人重组S100A8蛋白适配体的筛选和结构分析

目的:筛选人重组S100A8蛋白特异性的适配体。方法:采用配体指数级富集系统进化(systematic evolu-tion of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术,以人重组S100A8蛋白为靶蛋白,以微孔板为筛选介质,从体外合成的随机单链DNA文库中筛选其适配体。利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮单链DNA文库与靶蛋白的亲和力直至亲和力的上升趋于饱和,将最后一轮筛选产物克隆测序,并进行生物信息学分析。结果:经过11轮筛选,单链DNA文库与人重组S100A8蛋白的亲和力趋向稳定,将第11轮筛选产物克隆测序,对获得的30个适配体进行分析。一级结构分析显示30个适配体并无共同的保守序列,但有3对适配体序列完全一致。二级结构预测分析表明,茎环和口袋结构为主要的结构形式,提示其可能是适配体与人重组S100A8蛋白特异性结合的基础。根据茎环和口袋的相对比例可将30个适配体分为4组,其中第1组中35号适配体与人重组S100A8蛋白亲和力最高。结论:获得了与人重组S100A8蛋白特异性结合的适配体群,为后续适配体的应用研究以及S100A8蛋白功能的研究奠定了基础。     

大肠埃希菌的肠道寄殖与感染

大肠埃希菌是肠道正常寄殖菌及临床常见病原菌,也是耐药基因的重要储存库。笔者综述了肠道寄殖大肠埃希菌的耐药性及相关感染,指出应用抗菌药物时,不仅要考虑其抗菌谱,更要考虑其对肠道微生态的影响及对耐药菌的选择,只有合理应用抗菌药物才能更好地抑制细菌耐药的增长。     

人重组S100A8蛋白适配体的筛选和结构分析

目的：筛选人重组S100A8蛋白特异性的适配体。方法：采用配体指数级富集系统进化（systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX）技术,以人重组S100A8蛋白为靶蛋白,以微孔板为筛选介质,从体外合成的随机单链DNA文库中筛选其适配体。利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮单链DNA文库与靶蛋白的亲和力直至亲和力的上升趋于饱和,将最后一轮筛选产物克隆测序,并进行生物信息学分析。结果：经过11轮筛选,单链DNA文库与人重组S100A8蛋白的亲和力趋向稳定,将第11轮筛选产物克隆测序,对获得的30个适配体进行分析。一级结构分析显示30个适配体并无共同的保守序列,但有3对适配体序列完全一致。二级结构预测分析表明,茎环和口袋结构为主要的结构形式,提示其可能是适配体与人重组S100A8蛋白特异性结合的基础。根据茎环和口袋的相对比例可将30个适配体分为4组,其中第1组中35号适配体与人重组S100A8蛋白亲和力最高。结论：获得了与人重组S100A8蛋白特异性结合的适配体群,为后续适配体的应用研究以及S100A8蛋白功能的研究奠定了基础。     

大肠埃希菌氨基糖苷酰基转移酶基因型研究

目的：了解大肠埃希菌的耐药谱、氨基糖苷酰基转移酶基因（aac）的分布规律及其与氨基糖苷类抗生素耐药的相关性。方法：琼脂稀释法测定无菌体液分离的44株大肠埃希菌对阿米卡星等12种抗生素的耐药性，聚合酶联反应（PCR）法测定酰基转移酶基因型aac（3）-Ⅰ、Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ。结果：大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率为45．45％（20／44），对亚胺培南（IPM）、关罗培南（MEM）的耐药率为0，对哌拉西林／他唑巴坦、头孢他啶的耐药率较低（〈20％），对左氟沙星、环丙沙星的耐药率较高（〉60％），对氨基糖苷类阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为18．18％、56．82％、61．36％。氨基糖苷类耐药模式TG（妥布霉素、庆大霉素）〉TGA（妥布霉素、庆大霉素、阿米卡星）〉T（妥布霉素）〉G（庆大霉素），分别占36．36％、18．189／5、6．82％、2．27％。氨基糖苷酰基转移酶基因检出以aac（3）-Ⅱ最高，占52．27％（23／44），aac（6＇）-Ⅰ次之，占29．55％（13／44），aac（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ同时检出者占15．91％（7／44），未检出aac（3）-Ⅰ。ESBLs阳性株的aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰ检出率分别为60％、50％，高于ESBLs阴性株的45．81％、12．51％。TG模式与其耐药基因aac（3）-Ⅱ符合率较高为93．75％（15／16）。结论：本地分离大肠埃希菌氨基糖苷类耐药模式以TG为主，酰基转移酶基因以aac（3）-Ⅱ为主，aac（6’）-Ⅰ次之，aac（3）-Ⅰ罕见。     

大肠埃希氏菌对环丙沙星耐药性的临床实验

用环丙沙星对临床标本中分离得的45株大肠埃希氏菌进行体外抗菌活性测定。结果表明,环丙沙星对大肠埃希氏菌的最低抑菌浓度范围为0.008～128mg/L。该组细菌对环丙沙星耐药率达40％(18/45)。对环丙沙星耐药的菌株同时对依诺沙星、诺氟沙星和奥氟沙星耐药。此外,环丙沙星敏感株和耐药株两组间对庆大霉素、氯霉素和复方新诺明的药敏情况也存在显著性差异。院内感染者标本中分离的大肠埃希氏菌对环丙沙星的耐药率高达7/10。     

院内产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的流行及耐药性分析

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(E．coli)和肺炎克雷伯菌(K．pm)流行及耐药情况,以指导临床合理用药。方法 对临床分离的384株E．coli和88株K．pm采用美国临床实验室标准委员会(NCCL5)1999年版本标准规定的ESBLs表型初筛、确证实验确定ESBLs的发生率;药敏试验采用微量液体稀释法,由MicroScan Walk A Way-40全自动微生物分析仪测定。结果 E．coli和K．pm的ESBLs发生率分别为30．2％、28．4％;产ESBLs菌除对哌拉西林／他唑巴坦(Pip／Tazo)(E．coli为3．6％、K．pm为9％)、氨曲南(E．coli为8．1％、K．pm为5．7％)、头孢曲松(E．coli为3．9％、K．pm为4．5％)、头孢噻肟(E．coli为3．4％、K．pm为2．3％)耐药率较低外,对其他抗生素都有较高耐药率。结论 治疗产ESBLs菌引起的感染应首选氨曲南、耐酶抑抑制剂复合物药物、头霉素类以及其药敏试验敏感的药物;E．coli和K．pm是主要的ESBLs产生菌。     

产ESBLs大肠埃希菌耐药性分析

目的:了解我院分离的大肠埃希菌临床分布和耐药特点,为临床合理用药和控制大肠埃希菌感染提供依据。方法:收集临床分离的大肠埃希菌231株,采用纸片扩散法(K-B法)进行14种抗菌药物敏感性测定及产ESBLs耐药菌株的初步筛选,再通过双纸片协同试验(DDST)法确认产酶菌株。结果:231株大肠埃希菌标本来源,痰分离出86株(37.23%)、其次为尿液57株(24.68%)、胆汁39株(16.88%)等;产ESBLs大肠埃希菌阳性检出率为36.36%(84株);产ESBLs大肠埃希菌耐药率明显高于非产ESBLs大肠埃希菌。对氨苄西林、哌拉西林、萘定酸、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素的耐药率较高,对阿米卡星、头孢吡肟的耐药率较低,对亚胺培南耐药率为零。结论:产ESBLs大肠埃希菌具有多重耐药性,要重视产ESBLs菌株的检测,治疗其所致感染时,需根据药敏结果合理选用有效抗菌药物。     

儿科产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药的流行特征分析

目的 研究我国4个地区儿科产超广谱β内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌的耐药流行特征,为临床儿科其致病菌感染治疗提供参考.方法 2005-2006年4个地区5家儿童专科医院临床分离大肠埃希菌5127株,酶抑制剂增强试验初筛及确证产ESBL,琼脂稀释法测定349株产ESBL大肠埃希菌对9种儿科常用抗生素最小抑菌浓度(MIC).结果 判断标准根据美国临床标准化委员会2005年版执行.结果 5127株大肠埃希菌产ESBL率为46.7%.349株产ESBL大肠埃希菌对阿莫西彬克拉维酸耐药率为23.1%,中介率为38.5%;头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟耐药率分别为67.2%、24.5%和48.4%,中介率分别为26.4%、5.7%和19.1%;阿米卡星耐药率为5.4%,未检出亚胺培南耐药株.分离株对阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟、环丙沙星及庆大霉素耐药性存在地区差异.结论 ESBL在中国儿科临床分离大肠埃希菌中广泛流行,除亚胺培南、阿米卡星外,产ESBL大肠埃希菌对β内酰胺类药物耐药现象严重,部分药物耐药性存在地区差异.     

阑尾炎术后切口感染大肠埃希菌耐药性分析

目的探讨阑尾炎术后切口感染大肠埃希菌耐药性,为临床合理应用抗生素提供帮助。方法应用WHO-NET5.4软件分析本院2007年1月～2011年6月切口分离105株大肠埃希菌的药物敏感性试验结果。结果产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lactamases,ESBLs)大肠埃希菌47株,占44.76%;大肠埃希菌对美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦均敏感;除上述两种药物外,产ESBLs菌株对其他18种抗生素的耐药率均明显高于非产ESBLs菌株。结论阑尾炎术后切口感染大肠埃希菌的耐药性日益严重,应加强对产ESBLs菌株的耐药性监测,依据药物敏感性试验结果合理用药才能有效防止耐药菌的产生和扩散。     

大肠埃希菌临床分布及耐药性分析

目的了解医院大肠埃希菌的临床分布及耐药性,为临床用药提供依据。方法收集医院2011年1月～2012年6月常规培养检出的396株非重复的大肠埃希菌,分析其在各种临床标本中的分布特征、耐药状况。结果大肠埃希菌从临床标本中以痰液和脓液标本的检出最常见,分别占24．24％和23．49％,其余依次是尿液、其他分泌物、血液、引流液、其他标本、胆汁,分别占20．20％、18．18％、6．06％、5．30％、1．52％、1．01％：大肠埃希菌对氨苄西林、复方新诺明、环丙沙星、左氧氟沙星有较高的耐药性,耐药率均〉60％,对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星较敏感。结论大肠埃希菌存在比较严重的耐药性,临床应尽早进行细菌培养和对抗菌药物的耐药性监测。以指导临床合理用药。     

临床大肠埃希菌感染分布与药物敏感分析研究

目的 研究大肠埃希菌临床分布及其耐药情况,为临床医生提供帮助.方法 采用VITEK 2 Compact鉴定系统,对临床感染患者的标本进行病原菌分离培养鉴定和体外药敏试验.结果 在694株大肠埃希菌中,尿液标本分离率最高(47.6%);超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性率为60.8%,其中阳性菌株对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢替坦、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、环丙沙星和复方新诺明等有较高的耐药率,阴性菌株对大部分抗菌药物有较低耐药率.结论 产ESBLs大肠埃希菌比阴性菌株具有较高的耐药率,临床要重视对大肠埃希菌ESBLs的检测.     

我院急诊静脉用抗菌药物应用分析

目的：了解我院急诊静脉用抗菌药物的应用情况，以促进临床合理用药，在提高疗效的同时减少抗菌药物使用的不良后果。方法：采用回顾性分析方法，选取2007年急诊输液处方1000张，对抗菌药物的种类、用法、用量等进行统计分析。结果：头孢类抗生素应用量最大，其次为克林霉素。其中不合理使用抗菌药物处方有175张，占使用抗菌药物的17．5％。结论：用药情况基本合理，但仍需进一步提高用药水平，尤其是静脉抗菌药物在临床上的合理应用。     

大肠埃希菌临床分离株耐药性变迁

目的了解大肠埃希菌对抗生素耐药性变迁,为临床治疗提供参考。方法菌株鉴定和药敏试验采用ATB全自动微生物分析仪进行测定,超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）采用双纸片协同法。结果从2001-2005年检出的大肠埃希菌对青霉素类药物耐药率最高,对亚胺培南耐药率最低,氨基糖苷类和第三代头孢菌素药物具有较好的体外抗菌活性,大肠埃希菌超广谱β-内酰氨酶（ESBLs）的发生率呈逐年上升的趋势,分别是8.5%、16.4%、19.3%、25.4%、27.8%。结论随着抗生素的广泛使用,大肠埃希菌的耐药性逐渐上升,要加强对其的耐药性监测,指导临床合理用药。     

某院大肠埃希菌分布及耐药性分析

目的：了解某院大肠埃希菌的分布特点及其耐药性,指导临床合理应用抗菌药物。方法对766株大肠埃希菌的分布及耐药率进行回顾性分析。采用法国生物梅里埃公司全自动细菌鉴定仪 VITEK2 compact进行菌株鉴定,采用K-B法进行药敏试验,按美国临床实验室标准化委员会2014年标准判读结果。结果766株大肠埃希菌主要分离自尿液和痰液标本,分别占52．87%和13．84%;其中鉴定出产超广谱β-内酰胺酶( ESBLs)大肠埃希菌366株,占大肠埃希菌总数的47．78%。产ESBLs大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs大肠埃希菌(P<0．05)。结论大肠埃希菌是泌尿道和呼吸道感染的常见病原菌,产ESBLs大肠埃希菌的耐药率高,临床上应根据药敏合理使用抗菌药物。     

Aβ阻断肽适配子TRX1-ABAD-DP-TRX2融合基因的克隆及表达

目的 将Aβ阻断肽(ABAD-DP) cDNA插入人硫氧化还原蛋白(hTRX)的活化位点,克隆融合基因TRX1-ABAD-DP-TRX2 (T-A-T) cDNA,为基因治疗阿尔茨海默病奠定基础.方法 通过PCR获得目的片段TRX1、TRX2、ABAD-DP,进一步将上述3目的片段按既定顺序插入腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV的多克隆位点,从而获得融合基因TRX1 -ABAD-DP-TRX2.经PEI介导Hela细胞包装重组腺相关病毒rAAV/T-A-T.感染NIH-3T3细胞,通过荧光免疫组织化学染色检测融合基因的表达及其与Aβ42的定位.结果 酶切后得到TRX1 -ABAD-DP-TRX2融合基因片段的大小约为435 bp,与理论值一致.荧光免疫组织化学染色检测到融合基因的表达,且共定位组T-A-T和Aβ42均位于NIH-3T3细胞胞质内.结论 成功克隆及表达了Aβ阻断肽适配子TRX1-ABAD-DP-TRX2融合基因,为进一步将阻断肽用于基因治疗阿尔茨海默病提供了基础.     

TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的 :用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原 ,建立诊断TTV感染的特异性方法。方法 :采用PCR方法扩增TTVORF2 基因 ,将之插入到测序质粒载体中进行测序 ,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30 ,并转化大肠杆菌M15菌株 ,进行诱导表达。用SDS PAGE分析表达产物。表达产物经Ni NTA柱层析纯化后 ,得到纯度为90 %的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western BlotBlotting分析。结果 :经IPTG诱导后 ,筛选出 2株高表达株。结论 :该蛋白具有良好的抗原活性     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分布

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌所产生的ESBLs的基因型特征。方法PCR通用引物扩增blaTEM、blaSHV、blaCTX-M和blaOXA基因后测序以确定其基因亚型。结果140株大肠埃希菌中68株产blaCTX-M-9,58株产blaTEM-1,35株产blaSHV,15株产blaCTX-M-1。结论产ESBLs的大肠埃希菌的主要流行型别为blaCTX-M-9型和blaTEM型。     

410株大肠埃希菌耐药性分析

目的 测定大肠埃希菌对13种抗生素的耐药性。方法 采用VITEK－32型全自动微生物分析仪410株大肠埃希菌的药敏和超广谱β－内酰胺酶（ESBLs)。结果 大肠埃希菌对氨苄西林、替卡西林的耐药率分别为75.1%、76.4%，阿莫西林／棒酸、头孢西丁、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、妥布霉素、萘啶酸、培氟沙星、奈替米星、复方新诺明的耐药率为13.1%-61.5%，亚胺培南为2.1%。大肠埃希菌产超广谱β－内酰胺酶为31％。结论 大肠埃希菌对亚胺培南的耐药率最低，可作为重症大肠埃希菌感染的首选药物。