HPLC测定人血浆中苯巴比妥、苯妥英、卡马西平浓度

目的建立测定人血浆中苯巴比妥、苯妥英、卡马西平浓度的高效液相色谱方法.方法血浆样品用二氯甲烷萃取.采用Shim-pack CLC-CN色谱柱,以正己烷-无水乙醇-甲醇(94.5:5:0.5)为流动相,紫外检测波长为220 nm,以地西泮为内标.结果苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的线性范围均为0.5～80.0μg·mL-1(r≥0.9994),方法回收率分别为100.69%,99.66%及101.01%.日内和日间RSD均不大于5.9%.结论本方法灵敏、特异性强、准确、简便易行,适用于苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的治疗药物监测.     

高效液相色谱法测定血清中卡马西平的浓度

目的建立HPLC测定血清中卡马西平的浓度的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为C18柱（4.6mm×150mm,5μm）,柱温：35℃,检测波长：285nm,流动相为乙腈-水（50：50）,流速为1mL/min。结果在1～20μg/mL范围内线性良好,R=0.9983014,在高、中、低浓度下是的回收率为102.56%、97.03%、96.09%,日内精密度为0.69%,日间精密度为4.69%。结论该方法简便、快速,适合用于临床治疗药物监测。     

HPLC-MS/MS 和 FPIA 法测定全血中环孢素浓度的比较方法学

 目的 建立液质联用 (HPLC-MS/MS) 法同时测定人血中环孢素 (CsA) ,并与荧光偏振免疫法 (FPIA) 进行比较。 方法 液质联用法： Waters Quattro Premier 串联质谱检测器 , 采用 Symmetry C₁₈ 色谱柱 (2.1 mm × 150 mm , 5 μm) ,以含有 10 mmol·L^-1 乙酸铵 - 0.1% 甲酸溶液 0.1 % 甲酸甲醇溶液为 10 ∶ 90 ,流速 0.25 mL·min^-1, 采用多反应监测进行定量 , 血样处理：采用乙腈沉淀蛋白,分析时间为 5 min 。并收集 162 人份临床使用 CsA 的 重症肌无力患者 的血样分别用 HPLC-MS/MS 及 FPIA 法测定并进行评价。 结果 HPLC-MS/MS ： CsA 在人血中 50~ 1 000 μ g·L^-1 内线性良好,相对回收率在 98.67% ～ 103.56% 之间 , 日内及日间精密度 ( RSD%) 均小于 10% 。 2 种方法测定患者血样, HPLC-MS/MS 结果大多数低于 FPIA 法。 结论 2 种测定方法的相关性较差,串联质谱法方法用于监测 CsA 血药浓度特异性好,灵敏度高,经济,可适性强。与 FPIA 法相比,对 CsA 的母药有高度的选择性,并能够提高分析的灵敏度。     

癫痫患者血清和血清超滤液及唾液中苯妥英钠和卡马西平的浓度测定

 目的：測定癲痫患者血清、超滤液和唾液中游离苯妥英钠和卡马西平浓度，总结其相关性。方法：将94例癫 痫患者分为2組，第1组60例，单独服用笨妥英纳；第2组34例，单独服用卡马西平，应用超滤法获得血清中游离 药物后，再采用荧光偏振免疫法测定患者血清、血清超滤液和唾液中苯妥英钠、卡马西平的浓度。结果：第1组血清 苯妥英钠游离分数为10.41%，其中15例平均唾液游离分数为10.36%，血清游离分数9.51%，两者浓度之比1.09 ：1。第2组卡马西平游离分数22.58%，其中9例平均唾液游离分数为24.20%,血清游离分数23.09%,两者比值 1.05 ：1。结论：苯妥英钠、卡马西平在血清、血清超滤液和唾液中浓度有良好的相关性；唾液浓度比血清总浓度更 具有临床意义。     

超高效液相法测定卡马西平和苯妥英钠血药浓度及其临床应用

目的:在儿科临床上建立一种快速、准确测定癫痫患儿血浆中卡马西平(Carbamazepine,CBZ)和苯妥英钠(Phenytoin,PT)浓度超高液相(Ultra performance liquid chromatography,UPLC)方法,并观察药物浓度与不良反应。方法:收集癫痫患儿的超声肝脏检查和实验室检查资料。UPLC方法:取患儿血浆200μl,加入乙酸乙酯1.0 ml,涡旋1 min,室温高速离心7 min(12 000×g),取上清液700μl吹干后,100μl甲醇复溶进样分析;色谱条件为BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm;Waters公司),0.3 ml·min-1的流速,甲醇-1%三氟乙酸水溶液(45∶55,v/v),30℃的柱温,2μl的进样量,254 nm检测波长。结果:血浆中CBZ和PT色谱峰分离良好,无干扰,曲线为y=39589x+15280,R2=0.9991(CBZ);y=3739.5x+3073.5,R2=0.9996(PT),回收率均在90%~117%;超声检查和实验室检查显示正常,无造血及消化系统不良反应。结论:本法操作简便,适用于临床工作中,患儿血浆的CBZ、PT浓度快速监测。     

HPLC法和MAFPIA法用于测定全血中CsA血药浓度的比较

为了选择一个适合临床操作及研究的方法,对30个环孢菌素A血样分别用HPLC法与MAFPIA法进行测定并比较。得出结论：MAFPIA法成本较高而HPLC法成本低,适合于临床CsA血药浓度监测及药动学研究。     

高效液相色谱法和荧光偏振免疫法测定甲氨蝶呤血药浓度的相关性

目的　比较两种甲氨蝶呤血药浓度测定方法的相关性。方法　分别采用高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振免疫法 (FPIA)测定。结果　两方法测定值的回归方程为CFPIA =0 .8733CHPLC+ 0 .10 0 1,r2 =0 .981(P <0 .0 5 )。结论　两方法相关性好。FPIA法灵敏度更高 ,且操作简便     

单克隆荧光偏振免疫法、多克隆荧光偏振免疫法和高效液相色谱法分别测定环孢素A血药浓度结果的相关性探讨

 目的本实验定量比较当前通行的3种CsA(环孢素A)测定方法,考察方法间相关性,建立普遍适用的测定结果换算方法。方法分别采用高效液相色谱法、单克隆和多克隆荧光免疫法测定样品,测定结果采用Levene和Tamhane's T2进行方差分析,用Spearman进行相关性比较。结果经过统计分析得到3组方法结果互换方程式,Y_mFPIA=0.967 1X_HPLC+45.761; Y_pFPIA=1.493 7X_HPLC+205.94;Y_pFPIA=1.563X_mFPIA+129.72。结论高效液相色谱法、单克隆和多克隆荧光偏振免疫法三者间具有良好的相关性,通过方程式可将各自测定结果方便准确的互算。     

HPLC测定人血浆中山莨菪碱的浓度

 目的建立高效液相色谱法测定人血浆中山莨菪碱的血药浓度。方法色谱柱为Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-10 mmol·L^-1磷酸二氢钾溶液(pH3.0,内含10 mmol·L^-1高氯酸)(20∶80);柱温:室温;流速:1.0mL·min^-1;检测波长:214 nm。结果标准曲线的线性范围为0.5～50 mg·L^-1(r=0.999 7,n=7),低、中、高3种浓度的平均回收率为(87.2±2.2)%,(92.5±1.0)%,(89.3±2.1)%,日内RSD≤2.5%,日间RSD≤5.2%。山莨菪碱的最低检出量为0.1 mg·L^-1。结论本方法简单、灵敏、重现性好,适用于山莨菪碱临床血药浓度测定及人体药动学研究。     

RP—HPLC法测定人血浆中紫杉醇浓度的方法学研究

目的：建立高效液相色谱法测定人血浆中紫杉醇含量的方法,为人血浆中紫杉醇浓度的测定及药代动力学、生物利用度研究提供新的定量方法。方法：采用Hypersil0DS25p．m（4．6mm×250mm）色谱柱,甲醇-乙腈-水（40：30：30）为流动相,流速为1．0ml·min^-1,检测波长为227nm,血浆样品经叔丁基甲醚萃取。以内标法定量。结果：紫杉醇保留时间为10．7min,标准曲线的线性范围为0．113—11．30mg·ml^-1,r=0．9993,紫杉醇日内变异系数小于5％,日间变异系数小于10％,回收率〉90％。结论：本方法操作简单,数据准确,重现性好,适用于人血浆中紫杉醇浓度的测定及药动学研究。     

高效液相色谱法同时测定人血浆中6种抗癫痫药物及两种活性代谢物的浓度

 目的建立了同时测定人血浆中扑米酮(PRI)、拉莫三嗪(LTG)、苯巴比妥(PB)、苯妥英(PHT)、奥卡西平(OXC)、卡马西平(CBZ)及两种活性代谢物单羟奥卡西平(MHD)、环氧卡马西平(CBZE)浓度的HPLC方法。方法以盐酸普萘洛尔为内标,血浆样品经蛋白沉淀法处理后直接进样测定。色谱柱采用AgilentRX-C₈柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-体积分数0.1%三氟乙酸水溶液(20∶13.5∶66.5)。双波长双通道检测,在215nm测定PRI,LTG,MHD,PB和CBZE,235nm测定OXC,PHT和CBZ。结果PRI,LTG,MHD,PB,CBZE,OXC,PHT和CBZ的线性范围分别是5～50,1～25,1～50,5～100,1～10,0.5～25,1～50,1～25mg·L^-1。平均方法回收率分别为98.7%,97.0%,97.9%,102.9%,100.0%,99.2%,100.1%和101.7%。各待测组分的日内、日间RSD均小于11.6%。结论本法操作简便,结果准确,适用于临床治疗药物监测。     

反相高效液相色谱法同时测定人血浆中磷苯妥英、苯妥英及其主要代谢产物4'-羟苯妥英的浓度

 目的建立同时测定人血浆中抗癫痫药物磷苯妥英(FOS)、苯妥英(PHT)及其主要代谢产物4′-羟苯妥英(4′-HPPH)浓度的高效液相色谱法。方法以盐酸普萘洛尔为内标,血浆样品100μL经20%磷酸酸化后以乙酸乙酯1 mL萃取,提取后氮气吹干,加入流动相100μL复溶,取20μL进样测定。色谱柱采用Agilent RX-C₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温:40℃;流动相为甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(23∶17∶60),流速为1.5 mL·min^-1,紫外检测波长210nm。结果血浆内源性杂质和常用合并用药对样品测定无干扰,色谱峰分离良好。FOS、PHT、4′-HPPH的线性范围分别是1～400,0.5～50和0.5～10 mg·L^-1,相关系数(r)均大于0.999 1。平均方法回收率为92.79%～107.90%。各组分的日内、日间RSD均小于8%。结论该方法具有良好的准确性、精密性和灵敏性,且操作快速、简便,各组分之间分离良好,适用于临床血药浓度的监测。     

检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的方法研究

 目的建立镇静安神类中成药中非法添加化学药品的检测方法。方法对中成药中常见添加的10种化学药品,建立等度HPLC-DAD方法对样品进行分离测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-乙腈-体积分数0.5%甲酸pH(2.8±0.1)(30∶15∶55)为流动相;检测波长为254nm,同时进行DAD全波长扫描;然后建立UPLC-MS/MS方法对HPLC-DAD的结果进行确证。结果相关分子离子峰特征碎片离子明显,并在数批镇静安神类中成药中检出非法添加的化学药品成分。结论本方法专属性强、灵敏度高,结果准确可靠,可作为检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的有效方法。     

苯巴比妥单克隆抗体的研制及竞争ELISA血药浓度监测方法的建立

 目的研制苯巴比妥单克隆抗体(PBmAb),建立PB血药浓度竞争ELISA监测方法。方法将PB改造成对氨基苯巴比妥(pAPB),用重氮化法合成免疫原BSA-pAPB并免疫Balb/c小鼠;细胞融合技术筛选PB mAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备PB mAb;应用PB mAb研制PB血药浓度监测竞争ELISA试剂盒(PB-Kit),并测定其性能。结果BSA-pAPB偶联成功;筛选出4株杂交瘤细胞,应用其中最好的4E6株制备的PB mAb间接ELISA效价为1∶6.4×10⁵,亲和常数(K_a)为2.08×10¹⁰L·moL^-1,50%抑制浓度(IC₅₀)为9.84μg·L^-1,与巴比妥的交叉反应率(CR)为7.9%,与其他化合物无CR;PB-Kit的检测范围为1.0～128μg·L^-1,灵敏度为0.89μg·L^-1,检测限为1μg·L^-1,血清样添加回收率为94.7%,批内和批间变异系数均<10%;PB-Kit与差示分光光度法(DS)的符合率为100%。结论成功研制出高价、敏感、特异的PB mAb,建立了PB血药浓度竞争ELISA监测方法。     

反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A含量

目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中维生素A的方法,以评价人体维生素A营养状况。方法移取血清,加入乙腈乙醇混合溶液及正己烷进行萃取,旋涡混合、离心后,移取正己烷层氮气吹干,残渣用甲醇溶解后进样。色谱条件:XTerraTM RP18色谱柱,5μm,3.9 nm×150 mn,柱温:30℃,流动相为甲醇: 水(92:8);流速:1 mL/min;检测波长325nm。结果维生素A在25～800ng/mL浓度范围呈线性,R2=0.9993, 平均回收率为95.2%,RSD<7%,全部操作可在30min内完成。结论改进的检测人血清中维生素A含量的方法, 快速、灵敏、准确,简便易行。     

高效液相色谱法测定人血清和脑脊液中莫西沙星浓度

 目的 建立测定人血清和脑脊液中莫西沙星药物浓度的高效液相色谱方法。方法 血清和脑脊液取样量均为10 μL;采用Shima-pack CLC-ODS色谱柱（6.0 mm×150 mm,5 μm）进行分离;以0.01 mol·L-1磷酸缓冲液（含硫酸四丁基铵5 mmol·L-1,pH 2.5）-乙腈（80∶20）为流动相;吡哌酸为内标,荧光检测器波长：Ex=295 nm、Em=495 nm。结果 内标和莫西沙星的保留时间分别为2.93和6.39 min;血清和脑脊液标准曲线在0.2~20 mg·L-1内线性良好（r>0.999 9,n=5）,其高、中、低质控样本方法学回收率分别在98.08%~104.81%和92.08%~101.73%间,方法学误差批内RSD均小于5.5%,批间RSD均小于7.8%。扩大取样量至0.1 mL,标准曲线下限可达2 ng·mL-1并良好检出。结论 该方法取样量小、操作简便、灵敏度高;为进行血清和脑脊液中莫西沙星临床PK/PD研究提供了数据保障。     

高效液相色谱法测定人血清、脑脊液和胰液中利奈唑胺浓度

 目的 建立同时测定人血清、脑脊液、胰液中利奈唑胺药物浓度的HPLC测定方法。方法 以利培酮为内标物,在0.1 mol·L^-1NaOH碱性条件下甲基叔丁基醚-正丙醇=90∶10(V/V)液液提取,Shima-pack CLC-ODS-C₁₈(6.0 mm×150 mm,5 μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲溶液(0.02 mol·L^-1KH₂PO₄,H₃PO₄调pH 3.5)=20∶16∶64(V/V/V),流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,检测波长254 nm条件下测定。结果 血清中利奈唑胺在0.25~40.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 9),3个浓度质控样本(0.8、8.0、25.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为1.64%~2.38%(n=5)、4.53%~6.34%(n=5),方法学和提取回收率分别为93.781%~97.393%(n=5)、72.318%~73.442%(n=5);脑脊液中在0.1~20.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 3),3个浓度质控样本(0.2、2.0、15.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为3.84%~4.83%(n=5)、6.04%~8.16%(n=5),方法学和提取回收率分别为106.910%~110.971%(n=5)、73.226%~80.603%(n=5);胰液中在0.1~20.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 4),3个浓度质控样本(0.2、2.0、15.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为2.96%~5.30%(n=5)、4.68%~6.40%(n=5),方法学和提取回收率分别为97.178%~105.072%(n=5)、73.333%~76.010%(n=5)。内标提取回收率＞87%。结论 本方法灵敏度高,准确性好,简便快捷,应用液液提取处理样本去除更多杂峰干扰,更广泛适用于临床,尤其适用于合并用药患者生物标本中利奈唑胺药物浓度的测定。     

高效液相色谱法测定复方卡钙菖蒲胶囊中卡马西平的含量

目的建立复方卡钙菖蒲胶囊中卡马西平的高效液相色谱法。方法采用C18(200 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(60∶40)为流动相。检测波长为285 nm,流速为1.0 ml/min。结果卡马西平在0.008648~0.17296μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.0000,n=9),平均回收率为101.44%,(n=9),RSD为0.49%。结论该方法快速、简便、结果准确,可用于复方卡钙菖蒲胶囊的质量控制。