百合多糖联合BMSCs移植减轻小鼠肺纤维化的实验研究

目的 观察百合多糖联合BMSCs移植是否影响小鼠肺纤维化的形成.方法 培养小鼠BMSCs做移植备用.90只SPF小鼠按随机数字表法分为对照组(C)、模型组(M)、百合多糖联合BMSCs组(A)、BMSCs组(B)、百合多糖组(L),每组18只.建立肺纤维化小鼠模型,24h后各组给予相应处理.第7、14、28天行肺组织病理评分.第28天观察各组肺系数、肺组织胶原沉积、羟脯氨酸(HYP)含量、Western blot检测肺组织TNF-α和NF-κB蛋白表达情况.结果 与C组相比,M组肺系数、病理形态评分、HYP含量、肺组织TNF-α、NF-κB表达均增高(P＜0.05).与M组相比,A组、L组各指标均降低(P＜0.05),B组第28天病理评分降低(P＜0.05).M组有大量胶原沉积,各干预组胶原沉积均较轻.结论 百合多糖联合BMSCs移植后抑制肺纤维化小鼠肺组织的TNF-α、NF-κB的表达,减轻肺纤维化的病理损伤,联合干预的效果强于单用百合多糖或单用BMSCs移植.     

鼻腔滴注博莱霉素诱导ICR小鼠肺纤维化模型的建立

目的:通过鼻腔滴注博莱霉素诱导ICR小鼠发病,寻求建立稳定且方法简单的肺纤维化模型。方法:ICR雌性小鼠分为对照组和模型组,模型组鼻腔滴注博莱霉素50μL(15 mg/kg),对照组滴注生理盐水。取小鼠肺组织进行HE、Masson染色、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化及羟脯氨酸含量测定。结果:与对照组小鼠相比,造模后第7天模型组小鼠的肺脏出现急性肺泡炎;第14天时,肺泡炎更加明显,开始出现肺纤维化;第28天时肺泡炎有所减轻,肺纤维化明显加重。第28天时模型组小鼠的肺脏HYP含量、α-SMA水平明显高于对照组。结论:鼻腔滴注博莱霉素(15 mg/kg)可诱导ICR小鼠建立相对稳定的肺纤维化模型。     

两个品系小鼠肺纤维化模型的比较观察

目的采用气管内注射博莱霉素（Bleomycin,BLM）的方法,比较观察两个品系小鼠肺纤维化程度,确定适用的肺纤维化小鼠模型。方法BALB／c小鼠和C57BL／6小鼠分别分成模型组和对照组,模型组气管内注射博莱霉素（5mg／kg）,对照组气管内注射相同体积生理盐水。所有小鼠于造模后第28日处死,观察肺系数、肺组织病理学改变及羟脯氨酸含量的变化。结果光镜下各模型组肺组织呈不同程度纤维化,其中以C57BL／6小鼠最为明显;模型组的羟脯氨酸（HYP）含量均显著高于对照组;C57BL／6小鼠模型组肺系数及HYP明显高于BALB／c小鼠模型组。结论通过气管内注射博莱霉素,BALB／c及C57BL／6小鼠均能复制肺纤维化模型,以C57BL／6小鼠肺纤维化程度最高,获得的肺纤维化模型较为理想。     

CXCL4与高氧诱导新生小鼠性别差异性肺损伤的相关研究

目的：探讨肺组织CXC趋化因子配体4（chemokine C?X?C motif ligand 4,CXCL4）与高氧诱导新生小鼠性别差异性肺损伤的关系及相关机制。方法：32只C57BL/6J新生小鼠（雄性、雌性各16只）随机分为4组：高氧雄性组、高氧雌性组、空气雄性组、空气雌性组（每组8只）。高氧组小鼠置于95％氧浓度下暴露7 d,空气组于室内环境（FiO2 = 21％）中饲养。串联质谱标签（tandem mass tags,TMT）定量蛋白组学技术检测4组小鼠肺组织中蛋白质的表达变化,筛选差异表达的蛋白质;ELISA法检测肺组织匀浆CXCL4含量;HE染色法观察小鼠肺组织病理改变;冰冻切片免疫荧光染色检测肺组织“M4”型巨噬细胞（MMP7+ S100A8+）分布情况。结果：高氧暴露组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数（radial alveolar count,RAC）明显减小（P < 0.001）;与高氧雌性组相比,高氧雄性组RAC值下降（P < 0.01）。TMT筛选出的CXCL4在高氧雄性组差异性表达上调;肺组织匀浆验证了质谱分析结果。高氧雄性小鼠肺组织MMP7+ S100A8+细胞增多。结论：高氧诱导新生小鼠肺损伤程度存在性别差异,雄性损伤程度高于雌性,可能与CXCL4诱导肺“M4”型巨噬细胞形成存在一定的相关性。     

N-乙酰半胱氨酸对博莱霉素致肺纤维化大鼠羟脯氨酸的影响

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化羟脯氨酸(HYP)影响.方法 取健康、雌性Wistar大鼠75只,随机分成博莱霉素模型组(B组)、NAC治疗组(N组)和正常对照组(C组).3组动物均于气管灌注后的第1、3、7、14及28天随机处死5只,取肺组织标本行肺组织匀浆中HYP含量检测.结果 B组肺组织匀浆中HYP的含量呈持续增长趋势,在各时间点均高于C组及N组.N组HYP与B组相比较,第7、14、28天有显著性差异(P＜0.05).结论 NAC可降低博莱霉素所致肺纤维化大鼠肺组织匀浆中HYP水平,抑制肺纤维化的发展,对肺纤维化具有保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对矽肺大鼠肺纤维化的作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对矽肺大鼠肺组织纤维化的影响.方法 将42只SD雌性大鼠分为A、B、C、D组.A、B和C组采用暴露式气管内一次性缓慢注入二氧化硅(SiO2)混悬液建立矽肺大鼠模型,D组则注入生理盐水.B、C组分别于造模后6 h或第42天经尾静脉注射BMSCs.第14天,A、B和D组分别处死大鼠各6只,第56天各组分别处死6只.HE染色观察肺组织形态学变化,ELISA检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)水平.结果 A组在造模后第14天,肺组织病理改变以急性炎症反应为主,第56天以纤维化为主;B、C组病理改变均较同时期A组轻;D组未见明显异常.肺组织中Hyp水平,A、B和C组均较D组明显升高(P=0.000);B、C组与A组比较,在BMSCs治疗后第14天均明显减低(P=0.000、0.035),B组在治疗后第56天仍明显减低(P=0.016).结论 不论在以肺泡炎为主还是在以纤维化为主的病理阶段予BMSCs移植,均可以延缓矽肺大鼠肺纤维化的病理进程.     

骨髓间质干细胞移植对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的治疗作用

目的 研究骨髓间质干细胞(BMSCs)对博莱霉素A5(BLMA5)所致的大鼠肺间质纤维化的治疗作用.方法 收集、培养雄性SD幼鼠(鼠龄10 d)的BMSCs,并进行DAPI标记.将70只雌性SD大鼠随机分为4组,A组(n=21):生理盐水对照组;B组(n=21):BLMA5模型组;C组(n=21):气管内注入BLMA5后立即尾静脉注射移植BMSCs;D组(n=7):气管内注入BLMA5 14 d后移植BMSCs.分别于第7、14、28 d(D组于第28 d)处死大鼠,取肺组织病理切片行HE及Masson染色观察肺部炎症和纤维化情况,荧光显微镜下检测DAPI标记细胞;PCR法检测睾丸决定因子(SRY)基因;ELISA法检测肺组织内羟脯氨酸(HYP)、TNF-α和TGF-β1的含量.结果 (1)在C、D组7、14、28 d肺组织冰冻切片中均见到DAPI标记的BMSCs,PCR检测到雄性SD大鼠SRY基因.(2)B组第7 d肺泡炎最明显,到28 d时肺纤维化最严重,与其他三组比较差异均有统计学意义(P(0.05或0.01);C、D两组肺泡炎及肺纤维化程度均较B组显著减轻(P<0.05),但仍较A组严重(P<0.05或0.01),其中D组较C组严重(P<0.05).(3)B组第7 dHYP含量开始升高,28 d最高,显著高于其他三组(P<0.05或0.01),各组变化趋势与肺纤维化变化相一致;B组TNF-α在第7 d最高,此后开始下降,在14 d时仍高于A、C两组(P<0.05).28 d时四组之间无明显差异;B组TGF-β在第28 d达最高,各组之间比较均有显著差异(P<0.05).结论 骨髓间质干细胞可定植于损伤肺组织,并能有效阻止BLMA5诱导的大鼠肺纤维化,且早期治疗效果优于晚期.     

N-乙酰半胱氨酸对博莱霉素致小鼠肺间质纤维化形成及NF-κB、IL-4表达的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对博莱霉素(BLM)致小鼠肺间质纤维化形成及核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-4(IL-4)表达的影响。方法:75只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组:BLM组25只,气管注射BLM5mg/kg制作肺间质纤维化模型;NAC组25只,于注射BLM前5天开始,每天给予NAC250mg/kg直至取材;对照组25只,气管注射生理盐水。第1、3、7、14、28天处死小鼠,取右肺组织行HE染色和Masson染色,左肺组织测羟脯氨酸(HYP)含量;分别采用ELISA法和SP免疫组化染色检测支气管肺泡灌洗液中IL-4的含量和灌洗细胞中NF-κBp65的表达。结果:第7、14、28天,BLM组肺组织病理可见实变及胶原沉积,而NAC组明显减轻;3组小鼠肺组织HYP含量差异有统计学意义,NAC组HYP含量低于BLM组(P<0.05);第1、3、7天,3组小鼠支气管肺泡灌洗细胞NF-κBp65的表达水平及支气管肺泡灌洗液中IL-4的含量差异有统计学意义,且NAC组2指标均低于BLM组(P均<0.05)。结论:NAC可能通过抑制NF-κB的活化,减少致纤维化相关细胞因子IL-4的产生,进而减轻BLM所致小鼠肺间质纤维化。     

IL-27在博来霉素诱导肺纤维化模型中的保护作用

［摘要］目的　探讨IL-27在博来霉素诱导肺纤维化模型中的作用．方法　将80只C57BL/6小鼠随机分为正常组（A组）、BLM模型组（B组）、BLM＋IL-27组（C组）、BLM＋抗IL-27组（D组）,每组各20只．观察A、B组小鼠肺组织IL-27、IL-27R mRNA表达．各组分别于7 d、28 d各处死小鼠5只,获取肺组织,病理学方法观察各组小鼠肺组织肺泡炎症和肺纤维化程度,测定肺组织羟脯氨酸含量,观察各组小鼠生存情况．结果（1）IL-27、IL-27R mRNA在肺纤维化形成中明显升高（P＜0.05）;（2）病理结果提示:7 d D组肺泡炎和肺纤维化程度最重,C组最轻（P＜0.05）;28 d D组肺纤维化程度较B组加重, C组最轻（P＜0.05）;（3）羟脯氨酸含量变化:7 d,28 dD组肺组织羟脯氨酸含量最高,C组含量最少（P＜0.05）;（4）各组小鼠在28 d时A组无小鼠死亡,C组死亡率低于B组,D组死亡率高于B组（P＜0.05）．结论　IL-27抑制博来霉素诱导肺纤维化的形成,提高了小鼠的生存率．     

肺特灵Ⅵ号对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的干预作用及其机制

目的观察肺特灵Ⅵ号对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的干预作用。方法采用气管内注入博莱霉素法制备小鼠肺纤维化模型。给药28d后处死,计算肺系数;观察肺脏病理形态学改变,并对肺泡炎和肺纤维化程度进行评分;测定小鼠肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）与羟脯氨酸（HYP）等生化指标。结果与模型组相比,肺特灵Ⅵ号各剂量组可明显增加小鼠体质量,降低肺系数,减轻肺泡炎与肺纤维化程度,提高肺组织SOD活性与T-AOC,降低MDA与HYP含量（P〈0.05或〈0.01）。结论肺特灵Ⅵ号对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化有一定的防治作用。     

骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤后肾功能及氧化应激水平的改善作用

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）促肾缺血再灌注损伤修复的能力,为肾脏疾病治疗提供新的思路。 方法：健康3周龄C57BL/6J小鼠的骨髓细胞悬液进行BMSCs体外扩增培养。8周龄C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、平行对照组和细胞移植组,每组16只小鼠。建立肾缺血-再灌注损伤模型,将BMSCs通过尾静脉注射到细胞移植组小鼠中,平行对照组注射生理盐水。检测肾功能指标血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平变化、损伤肾组织自由基--羟自由基和超氧阴离子自由基变化和肾形态学变化。结果：①分离培养的BMSCs增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好。②平行对照组小鼠整体状态差,肾功能指标、氧化应激指标明显升高,组织形态学出现肾小球崩解,肾小管结构消失,肾间质见大量炎性细胞浸润。而细胞移植组小鼠整体状态良好,肾功能指标和氧化应激指标得到明显改善（P<0.05）,组织形态学未出现明显病理性改变。结论：BMSCs在体外易分离培养,具有旺盛的增殖能力;移植BMSCs后,通过抑制氧自由基的生成来促进肾缺血-灌注损伤后小鼠的恢复。     

骨髓间充质干细胞对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的作用

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的影响。方法 自C57BL/6小鼠骨髓分离MSCs,制备单细胞悬液并于体外传代培养,取第4～5代细胞用于实验。56只C57BL/6小鼠经Lewis肺癌细胞皮下接种建立小鼠肺癌皮下移植瘤模型,根据MSCs给予时间分为D0组(接种同时给予MSCs)和D10组(接种后第10天给予MSCs）,其中D0组分为3个亚组（n=8）：组1单纯接种肿瘤细胞,组2肿瘤细胞和MSCs共同接种,组3肿瘤细胞接种及尾静脉注射MSCs;D10组分为4个亚组（n=8）：组4(肿瘤细胞接种及瘤体内注射MSCs)及其等量PBS对照组（组5）,组6（肿瘤细胞接种及尾静脉注射MSCs）及其等量PBS对照组（组7）。观察各组移植肿瘤的生长情况,包括肿瘤形成时间及不同时间点的瘤体大小,并进行组间分析比较。结果 在D0组,组1、2、3肿瘤形成时间分别为（9.37±1.41）d、（7.62±1.40）d和（9.25±1.49）d,与组1和组3比较,组2的肿瘤形成时间明显缩短（P<0.05）;而各时间点三组瘤体大小比较,差异无统计学意义（P>0.05）。组4的瘤体显著大于其对照组（P<0.05）;而组6与其对照组的瘤体大小比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 MSCs与Lewis细胞同时接种可加速小鼠肺癌皮下移植瘤形成,而成瘤后MSCs瘤体内注射具有促进移植瘤生长的作用。     

HBV转基因小鼠与C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞分离培养的比较研究

目的 比较研究乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠和C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的分离培养体系.方法 采用贴壁培养法建立HBV转基因小鼠和C57BL/6小鼠BMSCs分离培养体系,通过在培养液中添加不同浓度的血清进行培养,分析HBV转基因小鼠和C57BL/6小鼠BMSCs细胞形态和数量的差异.结果 C57BL/6小鼠原代BMSCs生长迅速,按1∶3传代后呈漩涡状生长,形态类似成纤维细胞.HBV转基因小鼠原代BMSCs生长缓慢;以1∶2传代后生长缓慢,有明显的血清依赖性及密度依赖性.结论 在相同的生长环境下,不同血清浓度的培养液中,HBV转基因小鼠BMSCs生长较正常C57BL/6小鼠的BMSCs生长明显缓慢.     

人脐带间充质干细胞静脉输注小鼠的安全性

目的探讨C57/BL6J小鼠重复多次尾静脉输注人脐带间充质干细胞后的免疫反应和毒性。方法将SPF级别的32只C57/BL6J小鼠随机分为阴性对照组、细胞移植组,每组16只,雌雄各半,细胞移植组小鼠尾静脉注射分离培养的第5代人脐带间充质干细胞,一次5×106/只,每周注射一次,连续注射4周;阴性对照组每次注射相同容积的PBS。注射后后观察小鼠的一般症状,末次注射后1周、4周进行血细胞计数、血生化、免疫反应指标、脏器质量测定和组织病理学检查。结果细胞移植组小鼠血细胞计数、血生化、脏器重量和脏器系数与对照组无显著性差异(P>0.05),脏器组织病理学在光镜下检查结果与对照组无形态学差别,以及免疫结果测定(T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论人脐带间充质干细胞重复多次尾静脉输注C57/BL6J小鼠是安全可行的,对受者无明显免疫反应和毒副作用。     

胰岛素样生长因子1作用下的骨髓间充质干细胞对大鼠肺纤维化的治疗作用及其机制

目的通过观察胰岛素样生长因子1（IGF-1）作用过的骨髓间充质干细胞（BMSC）对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的影响,探讨治疗肺纤维化的新方法。方法体外分离、培养雄性6周龄SD大鼠的BMSC。将48只雄性成年SD大鼠随机分为四组：阴性对照组（N组）、博莱霉素组（B组）、间充质干细胞组（M组）及IGF-1处理组（I组）。N组经气管注入1 mL生理盐水,B、M及I组均经气管注入1 mL博莱霉素（5 mg/kg）。在造模2 d后,B组大鼠经尾静脉注入生理盐水0.5 mL,M组大鼠经尾静脉注入CM-D il标记的BMSC 0.5 mL（细胞数2×106）,I组注入经IGF-1培育48 h的相同数量的标记BMSC。在造模第7、14及28 d批量处死各组大鼠,留取肺组织行HE、Masson染色评价肺组织病理变化,冰冻切片观察肺组织内细胞定植情况,消化法测定肺组织羟脯氨酸（HYP）含量,RT-PCR方法检测各组大鼠肺组织肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达。结果 M组和I组肺组织在显微镜下可见红色荧光标记的BMSC,I组不同时间点的累积光密度值均高于M组（P〈0.05）,且M组和I组的荧光在28 d时均有所衰减。M组和I组的炎症在实验早期便轻于B组（P〈0.05）,其中I组更明显（P〈0.05）,至28 d时M组和I组炎症评分与N组的差异无统计学意义。B组、M组和I组肺纤维化评分在博莱霉素注入14 d时均明显高于N组（P〈0.05）,28 d时M组和I组的肺纤维化程度轻于B组（P〈0.05）,但M组与I组之间的差异始终无统计学意义。B组HYP含量在整个实验阶段均高于其他三组（P〈0.01）,而I组HYP含量始终与N组无显著差异;M组HYP含量在早期大于I组和N组,至28 d降至与N组间无显著差异。N组和B组的HGF mRNA表达一直保持在较低水平,M组和I组HGF mRNA的表达水平在第7 d时无显著差异,均高于N组和B组（P〈0.01）,至第14 d时I组开始高于M组（P〈0.05）,28 d时差异更明显（P〈0.01）。结论 IGF-1可以促进BMSC异体定植从而对肺损伤进行更有效的修复,机制可能是其促进了BMSC分泌HGF。     

移植间充质干细胞在颅脑创伤小鼠小脑的定植与创伤修复

目的探讨移植间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs）在颅脑创伤小鼠小脑的定植及参与创伤修复情况。方法绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）转基因小鼠MSCs的分离培养。制作小鼠颅脑创伤模型后随机分2组,移植组于小鼠颅脑损伤后尾静脉注射分离培养成功的GFP转基因小鼠MSCs;生理盐水组于小鼠脑损伤后尾静脉注射生理盐水。对照组为正常C57BL／6小鼠。免疫组织化学法检测GFP标记MSCs在小鼠小脑的定植情况,并对三组小鼠进行神经行为学和运动功能评分。结果分离培养的GFP标记的MSCs在荧光显微镜下GFP阳性表达。移植组免疫组织化学染色显示在小脑颗粒细胞层边缘和靠近颗粒细胞层部位有阳性的GFP标记MSCs定植。在各时相点,创伤模型小鼠神经行为学和运动功能评分都与对照组有统计学差异（P〈0．01）。第14天移植组神经行为学和运动功能评分与对照组比较无统计学差异,在第8天、14天与生理盐水组有统计学差异（P〈0．05）。结论移植的MSCs能通过血液系统到达小脑创伤部位定植,并参与小脑功能的恢复。     

大鼠骨髓间充质干细胞体内向造血细胞分化的研究

目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)及其天麻定向诱导神经细胞后向造血细胞分化的潜能。 方法:建立以亚致死量照射的BALB/C小鼠为受体动物模型,体外扩增的大鼠6～7代MSC为供体细胞,分以 下3组,每组12只进行实验:实验组1(A组),放疗+单纯输注MSC;实验组2(B组),放疗+输注天麻诱导1h MSC,A、B组每只小鼠注射0.3mL含1.5×106cells的无血清培养液。空白对照组,放疗+输注等量无血清培 养液。照射后4h内,分别经尾静脉注射。移植60d后取骨髓(BM)、外周血(PB)、脾(SP)细胞悬液,用流式细 胞仪检测供体大鼠源性CD11a、CD45表达。结果:所有实验小鼠均能存活到2个月,骨髓、外周血、脾细胞悬液 均可检测到低表达的大鼠源性CD11a、CD45。对照组为阴性。A、B两组相互比较,具有显著差别意义(P< 0.05)。结论:MSC及天麻定向诱导神经细胞后具有向造血细胞分化潜能。     

脐带间充质干细胞对C57BL/6小鼠Lewis肺癌生长及转移的影响

目的 利用Lewis肺癌动物模型,探讨脐带来源的MSC对恶性肿瘤生长及其转移的影响。方法 将16只C57BL/6小鼠分别建立Lewis肺癌模型,随机分为对照组（NS组）和MSC组,每组8只,MSC组分别于接瘤后第7、12、17天时,尾静脉注射给予脐带MSC（1×106/只）,在第21天时处死全部荷瘤小鼠,观察瘤体生长情况及肺转移情况。结果 NS组和MSC榈钠骄鲋胤直鹞?.5875±1.04g、 4.155±1.13g,两组相比没有显著性差异（P>0.05）。NS组和MSC组的平均肺转移数分别为3.75±1.39个、1.13±1.13个,抑制转移率为70.0%,两组相比具有显著性差异（P<0.001）。结论 脐带来源的MSC对C57BL/6小鼠Lewis肺癌本身的生长无影响,但能够明显抑制肿瘤的转移。     

骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质修复兔膝关节全层软骨缺损的实验

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)复合脱钙骨基质(deminerized bone matrix, DBM)修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效. 方法:MSCs取自4～6 mo龄2.5～3.5 kg的青紫兰兔,体外分离培养后种植于DBM支架上体外培养,再移植于兔膝关节全层软骨缺损模型处. 实验动物选用健康的青紫兰兔36只,随机分成A, B, C 3个处理组各12只,A处理组(MSCs/DBM)双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入DBM吸附体外分离培养的自体MSCs复合物;B处理组(DBM)单纯植入DBM;C处理组(对照)不作任何植入. 分别于术后4, 8和12 wk各处死4只兔子,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS 10.0软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义. 结果:MSCs复合DBM所修复组织为透明软骨样修复;而单纯DBM移植组和对照组为纤维性修复. 对术后12 wk大体及组织学形态进行评分. 按完全随机设计进行方差分析和SNK-q检验,结果显示,SMCs/DBM组明显优于DBM植入组和对照组(P<0.05);DBM组优于对照组(P<0.05). 结论:运用软骨组织工程的原理,以DBM为支架材料的自体MSCs移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法.     

异体骨髓间充质干细胞在骨髓嵌合小鼠体内分化为肝细胞的实验研究

目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在体内分化为肝细胞的可行性.方法 雌性C57BL/6J小鼠全身一次性接受10Gy 60Coγ射线照射后立即接受同品系绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞移植.移植后1周、1、3个月取骨髓嵌合小鼠肝脏,石蜡切片行GFP抗体免疫组化,冰冻切片在荧光显微镜下观察GFP阳性细胞在肝内分布.石蜡切片行GFP抗体和白蛋白(albumin,Alb)抗体以及GFP抗体和细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)抗体免疫荧光双标染色法,以此检测GFP阳性细胞在受体小鼠肝内的分化情况.结果 移植后1周、1、3个月骨髓嵌合小鼠肝内皆可见GFP阳性细胞,且有随时间减少的趋势,并都可见GFP和Alb双阳性细胞.结论 异体骨髓间充质干细胞可在骨髓嵌合小鼠体内分化为表达Alb和CK18的肝细胞,为肝组织的再生和修复提供了新思路.