鸡羽根角蛋白管毒性作用的研究

目的 观察鸡羽根角蛋白管作为组织工程材料的毒性作用.方法 分别制备不同处理强度的3种鸡羽根角蛋白管的浸提液并测定其化学成分.采用皮肤致敏实验(大鼠)、皮内刺激实验(家兔)、小鼠全身急性毒性实验以及体外细胞毒性实验观察鸡羽根角蛋白管浸提液的体内和体外毒性作用.结果 鸡羽根在浸出液中释放的主要物质为中等分子量的肽类物质,大分子蛋白释放不多.皮肤致敏实验和皮内刺激实验显示对浸提液不引起皮肤及皮内红斑、水肿和坏死现象.小鼠全身急性毒性实验中,腹腔注射浸提液的小鼠未出现死亡、衰竭、发绀、震颤、严重的腹膜刺激、眼睑下垂及呼吸困难等毒性症状.体外细胞毒性实验示浸提液细胞毒性接近于0级.结论 鸡羽根角蛋白管可被水解,释放一些肽类物质,其浸提液对皮肤无致敏作用,皮内刺激反应弱,不引起全身急性毒性症状,无细胞毒性.     

软骨组织工程支架材料的研究进展

软骨组织工程支架材料要求具有特定的生化、物理性质,如极强的生物相容性、合适的生物降解性、可控的孔径大小、足够的孔隙率等。随着软骨组织工程的发展,如何选取理想的支架材料已成为这一课题的关键。文中就近年来软骨组织工程的支架材料研究进展进行综述。     

胶原膜包裹或应用环孢素A改善鸡羽根角蛋白材料的组织相容性

目的 观察经胶原膜包裹或应用免疫抑制剂后,鸡羽根角蛋白(CCK)材料在体埋植对周围组织的影响.方法 30只SD大鼠,随机均分为5组.将经特殊处理的CCK埋植入竖脊肌组织中.实验组:A组为CCK材料埋植加术后两周腹腔内注射免疫抑制剂环孢素A(CsA,日剂量5 mg/kg),B组为CCK材料浸泡CsA(2.5 mg/ml)后埋植,C组为胶原膜包裹CCK材料后埋植,D组仅埋植CCK材料.空白对照组仅作切口,不埋植材料.分别于术后2、4、8周取材,常规切片染色,光镜下观察埋植材料的降解情况及对周围组织的影响,免疫组织化学术检测周围组织内T淋巴细胞浸润情况.结果 术后各组大鼠一般状况良好,术后第2、4、8周,可见大量巨噬细胞,尤其是多核巨细胞分布于材料边缘,吞噬材料.炎性细胞数量较少.第2、4、8周A组CD3阳性表达细胞数较B组少,与D组有显著差异(P＜0.05),A组与空白对照组无显著差异(P＞0.05).结论 短期应用免疫抑制剂可显著改善CCK的在体组织相容性;CCK在体内可降解,巨噬细胞,尤其多核巨细胞参与了该过程.     

海螵蛸作为组织工程支架材料的实验研究

目的了解并观察海螵蛸的空间结构及作为组织工程支架的生物相容性。方法将脱脂海螵蛸切成薄片,计算孔隙率,从光学显微镜和扫描电镜观察其空间结构。在小鼠背部皮下分别埋置海螵蛸支架和聚乙酸醇（PGA）,在术后1、2、4、8周观察炎症反应和吸收情况。四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT assay）分别检测海螵蛸支架对细胞增殖功能的影响。结果网格状的海螵蛸具有92%得孔率。皮下埋植术后1、2周仅少许淋巴细胞浸润,4周部分吸收,8周完全吸收,炎症细胞基本消退,与PGA比较无统计学差异。MTT assay测得细胞在海螵蛸支架中增殖能力较强。结论从结构上观察,海螵蛸符合细胞培养支架的多孔隙要求,且具有良好的生物相容性。     

组织工程支架材料研究进展

组织工程(Tissue Engineering)是应用生命科学与工程学的原理与技术,研究开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门学科.     

PEGPU3-D多孔支架在膀胱组织工程中的初步应用评价

目的 探讨膀胱上皮细胞、平滑肌细胞在聚乙二醇聚氨酯(PEGPU)3 D多孔支架的生长增殖能力,对PEGPU 3-D支架在膀胱组织工程中的潜在应用进行评价.方法 鼠成纤维细胞接种于乳液同含量(m/m)为8％、12％、16％、20％(即孔径为90.8、76.7、40.9和39.6 μm)的PEGPU 3-D聚氨酯多孔支架后,采用异硫氰酸荧光素(FITC)与4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)免疫荧光共染观察支架表面与支架内部细胞生长情况.采用免疫组织化学染色(检测α-actin与f-actin的表达)鉴定原代培养人膀胱平滑肌细胞.将人膀胱平滑肌细胞、上皮细胞和鼠成纤维细胞接种于PEGPU 3-D聚氨酯多孔支架后,采用胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测法绘制细胞生长曲线.结果 鼠成纤维细胞可在PEGPU 3-D多孔支架粘附、增殖,在平均孔径为40.9 μm的3-D多孔支架上鼠成纤维细胞可获得最佳的生长、增殖状态.膀胱平滑肌细胞在平均孔径为90.8 μm的3-D支架生长状态最佳,膀胱上皮细胞在平均孔径为39.6 μm的3D支架生长状态最佳.结论 3-D多孔PEGPU支架可支持膀胱上皮细胞与平滑肌细胞生长、增殖,具有膀胱组织工程应用的潜力.     

类人胶原蛋白联合天然和人工合成及纳米材料作为组织工程支架材料的应用进展

动物来源胶原材料在组织工程修复中的应用已十分广泛,而类人胶原蛋白(HLC)作为天然生物材料中的一种,是传统动物来源胶原材料的改良。HLC具有细胞相容性好、无免疫原性等特点,可以作为组织工程支架材料应用于组织工程修复组织器官损伤,并受到广泛关注。然而,低生物力学强度及不可控的生物降解速率使HLC在应用时受到一定程度的限制。为克服这些缺陷,将HLC与其他天然生物材料、人工合成材料及纳米材料联合使用,使得复合材料既无免疫源性,同时又具备了良好的细胞相容性、一定的机械强度和可控的生物降解速率,以便为组织工程修复组织和器官缺损提供更为优良的支架材料。     

小肠黏膜下层作为组织工程支架材料的免疫原性研究

目的检测小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)的免疫原性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。方法取SIS材料制备成体积为10mm×4mm×3mm的组织块,埋植于新西兰大白兔背部一侧骶脊肌内,以术前情况作自身对照,以新鲜SIS组作为阳性对照。分别于SIS材料植入前及植入后1、4、8周从兔耳缘静脉取血,用流式细胞仪检测家兔外周血中CD4+T和CD8+T细胞亚群的动态变化。结果流式细胞仪检测结果显示,脱抗原处理后的SIS植入兔体内后,其外周血CD4+T和CD8+T细胞较术前均有不同程度升高,术后一周达最高峰,与术前相比差异有统计学意义(P<0.05)。术后逐渐回落,至第4周时基本恢复正常。而植入新鲜SIS组的兔外周血CD4+T和CD8+T细胞较术前升高明显,与术前及实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SIS植入后T细胞亚群反应初始结果显示SIS有较低的免疫原性,提示其具有作为组织工程支架材料的可行性和可能性。     

软骨组织工程中支架材料的研究

随着材料学、生命科学及相关学科的发展,一门新的学科正在兴起,即组织工程技术。其基本方法是:将体外培养的高浓度的功能相关的活细胞种植于具备良好生物相容性和可降解性的支架,形成细胞支架复合物,然后,将这种复合物移植到动物体内组织缺损部位,最终形成一个与机体本身在组织学及生化组成上完全相同的组织,从而完成组织缺损的修复与再造。组织工程学的中心环节是支架材料,如何在原有研究的基础上研获理想的生物活性支架,已成为组织工程这一重大课题的核心热点和难点。     

小肠黏膜下层作为组织工程支架材料的研究进展

细胞支架材料作为组织工程技术主导材料之一,其在损伤修复过程中除了作为细胞锚着的基质和具有细胞繁殖、生长的介导作用外,还是决定损伤局部的组织结构能否序化再生,     

SGBG/PHBV构建牙周组织工程支架的初步研究

目的研究溶胶-凝胶生物活性玻璃（SGBG）／聚羟基烷酸酯（PHBV）与人牙周韧带细胞（PDLCs）的生物相容性，为牙周组织工程支架的选择提供依据。方法通过体外细胞培养实验，包括采用MTT比色分析法的浸提液实验，测定材料对人牙周韧带细胞有无毒性；及人牙周韧带细胞与SGBG／PHBV体外三维培养的直接接触法，通过扫描电镜，上清液羟脯氨酸含量的测定，检测材料对细胞生长形态及分泌功能的影响。结果SGBG／PHBV对人牙周韧带细胞无毒性，细胞在SGBG／PHBV三维支架上贴附及生长良好，实验组上清液羟脯氨酸含量测定值与对照组差异有显著性，材料不影响细胞的分泌功能，同时支架材料的三维结构更能促进细胞的分泌功能。结论SGBG／PHBV作为支架材料，有良好的生物相容性，有望应用于牙周组织缺损的组织工程修复。     

脱钙骨基质为骨组织工程支架修复骨缺损实验研究

目的：利用骨组织工程原理对节段性骨缺损进行修复,探讨脱钙骨基质（demineralized bone matrix,DBM）在骨组织工程中的应用。方法：从兔股骨分离骨髓间质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,经体外诱导分化、条件培养、5-溴-2′-dexyouridine,5-BrdU）标记后,接种到兔海绵状脱钙骨基质（sponge of DBM ,SDBM）支架上,然后分别植入兔背部肌肉内及兔桡骨中段10mm长的骨膜骨缺损内。对照组为缺损内单纯植入SDBM及空白组。术后观察6周。结果：经条件培养的BMSCs可在体外表达Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶,并形成钙结节;体内异位植入组织工程骨块可形成软骨及骨组织;组织工程骨块及单纯SDBM在术后6周完全修复骨缺损（6/6）;极限压缩强度测量显示,组织工程骨块植入组新生骨与正常桡骨段差异无显著性（P=0.623）,单纯SDBM植入组新生骨在生物力学方面低于正常桡骨段（P=0.038）。结论：脱钙骨基质在骨组织工程中是一种有效的生物活性支架材料。     

异种脱蛋白松质骨载体的制备及性能评价

目的研究探讨异种脱蛋白松质骨性能,以制备综合性能优异的骨组织工程载体材料。方法我们将取材于成年猪股骨远端松质骨通过理化方法制作成脱蛋白松质骨载体,并对载体形态结构、组成成分、载体与种子细胞黏附及生长增殖情况以及生物力学特性进行检测分析。同时将载体材料复合自体骨髓间充质干细胞和骨形态生长因子植入成年山羊横突间进行组织工程化成骨融合,观察成骨情况,并通过免疫酶组织染色方法检测异种脱蛋白松质骨的免疫原性。结果脱蛋白松质骨具有天然网状孔隙结构,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为Ⅰ型胶原,力学性能保存良好,有良好的细胞相容性,免疫原性检测阴性。异种脱蛋白松质骨复合rhBMP-2和MSCs植入体内后多点成骨,效果满意。结论异种脱蛋白松质骨是一种良好的载体材料。     

组织工程支架材料研究进展

细胞支架材料作为组织工程组织再生的框架,其特性直接影响细胞的粘附、生长和代谢功能,因此它是组织工程的关键要素之一。目前应用于组织工程的支架材料可分三大类：人工合成高分子可降解聚合物,天然材料提取物和细胞外基质,结合近年来的相关文献,对组织工程支架材料研究进展进行总结。     

柱形藻酸钙载体制备及复合兔膝关节软骨细胞的初步观察

目的 构建用于软组织工程研究的新型细胞载体。方法 通过向一定浓度的藻酸钠中加入二价阳离子并置入特殊模具中，经冷脱水等处理。获得圆柱形藻酸钙载体。并复合软骨细胞观察。结果 制备的藻酸钙载体具有网眼状结构。孔隙为60-160um，嵴上并可见10-20um的小洞。复合细胞组可见网眼中有数目不等的软骨细胞。结论柱形藻酸钙载体初步具备作为软骨细胞载体的条件。可用于软骨组织工程的研究。     

纳米结构组织工程支架材料

组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的粘附与生长有很重要的影响,表层具有纳米结构的支架材料可以改善细胞对材料的粘附性和生物相容性。本文主要介绍了纳米生物材料对组织工程发展的影响及纳米生物材料的一些制备方法,如自组装技术和模板技术。     

组织工程神经中雪旺细胞的形态

目的:观察组织工程神经中雪旺细胞的形态.方法:体外培养雪旺细胞,用倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察雪旺细胞在PGLA膜上的生长情况和雪旺细胞在BAM凝胶中的形态,用BrdU标记雪旺细胞,观察雪旺细胞-PGLA复合体植入SD大鼠3wk后,雪旺细胞的存活情况.结果:倒置显微镜下,PGLA膜上的雪旺细胞形态与常规培养特点相同,BAM凝胶中雪旺细胞逐渐恢复双极状形态,形成类Büngner带结构,然后可见细胞从凝胶中迁出;扫描电镜下,雪旺细胞细长的双极状形态特点明显,许多细胞聚合类似于Büngner带;透射电镜下,雪旺细胞底部形成一些特殊的钉状突与PLGA膜内接触;免疫组化染色显示组织工程神经中雪旺细胞大量存活.结论:本实验的组织工程神经中雪旺细胞形态正常,生长良好.     

壳多糖组织工程支架材料的制备及其应用

目的:探索一种简单的制备壳多糖细胞外基质网架的方法,考察该基质网架作为组织工程支架材料应用的可行性。方法:壳多糖溶于乙酸,搅拌成均匀泡沫状,冷冻铸型制成海绵状多孔基质网架。利用光镜、电镜等方法测定该网架的孔径和空孔率。分别应用该网架构建复层组织工程皮肤和组织工程软骨。 结果：制备的壳多糖网架外观呈多孔海绵状,光镜下观察有大小不等的孔隙;扫描电镜下观察,网架错综相连成许多网孔,孔径为83～136 μm,平均孔径为110 μm,平均三维空孔率为78%。构建的复层组织工程皮肤具有与天然皮肤极为相似的表皮和真皮双层结构,皮肤角朊细胞和成纤维细胞贴附于网架生长、增殖,形成连续的细胞层,细胞层数增多明显,并分泌角质样物质和基质样物质,网架逐渐降解。软骨细胞在网架上贴附、增殖良好,并分泌细胞外基质;组织学观察有新生软骨组织形成。结论：制备的壳多糖细胞外基质网架具有一定的孔径和空孔率,适于细胞贴附生长和增殖,将其作为组织工程支架材料具有较好的应用前景。