瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

[目的]探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达,以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用.[方法]免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达,MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用.[结果]胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达;47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例,有瘦素受体表达23例,两者共同表达17例;19例新鲜胃癌组织标本,有瘦素mRNA表达13例,瘦素受体mRNA表达12例,两者共同表达10例;与对照组相比,100ng/mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1.45、1.56及1.54.[结论]胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达,瘦素可促进胃癌细胞株增殖.     

瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

摘要：【目的】探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达，以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用。【方法】免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达，MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用。【结果】胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达；47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例，有瘦素受体表达23例，两者共同表达17例；19例新鲜胃癌组织标本，有瘦素mRNA表达13例，瘦素受体mRNA表达12例，两者共同表达10例；与对照组相比，100ng／mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1．45、1．56及1．54。【结论】胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达，瘦素可促进胃癌细胞株增殖。     

RNAi沉默SDF-1基因对新诱导建立的人胃癌耐药细胞系SGC7901/L-OHP的影响

目的 诱导构建人胃癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞系SGC7901/L-OHP,探讨RNAi沉默基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达对SGC7901/L-OHP增殖、凋亡、耐药的影响。方法 L-OHP高浓度间歇冲击法诱导构建耐药细胞系SGC7901/L-OHP,观察其生物学行为变化,RT-PCR及Western blot法检测SDF-1 mRNA和蛋白表达情况;RNAi沉默SGC7901/L-OHP细胞SDF-1基因,从mRNA和蛋白水平验证沉默效果,MTT法及流式细胞术检测SGC7901/L-OHP细胞增殖、凋亡及细胞周期变化。结果 成功建立耐药细胞系SGC7901/L-OHP,L-OHP对其增殖抑制率明显低于SGC7901细胞,其G₀/G₁期细胞增多、S期细胞减少,且SDF-1 mRNA和蛋白表达量明显高于SGC7901细胞(P均<0.05)。成功沉默SDF-1基因表达后,与空白及阴性对照组比较,SDF-1-RNAi组细胞增殖抑制率明显升高,对L-OHP药物敏感度明显升高,且其细胞凋亡也明显升高,G₀/G₁期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P均<0.05)。结论 本实验成功建立人胃癌L-OHP耐药细胞系SGC7901/L-OHP,并发现SDF-1参与胃癌细胞SGC7901对L-OHP获得性耐药过程;RNAi沉默SDF-1基因表达后抑制SGC7901/L-OHP细胞增殖、促进凋亡并部分逆转其对L-OHP的耐药性。     

二氯化钴对胃癌细胞SGC7901凋亡和增殖的影响

目的了解胃癌细胞系SGC7901在缺氧状态下凋亡和增殖情况,探讨低氧诱导因子(hypoxia induced factor,HIF-1α)与胃癌细胞SGC7901凋亡和增殖的关系。方法以二氯化钴(CoCl2)作为缺氧模拟剂,利用RT-PCR、免疫荧光及Western blotting法检测SGC7901细胞HIF-1α在转录水平和翻译水平上的表达,利用流式细胞仪检测SGC7901细胞在不同缺氧程度下的细胞凋亡率,利用MTT法观察SGC7901细胞的增殖情况。结果 (1)50μM CoCl2处理SGC7901细胞24小时后,HIF-1a mRNA及蛋白表达明显增加;(2)50μM CoCl2处理SGC7901细胞24小时后,细胞凋亡减少;(3)50μM CoCl2处理24小时后,细胞生长和增殖均加快。结论 50μM CoCl2处理SGC7901细胞24小时后,细胞增殖能力增加,细胞凋亡减少,HIF-1α表达增加,提示其在此过程中发挥重要作用。     

Survivin反义寡核苷酸诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及对白藜芦醇的增敏作用

目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡及对白藜芦醇敏感性的影响. 方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染胃癌细胞株(SGC7901)后,用MTT法检测细胞毒作用;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR、免疫组化技术检测survivin mRNA及蛋白的表达. 结果: ①survivin ASODN抑制胃癌SGC7901细胞的增殖呈时间和剂量依赖性; ②survivin ASODN处理组SGC7901细胞24 h后凋亡率为(33.6±1.2)%,正义寡核苷酸(SODN)组为(10.7±0.8)%,两组相比,差异有显著性(P＜0.05);③survivin ASODN处理组SGC7901细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降. ④survivin ASODN和白藜芦醇联合处理组SGC7901细胞24,48,72 h生长抑制率,显著高于单用survivin ASODN组(P＜0.05)和单用白藜芦醇组(P＜0.05). 结论:survivin ASODN能够抑制胃癌SGC7901细胞的增殖、诱导凋亡,并能增加胃癌细胞株SGC7901对白藜芦醇的敏感性,推测可能通过下调survivin mRNA及蛋白表达而起作用.     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

YY1在胃癌组织中的表达及其对SGC－7901细胞株增殖和凋亡的影响

目的:检测YY1在胃癌组织中的表达情况,探讨YY1对人胃癌细胞株SGC－7901增殖?凋亡的影响以及可能的机制?方法:利用定量PCR和免疫组织化学分别检测标本中YY1的mRNA和蛋白表达水平?利用慢病毒表达载体系统在胃癌细胞株SGC－7901中上调YY1,运用CCK－8?流式细胞术?平板克隆实验检测YY1对细胞的增殖?凋亡以及克隆形成能力的影响?结果:胃癌组织中YY1的mRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁组织?与空载对照组(SGC－7901－Empty Vector,SGC－7901－EV)和与正常对照组(SGC－7901)相比,过表达YY1组细胞(SGC－7901－YY1)的增殖和平板克隆形成能力明显减弱,细胞凋亡增加?结论:YY1与胃癌的发生发展有一定的关系,可能起到抑癌基因的作用,YY1基因可能成为胃癌靶向治疗的新的潜在靶点?     

胃癌组织中circMAPK14的表达及意义研究

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)14环状RNA(circMAPK14)在胃癌组织中的表达及意义。方法 收集该院29例胃癌患者的组织样本,利用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌及其癌旁组织、人胃癌细胞系SGC7901、正常胃黏膜上皮细胞GES-1中circMAPK14的表达水平。采用小干扰RNA(siRNA)降低circMAPK14的表达水平后,观察其对细胞增殖、凋亡、迁移情况的影响,以及对MAPK14和凋亡相关基因表达的影响。结果 胃癌患者癌灶组织中的circMAPK14 mRNA的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),SGC7901较GES-1的circMAPK14 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);采用siRNA降低circMAPK14的表达促进了SGC7901细胞增殖、迁移,抑制了细胞凋亡;circMAPK14表达水平的降低增强了MAPK14磷酸化水平,降低了Bax、Puma、Noxa等mRNA的表达水平(P<0.01)。结论 circMAPK14可能通过影响MAPK14的活性来调控MAPK信号通路,进而调控凋亡相关基因的表达...     

吲哚美辛体外干预研究胃癌Wnt/β-Catenin信号途径与Caspase-3及Bcl-2关系

目的:研究人胃癌细胞系SGC7901中β-连环蛋白(β-Catenin)与Caspase-3凋亡基因及与Bcl-2原癌基因表达的关系,初步探索肿瘤发生过程中Wnt/β-Catenin通路对细胞凋亡的调节机制.方法:(1)MTT方法检测吲哚美辛抗肿瘤效应;(2)RT-PCR分别检测人胃癌细胞系SGC7901受吲哚美辛干预组和未受干预组中的β-Catenin与Caspase-3及Bcl-2mRNA的表达.结果:吲哚美辛在浓度为50μmol/L时作用24h对人胃癌SGC7901细胞抑制效果不明显,而作用48、72h及浓度为100和200μmol/L时作用24、48、72h的凋亡诱导作用明显,且抑制率呈浓度和时间依赖性;吲哚美辛干预组较未受干预组表现为伴随β-Catenin表达水平降低,Bcl-2表达下调.而Caspase-3的表达上调.结论:人胃癌细胞系SGC7901可能通过Wnt/β-Catenin通路激活Bcl-2原癌基因蛋白表达促进细胞增殖,同时抑制Caspase-3凋亡基因的蛋白表达抑制细胞凋亡,使细胞增殖与凋亡失衡.     

ApoG2对胃癌细胞SGC7901粘附与迁移的影响及机制研究

目的探讨去醛基棉酚醌(ApoG2)对胃癌SGC7901体外细胞粘附、迁移及侵袭能力的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 ApoG2与胃癌细胞株SGC7901共孵育后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ApoG2对细胞增殖能力的影响;细胞粘附实验和侵袭小室法检测其对细胞粘附及侵袭能力的影响;RT-PCR法检测ApoG2对SGC7901细胞中与转移相关基因的变化。结果 ApoG2能抑制SGC7901细胞的增殖,其细胞的增殖抑制率与浓度成正相关。用20μmol·L-1ApoG2与SGC7901细胞共孵育后,可明显降低SGC7901细胞的粘附、迁移及迁徙能力。ApoG2能有效地抑制胃癌SGC7901细胞中NF-κB mRNA的表达。结论 ApoG2在体外具有抑制胃癌SGC7901细胞转移作用,其分子机制可能与下调NF-κB mRNA的表达有关。     

人白细胞介素24重组蛋白对胃癌抗肿瘤机制的实验研究

目的纯化人白细胞介素24（IL-24）的原核重组表达质粒pET-21a（＋）-IL-24在大肠杆菌BL（DE3）中的表达产物rhIL-24,并初步探讨其对胃癌细胞株SGC-7901抗肿瘤的可能机制。方法采用RT-PCR法和Western blot法检测rhIL-24对胃癌细胞株SGC-7901中促凋亡因子bax表达的影响,鸡胚绒毛尿囊膜技术观察其对血管形成的影响。结果rhIL-24处理组胃癌细胞中促凋亡因子bax表达增高,rhIL-24处理组二、三级血管数目明显减少,三级血管的数目与生理盐水组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论初步表明rhIL-24能上调促凋亡因子bax表达,从而抑制血管生成,发挥对胃癌的抗肿瘤作用。     

脂肪酸-辅酶A连接酶4的表达与胃癌细胞增殖、凋亡的关系

目的:研究脂肪酸-辅酶A连接酶4(FACL4)在胃癌中的表达,及其与8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)调控胃癌细胞增殖、凋亡的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应技术,检测23例胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜、以及8-Br-cAMP作用SGC7901细胞后FACL4 mRNA的表达水平。应用流式细胞仪及透射电镜技术,检测2×10-5mol/L浓度的8-Br-cAMP作用48 h后SGC7901细胞的凋亡情况。结果:与正常胃黏膜相比,胃腺癌组织及SGC7901细胞中FACL4 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),胃腺癌组织FACL4 mRNA阳性表达率为87%。2×10-5mol/L的8-Br-cAMP可抑制SGC7901细胞中FACL4的表达,从而抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论:FACL4在胃癌组织中表达增高,8-Br-cAMP作为选择性FACL4抑制剂,可抑制胃癌细胞增殖和FACL4表达,诱导胃癌细胞凋亡,可能成为胃癌诊治的一个新靶点。     

miRNA-34a 对人胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究 microRNA-34a(mir-34a)在人胃癌细胞中的表达水平及对胃癌 SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响。方法通过实时定量 PCR(RT-PCR)检测人正常胃黏膜上皮细胞 GES 及人胃癌细胞株 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平。体外将表达人 mir-34a ( has-mir-34a)慢病毒感染人胃癌 SGC-7901细胞。荧光显微镜观察评估细胞感染情况,MTT 实验、流式细胞术检测感染后胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期及凋亡情况。结果胃癌细胞 AGS、SGC-7901、MKN-45、BGC-823中 mir-34a 的表达水平较正常胃黏膜上皮细胞 GES 明显降低,其中以胃癌 SGC-7901细胞降低最为明显(P <0．01)。与阴性对照组相比, mir-34a 感染组 SGC-7901细胞增殖明显减慢( P <0．01), G1/ G0期细胞比例显著增加(P <0．05),细胞凋亡率显著升高(P <0．01)。结论 mir-34a 在多种人胃癌细胞,尤其是SGC-7901细胞中呈低表达。 mir-34a 可以抑制胃癌 SGC7901细胞的增殖,诱导细胞周期停滞及细胞凋亡。     

钒化钠抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用机理

目的通过观察钒化钠对人胃癌SGC7901细胞周期蛋白cyclinD1表达的影响,探讨其对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的作用机理。方法应用MTY法测定钒化钠对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制作用;用Western-blot法检测钒化钠对人胃癌SGC7901细胞周期蛋白cyclinD1表达水平的变化。结果一定浓度的钒化钠使人胃癌SGC7901细胞增殖周期密切相关的cyclinD1蛋白表达降低。结论一定浓度的钒化钠能明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,钒化钠的抗肿瘤机制可能与cyclinD1蛋白表达降低有关。     

吴茱萸碱诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡及机制研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC7901细胞的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,用不同浓度的吴茱萸碱作用于SGC7901细胞24h。MTT比色法观察吴茱萸碱对SGC7901细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜及荧光电镜观察细胞凋亡状态;流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡情况;用RT-PCR检测不同浓度的吴茱萸碱干预24h后SGC7901细胞Survivin和Caspase-3m RNA表达。结果吴茱萸碱能抑制SGC7901细胞增殖,呈剂量依赖性;倒置相差显微镜及荧光电镜下均观察到典型的细胞凋亡状态;吴茱萸碱可诱导SGC7901细胞凋亡,且随剂量增加作用增强;随吴茱萸碱浓度的增加,细胞内Survivin基因表达强度逐渐降低,Caspase-3表达强度逐渐增强。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡,SGC7901细胞中Survivin m RNA表达水平显著降低,从而可能下调其对Caspase-3的抑制作用,使细胞凋亡增加。     

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究.方法 将ALCAM 和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况.采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响.结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA(1.01 ±0.26)和蛋白质的表达水平(1.66 ±0.23)低于对照 shRNA组细胞ALCAM mRNA(0.12 ±0.06)和蛋白质水平(0.23 ±0.09),差异有统计学意义(P<0.05).与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA 稳定细胞系细胞增殖活性下降(P<0.05)、凋亡水平升高(P<0.05)、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓(P<0.05).ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路.结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡.     

大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响

目的探讨大蒜素（diallyl trisulfide,allicin）对人胃癌细胞株SGC7901体外生长的影响。方法大蒜素处理胃癌细胞株SGC7901,MTT法检测SGC7901的生长,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学法检测Ki67的表达。结果大蒜素作用于SGC7901细胞后,对其增殖表现出了明显的抑制作用,且呈浓度依赖性;大蒜素作用于SGC7901细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为2.41%、7.30%和15.44%,明显高于对照组（P〈0.05）;大蒜素作用48h后,Ki67的阳性表达率下降（P〈0.05）。结论大蒜素可以抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。