基于正反交杂交小鼠早期胚胎转录组的等位基因表达不平衡现象动态变化研究

目的 研究早期胚胎中等位基因表达不平衡的现象及其背后的调控因素.方法 基于两个不同品系纯合小鼠的正反交杂交实验设计,对早期胚胎中5个重要阶段的RNA测序数据进行生物信息学分析.结果 建立了识别基于正反交杂交品系中等位基因表达不平衡的工作流程,分析了早期胚胎5个重要阶段等位基因表达不平衡的动态变化规律,以及母源RNA、初...     

可溶性CD30和Th1/Th2检测在慢性移植肾功能不全患者免疫状态评估中的应用

目的探讨将血清可溶性CD30(sCD30)和外周血CD3 CD8-T淋巴细胞Th1/Th2检测用于评估慢性移植肾功能不全(CRAD)患者免疫状态的价值。方法通过分析临床资料,结合移植肾穿刺活检,选取移植术后远期(>6个月)免疫损伤为主的慢性移植肾功能不全患者(A组)、非免疫损伤为主的慢性移植肾功能不全患者(B组)和移植肾功能正常患者(C组)各15例,采用流式细胞术检测每例患者外周血CD3 CD8-T淋巴细胞IFN-γ和IL-4表达率,以IFN-γ和IL-4表达率之比作为Th1/Th2比例,同时留取标本以ELISA法行血清sCD30水平测定。结果A、B、C组患者外周血CD3 CD8-T细胞IFN-γ表达率(11.2%±6.2%、10.9%±6.4%、12.3%±6.9%)无统计学差异(P>0.05)。A组患者外周血CD3 CD8-T细胞IL-4表达率(4.0%±2.8%)明显低于B、C组(7.9%±5.5%、10.2%±7.5%,P<0.01),且其Th1/Th2比例(3.1±1.1)明显高于B、C组(1.5±0.5、1.4±0.5,P<0.01)。B、C组患者外周血CD3 CD8-T细胞IL-4表达率和Th1/Th2比例无统计学差异(P>0.05)。A组患者血清sCD30水平(20.2±12.4ng/ml)明显高于B、C组(7.8±3.1ng/ml、7.6±3.0ng/ml,P<0.01),而B、C组患者血清sCD30水平无统计学差异(P>0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,当Th1/Th2比例取1.95时,鉴别以免疫损伤为主的CRAD的敏感度为80%,特异度为90%;血清sCD30水平取10.0ng/ml时,鉴别以免疫损伤为主的CRAD的敏感度为93.3%,特异度为86.7%。结论以免疫损伤为主的CRAD患者大都存在Th1/Th2平衡失调(向Th1方向偏移),且血清sCD30水平相对较高。根据外周血CD3 CD8-T细胞Th1/Th2比例和血清sCD30水平鉴别以免疫损伤为主的CRAD具有较高的敏感性和特异性。     

可溶性CD30和Th1/Ih2检测在慢性移植肾功能不全患者免疫状态评估中的应用

目的 探讨将血清可溶性CD30(sCD30)和外周血CD3 CD8-T淋巴细胞Th1/Th2检测用于评估慢性移植肾功能不全(CRAD)患者免疫状态的价值.方法 通过分析临床资料,结合移植肾穿刺活检,选取移植术后远期(＞6个月)免疫损伤为主的慢性移植肾功能不全患者(A组)、非免疫损伤为主的慢性移植肾功能不全患者(B组)和移植肾功能正常患者(C组)各15例,采用流式细胞术检测每例患者外周血CD3 CD8-T淋巴细胞IFN-γ和IL-4表达率,以IFN-γ和IL-4表达率之比作为Th1/Th2比例,同时留取标本以ELISA法行血清sCD30水平测定.结果 A、B、C组患者外周血CD3 CD8-细胞IFN-γ表达率(11.2%±6.2%、10.9%±6.4%、12.3%±6.9%)无统计学差异(P＞0.05).A组患者外周血CD3 CD8-T细胞IL-4表达率(4.0%±2.8%)明显低于B、C组(7.9%±5.5%、10.2%±7.5%,P＜0.01),且其Th1/Th2比例(3.1±1.1)明显高于B、C组(1.5±0.5、1.4±0.5,P＜0.01).B、C组患者外周血CD3 CD8-T细胞IL-4表达率和Th1/Th2比例无统计学差异(P＞0.05).A组患者血清sCD30水平(20.2±12.4ng/ml)明显高于B、C组(7.8±3.1ng/ml、7.6±3.0ng/ml,P＜0.01),而B、C组患者血清sCD30水平无统计学差异(P＞0.05).受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,当Th1/Th2比例取1.95时,鉴别以免疫损伤为主的CRAD的敏感度为80%,特异度为90%;血清sCD30水平取10.0ng/ml时,鉴别以免疫损伤为主的CRAD的敏感度为93.3%,特异度为86.7%.结论 以免疫损伤为主的CRAD患者大都存在Th1/Th2平衡失调(向Th1方向偏移),且血清sCD30水平相对较高.根据外周血CD3 CD8-T细胞Th1/Th2比例和血清sCD30水平鉴别以免疫损伤为主的CRAD具有较高的敏感性和特异性.     

XRCC2基因多态性与中国北方人群肺癌易感性的相关性研究

目的 研究DNA双链断裂修复基因XRCC2多态性与中国北方人群肺癌易感性的关系.方法 采用病例对照研究,收集河北石家庄及其周边县市区的原发性肺癌患者300例为肺癌组,同时选择与患者同一地区的健康人300例为对照组,应用PCR-RFLP方法分析了肺癌组和对照组的XRCC2基因(C41657T)位点的多态性,比较不同基因型与肺癌易感性的关系,以及基因多态性与吸烟之间对肺癌易感性的交互作用.结果 XRCC2(C41657T)C/T等位基因频率肺癌组为84.67%、15.33%,对照组为87.50%、12.50%,两组间分布无显著性差异(P=0.16);C/C、C/T、T/T基因型频率肺癌组分别为72.7%、24.0%、3.3%,对照组分别为76.3%、22.0%、1.7%,C/C及C/T基因型频率两组间比较无显著性差异(χ2=0.48,P=0.48).非吸烟者C/T基因型频率肺癌组高于对照组(χ2=6.67,P=0.01);相对于C/C基因型,C/T基因型的个体患肺癌的(OR＝2.11,95%CI＝1.19～3.73);吸烟者C/C及C/T基因型频率肺癌组与对照组无显著性差异(OR=0.69,95%CI=0.41～1.16,P=0.16).结论 XRCC2(C41657T)基因多态性总体上对肺癌易感性无明显影响,但其C/T基因型可增加非吸烟中国北方人群患肺癌的危险性.     

太极拳运动对中老年女性Th1/Th2平衡影响的机制研究

目的:从细胞因子角度在基因表达水平上探讨太极拳运动前后调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)对辅助性T细胞(helper T cell,Th)亚群Th1/Th2平衡的影响。方法:将自愿参加本实验的34名中老年女性随机分为太极拳组和对照组。太极拳组参加为期32周、每周3次、每次1小时的24式和42式太极拳锻炼;对照组不锻炼,保持原有生活状态。实验前后采集受试者外周血,使用流式细胞术检测Treg细胞数量;使用Real-time PCR定量分析Th1型淋巴细胞相关细胞因子干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)和Th2型淋巴细胞相关细胞因子白介素-4(Interleukin-4,IL-4)、Treg相关细胞因子白介素-10(Interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β(transforming growth factor,TGF-β)以及细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)mRNA表达。结果:实验后,太极拳组IFN-γ、TGF-β、CTLA-4和IL-10 mRNA表达量较实验前显著上升(P<0.01),IFN-γ与IL-4 mRNA表达量比值显著上升(P<0.05),Treg细胞占CD4+T细胞比例显著上升(P<0.01)。实验后,对照组除TGF-βmRNA表达下降(P<0.05)外,其他指标变化均无统计学意义。结论:太极拳运动影响外周血Treg细胞数量及相关细胞因子mRNA表达,提高中老年女性Th1/Th2型细胞因子mRNA表达量比值,在基因表达水平上改善老年女性Th1/Th2失衡。     

六个miniSTR基因座在中国汉族人群的复合扩增研究(英文)

目的 研究两个miniSTR复合扩增体系在中国汉族人群中的特征,其中NC01(D10S1248、D14S1434和D22S1045)由欧洲DNA分析工作组推荐,另一体系中D2S2944、D18S872和D19S591位点为自行研究发现.方法 利用荧光复合扩增技术进行扩增,采用ABI PRISM(☉)310基因分析仪对产物进行检测,GeneScan 3.7及GenoTyper 3.7软件分析结果.结果 所有基因座复合Hardy-Weinberg平衡,6个基因座的累积个人识别率为0.9999,累积非父排除率为0.9793.同时对NC01在中国人群和其他人群中的遗传差异进行了比较.结论建立了两个miniSTR基因座的荧光标记复合扩增体系,这些体系在不同的人群中具有遗传差异.     

中国耐力运动员线粒体DNA高变区I多样性及其与其他人群的比较研究

为了探讨人类运动能力的相关基因标记与分子遗传学机制,选取汉族耐力运动员61人,相应汉人对照63人,对其线粒体基因高变区I(mtDNA HVRⅠ)特异性片段进行扩增、测序,评估其单倍型、多样性及偶合概率,并与其他人群进行比较研究.结果显示:中国汉族耐力运动员中有60个单倍型,汉人对照有61个单倍型.中国汉族耐力运动员mtDNA多样性高达99.95%,汉人对照mtDNA基因多样性也达99.90%,二组无关个体间偶合概率均很小,经卡方检验上述各参数与频率在汉族耐力运动员和汉人对照两组间的分布无显著性差异(P>0.05).与西班牙人、中国台湾人及俄罗斯人等不同人群比较发现,mtDNA多样性的差异存在于群体内个体间,而群体间的差异较小.结果提示,汉族耐力运动员mtDNA HVRⅠ多样性非常高,且每个个体间mtDNA单倍型差异很大;不同人群mtDNA多样性的差异存在于群体内个体间,而群体间的差异较小.     

创伤后多器官功能不全综合征与HLA-DRB1基因的相关性研究

目的　研究HLA -DRB1基因与创伤后多器官功能不全综合征 (MODS)的相关性。　方法　采用多聚酶链反应 -序列特异性引物分析法 (PCR -SSP) ,对 37例创伤后MODS患者HLA -DRB1基因进行分型 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)进行血浆白细胞介素 - 10 (IL - 10 )测定 ,并与相应健康人 5 2例结果比较。　结果　创伤后MODS患者HLA -DRB1 15 0 1～DRB1 15 0 2 (编码HLA-DR2抗原 )基因频率显著升高 [5 1.4%∶2 6 .9% ,χ2 =4.5 32 ,相对危险率 (RR) =2 .86 5 ,P <0 .0 5 ,病因分数 (EF) =0 .49]。DR2 的MODS患者血浆IL - 10水平较DR2 -的MODS患者显著升高 (P <0 .0 1) ,DR2 的MODS患者病死率亦较DR2 -的MODS患者显著升高 (P <0 .0 5 )。　结论　创伤后MODS易感性与宿主HLA -DRB1 15 0 1～DRB1 15 0 2密切相关。     

中国汉族人群SCN5A基因H558R、P1090L、4299+53T＞C及D1819D的多态性研究

目的了解中国汉族人群SCN5A基因单核苷酸多态性少见等位基因频率分布情况。方法在社区体检人群中选择126例作为研究对象,采用限制性片段长度多态性分析（RFLP）对SCN5A基因的H558R、P1090L、4299＋53T〉C及CA457T（D1819D）多态位点进行基因型鉴定,并随机选取样本采用ABI3700毛细血管电泳进行序列测定验证酶切结果。结果SCN5A H558R、P1090L、4299＋53T〉C及C5457T（D1819D）在中国汉族人群中的少见等位基因频率分别为11．1％、5．2％、28．2％及31．8％,与日本及国人先前的研究结果不尽相同。结论SCN5A基因的单核苷酸多态性存在种族差异。     

基因水平HLA—DR相容对移植肾急性排斥和存活率的影响

回顾性分析基因水平HLA-DR相容对移植肾急性排斥和存活率的影响。318例接受环孢菌素A治疗的首次尸肾移植,DR分型采用PCR-SSP方法。分析DR相容对早期肾功能、急性排斥与激素治疗和1年存活率的影响。结果显示HLA-DR基因分型均获成功,耗时4h。318例受者中达到0MM者占11.6%、1MM占51.9%、2MM占36.5%,总体排斥率49.1%,1年人/肾存活率94.3%、90.3%。DR相容者,早期肾功能、急性排斥与激素治疗、移植肾存活均明显优于配型差的受者,具有统计学差异。提示基因水平HLA-DR相容对尸肾移植急性排斥和存活率具有重要影响。     

Using X-chromosomal markers in relationship testing: calculation of likelihood ratios taking both linkage and linkage disequilibrium into account

X-chromosomal markers in forensic genetics have become more widely used during recent years, particularly for relationship testing. Linkage and linkage disequilibrium (LD) must typically be accounted for when using close X-chromosomal markers. Thus, when producing the weight-of-evidence, given by a DNA-analysis with markers that are linked, the normally used product rule is invalid. Here we present an implementation of an efficient model for calculating likelihood ratios (LRs) with markers on the X-chromosome which are linked and in LD. Furthermore, the model was applied on several cases based on data from the eight X-chromosomal loci included in the Mentype^® Argus X-8 (Biotype). Using a simulation approach we showed that the use of X-chromosome data can offer valuable information for choosing between the alternatives in each of the cases we studied, and that the LR can be high in several cases. We demonstrated that when linkage and LD were disregarded, as opposed to taken into account, the difference in calculated LRs could be considerable. When these differences were large, the estimated haplotype frequencies often had a strong impact and we present a method to estimate haplotype frequencies. Our conclusion is that linkage and LD should be accounted for when using the tested set of markers, and the used model is an efficient way of doing so.     

肝移植患者外周血中Treg细胞上CTLA-4及HLA-DR表达的特征及意义

目的 观测肝移植患者外周血中调节性T细胞（Treg）上CTLA-4、HLA-DR分子的表达特征,探讨CTLA-4、HLA-DR表达与术后急性排斥反应的关系.方法 入组38例行肝移植术患者,其中16例患者发生急性排斥反应（急排组）,22例未发生急性排斥反应（稳定组）.应用流式细胞仪检测两组肝移植术后患者外周血中Treg细胞上CTLA-4、HLA-DR分子的表达,并分析其与肝功指标的相关性.结果 急排组外周血中Treg细胞上CTLA-4及HLA-DR分子表达水平明显低于稳定组（P＜0.05）.此外,Treg细胞上CTLA-4及HLA-DR分子表达水平与肝功指标ALT、AST呈明显负性相关.结论 肝移植患者发生急性排斥反应时,外周血中Treg细胞上CTLA-4及HLA-DR分子表达水平降低,提示其可能与术后急性排斥反应的发生相关.     

HLA-G5在健康人和肝肾移植受者体内的表达分析

目的了解国内健康人和器官移植受者体内人类白细胞抗原-G5(HLA-G5)的表达情况,并探索其表达的时间规律。方法分别采集30例健康人(健康查体正常)、50例肝移植受者(肝移植术后3个月且肝功能稳定)、50例肾移植受者(肾移植术后3个月且肾功能稳定)的外周血各3ml,并采集33例肝肾移植受者术前及术后1周、4周、12周、1年的外周血各3ml。提取血清,采用酶联免疫法(ELISA)检测HLA-G5水平。结果30例健康人中,28例HLA-G5的A值低于0.5,根据标准曲线含量为0.0ng/ml,2例分别为8、9ng/ml。50例肝移植受者HLA-G5表达阳性者16例,阳性率为32%,其中4例含量高于30ng/ml。50例肾移植受者HLA-G5表达阳性者10例,阳性率为20%,有1例含量为25ng/ml。健康人、肝移植、肾移植3组血清中HLA-G5平均含量分别为0.56±0.20、8.34±1.50和3.26±0.25ng/ml。对33例肝肾移植受者进行动态检测显示,有1例患者术前和术后1周HLA-G5呈阳性,4例术后4周阳性,12例术后12周阳性,追踪至术后1年有11例阳性。结论HLA-G5在健康人体内低表达,与器官移植免疫耐受有一定相关性。在移植后移植物接受良好的情况下,HLA-G5有不同水平的表达,肝移植受者的HLA-G5表达量高于肾移植受者。33例肝肾移植受者的动态结果证实了HLA-G5的表达从mRNA转录到蛋白表达的时间为15~60d的观点,HLA-G5的表达在第60天到达高峰,并具有稳定性。     

肾移植术后肝肾功能损害患者应用他克莫司切换环孢素的临床观察

目的观察他克莫司切换环孢素A治疗肾移植术后肝、肾功能损害患者的安全性及临床疗效。方法将33例肾移植术后肝、肾功能异常的患者分为4组：术后直接使用他克莫司组（Ⅰ组,8例）;术后1年内切换他克莫司组（Ⅱ组,9例）;术后2～4年切换他克莫司组（Ⅲ组,9例）;术后5年以上切换他克莫司组（Ⅳ组,7例）。观察用他克莫司替换环孢素A12、24个月后各组患者肝、肾功能的变化情况。结果肾移植术后1年内切换他克莫司的患者,切换12个月时血肌酐由切换前的（133.21±40.92）μmol·L-1降至（116.86±35.41）μmol·L-1,呈明显下降趋势,但差异无统计学意义;移植术后2～4年切换他克莫司的患者,切换24个月时,患者的血肌酐由（138.00±15.72）μmol·L-1降至（109.76±9.68）μmol·L-1,下降较显著（P〈0.05）,差异有统计学意义;术后5年以上切换他克莫司患者,切换12个月时,血肌酐变化不大,差异无统计学意义。结论用他克莫司替换环孢素A治疗肾移植术后肝、肾功能损害是一种安全而有效的措施。     

Corrigendum to “Linkage disequilibrium analysis of D12S391 and vWA in U.S. population and paternity samples” [Forensic Sci. Int.: Genet. (in press), doi:10.1016/j.fsigen.2010.09.003]

Recently, the European Network of Forensic Science Institutes voted to adopt five additional STR loci (D12S391, D1S1656, D2S441, D10S1248, and D22S1045) to their existing European Standard Set of seven STRs (TH01, vWA, FGA, D8S1179, D18S51, D21S11, and D3S1358). The D12S391 and vWA loci are located 6.3 megabases (Mb) apart on chromosome 12. Ideally for use in forensic analyses, genetic markers on the same chromosome should be more than 50 Mb in physical distance in order to ensure full recombination and thus independent inheritance. The purpose of this study was to evaluate if the closely located D12S391 and vWA loci are independent and, consequently, if these loci can be included in the product rule calculation for forensic and kinship analyses. Departures from Hardy–Weinberg equilibrium and linkage disequilibrium between the D12S391 and vWA loci were tested using n = 654 unrelated U.S. African American, Caucasian, and Hispanic samples, and n = 764 father/son paternity samples. In the unrelated U.S. population samples, no significant departures from HWE were detected for D12S391 or vWA. No significant evidence of linkage disequilibrium was observed between the loci in the population samples. However, significant linkage disequilibrium was detected in U.S. African American, Caucasian, and Asian father/son samples with phased genotypes. No significant linkage disequilibrium was detected for U.S. Hispanic paternity samples. The use of phased father/son pairs allowed for robust detection of linkage disequilibrium between D12S391 and vWA. In unrelated population samples, linkage disequilibrium is present but more difficult to detect due to the large number of possible haplotype combinations and unknown allelic phase. For casework analyses that involve unrelated or related individuals, the single-locus genotype probabilities for D12S391 and vWA should not be multiplied to determine the match probability of an autosomal STR profile. Since the D12S391 and vWA loci are not independent, it is recommended that the observed combination of alleles at D12S391 and vWA should be treated as a non-independent diplotype for profile probability calculations. The observed haplotype frequencies for U.S. African American, Caucasian, Hispanic, and Asian populations are provided for match probability calculations.     

载脂蛋白E基因编码区及其转录调控区+113G/C多态在中国正常人群中的分布

目的：探讨中国正常人群中载脂蛋白E(ApoE)基因编码区及其转录调控区 113G／C多态的分布。方法：采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态(RFLP)方法，检测ApoE基因编码区及其转录调控区 113G／C多态各等位基因及基因型的烦率分布。结果：正常人群中ApoE基因及转录调控区 113G／C多态基因型的分布符合Hardy-Weirdberg平衡。按是否含ApoE ε4基因分层后，ε4与非ε4型人群等位基因和基因型烦率分布差异均无显著意义(基因型χ^2=1．819，P=0．178；等位基因χ^2=4．952，P=0．085)。按 113G／C多态各基因型分层后，各人群间ApoE基因型差异无统计学意义(G／G与非G／Gχ^2=1．145，P=0．95；C／C与非C／Cχ^2=3．997，P=0．55)。但ε4等位基因与C／C基因型连锁分离的概率为0，ε4纯合基因型与 113G纯合基因型共分离的概率亦为0。结论：中国正常人群中ε4等位基因与 113C纯合基因型及ε4纯合基因型与 113G纯合基因型共分离相当罕见，这两种基因连锁分离时可能不利于中国人群的生存。