芹菜素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的探讨黄酮类化合物芹菜素对大鼠实验性心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)时心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,并分析心肌组织病理学损伤程度。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血45 min,再灌注2 h制作缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为8组,即正常组(normal group,Normal)、假手术组(sham oper-ation group,Sham)、生理盐水缺血/再灌注组(saline ischemi-a-reperfusion group,NS)、溶剂对照组(solvent control group,Sol)、美托洛尔对照组(metoprolol control group,Meto)、芹菜素低、中、高剂量(1、2、4 mg.kg-1)用药组(apigenin low,medium and high dose treatment group,Api1,Api2,Api4)。再灌注2 h后迅速取出心脏,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞;免疫组化法测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达;做病理组织切片检查心肌损伤情况。结果芹菜素各剂量组心肌细胞凋亡率明显低于NS组(P<0.05),Api1,Api2,Api4能剂量依赖性地降低大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡率;芹菜素各剂量组剂量依赖性地提高大鼠心肌缺血/再灌注的Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低大鼠心肌缺血/再灌注的Bax、Caspase-3蛋白表达量(P<0.05);芹菜素各剂量组与NS组比较,心肌组织损伤的病理学变化明显减轻(P<0.05)。结论芹菜素对缺血/再灌注心肌的保护效应可能与其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡有关;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3蛋白表达有关;芹菜素能明显减轻心肌组织损伤。     

河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。     

河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法取Wistar大鼠24只,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,随机分为3组（n=8）：基础组、STH-2组、TTX组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达,Westernblot检测Bcl-2蛋白表达。结果STH-2组凋亡指数（AI）（11.20±0.79）%高于TTX组（6.92±1.10）%和基础组（1.34±0.23）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的PEI为（22.63±1.10）%高于STH-2组（13.51±0.67）%和基础组（2.52±0.58）%（P〈0.01）;STH-2组Bax的PEI为（8.04±0.57）%高于TTX组（6.05±0.46）%和基础组（2.14±0.57）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2/Bax为3.78±0.41高于STH-2组1.75±0.15（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的相对蛋白含量为（86.1±0.98）%高于STH-2组（53.2±1.76）%和基础组（23.7±2.61）%（P〈0.01）。p53蛋白在各组均未见明显阳性表达。结论与STH-2比较,TTX能减少缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡数,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的观察雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法大鼠口服雷米普利(1 mg.kg-1)或等剂量生理盐水,24 h后制备心肌缺血30m in再灌注120 m in模型,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死范围,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测心肌细胞凋亡并用免疫组化方法测定抑凋亡基因(Bc l-2)和促凋亡基因(Bax)的表达。结果与对照组相比,雷米普利组由缺血/再灌注损伤引起的心肌梗死范围缩小,细胞凋亡指数减少且DNA琼脂糖凝胶电泳呈现减弱的DNA梯形图谱,Bc l-2表达增加以及Bc l-2/Bax比值增加。结论雷米普利通过减少/缺血再灌注心肌细胞坏死和凋亡以及上调抑凋亡基因Bc l-2的表达发挥心脏保护作用。     

依那普利干预对缺血-再灌注大鼠模型心肌细胞凋亡Bcl-2和Bax基因蛋白表达的影响

目的探讨依那普利干预对缺血再灌注大鼠模型心肌细胞凋亡Bcl-2和Bax基因蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠45只,随机分成3组:①缺血-再灌注(I/R)组15只,结扎左冠状动脉45min,松解4h,结扎前15min以及再灌注1h分别静脉注射生理盐水2ml/kg。②依那普利组(L)组15只:结扎左冠状45min,松解4h,结扎前15min以及再灌注1h分别静脉注射依那普利10mg/kg(依那普利以5mg/kg溶于生理盐水)。③假手术(C)组15只,冠状动脉下穿线不结扎,持续4.75h股静脉注射生理盐水2ml/kg。于实验结束时,取出心脏于4%多聚甲醛固定、石蜡包埋切片,按TUNEL法检测凋亡细胞,以S-P免疫组化法检测Bcl-2和Bax基因蛋白表达。结果①I/R组和L组标本中分别有13例和11例心肌细胞发生凋亡,L组凋亡细胞百分数较I/R组明显减少,差异具有高度显著性(P<0.05)。C组15例样本中12例均未检测到TUNEL阳性细胞。②L组Bcl-2表达较I/R组和C组均增强,L组Bax阳性心肌细胞较I/R组明显减少(P<0.05)。结论缺血-再灌注心肌细胞存在明显的凋亡现象,且受Bax蛋白与Bcl-2基因蛋白下调影响,Bax蛋白与Bcl-2蛋白共同调节心肌细胞凋亡,依那普利干预可诱导心肌细胞表达Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。     

阻断JAK/STAT通道对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

<正>缺血再灌注损伤是心脏外科手术体外循环中一个常见的病理生理过程,在这个过程中常伴有心肌细胞的死亡。它包括心肌细胞的坏死和心肌细胞的凋亡,其中心肌细胞的凋亡占主要的地位,文献[1]报道缺血再灌注过程中可发生细胞凋亡,细胞凋亡加重再灌注损伤。大量研究表明[2,3],细胞凋亡     

复方温心汤对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因的影响

为研究中药复方温心汤预处理对家兔缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因Bcl-2mRNA、凋亡刺激基因Fas mRNA表达的影响，采用TUNEL法和原位杂交法测定家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2mRNA及Fas mRNA的表达。结果表明，缺血预适应组、温心汤预处理组的心肌细胞凋亡率比缺血再灌注损伤组明显减少(P&;lt;0．01)；缺血预适应组、温心汤预处理组心肌细胞Bcl-2 mRNA的阳性表达明显增强，Fas mRNA的阳性表达明显较低，与缺血再灌注组相比差异有显著意义(P&;lt;0．05)。结论：复方温心汤可能是通过激发机体内源性保护作用，模拟缺血预适应而减轻缺血再灌注心肌细胞的凋亡程度，对实验性家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用通过预处理的途径产生的。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤的细胞凋亡的影响

目的观察白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤的细胞凋亡的影响。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用TUNEL染色法及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测心肌细胞凋亡;底物酶解法检测caspase-3活性;免疫组织化学法结合计算机图像分析检测心肌细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果Res预处理使得心肌细胞凋亡率由(39.7±5.4)%降至(8.3±0.8)%,caspase-3的相对活性由5.9±0.7降至2.8±0.4,P<0.05。Res预处理可使Bcl-2表达的光密度值由99.5±4.8升至138.9±8.4,Bax表达的光密度值由140.7±8.6降至125.3±5.8,P<0.05。结论白藜芦醇预处理可通过促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抑制促凋亡蛋白Bax的表达,抑制凋亡过程中关键酶caspase-3的活性,减少I/R引起的心肌细胞凋亡。     

缺血再灌注心肌细胞凋亡及药物干预

目的：研究葛根素和维拉帕米对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法：对５６只成年Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠建立冠状动脉左前降支（ＬＡＤ）缺血再灌注模型,其中３２只大鼠在缺血胶及再灌注前给予维拉帕米和葛根素进行干预治疗,观察大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达情况以及维拉帕米和葛根素对其影响。采用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）进行细胞凋亡检测;应用免疫组化的检测Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ的表达。     

美托洛尔对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的:研究美托洛尔对缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡以及对凋亡相关基因的影响。方法:用末端标记原位细胞凋亡法和免疫组化法检测细胞凋亡程度。结果:缺血再灌注组与假手术组相比,心肌细胞凋亡程度明显增加,Bcl-2蛋白的表达都有明显增高,差异具极显著性(P<0.01);美托洛尔组与缺血再灌注组比较,心肌细胞凋亡程度明显降低,差异具极显著性(P<0.01);Bcl-2蛋白表达略增高,差异无显著性(P>0.05)、Fas-L蛋白表达略降低,差异无显著性(P>0.05)。结论:美托洛尔对缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡有对抗作用。     

硫化氢对急性缺血所致心肌细胞凋亡的影响

目的观察H2S对急性缺血所致大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法健康成年♂SD大鼠(270±20)g,随机分为:假手术组、缺血组、缺血+NaHS低、中、高剂量组。麻醉大鼠,结扎左冠状动脉前降支,NaHS低、中、高剂量组分别于缺血3 h时腹腔注射0.78、1.56和3.12 mg·kg-1的NaHS,缺血组注射等容量的生理盐水,假手术组只穿线不结扎。各组大鼠均于缺血6 h时经颈总动脉取血迅速开胸取心脏,流式细胞术检测心肌组织细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3蛋白的表达,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,HE染色观察心肌组织学变化。结果大鼠心肌缺血6 h后,心肌细胞凋亡率、caspase-3和Bax表达阳性细胞数百分率明显升高,Bcl-2表达阳性细胞数百分率降低。缺血3 h治疗3 h时,NaHS 3个剂量组大鼠心肌细胞凋亡率、caspase-3和Bax表达阳性细胞数百分率明显低于缺血组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值高于缺血组。组织形态学变化显示,假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,着色均匀,缺血组大鼠心脏部分区域心肌纤维横纹不齐或消失,核偏移甚至裂解消失,有炎性因子渗出,NaHS 3个剂量组大鼠心肌细胞损伤程度较缺血组明显减轻。结论硫化氢对大鼠急性缺血心肌具有一定的保护作用,上调Bcl-2的表达,下调Bax表达,抑制细胞凋亡可能是其重要保护作用机制。     

氯沙坦对大鼠心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及对bcl-2,bax 和p53基因表达的影响

目的:研究氯沙坦对大鼠在体心肌缺血再灌注后细胞凋亡影响以及与bcl-2,bax和p53基因表达变化之间的关系.方法:用原位末端标记、原位杂交、免疫组化分别检测细胞凋亡、基因表达产物的mRNA和蛋白质,经图象分析系统测量阳性染色区域的平均光密度值,从而对原位杂交和免疫组化检测物质进行量化分析.大鼠分成对照组、治疗组和假手术组.结果:细胞凋亡数各组间差异非常显著(P<0.001);原位杂交和免疫组化bcl-2对照组、治疗组的升高值与假手术组之间差异显著(P<0.05),治疗组和对照组之间无显著差异(P>0.1);免疫组化bax治疗组、假手术组的降低值与对照组间差异非常显著(P<0.001),治疗组和假手术组之间无差异(P>0.9);bcl-2/bax比值由高到低分别为治疗组、对照组和假手术组.原位杂交p53各组间差异非常显著(P<0.001),假手术组>治疗组>对照组;免疫组化p53假手术组显著高于对照组和治疗组(P＜0.001 ),治疗组和对照组间差异无显著性(P>0.1).结论:氯沙坦可抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡,机制可能是通过抑制bax基因表达使bcl-2/bax比值升高,并抑制p53基因表达的降低.     

人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的:研究人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响。方法:采用大鼠右侧大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occulusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,缺血前给予人参皂苷Rg1 25、501、00 mg.kg-1灌胃,7 d。末次给药1h后制备MCAO模型,缺血2 h,再灌注22 h后,分别用Longa’s法T、TC染色法评价大鼠的神经功能状态及脑梗死面积;用TUNEL法测定缺血再灌后神经细胞凋亡的程度;用Western blot法测定大脑缺血侧脑组织中与凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2的蛋白表达。结果:人参皂苷Rg1(50、100 mg.kg-1)可明显减少MCAO再灌注后脑梗死面积,改善神经功能症状,与模型组比较具有显着性差异(P<0.05或P<0.01);脑缺血2 h再灌22 h后,模型组大鼠缺血侧细胞凋亡程度、Caspase-3蛋白表达明显增加,同时Bcl-2的蛋白表达降低。给予人参皂苷Rg1(50,100mg.kg-1)后,缺血侧细胞凋亡程度、Caspase-3蛋白表达降低,而Bcl-2的蛋白表达增加,与模型组相比具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1对大鼠脑缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡具有明显的保护作用,其机理可能与人参皂苷Rg1影响Caspase-3、Bcl-2的表达有关。     

醛固酮受体拮抗剂对心肌细胞凋亡的影响

目的研究醛固酮受体拮抗剂螺内酯对急性心肌梗死心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的作用。方法通过结扎左冠状动脉前降支造成大鼠左室大面积心肌梗死模型。SD大鼠随机分为心肌梗死对照组(AMI组,0.9%氯化钠溶液2ml/d灌胃,n=24)和螺内酯治疗组(Spi组,螺内酯20mg/kg/d,2ml灌胃,n=24),另设假手术组(Sham组,0.9%氯化钠溶液,2ml/d灌胃,n=24)。分别于术后2、7、14、21d观察下列指标:用流式细胞学方法测定非梗死心肌细胞凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与Sham组相比较,AMI组大鼠和Spi组非梗死区心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01);BCL-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05);与AMI组比较,大鼠心肌细胞凋亡率和非梗死区心肌细胞BCL-2蛋白表达在2d、7d差异无统计学意义(P>0.05),14d、21d有所升高(P<0.05)。Bax蛋白表达在2d、7d差异无统计学意义(P>0.05),14d、21d有所降低(P<0.05)。结论螺内酯治疗可减少心肌细胞凋亡,同时增加凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达和减弱Bax蛋白的表达。     

黄体酮防治大鼠缺血再灌注脑损伤中细胞凋亡及p53蛋白的变化

目的:探讨黄体酮对缺血再灌注损伤脑的保护机制。方法:采用SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(transientmiddlecerebralarteryocclusion,MCAO),将大鼠随机分为6组:假手术组、缺血再灌注组、二甲基亚砜溶剂(dimethylsulfoxide,DMSO)对照组、黄体酮(progesterone,PROG)预防组、PROG治疗组、PROG预防治疗组,应用免疫组织化学和细胞死亡原位末端标记(Insituendlabeling,ISEL)法研究脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白p53的表达情况。结果:高倍视野下p53蛋白阳性细胞数,各药物处理组凋亡细胞数与缺血再灌注组和对照组之间差异有显著的统计学意义(P<0.05)。结论:PROG可减轻局灶性缺血再灌流脑损伤,减少大鼠脑缺血再灌注后的脑细胞凋亡。抑制脑神经细胞中p53蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。     

白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组(Res+I/R),每组20只。采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤。Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1)。缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达。结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05)。结论缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。     

灯盏花素联合缺血预适应对兔心肌缺血再灌注细胞凋亡的保护机制

目的:探讨灯盏花素联合缺血预适应对心肌缺血再灌注细胞凋亡的保护作用机制。方法:采用在体兔结扎心肌左旋支建立缺血再灌注损伤模型。采用免疫组化法检测心肌梗死危险区组织细胞色素C、Caspace-3、bcl-2蛋白表达。结果:灯盏花素联合预适应组心肌酶释放较缺血再灌注组明显降低(P<0.01),bcl-2蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞色素C及Caspace-3蛋白表达明显减少(P<0.01)。结论:灯盏花素联合缺血预适应可通过减轻细胞色素C的释放,上调Bcl-2表达,下调Capase-3表达从而抑制心肌细胞凋亡。     

SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元的保护作用

目的探讨SP600125-JNK特异性抑制剂对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤的保护性作用及其作用机制。方法雄性SD大鼠54只,体重230～250g,随机分成假手术组(SH组),缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组),每组根据再灌注时间分为30min、24h和72h3个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠脑缺血模型,三组于缺血前30min侧脑室注射DMSO,DMSO及JNK抑制剂SP600125(溶媒采用DMSO),容积均为10μl;脑缺血再灌注后30min、24h、72h免疫组织化学方法测定各时间点海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达阳性细胞数量,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果缺血再灌注使海马CA1区Bcl-2和Bax阳性锥体细胞数目表达增加,再灌注24h阳性锥体细胞数目表达至高峰(P<0.01),再灌注24～72h可见阳性锥体细胞数目表达减少(P<0.05)。其中SP组Bcl-2阳性锥体细胞数目显著多于IR组(P<0.05),而Bax阳性锥体细胞数目显著小于IR组(P<0.05)。脑缺血再灌注后海马CA1区神经元存活数目SP组高于IR组(P<0.01),凋亡细胞数目低于IR组(P<0.01)。结论 SP600125对大鼠脑缺血再灌注神经元损伤具有保护作用。     

鼠急性全脑缺血再灌注后葛根素对海马CA1区Bcl-2、Bax表达的影响

目的　观察全脑缺血再灌注后葛根素对神经细胞凋亡相关基因Bcl 2、Bax表达的影响。方法　采用免疫组织化学法、原位末端标记法检测大鼠全脑缺血再灌注不同时间内海马CA1区Bcl 2和Bax蛋白表达水平及凋亡细胞数的变化。结果　①脑缺血再灌注后 ,海马CA1区Bcl 2蛋白的表达随再灌注时间不同而变化 ,缺血 10min后再灌注 6h达高峰 ;葛根素治疗组Bcl 2蛋白的表达于相应的时间点明显增加 ;②Bax蛋白表达在再灌注 2 4h达高峰 ,葛根素治疗组Bax蛋白表达在相应时间点则下降 ;③神经细胞凋亡数随再灌注时间延长而增加 ,葛根素可减少神经细胞凋亡数。结论　在全脑缺血再灌注后细胞凋亡中 ,Bcl 2、Bax发挥重要作用 ;葛根素通过上调Bcl 2蛋白的表达 ,下调Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡发挥神经保护作用