银杏叶提取物对老龄大鼠心肌保护作用的研究

目的 探讨银杏叶提取物对老龄大鼠心肌的保护作用.方法 选择20月龄大鼠,分别给予银杏叶提取物(EGB)和非酶糖基化产物(AGEs)交联结裂解剂(ALT-711)灌胃,经16周治疗后,观察心肌内AGEs、血清内抗氧化活性物质超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)及氧化代谢产物丙二醛(MDA)的含量,观察心肌细胞内线粒体DNA的缺失率及心肌超微结构的改变.结果 老龄对照组大鼠和成年对照组比较.心肌细胞间质增生、肿大,线粒体和内质网膜受损,心肌组织内AGEs含量减少[分别为(33.5±1.3)AU/mgHYP和(18.1±1I 2)AU/mgHYP,t=7.18,P<0.05],血清中SOD和GSH-PX减少[分别为(138.4±3.8)U/ml和(1283.8±28.8)U/ml、(227.7±13.8)U/ml和(2114.1±135.9)U/ml,t分别为-19.59和-18.79,均P<0.01],MDA增多[分别为(6.7±0.6)mmol/ml与(4.1±1.O)mmol/ml,t=7.18,P<0.05],线粒体mtDNA缺失率增多[(0.1805±0.0718)%和(0.0060±0.0001)%,t=6.98,P<0.01],EGB和ALT-711治疗组与老年对照组比较,心肌内AGEs产物减少(P<0.05).血清内SOD、GSH-PX抗氧化物质增多(P<0.05),血清氧化代谢产物MDA减少(P<0.05),mtDNA缺失率减少(P<0.01).结论 老龄大鼠心肌老化和非酶糖基化及氧化应激相关,EGB和ALT-711同样具有抑制非酶糖基化和抑制氧化应激的作用,通过对心肌内线粒体mtDNA缺失率的抑制,具有抗衰老作用.     

不同游泳形式运动对衰老小鼠模型骨骼肌线粒体DNA缺失的影响

目的 研究不同形式运动对衰老小鼠模型骨骼肌线粒体DNA(mtDNA)的影响.方法 用D-半乳糖诱导衰老模型小鼠,以不同形式运动方式训练小鼠6 w后检测腓肠肌组织SOD活性、MDA含量和mtDNA的缺失比例.结果 运动各组与无运动组相比小鼠腓肠肌组织SOD活性显著提高(P＜0.05),MDA含量显著降低(P＜0.05),mtDNA缺失比例显著降低(P＜0.05).结论 运动能够降低线粒体缺失率和减轻自由基的损伤,使抗氧化酶和线粒体产生适应性的变化,从而延缓衰老的发生或减轻衰老的程度.     

维生素C对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型的影响

目的从mtDNA缺失改变，线粒体呼吸酶活力和氧化应激水平的角度研究维生素C（Vc）对D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型的影响。方法建立衰老小鼠模型，PCR法检测实验小鼠mtDNA固定片段的缺失情况，氧电极法检测肝线粒体呼吸酶琥珀酸脱氢酶（SUCOX）和NADH氧化酶（NADHOX）活力，荧光法检测肝和脑MDA含量和GPX活性，化学法检测SOD的活性。结果模型组和Vc保护组小鼠都出现mtDNA固定片段缺失，但Vc保护组荧光强度明显低于模型组。与模型组相比，对照组线粒体呼吸酶琥珀酸脱氢酶和NADH氧化酶活性显著降低，Vc保护组线粒体呼吸酶琥珀酸脱氢酶和NADH氧化酶活性显著升高；对照组和Vc保护组小鼠肝脑MDA含量和SOD活性降低。结论Vc可以减轻D-半乳糖诱导亚急性衰老动物模型的氧化损伤，保护mtDNA和增强线粒体氧化呼吸酶活性。     

松花粉对衰老成纤维细胞线粒体DNA缺失突变的影响

目的 通过研究松花粉对衰老细胞线粒体(mt) DNA4977缺失突变的影响,探讨松花粉抗衰老的作用机制.方法 将细胞分为青年组、衰老细胞组、含240 mg/dl松花粉的衰老细胞处理组,三组细胞分别用不同培养基培养后,抽提线粒体DNA,进行PCR检测mtDNA4977缺失突变,以线粒体DNA中保守序列PCR扩增结果作为内参,比较各组mtDNA4977缺失突变在总线粒体DNA中的比例;同时对各组细胞进行β-半乳糖苷酶染色;并测定各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果 松花粉能够改善衰老成纤维细胞的衰老变化,并能降低衰老细胞mtDNA4977的缺失突变,提高细胞SOD活性及降低其MDA含量(P＜0.05).结论 松花粉可能通过减轻成纤维细胞的氧化损伤,从而保护细胞mtDNA延缓成纤维细胞的衰老.     

线粒体脱氧核糖核酸缺失与病毒性心肌疾病患者心功能损伤的关系

目的探讨不同心功能状态病毒性心肌疾病患者外周淋巴细胞线粒体脱氧核糖核酸(mtI)NA)缺失率,为进一步明确mtDNA损伤在病毒性心肌疾病发病中的作用提供分子依据方法将83例病毒性心肌疾病患者分为病毒性心肌炎组(VMC组,n=50)和扩张型心肌病组(DCM组,n=33),23例健康献血者为对照组.用定量多聚酶链反应(PCR)法检测患者外周淋巴细胞mtDNA4977碱基对(mtDNA4977)和mtDNA7436碱基对(mtDNA7436)缺失率,并分析mtDNA缺失程度与心脏扩大及心功能状态的关系.结果VMC组和DCM组外周淋巴细胞mtDNA缺失率显著高于对照组(P<0.001);mtDNA缺失率的高低与心功能损害呈一致性改变,NYHA心功能I级与IV级者mtDNA缺失率分别比对照组高12.4倍和110.3倍;mtDNA缺失率与心功能分级、心胸比率及心腔内径呈正相关,与左心室射血分数(LVEF)呈负相关;mtDNA4977和mtDNA7436缺失率与LVEF的相关系数分别为-0.681和(0.675(P均<0.05).结论mtDNA缺失突变与病毒性心肌疾病患者心功能的损伤密切相关,可能在该病发生与发展中起一定作用.     

SIRT3在AGEs诱导的心肌老化中的角色及机制研究

目的：研究晚期糖基化终产物（AGEs）诱导心肌老化的机制,沉默信息调节因子SRIT3是否参与,探索黄山药总皂苷(TSDP )改善心肌老化下游机制。方法：原代心肌细胞分对照组,AGEs+NC SiRNA组,AGEs及+SIRT3 SiRNA共干预组,用western-blot测P16,P53及SOD2表达水平,用活性氧试剂盒测细胞内活性氧,用半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色试剂盒测细胞老化。另对照组,AGEs+NC SiRNA组,TSDP+AGEs+NC SiRNA组,及 TSDP+AGEs+SIRT3 SiRNA组,用SA-β-Gal测老化。结果： AGEs+NC SiRNA组较对照组SIRT3蛋白水平下降,AGEs+NC SiRNA,和AGEs+SIRT3 SiRNA共干预组较对照组P53增加,SOD2减少,SA-β-Gal比例及活性氧增加。SIRT3 SiRNA共干预组较AGEs+NC SiRNA组P53增加,P16及SA-β-Gal比例不变。TSDP预干预AGEs组较AGEs+NC SiRNA组SA-β-Gal活性降低,敲降SIRT3后SA-β-Gal活性降低现象消失。结论：AGEs可能是通过下调SIRT3的表达水平,减少抗氧化物蛋白SOD2的表达,加重线粒体氧化应激,促进AGEs诱导的心肌老化进程。TSDP可能通过调控 SIRT3的表达水平而影响老化。     

病毒性心肌炎小鼠心肌与骨骼肌细胞线粒体损伤及其相关性

目的探讨病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌与骨骼肌细胞线粒体损伤（线粒体膜磷脂脱失和线粒体DNA3867缺失）程度及二者的相关性。方法50只BALB/c小鼠随机分为2组,实验组（40只）腹腔注射内含柯萨奇B3病毒（Coxsackievirus B3,CVB3,TCID50=108）的Eagle液制备VMC小鼠模型,另10只为对照组。分别于病毒感染后3、11和24 d行心肌和骨骼肌细胞线粒体膜磷脂脱失程度和mtDNA3867缺失率的测定,并用Spearman法对其进行相关分析。结果实验组小鼠在病毒感染后3 d,可见心肌和骨骼肌细胞mtDNA3867缺失率显著高于对照组（P<0.05）,而线粒体膜磷脂脱失程度与对照组相比无显著性差异;病毒感染后11 d,心肌和骨骼肌细胞mtDNA3867缺失性损伤达高峰（P<0.05）,线粒体膜磷脂脱失程度亦显著高于对照组（P<0.05）;病毒感染后24 d,心肌和骨骼肌细胞线粒体膜磷脂脱失和mtDNA3867缺失程度与感染后11 d组比较无显著性差异,但与对照组和病毒感染后3 d组比较,仍有显著性差异（P<0.05）。线粒体的上述损伤性改变在心肌和骨骼肌细胞呈一致性同步变化,且具有良好相关性（P<0.05）。结论CVB3可显著损伤心肌和骨骼肌线粒体DNA和膜磷脂,两者损伤具有相关性,提示骨骼肌有望成为反映心肌细胞线粒体损伤的外周细胞“窗口”。     

五味子对衰老大鼠心肌抗氧化能力及形态学改变的影响

目的探讨五味子对D-半乳糖致衰老大鼠血清及心肌抗过氧化能力及心肌形态学改变的影响。方法应用D-半乳糖复制衰老大鼠模型,同时给予五味子灌胃,8 w后,取血、心脏。检测血清和心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的含量及光镜下心肌形态学的改变。结果五味子治疗组血清和心肌组织的T-AOC、GSH-Px、SOD、NO含量明显高于衰老模型组,MDA含量低于衰老模型组。结论五味子对自由基引起的心肌损伤有保护作用,清除自由基的能力随用药时间的延长而增强,所以其保护作用与五味子服用时间呈正相关。     

衰老小鼠线粒体DNA缺失的研究

目的：探讨线粒体DNA(mtDNA)大片段缺失与衰老的关系。方法：用聚合酶链反应（PCR）检测不同年龄段小鼠心肌组织mtDNA片段缺失，同时用电镜观察其组织学改变。结果：用PCR检测到2只老年小鼠心肌mtDNA存在着3.87Kb片段缺失，电镜下老年小鼠心肌线粒体明显肥大肿胀，数目减少。结论：MtDNA片段缺失的发生随年龄增加而增加，可能中衰老的过程中起重要作用。     

间歇有氧运动训练上调SIRT3改善衰老心肌线粒体功能

目的 探讨间歇有氧运动训练（AIT）对调节SIRT3介导的抗氧化酶系统改善老年小鼠心肌线粒体功能的影响。方法 采用C57小鼠（20月龄）20只,随机分为AIT组和非运动组,每组10只。以成年野生型C57小鼠非运动组(4月龄,10只)为对照组。建立间歇有氧运动训练12周小鼠模型,跑台训练由3部分构成:10 min热身运动,7 min间歇训练（4 min高强度和3 min低强度训练）及1 min冷却。每日训练1 h,每周训练5 d,训练时间为12周。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌线粒体抗氧化酶相关蛋白的表达。结果 AIT显著上调衰老心肌中线粒体去乙酰化酶sirtuin-3（SIRT3）表达水平,提高AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平(P<0.05);AIT可改善老年组小鼠心肌线粒体抗氧化酶(MnSOD、Catalase)的活性,有效减少衰老心肌脂质过氧化损伤(P<0.05);AIT训练显著提高衰老心肌线粒体生物合成能力改善了线粒体的功能(均P<0.05)。结论 有氧间歇运动训练可有效地上调衰老小鼠心肌细胞SIRT3水平,有效提高衰老小鼠心肌线粒体功能,其机制可能与激活心肌SIRT3所介导的抗氧化酶系统有关。     

Establishment of the mimetic aging effect in mice caused by D-galactose

We successfully established an oxidant damageof mimetic aging model using mice induced byD-galactose, and the mimetic aging model isrelative to free radical and the accumulationof waste substances in metabolism. The animalswere divided into 3 groups: (1)phosphate-buffered saline (PBS); (2) 1%D-galactose; (3) 5% D-galactose bysubcutaneous injection every day. After 45days, mice treated with D-galactose showed asignificant increase in the malondialdehyde(MDA), total antioxidant status (TAS) and adecrease in superoxide dismutase (SOD) in the blood comparedwith the PBS group. In the brain, theD-galactose treated mice exhibited a higherlevel MDA and a lower level SOD activity.In the liver, only the 5% D-galactose groupindicated a significant increase in MDA. By reference to theoxidative biomarkers in blood, brain and liver,we have confirmed the reliability of themimetic aging model.     

大枣对D-半乳糖致衰老小鼠钙稳态影响的实验研究

目的　探讨大枣对维持细胞内钙稳态的作用及机制。方法　本实验以D 半乳糖致衰老小鼠为研究对象 ,分别以大、中、小剂量的大枣水煎剂灌胃 45d,测定了青年、老年小鼠红细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性 ,心肌线粒体内丙二醛 (MDA)含量 ,心肌细胞膜Na K ATPase、Ca2 ATPase活性 ,心肌组织及线粒体Ca2 含量变化 ,同时 ,观察不同剂量大枣对老年小鼠上述指标的影响。结果　红细胞SOD活性、心肌细胞膜Na K ATPase、Ca2 ATPase活性、心肌线粒体Ca2 含量变化随增龄而下降 ;心肌线粒体内MDA含量、心肌组织Ca2 含量随增龄而上升。大枣可提高小鼠红细胞SOD活性 ,心肌细胞膜Na K ATPase、Ca2 ATPase活性、心肌线粒体Ca2 含量 ,并能降低心肌线粒体内MDA含量、心肌组织Ca2 含量。在各给药组中以大枣大剂量组的作用最强。结论　 (1 )大枣能增强机体抗氧化能力 ,减少自由基对生物膜的损伤 ,维持细胞内钙稳态 ,具有一定的抗衰老作用 ;(2 )自由基与钙超载协同作用可能是导致衰老的重要原因。     

增龄对SAM小鼠脑线粒体DNA氧化损伤的影响

目的探讨增龄对SAM小鼠脑线粒体DNA(mtDNA)缺失、活性氧自由基水平及脑组织总抗氧化能力的影响。方法SAM-P／8和SAM-R／1小鼠分别分为三组幼年组(0．5月龄)、青年组(2月龄)和老年组(12月龄)各6只。用PCR方法测定脑组织线粒体DNA缺失、用化学发光法测定总抗氧化能力及活性氧自由基。结果随增龄，SAM—P／8小鼠脑组织线粒体DNA缺失增加，线粒体活性氧自由基水平升高，脑组织总抗氧化能力下降。结论随增龄，SAM-P／8小鼠脑组织氧化损伤增加，可能是导致其记忆学习障碍的原因之一。     

限食对衰老大鼠心功能的保护作用及其机制

目的研究限食对衰老大鼠心功能的保护作用及其机制。方法选择2月龄SD大鼠10只,随机分为衰老组和限食组(60%进食量),每组5只。2组大鼠每天皮下注射D-半乳糖100mg/kg,连续给药42d建立衰老动物模型;衰老模型建立后另选5只2月龄SD大鼠设为青年组。3组行心功能检测,包括左心室内压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dtmax),以及血浆丙二醛水平、超氧化物歧化酶活性和左心室心肌脂褐素水平测定。结果与青年组比较,衰老组大鼠LVSP、+dp/dtmax、超氧化物歧化酶活性明显降低,LVEDP、丙二醛、脂褐素水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与衰老组比较,限食组LVSP[(110.88±7.35)mm Hg(1mm Hg=0.133kPa)vs(70.18±19.27)mm Hg]、+dp/dtmax[(2827.60±237.88)mm Hg/s vs(2365.66±99.81)mm Hg/s]和超氧化物歧化酶[(115.77±10.17)U/ml vs(90.10±17.11)U/ml]活性明显升高,LVEDP[(7.12±2.51)mm Hg vs(14.05±2.01)mm Hg]、丙二醛[(12.54±1.66)nmol/ml vs(15.83±2.51)nmol/ml]和脂褐素[(348.82±27.29)ng/mg vs(400.12±31.89)ng/mg]水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论衰老大鼠心功能有所降低,限食可能通过降低机体氧化应激水平,使脂褐素形成减少,从而改善衰老大鼠心功能。     

D-半乳糖诱发氧自由基升高对大鼠动脉衰老的影响

目的观察D半乳糖诱发氧自由基升高对大鼠颈动脉顺应性和腹主动脉脂褐素含量的影响。方法大鼠皮下注射D半乳糖140mg/kg连续7w,造成氧自由基升高动物模型。分别测定模型组与对照组大鼠血浆MDA、SOD水平。同时采用恒速注入流体方法测定大鼠颈动脉血管段的顺应性和荧光图像分析法测定腹主动脉脂褐质含量。结果模型组较对照组MDA含量显著升高(P<001),SOD略有下降。模型组血管顺应性低于对照组,其中弹性面积有显著性差异(P<005)。模型组腹主动脉脂褐质荧光强度显著高于对照组(P<005)。结论氧自由基是造成动脉衰老的重要因素。     

晚期糖基化终产物引起老年小鼠创伤后继发心脏损伤加重的机制研究

目的 探讨衰老个体创伤后心肌损伤加重的机制,尤其是晚期糖基化终产物（AGEs）在其中发挥的作用。方法 C57雄性小鼠使用Noble-Collip创伤仪制备小鼠创伤模型。将成年C57小鼠（2月龄18只）和老年C57小鼠（20月龄18只）随机分为:非创伤组、创伤组、创伤干预组。采用彩色多普勒超声诊断仪检测左室射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS)。取心肌组织予Western blot检测磷酸化的AMP蛋白激酶（pAMPK）、AMP蛋白激酶（AMPK）、p16和p53 蛋白表达水平,使用ELISA 试剂盒检测血清可溶性晚期糖基化终产物受体（sRAGE）和羧甲基赖氨酸（CML）的水平。结果 与成年创伤小鼠对比,老年小鼠创伤后心肌损伤明显加重,表现为左室EF和左室FS显著减低（均P<0.01）。血MG-AGEs显著升高（P<0.05）以及AMPK活性下降（P<0.05）。预先采用sRAGE对AGEs进行干预,可显著改善老年小鼠创伤后心功能,表现为心肌AMPK活性显著提高（P<0.01）,心脏功能EF和FS值显著提高（P<0.01）。结论 衰老个体创伤后心肌损伤加重的机制与MG-AGEs系统有关,该系统可能是提高老年个体临床救治的有效靶点之一。     

Cross-linking of glycated collagen in the pathogenesis of arterial and myocardial stiffening of aging and diabetes

The normal aging process is often accompanied by arterial wall stiffening and by a decrease in myocardial compliance. These processes contribute to isolated systolic hypertension and diastolic heart failure, which lead to substantial morbidity and mortality among older individuals. Patients with diabetes manifest arterial stiffening and diastolic dysfunction at a younger age. This leads to the concept that the mechanism that underlies changes in vascular mechanical properties during aging is accelerated in diabetes. The Maillard reaction or advanced glycation of proteins occurs slowly in vivo with normal aging and at an accelerated rate in diabetes. Advanced glycation end-products (AGEs) that form during the Maillard reaction are implicated in the complications of aging and diabetes. The formation of AGEs on vascular wall and myocardial collagen causes cross-linking of collagen molecules to each other. This leads to the loss of collagen elasticity, and subsequently a reduction in arterial and myocardial compliance. Aminoguanidine, an inhibitor of AGE formation, is effective in slowing or preventing arterial stiffening and myocardial diastolic dysfunction in aging and diabetic animals. In aged and diabetic animals, agents that can chemically break pre-existing cross-linking of collagen molecules are capable of reverting indices of vascular and myocardial compliance to levels seen in younger or non-diabetic animals. These studies suggest that collagen cross-linking is a major mechanism that governs aging and diabetes-associated loss of vascular and cardiac compliance. The development of AGEs cross-link breakers may have important role for future therapy of isolated systolic hypertension and diastolic heart failure in these conditions.     

橙皮苷与氨基胍对STZ－糖尿病大鼠主动脉胶原非酶糖化作用的比较

本文观察了天然黄酮类化合物──橙皮苷对ＳＴＺ－糖尿病大鼠主动脉胶原非酶糖基化作用的影响，并与氨基肌进行了比较。结果表明：用橙皮苷及氨基肌治疗１２０天后，糖尿病鼠动脉胶原ＡＧＥｓ含量明显降低（Ｐ＜０．０１），而血糖、体重无明显差别。提示橙皮苷对糖尿病大鼠蛋白非酶糖基化作用与氨基胍相似。     

Exogenous advanced glycosylation end products induce complex vascular dysfunction in normal animals: a model for diabetic and aging complications.

Advanced glycosylation end products (AGEs) have been implicated in many of the complications of diabetes and normal aging. Markedly elevated vascular tissue and circulating AGEs were linked recently to the accelerated vasculopathy of end-stage diabetic renal disease. To determine the pathogenic role of AGEs in vivo, AGE-modified albumin was administered to healthy nondiabetic rats and rabbits alone or in combination with the AGE-crosslink inhibitor aminoguanidine. Within 2-4 weeks of AGE treatment, the AGE content of aortic tissue samples rose to six times the amount found in controls (P < 0.001). Cotreatment with aminoguanidine limited tissue AGE accumulation to levels two times that of control. AGE administration was associated with a significant increase in vascular permeability, as assessed by 125I label tracer methods. This alteration was absent in animals that received aminoguanidine in addition to AGE. Significant mononuclear cell migratory activity was observed in subendothelial and periarteriolar spaces in various tissues from AGE-treated rats compared to normal cellularity noted in tissues from animals treated with aminoguanidine. Blood pressure studies of AGE-treated rats and rabbits revealed markedly defective vasodilatory responses to acetylcholine and nitroglycerin compared to controls (P < 0.001), consistent with marked NO. inactivation; aminoguanidine treatment significantly prevented this defect. These in vivo data demonstrate directly that AGEs, independent of metabolic or genetic factors, can induce complex vascular alterations resembling those seen in diabetes or aging. AGE administration represents an animal model system for the study of diabetic and aging complications as well as for assessing the efficacy of newly emerging therapies aimed at inhibiting advanced glycosylation.