60Co-γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的:探讨60Co -γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子(vascula endothelial growth factor ,VEGF)表达变化.方法:2 Gy剂量60 Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72 h VEGF mRNA表达改变, 以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化.结果:以对照组(未照射组)VEGF mRNA表达量为1,照射后4 h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰(8.83±3.01,P＜0.05 ;14.67±7.18,P＜0.01),48-72 h随后降至接近对照组水平.ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4 h 降低,随后开始升高,24、48 h达到高峰(600.86±20.87,P＜0.05;594.75± 2.52,P＜0.05),72 h降至对照组水平.结论:2 Gy剂量60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机.     

鸢尾素介导抗炎和抗氧化作用的机制

目的：探讨鸢尾素(irisin)介导的小鼠巨噬细胞RAW264.7抗炎和抗氧化作用的机制。方法：用200 ng/mL鸢尾素分别处理RAW264.7细胞0、24和48 h,采用实时荧光定量PCR (qPCR)检测抗炎因子(IL-10、Arg-1、CD206),抗氧化基因(HO-1、SOD2)和PPAR-γ mRNA的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中抗炎因子含量;试剂盒测定抗氧化酶活性;Western blot检测PPAR-γ蛋白表达;免疫荧光法检测Nrf2、PPAR-γ的表达和定位。另用200 ng/mL鸢尾素预处理细胞4 h,100 ng/mL脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞24 h,采用qPCR检测促炎因子表达,DCFH-DA和Mito-LX染色检测活性氧(ROS)水平。进一步用PPAR-γ抑制剂T0070907(30 μmol/mL)预处理细胞4 h,200 ng/mL鸢尾素培养24 h,采用qPCR检测抗炎因子表达。结果：与对照组相比,200ng/mL鸢尾素可促进IL-10、Arg-1和CD206等抗炎因子的表达(P<0.05),并抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6 mRNA表达升高(P<0.05),表明鸢尾素具有抗炎作用。并且200 ng/mL鸢尾素处理RAW264.7细胞4 h后Nrf2发生核转位,HO-1和SOD2表达和酶活性显著增强,GSH含量也升高(P<0.05)。此外,鸢尾素刺激下细胞内PPAR-γ的mRNA和蛋白表达升高,并发生明显核转位,PPAR-γ抑制剂T0070907可阻断鸢尾素介导的抗炎因子表达升高(P<0.05)。结论：鸢尾素通过PPAR-γ启动巨噬细胞M2型极化发挥抗炎作用,并增强Nrf2及下游抗氧化酶谱表达,有望成为炎症疾病候选治疗药物。     

X射线对人肺癌A549细胞Bmi-1表达的影响

目的：研究X射线照射对人肺癌A549细胞株中Bmi-1 mRNA和蛋白表达的影响。方法：用不同剂量（0、2、4、6Gy）的X射线照射体外培养的人肺癌A549细胞株,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测照射0、6、12、24、48和72 h后Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,2、4、6 Gy X射线照射A549细胞后48 h内Bmi-1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0.05）;（2 Gy 48 h组除外）,2 Gy组照射后6 h、4 Gy组12 h、6 Gy组24 h升高最显著（P〈0.05）。照射后48 h内蛋白表达升高（4Gy除外）,48 h后蛋白表达逐渐下降,至72 h时接近未照射组水平。各时间点（除4 Gy 48 h和72 h外）的蛋白表达与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,2～6 Gy剂量X射线照射48 h内可使人肺癌A549细胞Bmi-1表达升高,之后表达逐渐降低。     

γ射线对人肺癌A549细胞和人淋巴细胞Cx43基因转录表达的影响

目的:研究γ射线对人肺癌A549细胞和淋巴细胞Cx43基因转录表达的影响.方法:对数生长期的肺癌A549细胞和外周血淋巴细胞,分别给予1、2、3、5和6 Gy的60Co γ射线照射,并于照射前(对照组)和照射后4、8、12、24、36、48和72 h分别提取总RNA,反转录成cDNA.应用实时荧光定量PCR技术,检测各时相点Cx43基因表达改变.结果:低剂量1～6 Gy照射后12 h,人外周血淋巴细胞Cx43 mRNA表达水平明显增高,P<0.05.肺癌A549细胞照射后Cx43 mRNA表达水平(在1、3和6 Gy照射12 h后分别为0.06、0.12和0.09)与对照组(1.00)相比明显降低,P<0.05.结论:γ射线照射后能上调人淋巴细胞Cx43 mRNA表达和下调肺癌A549 Cx43 mRNA表达,其机制可能与细胞类型及对γ射线的反应性有关.     

^60Co—γ照射对肺癌A549细胞VEGF表达的影响

目的：探讨^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后血管内皮生长因子（vascula endothelial growth factor,VEGF）表达变化。方法：2Gy剂量^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞,以荧光定量PCR法检测照射后4、12、24、48、72h VEGF mRNA表达改变,以ELISA法检测各组培养液上清中VEGF蛋白表达量变化。结果：以对照组（未照射组）VEGF mRNA表达量为1,照射后4h VEGF mRNA表达开始升高,12、24小时达到高峰（8．83±3．01,P〈0．05;14．67±7．18,P〈0．01）,48—72h随后降至接近对照组水平。ELISA检测培养液上清中VEGF蛋白表达量,在照射后4h降低,随后开始升高,24、48h达到高峰（600．86±20．87,P〈0．05;594．75±2．52,P〈0．05）,72h降至对照组水平。结论：2Gy剂量^60Co-γ射线照射肺癌A549细胞后早期VEGF表达升高,我们推测此时可能是联合抗VEGF药物抑制肺癌转移的最佳时机。     

不同时间点电离辐射对胶质瘤C6细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

目的 探讨不同时间点电离辐射对胶质瘤c6细胞垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响.方法 胶质瘤C6细胞用2 Gy剂量X射线照射,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测照射前、照射后4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 hPTrG mRNA的表达,采用免疫细胞化学检测FITG蛋白表达.结果 FITG mRNA及其蛋白的表达水平在X射线照射后4 h即开始下降,12 h下降最明显,24 h开始回升,72 h恢复正常.结论 电离辐射可以显著影响胶质瘤细胞PTTG的转录和翻译;机体内存在对电离辐射导致的PTTG损伤的修复系统.     

阿魏酸对人脐静脉血管内皮细胞辐射损伤的保护作用及其机制

目的：研究阿魏酸对电离辐射所致人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用,及其对辐射敏感蛋白Thbd和γH2AX的影响,探讨阿魏酸的抗辐射作用与机制。方法：以4~16 Gy的⁶⁰Co γ射线照射HUVEC细胞,照后48 h以MTS法检测细胞活力,探索适宜照射剂量。以10 Gy γ射线照射HUVEC细胞,分别于照射后1、3、6、12、24和48 h提取细胞总蛋白,蛋白质印迹法检测蛋白Thbd和γH2AX的表达水平。并于照射前2 h,预防性给予细胞0.001~1 μmol/L的阿魏酸,照后48 h检测细胞活力、Thbd和γH2AX蛋白表达水平的改变。结果：与未照射组（0 Gy）比较,HUVEC受到10 Gy γ射线照射后48 h,细胞活力约降低30%（P < 0.05）。以此剂量照射,照后1 h Thbd约降至正常水平的0.6（P < 0.05）,照射后48 h γH2AX约升高至正常水平的5倍（P < 0.05）。与照射对照组比较,0.1和1 μmol/L 的阿魏酸作用后,受照HUVEC的细胞活力提高（P < 0.05）,Thbd蛋白表达升高（P < 0.05）,γH2AX蛋白表达降低（P < 0.05）。结论：0.1~1 μmol/L的阿魏酸可调节10 Gy γ射线照射后HUVEC的Thbd和γH2AX蛋白的表达水平,从而促进HUVEC增殖,提高其细胞活力,发挥抗辐射作用。     

60Coγ射线诱导人淋巴细胞线粒体COXⅡ基因表达改变的研究

目的：研究电离辐射诱导人外周血永生化淋巴细胞株中线粒体COXⅡ基因表达水平的变化,以期为探索放射敏感生物标志物和解决放射生物学领域中快速剂量估算的难题提供科学依据。方法：采用不同剂量（0～15 Gy）~（60）Coγ射线照射指数生长期的人淋巴细胞株,于照射后不同时间点（0～72 h）收集细胞提取总RNA和总蛋白,分别用实时荧光定量PCR和Western blot方法测定COXⅡ基因表达水平的变化。结果：~（60）Coγ射线照射后的各个时间点上,COXⅡ基因在mRNA水平的变化无明显规律性。在蛋白水平上,与对照组相比,~（60）Coγ射线照射4和12 h后COXⅡ基因表达水平无显著变化（P〉0.05）,照射后24、48和72 h COXⅡ基因表达水平显著上调并且在不同范围内呈现良好的剂量-效应关系（P〈0.05）。对比相同照射时间点COXⅡ基因的mRNA和蛋白水平的表达水平变化发现,两者无必然一致的趋势,但照射后48和72 h,COXⅡ蛋白的表达水平与照射时间呈良好的线性关系。结论：~（60）Coγ射线照射后48和72 h,COXⅡ蛋白表达水平与照射时间呈良好的线性关系,可作为新的辐射损伤标志物进一步研究验证。     

Y射线对小鼠胸腺淋巴细胞微丝形态及丝切蛋白磷酸化的影响

目的：通过观察γ射线诱导小鼠胸腺淋巴细胞的微丝形态变化和对丝切蛋白（cofilin）磷酸化的影响,探讨cofilin及相关蛋白在辐射损伤中的作用。方法：将36只BALB/c小鼠按对照组（0 h）,照射后3、6、9、12和24 h时间点随机分为6组,每组6只,除对照组外,其余各组均给予2 Gy γ射线诱导,根据cofilin蛋白表达规律,确定取材时间。另将24只BALB/c小鼠按γ射线诱导剂量随机分为未照射（0 Gy）组、2、6和10 Gy组共4组,照射3 h后取材,观察淋巴细胞微丝形态,进行cofilin蛋白1（cofilin 1）、磷酸化cofilin蛋白（p-cofilin）、LIM激酶1（LIMK1）、TES激酶2（TESK2）和Slingshot家族的磷酸酶2（SSH2）表达检测。结果：BALB/c小鼠在2 Gy γ射线照射3 h后胸腺淋巴细胞cofilin基因的mRNA和蛋白表达均显著下调（P < 0.05）,因此后续实验选择照后3 h为取材时间。通过对cofilin及相关蛋白表达的检测,发现随着γ射线照射剂量的增加,胸腺淋巴细胞cofilin的表达逐渐增加,与对照组相比,以10 Gy组增加最为明显（P < 0.05）;而p-cofilin的表达则减少,10 Gy组减少最为明显（P < 0.05）。LIMK1、TESK2和SSH2的表达在照射后无显著变化（P > 0.05）。结论：随着照射剂量的增加,更多的SSH2使p-cofilin的Ser3位点去磷酸化,胞质内cofilin的量增多,参与到微丝骨架组装的过程中,细胞的迁移能力增强。     

shRNA转染对食管癌细胞TE13中CHK1和CHK2表达以及照射后G2/M期阻滞的影响

背景与目的:肿瘤细胞照射后常表现为细胞周期的变化,本研究采用细胞周期监测点激酶CHK1和CHK2基因的短发卡状RNA(shRNA)转染食管癌细胞,观察对其蛋白表达以及60Co γ射线照射后细胞周期的影响.方法:设计合成并构建质粒连接的CHK1和CHK2 shRNA,分别提取质粒DNA并采用脂质体转染TE13细胞并传代;采用Western blot、RT-PCR和流式细胞仪分别检测CHK1和CHK2蛋白和muRNA表达、以及5 Gy 60Co γ射线照射后细胞周期变化,克隆形成实验检测5 Gy γ射线照射后细胞存活率.结果:采用CHK1和CHK2 shRNA转染TE13细胞后,其mRNA和蛋白表达均明显降低.单纯5 Gy γ射线照射后24 h,TE13细胞G2/M期比例由未照射组的32.17%增至6147%;shRNA转染的TE13细胞在5 Gy γ射线照射后24 h,C2/M期比例由单纯照射组的61 47%降至28.13%(CHK1)和42.80%(CHK2),P＜0.05.5 Gy γ射线、CHK1 shRNA力5 Gy γ射线、以及CHK2 shRNA力5 Gy γ射线照射后,细胞存活率分别为27.0%、13.0%和21.0%.shRNA转染的子一代TE13细胞在转染后120 h,对CHK1和CHK2蛋白表达的抑制作用已基本消失:转染120 h后以5 Gy γ射线照射24 h,CHK1或CHK2 shRNA转染组G2/M期比例高于单纯照射组,P＜0.05;至转染后144 h和5 Gy γ射线照射后48 h,转染组与单纯照射组比较G2/M期比例无明显差别,P＞0.05.结论:采用质粒连接的人CHK1和CHK2 shRNA转染TE13细胞后,可以明显抑制其mRNA和蛋白表达并消除照射后G2/M期阻滞,增加放射敏感性;提示TE13细胞γ射线照射后G2/M期检测点可能受CHK1和CHK2激酶双重调节,但以CHK1为主.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。