雷洛昔芬对大鼠血管平滑肌细胞增殖基因Myocardin表达的影响

目的 观察雷洛昔芬对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖情况的作用,探讨雷洛昔芬对心血管系统的保护作用,为绝经后妇女心血管疾病的预防和治疗提供依据.方法 植块法培养大鼠VSMC,不同浓度的戊酸雌二醇和雷洛昔芬作用于大鼠VSMC 24 h,实时定量PCR法测定VSMC 的标志基因心肌素(MYOCD)、经典雌激素受体(ESR)、G蛋白偶联雌激素受体(GPER)mRNA的表达量.比较不同浓度的戊酸雌二醇和雷洛昔芬对大鼠VSMC增殖的影响及作用机制.结果 戊酸雌二醇和雷洛昔芬处理组的MYOCD mRNA表达量明显低于对照组(P＜0.05),并随着浓度的降低MYOCD表达量逐渐增加,差异有统计学意义(P＜0.05).同时处理组的ESR和GPER mRNA表达量较对照组升高,与药物浓度呈正相关(P＜0.05).结论 与雌二醇作用相似,雷洛昔芬亦能明显抑制血管平滑肌细胞的表型转化,影响其增殖,可替代雌二醇作为绝经后妇女雌激素替代疗法(ERT)的新药,对绝经后妇女心血管疾病的预防、治疗有重要意义.     

内皮素受体基因在心力衰竭患者外周血的表达及意义

目的 :研究充血性心力衰竭 (心衰 )患者血浆内皮素 (ET)水平和ET受体基因在其外周血单个核细胞表达情况。方法 :在 36例心衰 (心衰组 )患者和 12例健康人 (对照组 )中分别采用放免法测定血浆ET水平、逆转录聚合酶链反应检测ET受体基因在其外周血单个核细胞的表达。结果 :心衰组血浆ET水平〔(4 .90± 1.96 )pmol L〕明显高于对照组〔(1.76± 0 .82 )pmol L〕(P <0 .0 1)。ET受体基因表达阳性率在两组差异无显著性意义(P >0 .0 5 ) ,半定量后 ,心衰组ETA受体 (0 .82± 0 .2 6 )表达水平明显高于对照组 (0 .5 9± 0 .17) (P <0 .0 1)。结论 :ET及其A受体与心衰的发生、发展有密切关系     

NK4基因在人胰腺癌细胞中的表达及其生物学活性

目的　肝细胞生长因子通过其受体c met的激活 ,在调节肿瘤侵袭、转移和血管形成中具有重要作用。NK4不仅是肝细胞生长因子的拮抗剂 ,而且也是血管形成的抑制剂 ,阻断HGF/c met途径和肿瘤血管的形成可成为抗胰腺癌治疗的策略之一。为此 ,构建NK4基因真核细胞表达载体并进行转染研究 ,探讨NK4基因在胰腺癌细胞中的表达及其生物学活性。方法　对重组 pcDNA3/hNK4质粒转行酶切 ,将NK4基因克隆到真核表达载体pRC/CMV2 ,应用脂质体将重组 pRC/CMV2 hNK4质粒转入胰腺癌SW 1990细胞中 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫印迹 (Westernblot)分别检测转染肿瘤细胞中NK4mRNA和蛋白的表达 ,并筛选出高转录和高表达的细胞克隆。以MTT法检测其细胞克隆表达产物对血管内皮细胞增殖的影响。结果　转导NK4基因的SW1990细胞可表达并分泌NK4,RT PCR扩增出预期的 45 3bp片段 ,Westernblot显示有 5 0 0 0 0的NK4蛋白 ,其上清液可显著抑制血管内皮细胞的生长 (0 .5 37± 0 .10 6和 1.15 2± 0 .12 8,0 .736± 0 .10 8和 1.16 1± 0 .110 ,P <0 .0 1)。结论　NK4基因对血管内皮细胞的生长具有抑制作用 ,在肿瘤基因治疗中可能具有重要意义     

雌激素受体介导Genistein对内皮型一氧化氮合酶表达的诱导作用

目的 研究雌激素受体介导的基因组效应在Genistein促进内皮型一氧化氮合酶表达过程中的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,在氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)干预内皮细胞的基础上,经雌激素受体拮抗剂ICI182780(1 μmol/L)或经基因转录阻断剂放线菌素D(5 mg/L)作用30 min后,再加入Genistein(100 nmol/L)作用24 h,实时定量PCR检测内皮型一氧化氮合酶mRNA表达,Western Blotting检测内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达.结果 与空白对照组相比,氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)明显下调内皮型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达(P<0.05);Genistein明显上调内皮型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达(P<0.05),而且Genistein对内皮型一氧化氮合酶的诱导作用被雌激素受体拮抗剂ICI182780和基因转录阻断剂放线菌素D明显抑制(P<0.05 ).结论 Genistein促进内皮型一氧化氮合酶的表达与雌激素受体介导的基因组效应密切相关.     

卵巢切除及高脂饮食对雌鼠心脏组织、血管内皮细胞雌激素受体含量的影响

目的探讨卵巢切除(去势)、高脂饮食对雌鼠心脏组织和肺血管内皮细胞中雌激素受体(ER)含量的影响。方法用放射配体结合法分别测定去势、高脂饮食及雌激素替代治疗后雌鼠心脏、血管内皮细胞中ER含量,并对雌鼠去势前后血清雌二醇及血脂水平进行检测。结果心脏及血管内皮细胞中ER含量在去势后〔（0.51±0.09）fmol/mgpro,(6.73±0.52)fmol/106cell〕及高脂饮食后〔（0.97±0.12）fmol/mgpro,（9.15±0.53）fmol/106cell〕均较假手术组〔(2.08±0.15）fmol/mgpro,（17.66±1.26）fmol/106cell〕,显著下降(P＜0.01),但以去势后为明显;补充雌激素后ER表达得到明显改善〔（1.75±0.28）fmol/mgpro,（13.81±1.06）fmole/106cell〕;去势组雌鼠血清雌二醇水平较假手术组明显下降〔（181±36）pmol/L对（1004±88）pmol/L,P＜0.01〕,胆固醇水平显著升高〔(1.84±1.27）mmol/L对(1.22±0.11)mmol/L,P＜0.01〕。结论雌激素水平明显影响雌鼠心脏组织和肺血管内皮细胞中雌激素受体的含量,高脂饮食可明显降低组织和细胞中雌激素受体的含量。     

半边莲生物碱抑制肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA和蛋白表达

目的观察半边莲生物碱对肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA表达、蛋白合成和释放的影响。方法采用两肾一夹高血压大鼠模型,随机分为高血压组、半边莲组、卡托普利组和假手术组。用原位杂交技术观察大鼠外周血白细胞内皮素1 mRNA的表达,应用免疫组织化学染色计数大鼠主动脉内皮细胞铺片内皮素阳性细胞率(反映内皮素1蛋白的合成),用放射免疫技术测定大鼠血浆内皮素的含量。结果与假手术组比较,高血压组外周血白细胞内皮素1mRNA表达增强(34.64%±8.39%比9.34%±4.47%,P<0.05),动脉内皮细胞合成内皮素增多(7.42%±0.24%比1.58%±0.24%,P<0.05),血浆内皮素水平显著升高(221±24ng/L比138±19ng/L,P<0.05)。应用半边莲生物碱8周后,与高血压组比较,内皮素1 mRNA表达(20.38%±11.31%比34.64%±8.39%,P<0.05)、内皮素合成(3.53%±0.21%比7.42%±0.24%,P<0.05)和血浆内皮素水平(191±21ng/L比221±24ng/L,P<0.05)均受到显著抑制。结论肾性高血压大鼠伴有内皮素表达增强,半边莲生物碱能抑制内皮素基因的转录、蛋白合成及翻译,对防治肾性高血压所致的血管病变具有一定作用。     

选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬阻止去卵巢大鼠骨丢失的机制

目的　了解选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬 (RLX)阻止去卵巢大鼠骨丢失的机制。对骨质疏松症模型大鼠进行雌激素及选择性雌激素受体调节剂类药物RLX治疗 ,观察其对去卵巢大鼠骨组织光镜、电镜及骨密度 (BMD)等各种指标的影响。　方法　用 3月龄雌性SD大鼠 32只 ,随机分为卵巢未切除组、卵巢切除组、雌激素治疗组、RLX治疗组 ,5个月后处死 ,检测股骨、腰椎及全身BMD、子宫重量、骨形态。　结果　卵巢切除组经RLX治疗 3个月后腰椎、股骨、全身BMD增加35 %、4 0 %、2 1% ,分别为 (0 2 5 6± 0 0 2 2 ) g/cm2 、(0 2 93± 0 0 15 ) g/cm2 和 (0 36 8± 0 0 2 5 ) g/cm2 ;RLX组大鼠骨小梁表面的破骨细胞数比卵巢切除组减少 ;与卵巢切除组相比 ,雌激素治疗组的子宫重量增加了 5 5 % ,而RLX组则对子宫无明显刺激作用。　结论　RLX及雌激素都具有防治骨质疏松的作用 ,RLX能阻止去卵巢所造成的骨丢失。     

雌雄大鼠动脉中雌激素受体表达的比较

为比较雌性和雄性大鼠动脉中雌激素受体的表达情况并探讨其意义 ,用放射配体结合分析法检测雌性和雄性成年大鼠 (各 1 0只 )主动脉中雌激素受体的含量。结果发现 ,雌性大鼠动脉雌激素受体的结合容量及平均解离常数为 37.37± 7.85nmol g蛋白和 (2 .96± 0 .71 )× 1 0 -9mol,雄性大鼠动脉雌激素受体的结合容量及平均解离常数为 35 .46± 6 .81nmol g蛋白和 (2 .58± 0 .39)× 1 0 -9mol,两者相比无显著差异 (P >0 .0 5)。以上提示 ,大鼠雌性与雄性之间动脉中雌激素受体含量无显著差异 ,两性冠心病发病率存在差异的原因可能与两性间存在不同的雌激素受体后信号转导途径相关     

内皮素受体拮抗剂BMS-182874对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

为观察选择性内皮素A受体拮抗剂BMS 182 874对离体灌注心脏缺血再灌损伤的影响 ,并进一步探讨其可能的作用机制。按照Langendorff方式灌注离体大鼠心脏 ,全心缺血 30min后再灌注 30min诱导急性心肌缺血模型。给予BMS 182 874 (10 μmol/L或 5 0 μmol/L)持续灌注离体心脏 ,连续记录心功能 ,检测冠状动脉流出液中的肌酸激酶和心肌组织中的肿瘤坏死因子α含量。结果发现 ,与对照组相比 ,缺血再灌注组心功能显著下降 ,左心室内压和左心室内压最大变化率 (±dp/dtmax)、冠状动脉流量明显降低 (P <0 .0 1) ,肌酸激酶 (2 3.9± 2 .2比 2 17.5± 14 .1,P<0 .0 1)以及心肌组织中肿瘤坏死因子α含量明显增加 (6 4 5± 4 5比 192 6± 14 1,P <0 .0 1) ,而 10 μmol/L和 5 0 μmol/L的BMS 182 874显著减轻缺血后心功能的损害 ,升高左心室内压和左心室内压最大变化率 (±dp/dtmax) (P <0 .0 1) ,同时降低肌酸激酶 (185± 14和 14 3± 11,与缺血再灌注组相比P <0 .0 5和P <0 .0 1)和心肌组织中的肿瘤坏死因子α含量 (12 2 2± 6 7和 110 8± 5 7,与缺血再灌注组相比P <0 .0 1)。结果提示 ,内皮素A受体拮抗剂能显著减轻心肌缺血再灌注损伤 ,其保护作用可能与抑制心肌组织中肿瘤坏死因子α生成有关。     

西立伐他汀对血管内皮细胞一氧化氮合酶及细胞间黏附分子的作用

目的　观察西立伐他汀对内皮细胞一氧化氮合酶 (NOsythase ,eNOS)和细胞间黏附分子 1 (intercellularadhesionmolecule 1 ,ICAM 1 )基因的表达 ,NOS活力和黏附的THP 1细胞量的影响。方法　以氧化LDL抑制培养的ECV 3 0 4细胞表达eNOS ,加入不同浓度西立伐他汀后 ,用RT PCR法检测eNOSmRNA ,硝酸还原酶法测定培养基中NO量。以脂多糖 (LPS)及西立伐他汀加入ECV 3 0 4细胞后 ,用RT PCR法检测ICAM 1mRNA ,并测定黏附的THP 1细胞量。结果　随着西立伐他汀浓度增加 ,内皮细胞eNOSmRNA水平增加 ,0 0 1 ,0 1 ,1 0 μmol/L时分别增加 5 0 %,1 5 0 %,3 0 0 %,P均 <0 0 5。培养液中NO亦相应增加 ,0 0 1 ,0 1 ,1 0 μmol/L时分别增加 2 6 7%,92 3 %,2 3 0 %,P <0 0 5。西立伐他汀浓度为 0 1 ,1 0 μmol/L时 ,ICAM 1mRNA分别从 70 7± 1 0 4降至 5 6 2± 6 5 ,3 5 8± 4 2 ,P <0 0 5。黏附于ECV 3 0 4细胞的THP 1细胞在 1 0 μmol/L时被抑制 2 6 %,P <0 0 5。结论　西立伐他汀能诱导内皮细胞eNOS基因的表达及增加NOS活力 ;抑制内皮细胞表达ICAM 1mRNA及THP 1细胞黏附于内皮细胞     

雌激素替代治疗时大鼠动脉雌激素受体及一氧化氮合酶活性的变化

目的观察激素替代治疗时大鼠动脉雌激素受体(ER)的表达及一氧化氮合酶(NOS)的活性。方法建立大鼠雌激素替代治疗模型,用放射配体结合分析法检测主动脉ER的含量,血红蛋白还原酶法检测主动脉中NOS的活性：结果卵巢切除去势组大鼠动脉ER的结合容量及NOS活性显低于假手术组;切除卵巢后补充雌激素鼠动脉ER的结合容量及NOS活性都显高于单纯卵巢切除去势组。结论雌性大鼠去势2个月后,主动脉表达ER显减少,NOS活性显减低,补充适量雌激素能使去势大鼠动脉NOS的活性显增强,ER的含量维持在正常水平。这可能是雌激素对绝经后妇女心血管保护作用的重要机制。     

雌激素受体在人类垂体腺瘤中的表达

目的检测雌激素受体(estrogen receptor,ER)在人类不同类型激素垂体腺瘤中的表达,探讨垂体腺瘤中分泌不同类型激素的腺瘤细胞与ER免疫组化阳性细胞之间的关系.方法采用免疫组化S-P法对53例垂体腺瘤标本进行激素分型,检测垂体腺瘤中ER蛋白的表达.采用免疫组化双标法检测多激素分泌型垂体腺瘤中垂体激素合并ER表达的情况.结果53例垂体腺瘤标本中,部分PRL(5/7)、FSH(2/3)、LH(1/1)单激素腺瘤及部分多激素腺瘤有ER蛋白表达,而全部GH、ACTH、TSH单激素腺瘤均无ER蛋白表达,4例无功能腺瘤无ER蛋白表达.在33例多激素型垂体腺瘤标本中,22例有ER蛋白表达,其中PRL ER双标染色阳性标本10例、LH ER双标染色阳性标本9例、FSH ER双标染色阳性标本7例、GH ER双标染色阳性标本2例,33例标本的ACTH ER和TSH ER的双标染色均为阴性.结论垂体腺瘤患者的性别不影响肿瘤组织中ER蛋白的表达.垂体腺瘤中,分泌PRL、LH或FSH的垂体腺瘤细胞可表达ER;分泌ACTH或TSH的垂体腺瘤细胞不表达ER;分泌GH的垂体腺瘤细胞是否表达ER可能与该垂体腺瘤是否同时分泌PRL有关.ER在PRL、LH及FSH垂体腺瘤细胞的发生、发展中发挥作用.     

Selective estrogen receptor modulators

Selective estrogen receptor modulators (SERMs) competitively bind to estrogen receptors to act as agonists or antagonists in certain tissues, distinguishing the various available SERMS. Although tamoxifen, toremifene, and additional new compounds are discussed briefly, raloxifene is the only SERM currently indicated for the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis in women. The effects of raloxifene on vertebral fractures, nonvertebral fractures, and bone mineral density (BMD) have been explored. In the Multiple Outcomes of Raloxifene Evaluation (MORE) trial, vertebral fractures were significantly reduced in the raloxifene treatment group (relative risk of 0.60, 95% confidence interval 0.50–0.70, p<0.01). Raloxifene did not significantly reduce nonvertebral fractures with either 60 or 120 mg/d in the MORE trial. BMD increased by 0.4 to 1.20% at the lumbar spine and the effects have been documented for at least 7 yr in the Continuing Outcomes Relevant to Evista trial. Fracture prevention is greater than expected based on BMD changes. Adverse effects that should be considered with raloxifene include hot flushes and an increased risk for venous thromboembolism. Raloxifene is a viable option for postmenopausal patients with osteoporosis, particularly in patients at increased risk of invasive breast cancer. Although not yet indicated by the US Food and Drug Administration for breast cancer prevention, clinical trail data is encouraging.     

雌激素受体在大鼠和兔血管的分布

目的 :观察 ER两个亚型α和β在大鼠和兔血管的表达。方法 :应用种属特异性抗体 （兔抗大鼠 ERα和羊抗大鼠 ERβ抗体 ）进行免疫组织化学染色。结果 :ERα和 ERβ免疫反应阳性物质位于细胞核内 ,阳性细胞主要分布于血管内膜、外膜及肌层。结论 :在大鼠和兔血管分布有 ERα和 ERβ免疫反应阳性细胞 ,提示两者在介导雌激素的作用中有重要功能。     

激素替代治疗对去卵巢大鼠动脉雌激素受体表达的影响

目的　研究雌、孕激素替代治疗时去卵巢大鼠动脉壁雌激素受体 (ER)的表达。　方法　将 40只成年雌性大鼠随机分为 4组 :假手术对照组、去卵巢组、去卵巢 雌激素治疗组、去卵巢 雌孕激素治疗组。给予正常饮食 ,2个月后处死大鼠。用放免法检测血清中雌二醇和孕酮浓度 ,用放射配体结合分析法检测大鼠主动脉ER的含量。　结果　 (1)正常雌性成年大鼠 (假手术对照组 )主动脉中存在ER ,解离常数 (Kd)为 (3 0± 0 7)× 10 -9,最大结合容量 (Bmax)为 (37 4± 7 9)pmol/g蛋白 ;(2 )去卵巢组大鼠动脉ER的Bmax〔(10 4± 5 9)pmol/g蛋白〕显著低于假手术组 (P <0 0 1) ;(3)去卵巢 雌激素治疗组与去卵巢 雌孕激素治疗组动脉ER的Bmax差别无显著性〔(分别为 (40 7± 7 5 )和(35 1± 4 5 )pmol/g蛋白〕 ,二者都显著高于去卵巢组 ;各组间Kd值差别无显著性。　结论　去卵巢2个月后大鼠主动脉的ER表达显著减少 ,补充雌激素或补充雌、孕激素能使去卵巢大鼠主动脉ER的含量维持在正常水平 ,这可能是雌激素对绝经后妇女心血管保护作用的机制之一。     

Distribution of estrogen receptor subtypes,expression of their variant forms,and clinicopathological characteristics of human colorectal cancer

We examined the expression of estrogen receptor (ER) messenger RNAs (ER-, ER-, and ER- isoforms) in colorectal tumor samples and corresponding normal mucosa, paying particular attention exons 3 and 5 of both ER mRNA subtypes that likely suffer deletions, and may encode proteins that have lost either DNA- or ligand-binding moieties. Then we correlated these findings with the clinicopathological properties of the tumors. Our results demonstrated that in all patients the two ER subtype mRNAs were coexpressed in wild-type form. In 10% of the patients the ER- mRNA was also present as an exon-5-deleted form that encoded any aberrant protein. Immunohistochemical analysis revealed that the ER- protein was present in tumor stroma, but not in infiltrating lymphocytes. ER-1 and ER-2, isoforms of ER-, were up-regulated in malignant tissues, whereas the ER-5 isoform, was found to be equally expressed, at very low levels, in the two tissue compartments. No correlations between ER levels and clinicopathological parameters were found. This suggests that the ER- mRNA levels are independent of the tumor characteristics.     

Myeloid-specific estrogen receptor alpha deficiency impairs metabolic homeostasis and accelerates atherosclerotic lesion development

ERα is expressed in macrophages and other immune cells known to exert dramatic effects on glucose homeostasis. We investigated the impact of ERα expression on macrophage function to determine whether hematopoietic or myeloid-specific ERα deletion manifests obesity-induced insulin resistance in mice. Indeed, altered plasma adipokine and cytokine levels, glucose intolerance, insulin resistance, and increased adipose tissue mass were observed in animals harboring a hematopoietic or myeloid-specific deletion of ERα. A similar obese phenotype and increased atherosclerotic lesion area was displayed in LDL receptor-KO mice transplanted with ERα(-/-) bone marrow. In isolated macrophages, ERα was necessary for repression of inflammation, maintenance of oxidative metabolism, IL-4-mediated induction of alternative activation, full phagocytic capacity in response to LPS, and oxidized LDL-induced expression of ApoE and Abca1. Furthermore, we identified ERα as a direct regulator of macrophage transglutaminase 2 expression, a multifunctional atheroprotective enzyme. Our findings suggest that diminished ERα expression in hematopoietic/myeloid cells promotes aspects of the metabolic syndrome and accelerates atherosclerosis in female mice.