胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞与IL-4、IFN-γ的关系

目的 研究胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量变化及其相互关系.方法 分别应用流式细胞仪及ELISA法检测25例胰腺癌患者和45名健康人外周血中CD4-CD8-T细胞比例和IL-4、IFN-γ的含量.结果 25例胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞占CD3+T细胞的比例为(4.2±1.7)%,45名健康人CD4-CD8-T细胞占CD3+T细胞的比例为(6.3±2.6)%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者外周血中IL-4含量为(86.3±23.3)fg/L,健康对照组外周血中IL-4含量为(56.2±9.2)fg/L,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者外周血中IFN-γ含量为(16.4±4.8)fg/L,健康对照组外周血中IFN-γ含量为(27.4±3.8)fg/L,两组之间差异有统计学意义(P＜0.01).胰腺癌患者手术后CD4-CD8-T细胞比例显著高于术前(P＜0.01).胰腺癌患者外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4含量呈负相关,与IFN-γ含量呈正相关;胰腺癌患者CD4-CD8-T细胞比例、IL-4含量与肿瘤临床分期有关(P＜0.05),与肿瘤分化程度均无关(P＞0.05),IFN-γ含量与肿瘤临床分期和肿瘤分化程度均无关(P＞0.05).结论 CD4-CD8-T细胞在胰腺癌患者外周血中比例降低,CD4-CD8-T细胞可能通过影响IFN-γ的分泌参与胰腺癌的发生和发展.     

结直肠癌患者外周血Th1和Th2细胞的检测与临床意义

目的 研究结直肠癌患者外周血CD4+T细胞亚群Th1和Th2细胞的比例以及相关特异性转录因子与细胞因子的表达水平,并观察其与临床分期之间的关系.方法 43名结直肠癌患者(肠癌组)与30名健康体检志愿者(对照组)作为研究对象.结直肠癌患者外周血Th1和Th2细胞占CD4+T细胞的比例运用流式细胞技术进行检测.采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR),检测外周血Th1/Th2细胞亚群特异性转录因子的相对基因表达量.血浆细胞因子的表达水平使用液相芯片技术方法定量检测.结果 肠癌组外周血Th2细胞占CD4+T细胞的比例和Th2细胞特异性转录因子GATA-3的mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05).肠癌组外周血Th1细胞特异性转录因子T-bet的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),但Th1细胞占外周血CD4+T细胞的比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05).血浆TNF-α、IL-1β和IL-15表达水平组间无显著差异(P>0.05).结直肠癌患者血浆IFN-γ、IL-4和IL-6的表达水平与病程分期有关(P<0.05).结论 结直肠癌患者外周血中Th1细胞比例变化不明显而Th2细胞比例明显升高.结直肠癌患者血浆细胞因子的不平衡表达可作为机体免疫状态转换与病情判断的指标.     

晚期肺癌患者化疗前后细胞免疫功能及T细胞分泌细胞因子的变化

目的:探讨晚期肺癌患者化疗前后外周血中T细胞免疫功能及其分泌细胞因子水平的变化.方法:通过流式细胞仪检测57例晚期肺癌患者和22例健康体检者CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞在外周血单核细胞(PBMC)中所占比例以及外周血CD4+T细胞分泌细胞因子水平的变化.结果:晚期肺癌患者化疗前CD4+T细胞在PBMC中所占比例、CD4+T细胞与CD8+T细胞比值均低于健康人(P＜0.001),化疗后均较化疗前明显升高(P＜0.01或P＜0.001):化疗前CD8+T细胞在PBMC中所占比例高于健康人(P＜0.001),而于化疗后较化疗前明显下降(P＜0.05).治疗前后患者血清中CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-y、TNF-α、IL-2)和Th2细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)水平均无明显变化(P＞0.05).结论:化疗能够增加肺癌患者外周血中CD4+T细胞所占比例,但对Th1、Th2所分泌的相关细胞因子水平影响不大.     

血栓痔病人外周血Th1／Th2分析

为探讨血栓痔发病与T淋巴细胞活化及释放的Th1／Th2细胞因子失衡状态的关系,对32例血栓痔（实验组）和30例健康人（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,经PMA诱导培养后,用流式细胞术测定CD3^＋标记T细胞内自细胞介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）含量和CD8^-标记T细胞内IL-4和IFN-γ的含量,进行比较分析,从而估计Th1／Th2细胞的漂移状态。结果显示,实验组的IL-4和IFN-γ含量均显著高于对照组（P〈0．001）;且实验组IL-4^＋含量高于IFN-γ含量（P〈0．05）。结果表明,血栓痔病人发病时,体内的T淋巴细胞免疫系统被激活,且以Th2细胞为主,这种Th1／Th2细胞因子失衡可能在血栓痔发病过程中起到重要作用。     

慢性HBV感染者不同免疫状态下及抗病毒治疗后外周血T细胞亚群比例和细胞因子水平特点

目的：观察不同免疫状态的慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者及抗病毒治疗后外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞比例、CD4^＋/CD8^＋比值及血清中细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ水平的变化特点及与HBeAg血清学转换的相关性。方法纳入79例处于不同免疫状态的慢性HBV感染者（其中非活动性HBV携带期15例、免疫耐受期20例、免疫活化期44例）及21例健康对照者为研究对象,采用流式细胞术检测其外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞比例。对其中33例免疫活化期患者进行核苷（酸）类似物抗病毒治疗并随访至48周。分别于治疗前（T0期）及治疗后4周（T1期）、8周（T2期）、12周（T3期）、24周（T4期）和48周（T5期）采集外周血,流式细胞术检测各时间点患者外周血CD4^＋T、CD8^＋T细胞比例。同时对部分患者血清标本中的细胞因子水平进行检测。结果在慢性HBV感染者中,免疫活化组患者外周血CD4^＋T细胞比例及CD4^＋/CD8^＋比值显著低于健康对照组（P均＜0.05）,而CD8^＋T细胞比例显著高于健康对照组（F =3.610,P ＜0.05）。抗病毒治疗后,△T0～T1、△T0～T2期,HBeAg血清学转换组外周血CD8^＋T细胞比例升高率显著高于未转换组（P均＜0.05）;△T0～T5期,HBeAg血清学转换组外周血CD4^＋T细胞比例升高率显著高于未转换组（Z =-2.200,P ＜0.05）。免疫活化组患者血清IL-10、IFN-γ水平均显著高于对照组和免疫耐受组（P均＜0.05）。免疫活化组患者抗病毒治疗后12周及24周,血清IL-10水平显著下降（t=3.037、3.180,P均＜0.05）,与ALT水平、HBV DNA载量呈正相关关系（P均＜0.05）。结论慢性HBV感染者在不同免疫状态下外周血T细胞亚群比例及血清细胞因子水平表现不同,免疫活化期患者与健康对照者比CD4^＋T比例及CD4^＋/CD8^＋下降,CD8^＋T比例升高,血清IL-10水平显著升高。HBeAg阳性患者,核苷（酸）类似物抗病毒治疗过程中外周血CD8^＋T细胞和CD4^＋T细胞的比例升高可能有助于预测HBeAg的血清学转换。     

胰腺癌患者手术前后CD4-CD8-T细胞比例与IL-4,IFN-γ含量的关系

目的研究胰腺癌患者手术前后外周血CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量变化及其相互关系。方法分别应用流式细胞仪及ELISA法检测胰腺癌患者手术前后外周血中CD4-CD8-T细胞比例与IL-4、IFN-γ含量。结果20例胰腺癌患者术前CD4-CD8-T细胞占CD3 T细胞的比例为(4.13%±1.81%),术后CD4-CD8-T细胞占CD3 T细胞的比例为(6.11%±1.40%),两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。胰腺癌患者术前外周血中IL-4含量为(90.29±24.99)pg/ml,术后外周血中IL-4含量为(71.43±8.39)pg/ml,两组之间差异有统计学意义(P<0.01);术前外周血中IFN-γ含量为(15.79±5.90)pg/ml,术后外周血中IFN-γ含量为(20.08±6.60)pg/ml,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论胰腺癌患者手术前后CD4-CD8-T细胞比例变化可能影响IL-4、IFN-γ含量的变化,胰腺癌患者手术前后测定CD4-CD8-T细胞比例、IL-4、IFN-γ含量对判断机体的免疫水平具有一定的参考价值。     

下调LSD1表达对于外周血Th1/Th2分化格局的影响

目的 探讨shLSD1转染人外周血CD4+T细胞后,LSD1的脱甲基酶活性对辅助性T细胞亚群1和亚群2(Th1/Th2)分化格局的影响.方法 收集并利用磁珠分离纯化人外周血CD4+T细胞,PHA刺激活化48 h后,shLSD1和化学抑制剂TCP抑制2种方法抑制LSD1的表达,采用流式细胞术和RT-PCR对人外周血T淋巴细胞亚群及CD4+T细胞功能亚型Th1、Th2的代表细胞因子IFN-γ、IL-4进行检测.结果 体外分离培养外周血CD4+T细胞并用转染shLSD1或TCP处理48 h后,流式细胞对胞内基因表达检测显示,shLSD1和TCP组细胞IFN-γ+T细胞比例(26.13±1.89)％和(27.01±1.18)％明显高于对照组(14.67±0.65) ％(P ＜0.05),而IL-4+T细胞比例与对照组无显著差异(P＞0.05);RT-PCR检测显示,shLSD1和TCP组IFN-γ mRNA表达明显高于对照组(P＜0.05),IL-4基因表达则没有改变(P＞0.05).结论 LSD1可以引起CD4+T细胞向Th1/Th2分化方向改变,促进Th1方向分化,对Th2方向无明显影响.     

慢性特发性荨麻疹患者外周血T及Th淋巴细胞亚群的表达

目的：探讨慢性特发性荨麻疹患者外周血T及辅助性T淋巴细胞（Th）亚群的表达及其在慢性特发性荨麻疹发病机制中的作用。方法：采用流式细胞术检测经四色荧光抗体染色的慢性特发性荨麻疹患者及正常对照外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数及CD4^＋／IFN-γ’（Th1）、CD4^＋／IL-4^＋（Th2）细胞含量。结果：慢性特发性荨麻疹组外周血CD3^＋T淋巴细胞数无明显变化、CD4^＋T淋巴细胞数、CD8^＋T淋巴细胞数均降低;CD4^＋／CD8^＋比值增高,差异有统计学意义（P〈0．01）。慢性特发性荨麻疹患者外周血Th1细胞含量、Th1／Th2比值均明显低于正常对照组（P〈0．01,P〈0．05）,Th2细胞含量高于正常对照组（P〈0．01）。结论：慢性特发性荨麻疹患者外周血存在着T及Th淋巴细胞亚群分化失衡,这可能为慢性特发性荨麻疹发病的机制之一。     

贲门癌患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子表达的变化

目的 观察贲门癌手术患者机体免疫状态的变化.方法 采用流式细胞术检测97例贲门癌患者T淋巴细胞亚群(Th1、Th2、CD3+、CD4+、CD8+细胞),采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、IL-4、IL-10、可溶性白细胞介素-2受体R(sIL-2R)和肿瘤坏死因子(TNF)-β水平.结果 贲门癌患者术前外周血Th1/Th2细胞比值(0.43±0.13)较正常对照组(0.58±0.12)降低(P＜0.05),其Th1细胞表达的IL-2、IFN-γ等细胞因子水平低于正常对照组;Th2细胞表达的IL-4、IL-10细胞因子水平高于正常对照组(P＜0.05).T细胞介导的细胞免疫及血清sIL-2R和TNF-β水平与肿瘤TNM分期相关,其特征为:CD3+、CD4+细胞减少(P＜0.05),而CD8+细胞增加(P＜ 0.01);CD4 +/CD8+细胞比值下降(P＜0.01),血清sIL-2R和TNF-β水平升高(p＜0.05) 贲门癌根治术后1个月CD3+、CD4+细胞回升,CD8+细胞回降,同时血清sIL-2R和TNF-β水平降低(P＜0.01).结论 贲门癌患者外周血Th1/Th2细胞比值降低,细胞因子表达失衡,患者存在免疫功能抑制.     

Th1/Th17细胞在肺部感染中的作用

目的：观察Th1、Th17型细胞因子在肺部感染性疾病中的动态变化,深入探讨机体抵抗肺部感染的免疫机制,为肺部感染性疾病的特异性诊治提供实验依据。方法：收集临床肺部感染患者血清、外周血淋巴细胞样本,分别用ELISA方法检测血清中Th1型细胞因子（IFN-γ）及Th17型细胞因子白细胞介素-17（IL-17）的表达水平,用FACS检测外周血中CD4＋IFN-γ＋Th1及CD4＋IL-17＋Th17细胞的比例变化,同时用Realtime-PCR方法检测外周血中Th17型细胞因子IL-17在基因水平的表达变化。以上指标的检测均以临床公认的CRP水平的变化作为参考。结果：ELISA结果显示,肺部感染患者血清IFN-γ的水平较健康对照组显著升高,动态检测结果显示IFN-γ变化水平与反映临床疾病状态的CRP出现显著的相关性。而IL-17的表达在不同的疾病过程未出现显著的变化。FACS及Real-time-PCR结果均显示CD4＋IFN-γ＋Th1的活性变化与疾病状态相关,而CD4＋IL-17＋Th17细胞在肺部感染不同阶段未出现显著的变化。结论：相对于Th17细胞而言,Th1细胞在机体防御肺部感染的过程中发挥更为关键的作用。Th17细胞在该类感染性疾病中的作用尚需进一步探讨。     

RNAi对大鼠T淋巴细胞CD28和OX40基因表达的联合抑制作用

目的 通过RNAi技术干扰T细胞CD28、CD134基因表达后,诱导获得抑制性T细胞(Ts);探讨Ts免疫学特性.方法 设计针对目标基因的siRNA,转染大鼠T淋巴细胞,FCM检测CD28、CD134水平,混合淋巴细胞反应(MLR)检测转染后的T淋巴细胞对异体淋巴细胞的增殖能力的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞因子水平.结果 siRNA转染大鼠T淋巴细胞后,抑制CD28、CD134分子的表达,siRNA转染24 h后,siRNA组CD28、CD134表达受到抑制[转染后及转染前表达分别为(22.35±4.37)%及(34.76±3.51)%(P<0.05)],T淋巴细胞分泌细胞因子IL-10水平增高,转染组及未转染组表达分别为(77.15±12.60)ng/L及(37.56±5.93)ng/L(P<0.01).而转染组及未转染组的IL-2表达分别为(2.79±0.51)及(4.35±1.11)ng/L(P<0.05);干扰素(IFN)-γ表达分别为(277.15±14.8)、(682.7±53.5)ng/L(P<0.05).结论 siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28、CD134基因表达,抑制了IL-2、IFN-γ的表达,提高了IL-10细胞因子表达水平,从而产生了免疫耐受效应.Ts细胞具有抗原特异性,而且在外源性rrIL-2存在时,不能逆转Ts细胞的功能.     

辅助性T细胞亚群分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用

目的 探讨前列腺液(EPS)中CD+4T细胞亚群辅助性T细胞(Th细胞)分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用. 方法门诊诊断前列腺炎患者76例,年龄18～47岁,平均32岁.患者均有慢性前列腺炎典型临床症状,病程均＞3个月.按美国国立卫生院分类方法分为ⅢA型组(47例)、ⅢB型组(29例).其中ⅢA型组根据炎症程度又分为ⅢAl组(轻度炎症26例)和ⅢA2组(重度炎症21例).另设健康对照组(16例),年龄19～45岁,平均31岁.采用双抗体夹心酶联免疫法检测EPS中Th1类细胞因子(IFN-γ)、Th2类细胞因子(IL-4)水平及Th1/Th2比值(IFN-γ/IL-4),比较各组问差异.结果 ⅢA、ⅢB组IFN-γ水平[(134.78±43.67),(109.82±30.09)pg/m1]与对照组[(60.63±15.16)pg/m1]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),ⅢA组较ⅢB组升高更明显(P＜0.05);ⅢA组IL-4水平[(51.99±20.59)pg/m1]与对照组[(53.88±17.92)pg/m1]比较差异无统计学意义P＞0.05),ⅢB组IL-4水平[(76.40±17.99)pg/m1]明显上调(P＜0.05);ⅢA组IFN-γ/IL-4水平(2.94±1.12)明显高于对照组(1.20±0.48,P＜0.05),Ⅲ B组(1.49±0.48)无明显改变(P＞0.05).与对照组比较,Ⅲ A1组IL-4水平[(63.03±18.86)pg/m1]无明显变化(P＞0.05),而ⅢA2组水平[(30.20±13.16)pg/m1]显著下调(P＜0.05);ⅢA1组和m A2组IFN-γ水平均明显上调[(127.65±36.57),(143.49±50.76)pg/m1],P＜0.05),但2组间差异无统计学意义(P＞0.05);ⅢA2组IFN-γ/IL-4明显高于ⅢA1组(3.67±0.82 vs 2.34±0.97,P＜0.05).结论 ⅢA型前列腺炎Th1细胞分化占优势,Th1/Th2平衡向Th1漂移,以细胞免疫反应为主;Th细胞分化也参与了ⅢB型前列腺炎的发病,但Th1/Th2处于相对平衡状态.Th1的优势分化可能是导致前列腺局部炎症发展的原因之一.     

间质性膀胱炎与1型/2型辅助性T淋巴细胞漂移的相关研究

目的 探讨间质性膀胱炎(IC)患者血浆及膀胱黏膜1型/2型辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)与免疫调节失衡的关系.方法 女性IC患者血浆及黏膜标本16例,输尿管结石患者标本16例作为对照组.2组患者性别及年龄匹配.IC患者符合美国糖尿病、消化及肾病协会诊断标准.依据盆腔疼痛和尿急/尿频症状评分(PUF评分)结果分为低评分(0～20分)和高评分(21～35分)2组.采用酶联免疫吸附试验和免疫组化染色检测2组患者血浆和膀胱黏膜中Th1(IFN-γ和IL2)和Th2(IL-4和IL-10)细胞因子表达情况. 结果①IC患者血浆IFN-γ、IL-2表达量分别为(4.57±2.92)、(17.52±7.52)pg/ml,对照组分别为(4.11±2.27)、(20.99±5.09)pg/ml,2组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);IC患者血浆IL-4、IL-10表达量分别为(O.34±0.22)、(4.37±2.34)pg/ml,对照组分别为(0.14±0.07)、(1.18±0.61)pg/ml,2组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).②IC患者和对照组膀胱黏膜标本中IFN-γ、IL-2表达强度比较χ2值=1.900、0.514,差异均无统计学意义(P＞0.05);2组IL-4、IL-10表达强度比较χ2值=8.237、8.209,差异均有统计学意义(P＜0.05).③IC患者PUF低评分组血浆IL-4、IL-10表达量分别为(0.16±0.11)、(2.42±1.27)pg/ml,高评分组分别为(0.53±0.12)、(6.31±1.21)pg/ml,2组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).2组膀胱黏膜标本IL-4表达强度比较χ2＝7.608,γ3＝0.467,差异有统计学意义(P＜0.05);IL-10表达强度比较χ2＝8.844,γ3＝0.517,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IC患者存在免疫调节失衡,Th2介导的体液免疫反应增强,且免疫失衡随症状程度而加重.     

黄芪多糖对分泌白细胞介素12树突细胞亚群的免疫调控效应与机制

目的 观察黄芪多糖(APS)对分泌IL-12树突细胞(DC)亚群CD11chighCD45RBlowDC功能的影响.方法磁珠分选技术获得BALB/c小鼠脾脏CD11chighCD45RBlowDC和CD4+T淋巴细胞.在CD11 chighCD45RBlowDC中加入不同浓度APS(50、100、200μg/mL)处理,以不加APS的细胞作为对照,应用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12水平,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD80、CD86、I-A/E及Toll样受体4(TLR4)的表达.将CD4+T淋巴细胞分为正常对照组(未行任何处理)、未刺激组(加入未经APS处理的CD11chighCD45RBlowDC与CD4+T淋巴细胞混合培养)、高浓度APS刺激组(加入经200μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC与CD4+T淋巴细胞混合培养)、高浓度APS刺激+抗体1组(加入经200μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC、IL-12抗体与CD4+T淋巴细胞混合培养)和高浓度APS刺激+抗体2组(加入经200 μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC、IL-12同型对照抗体与CD4+T淋巴细胞混合培养).采用噻唑蓝法测定CD4+T淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞培养液中IL-4和γ干扰素水平.对数据行多组间单因素方差分析.结果与未加APS刺激相比,3种浓度APS均显著增强CD11chighCD45RBlowDC表面分子CD40、CD80、I-A/E及TLR4表达及IL-12分泌,其中IL-12分泌呈APS浓度依赖性;CD86表达无明显变化.高浓度APS刺激组CD4+T淋巴细胞增殖能力高于未刺激组(F=13.438,P＜0.05);高浓度APS刺激组细胞γ干扰素水平为(2784±137)pg/mL,高于未刺激组[(1952±101)pg/mL,F=12.177,P＜0.05];高浓度APS刺激组细胞IL-4水平为(172±20)pg/mL,明显低于未刺激组[(193±19)pg/mL,F=11.963,P＜0.05].高浓度APS刺激+抗体1组前述3项指标表达水平较未刺激组明显改善,高浓度APS刺激+抗体2组前述3项指标表达水平与高浓度APS刺激组接近.结论 APS能够通过促进CD11chighCD45RBlowDC中IL-12的表达,诱导CD4+T淋巴细胞向Th1型反应分化,通过激活CD11chighCD45RBlowDC增强免疫活性.

Abstract：

Objective To investigate immunomodulatory effect of Astragalus polysaccharides (APS) on IL-12-secreting dendritic cell (DC) subset CD11chigh CD45RBlow DC. Methods Spleen CD11chighCD45RBlow DC and CD4 +T lymphocytes in BALB/c mice were purified by magnetic beads sorting,and were treated with 0 (as control), 50, 100, 200 μg/mL APS. Immunofluorescence staining and flow cytometry were used to determine expressions of CD11chighCD45RBlow DC surface molecules, including CD40,CD80, CD86, I-A/E, and Toll-like receptor (TLR) 4. IL-12 level in CD11chighCD45RBlow DC culture supernatant was determined by ELISA. The CD4+ T lymphocytes were divided into: normal control group,non-stimulation group ( CD4 + T lymphocytes cocultured with APS-unstimulated CD11 chigh CD45RBlow DC ) ,high-dose APS stimulation group (CD4+T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11ch'ghCD45RBlow DC) , high-dose APS stimulation + antibody 1 group ( CD4 + T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11chighCD45RBlow DC and IL-12 antibody), high-dose APS stimulation +antibody 2 group (CD4 +T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11chigh CD45RBlow DC and IL-12 antibody isotype). Proliferation ability of CD4 + T lymphocytes was determined with MTT method.IL-4 level as well as IFN-γ level in CD4 + T lymphocyte culture supernatant was determined by flow cytometry. Data were processed with one-way analysis of variance. Results Compared with those in control, the expressions of CD 11 chigh CD45 RBlow DC surface molecules ( except for CD86 ) on CD 11 chigh CD45RBlow DC surface, as well as IL-12-secreting level with dose-dependence were increased in cells stimulated with 50,100, 200 μg/mL APS. Proliferation ability of CD4 +T lymphocytes in high-dose APS stimulation group was higher as compared with that in non-stimulation group ( F = 13. 438, P ＜0.05). IFN-γlevel in high-dose APS stimulation group [(2784 ± 137 ) pg/mL] was higher than that in non-stimulation group [(1952 ±101 ) pg/mL, F = 12. 177, P ＜0.05]. IL-4 level in high-dose APS stimulation group was (172 t 20) pg/mL,which was lower than that in non-stimulation group [( 193 ± 19) pg/mL, F = 11.963, P ＜0.05]. Proliferation ability of CD4+ T lymphocytes, IFN-γ level, and IL-4 level in high-dose APS stimulation + antibody 1 group were all ameliorated when compared with those in non-stimulation group; while levels of the 3 indexes in high-dose APS stimulation + antibody 2 group were similar to those in high-dose APS stimulation group.Conclusions APS can activate IL-12-producing CD11 chighCD45RBlowDC, and further induce the activation of immune function of T lymphocyte with shifting of Th2 to Th1 in vitro. APS can enhance the immune response via promoting the phenotypic and functional maturation of CD11 chighCD45RBlow DC.     

不同透析膜对维持性血液透析患者外周血Ｔ细胞凋亡的影响

目的 研究终末期肾病(ESRD)患者外周血T细胞凋亡、Bcl-2和Fas的表达、Th1及Th2类细胞因子特征以及不同透析膜对维持性血液透析患者T细胞凋亡的影响。 方法 研究对象包括ESRD未透析(ND)患者10例；维持性血液透析(HD)的患者45例，分别用醋酸纤维素膜(CA)、低通聚砜膜(PS-LF)、高通聚砜膜(PS-HF)进行透析；以及健康对照(C)8例。上述研究对象的外周血T细胞经植物凝集素(PHA)刺激培养24 h后，应用流式细胞术检测其凋亡情况；免疫组化检测T细胞Bcl-2、Fas的表达；ELISA检测细胞培养上清IFN-γ及IL-4的水平。 结果 ND组及HD组T细胞凋亡率高于C组的(6.82±1.64)%。HD各组T细胞的凋亡率以CA组的(12.26±1.21)%最高，PS-HF组(9.00±0.89)%最低(P < 0.05)。ND组及HD组外周血T细胞Bcl-2的表达低于C组(P < 0.05)，Fas的表达高于C组(P < 0.05)；相关分析显示T细胞凋亡与Fas的表达呈正相关，与Bcl-2呈负相关。ND组及HD组IFN-γ的水平均低于C组(P < 0.05)，与T细胞凋亡呈负相关；IL-4的水平高于C组 (P < 0.05)，与T细胞凋亡呈正相关。 结论 ND组及HD组外周血T细胞凋亡加速，Bcl-2、Fas参与T细胞凋亡的发生。 ND组及HD组患者Th类细胞因子失衡，呈Th2细胞因子优势， Th类细胞因子参与T细胞凋亡的调控。HD患者的T细胞凋亡不仅与透析膜的生物相容性有关还与透析膜的通透性有关。     

紫杉醇联合FOLFOX4方案新辅助化疗在进展期胃癌中的临床应用

目的 评价紫杉醇联合FOLFOX4方案(氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂)新辅助化疗治疗进展期胃癌的临床疗效及不良反应.方法 应用前瞻性随机对照的方法将cTNM分期为Ⅲ或Ⅳ期(M0) 的胃癌患者78例,按入组顺序根据随机数字表法随机分配到试验组(39例)和对照组(39例).试验组给予紫杉醇联合FOLFOX4方案的新辅助化疗,每2周为1周期,3周期后采用RECIST标准评价临床疗效,2～4周后手术,术后给予原方案化疗3周期.若术前评效为疾病进展(PD)者,术后改为ECF方案(表阿霉素、顺铂和氟尿嘧啶)化疗.对照组确诊后2周内手术.术后给予6周期紫杉醇联合FOLFOX4方案的辅助化疗.结果 试验组紫杉醇联合FOLFOX4方案新辅助化疗的临床有效率为66.7%,R0切除率(82.1%)明显高于对照组(59.0%)(P＝0.025),淋巴结转移数目[(3.23±2.80)枚]明显少于对照组[(5.79±2.69)枚](P＝0.001),术后并发症发生率(5.1%和2.6%)及淋巴结清扫数目[(19.69±2.95)枚和(20.59±3.22)枚]两组差异均无统计学意义(P＞0.05).试验组和对照组术后中位生存期分别为(27.10±2.32)个月和(18.20±1.30)个月(P＝0.006).Cox回归多因素分析显示,肿瘤分化程度、R0切除、淋巴结转移均是影响预后的独立因素.化疗不良反应主要为血液学及末梢神经毒性,患者均可耐受,两组化疗不良反应差异无统计学意义(P＞0.05).结论 紫杉醇联合FOLFOX4方案新辅助化疗有效率高,患者耐受性和依从性好,可提高进展期胃癌患者的R0切除率、降低淋巴结转移率,提高生存率.     

冷冻消融治疗前列腺癌诱导肿瘤特异性免疫反应

目的:评价经皮冷冻消融治疗局限性前列腺癌前后机体抗肿瘤免疫反应。方法:10例局限性前列腺癌患者行经皮冷冻消融治疗。分别于冷冻治疗前1d、治疗后2周采取外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)。穿刺活检制备前列腺自身肿瘤和非肿瘤组织溶解物。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10水平,以IFN-γ/IL-4计算Th1/Th2比值。酶联免疫斑点(ELISPOT)试验检测不同组织溶解物刺激下分泌IFN-γ的T细胞数。以人前列腺癌LNCaP细胞和肾癌GRC-1细胞为靶细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测细胞毒T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤活性。结果:与术前比较,冷冻治疗后TNF-α、IFN-γ明显升高,IL-4、IL-10轻度下降,Th1/Th2比值明显升高(P<0.01)。肿瘤组织溶解物刺激后IFN-γ+T细胞数明显增多(P<0.01)。非肿瘤组织溶解物刺激后,IFN-γ+T细胞数无明显变化。冷冻治疗后细胞毒CTL对人前列腺癌细胞株LNCaP特异杀伤活性明显增强,而对人肾癌细胞株GRC-1无明显杀伤活性。随访3～6个月,仅1例患者肿瘤复发。结论:经皮冷冻治疗前列腺癌可诱导机体产生肿瘤特异性免疫反应。     

瘤体内直接注射白细胞介素-7基因抗小鼠乳腺肿瘤免疫效应的研究

目的 观察瘤体内直接注射白细胞介素(IL)-7基因抗小鼠乳腺肿瘤免疫效应.方法 构建IL-7真核表达质粒(pcDNA3-IL-7);建立乳腺癌TM40D细胞BALB/C小鼠移植模型;瘤体内直接注射pcDNA3-IL-7,观察小鼠肿瘤体积变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血干扰素(IFN)-γ含量;流式细胞仪检测胞内IFN-γ的分泌量;局部肿瘤经治疗后行常规病理分析.结果 成功构建pcDNA3-IL-7;与对照磷酸盐缓冲液(PBS)组(115.2±11.8) ng/L、pcDNA3组(133.6±9.4) ng/L比较,pcDNA3 -IL-7注射组(242.3±10.1)ng/L外周血IFN-γ明显增高;pcDNA3-IL-7明显抑制肿瘤生长(P＜0.05);流式细胞仪检测显示pcDNA3-IL-7显著促进CD4+T细胞、CD8+T细胞内IFN-γ的分泌量;常规病理显示pcDNA3 -IL-7注射组肿瘤组织大量坏死,炎性细胞和大量淋巴细胞浸润.结论 瘤体内直接注射pcDNA3-IL-7明显抑制小鼠乳腺肿瘤生长,显著促进IFN-γ分泌,增强了小鼠机体抗乳腺肿瘤的免疫效应.     

乳腺癌细胞抗原负载的自体树突状细胞体内诱导特异性T细胞应答

目的 以乳腺癌细胞抗原体外负载自体树突状细胞(DCs)对24例乳腺癌患者进行自身免疫,探讨其体内诱导特异性T细胞免疫应答的能力.方法 新鲜癌组织制备成热休克凋亡细胞抗原负载外周单核细胞来源DC,分别在采血后第1、2、4、6周于患者腹股沟淋巴结富集区进行皮内注射,细胞剂量为4×10+～6×106/次.结果 DC免疫治疗后患者血清抗瘤免疫因子水平明显上升:白细胞介素(IL)-2治疗前为(33.8±7.2)ng/L,治疗后为(68.5±12.4)ng/L;IL-12治疗前为(48.5±10.9)ng/L,治疗后为(118.2±31.5)ng/L;肿瘤坏死因子(TNF)-α治疗前为(18.7±5.3)ng/L,治疗后为(78.3±11.5)ng/L;干扰素(IFN)-γ治疗前为(20.5±6.3)ng/L,治疗后为(92.6±14.9)ng/L,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.01);DTH试验阳性率为7/10;4/10例IFN-γ+CD8+T细胞频率较治疗前明显增加.随访发现:除1例患者在治疗后3个月内疾病进展(PD),其余患者病情稳定无复发与转移症状(SD).结论 以乳腺癌细胞为抗原负载自体DC免疫患者,能够有效提高患者非特异免疫水平,激发体内特异性T细胞免疫应答,是一种安全、副反应较小、有效的乳腺癌辅助治疗手段.