β2肾上腺素受体遗传多态性与夜间哮喘的相关性研究

人类β2肾上腺素受体(β2AR)基因位于染色体5q31.目前已检测出该基因编码区存在着9个突变位点(遗传多态性),其中4 个可导致氨基酸序列的改变,从而使编码的第46、79、100、491位氨基酸分别发生Arg16→Gly、Gln27→Glu、Val34→Met、Thr164→Ile的改变[1].夜间哮喘是哮喘的一种特殊类型,其夜间症状及气道阻塞加重,对其发生机制尚不清楚.但已了解到夜间哮喘其夜间β2AR下调,而非夜间哮喘者患者和正常人无此下调[2].而在定位诱变和重组表达研究中已发现,β2AR16位点上的Arg突变为Gly具有增强激动剂所促发的受体下调作用[3].于是人们推测:Gly16与夜间哮喘的β2AR下调可能有关.为了探讨这一问题,本研究利用聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸杂交法(PCR-ASO),从分子水平对夜间哮喘和非夜间哮喘的β2AR16和27位的遗传多态性进行分析,并探讨这一多态性与夜间哮喘的关系.     

中国人群凝血因子V基因多态性与冠心病关系的研究

迄今已在某些疾病中发现ＦＶ基因存在一些突变和多态性[1,2 ] 。其中 ,Ｌｅｉｄｅｎ突变 [1 6 91Ｇ→Ａ(Ａｒｇ5 0 6Ｇｌｎ) ]恰巧位于活性蛋白Ｃ (ＡＰＣ)降解凝血因子Ｖ (ＦＶ)的特殊位点Ａｒｇ5 0 6 ,其结果导致ＦＶ灭活障碍 ,造成高凝遗传基础[3 ] 。研究发现家族性高凝患者中约 40 %～ 6 0 %有Ｌｅｉｄｅｎ突变[4 ] 。另有报道称白种女性心肌梗死发病 (388例 )与Ｌｅｉｄｅｎ突变相关[5] 。但这种遗传缺陷在亚洲人种中很少见[6] 。本研究在1 38例冠心病和 1 73例正常对照中 ,运用ＰＣＲ ＤＧＧＥ技术对ＦＶ基因全部 2 5个外显子进行筛…     

肥胖患者解偶联蛋白-1和β_3-肾上腺素能受体基因变异的研究

目的：探讨解偶联蛋白－１（ＵＣＰ－１）和β３－肾上腺素能受体（β３－ＡＲ）基因在肥胖人群中的变异及其对肥胖患者基础代谢率（ＢＭＲ）和体重指数（ＢＭＩ）的影响。方法：应用聚合酶链反应产物限制性酶切片段长度多态性检测法测定ＵＣＰ－１基因Ａ→Ｇ（－３８２６）变异和β３－ＡＲＴｒｐ６４Ａｒｇ突变并作基因分型,分析突变等位基因与ＢＭＲ和ＢＭＩ的相关性。结果：本研究肥胖人群ＵＣＰ－１野生型等位基因（Ａ）和突变型等位基因（Ｇ）的频率分别为０．７１７０和０．２８９９。β３－ＡＲ野生型等位基因（Ｔｒｐ６４）和突变型等位基因（Ａｒｇ６４）的频率分别为０．８４４２和０．１５５８。ＵＣＰ－１和β３－ＡＲ基因均有变异的肥胖患者与该两基因均无变异的肥胖患者相比,ＢＭＲ降低和ＢＭＩ增高分别显示极显著意义（Ｐ＜０．０１）和显著意义（Ｐ＜０．０５）。结论：ＵＣＰ－１基因Ａ→Ｇ（－３８２６）变异和β３－ＡＲＴｒｐ６４Ａｒｇ突变与肥胖患者ＢＭＲ降低和体重增加相关,两基因的变异对ＢＭＲ和ＢＭＩ的影响存在加合作用。     

β2肾上腺素受体基因多态性与支气管哮喘的关系

β2 肾上腺素受体 (β2 ＡＲ)在体内各种组织中均有不同程度的表达 ,但主要分布于肺。已发现 β2 ＡＲ存在于支气管上皮、细支气管平滑肌、黏膜下腺、肺动脉内皮、肺动脉平滑肌和肺泡壁中 ,也出现在肺的免疫细胞 ,包括肥大细胞、巨噬细胞、嗜酸性细胞、中性粒细胞和淋巴细胞。β2 ＡＲ与刺激性Ｇ蛋白 (ＧＳ)藕联 ,使腺苷酸环化酶 (ＡＣ)激活 ,细胞内环磷酸腺苷 (ｃＡＭＰ)增加 ,导致气道平滑肌松弛[1] 。β2 ＡＲ功能低下可能是支气管哮喘的重要发病机制之一 ,而控制其表达的基因的多态性已成为支气管哮喘遗传学研究的热点。通过此研究 ,可…     

脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的:研究人脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法:应用RT-PCR及SSCP检测22例脑胶质瘤、4例脑膜瘤、3例垂体瘤及1例肺部转移性鳞癌标本中polβ的表达,利用DNASIS、OMIGA软件及Chou&Fasman算法对扩增产物进行序列分析及蛋白质二、三级结构分析。结果:脑胶质瘤组织中DNApolβ突变率为6/22,共8个突变位点,2例发生504位A→G(131位Lys→Glu)、748位A→G(212位His→Arg)突变,2者蛋白质二级结构亦明显改变;598位T→C(162位Val→Ala)突变2例,但2者蛋白质二级结构无明显改变;2例Ⅲ级星形细胞瘤分别有2个和3个突变位点,但其各有1个相应的氨基酸未发生变异。Ⅱ级以下脑胶质瘤及脑膜瘤、垂体瘤等良性脑肿瘤组织均未发现DNApolβ基因突变。1例肺癌脑部转移性鳞状细胞癌DNApolβ基因出现5个突变位点,737位A→C(208位Pro未变异)、744位T→G(211位Lue→Val)、830位C→G(239位Cys→Trp)、866位A→C(251位Pro未变异)、870位A→C(253位Arg未变异),但蛋白质二级结构未改变。蛋白质三维结构图显示脑胶质瘤组织中6个氨基酸变异位点中,5个位于掌部,1个位于拇指部。结论:脑胶质瘤细胞中存在DNApolβ基因突变,且这些突变位点均为DNApolβ基因(尤其是掌部)活化结构域。提示脑胶质瘤的发生和发展可能与DNApolβ基因突变有关。     

肝癌细胞HepG2株线粒体亮氨酸拉链EF-hand结构域基因突变实验研究

[目的]检测肝癌细胞HepG2株线粒体亮氨酸拉链EF-hand结构域(LETM1)基因突变.[方法]提取HepG2株细胞中的mRNA并合成cDNA,采用PCR方法扩增LETM1基因,连接到真核表达载体pCMV-3Myc-2A上,构建重组质粒pCMV-3Myc-LETM1,酶切,测定序列并检测突变位点.[结果]肝癌细胞LETM1基因发生突变和氨基酸改变,突变发生于G148A(缬氨酸→异亮氨酸)、G320A(甘氨酸→天冬酰胺)、G344A(精氨酸→组氨酸)和A1760G(赖氨酸→精氨酸).[结论]肝癌细胞HepG2线粒体LETM1基因发生突变.     

胰腺癌组织中K—ras基因点突变的研究

应用Ｔａｑ酶直接测序技术对９例胰腺癌标本及１例恶性胰岛细胞瘤标本进行了Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的检测。结果显示：９例胰腺癌中含Ｋ－ｒａｓ基因突变者５例。表现出２突变类型，即ＣＣＡ→ＣＧＡ型４例；ＣＣＡ→ＣＡＡ型１例。相应氨基酸改变分别为：甘氨酸→丙氨酸；甘氨酸→缬氨酸。分析了在突变率及突变内容上与国外学者不同的原因，探讨了检测Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的意义。     

糖尿病及并发足坏疽与β3—AR基因Arg^64突变

目的：探讨β３肾上腺素能受体（β３ＡＲ）基因６４位点的色氨酸（Ｔｒｐ）密码子被精氨酸（Ａｒｇ）置换与胰岛素抵抗及代谢综合征的关系。方法：利用ＰＣＲ扩增包含６４位密码子的该基因片段，内切酶ＢｓｔＮＩ消化电泳确定６４位点基因型。结果：１５２名中国ＮＩＤＤＭ患者的Ａｒｇ等位基因频率为０１７，高于芬兰人，低于Ｐｉｍａ印第安人，与日本人ＮＩＤＤＭ人群基因频率相近。４５例携带Ａｒｇ等位基因和１０７例Ｔｒｐ纯合子的ＮＩＤＤＭ患者中分别有６例和２例发生糖尿病足坏疽，前者糖尿病足坏疽危险性８倍于后者（Ｐ＜００１）。β３ＡＲ基因６４位密码子Ｔｒｐ被Ａｒｇ置换的患者糖尿病发病年龄有年轻化的趋势，Ａｒｇ纯合子、杂合子及Ｔｒｐ纯合子的糖尿病发病年龄分别是４４３岁、４６５岁和４９６岁。结论：ＮＩＤＤＭ发病年龄与β３ＡＲ基因的Ａｒｇ６４替代有关，并在世界上首次提出β３ＡＲＡｒｇ６４等位基因可能是糖尿病足坏疽的风险基因     

胰腺癌组织中K－ras基因点突变的研究

应用Ｔａｑ酶直接测序技术对９例胰腺癌标本及１例恶性胰岛细胞瘤标本进行了Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的检测。结果显示：９例胰腺癌中含Ｋ－ｒａｓ基因突变者５例。表现出２种突变类型，即ＣＣＡ→ＣＧＡ型４例；ＣＣＡ→ＣＡＡ型１例。相应氨基酸改变分别为：甘氨酸→丙氨酸；甘氨酸→缬氨酸。分析了在突变率及突变内容，上与国外学者不同的原因，探讨了检测Ｋ－ｒａｓ基因１２位点突变的意义。     

结核分支杆菌耐利福平基因rpoB变异机理及其检测的研究

目的 研究耐利福平株结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因变异及其ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测方法。方法 ＰＣＲ法扩增ｒｐｏＢ基因,纯化克隆,大量质粒制备,经ＡＢＩ３７７系统直接测序。结果 １７例多耐药结核菌,１４侏检测出ｒｐｏＢ基因变异。４９６（Ａｒｇ）,５０７（Ｇｌｙ→Ａｓｐ）,５７９（Ａｌａ→Ｇｌｙ）和５８３（Ｐｒｏ→Ｌｅｕ）密码子变异未风报道。全部为点突变,主要是错义突变。在５１１－５３３密码子区域变异只占６６     

IgE高亲和力受体β链基因的多态性与中国人哮喘易感性的研究

目的 探讨ＩｇＥ高亲和力体β链基因（ＦｃεＲＩ－β）的多态性与中国人哮喘易感性的连锁关系。方法 用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ检测ＦｃεＲＩ－β基因编码区Ｅ２３７Ｇ变异位点及非编码区的２个多态性位点，对３２个哮喘家系共１９２份样品以及１２２例哮喘患儿进行分析。结果 （１）中国人在这３个位点的等位基因频率与白种人及日本人明显不同。（２）哮喘家系样本显示，第２内含子区多态位点的Ａ等位片段与哮喘有显著相关性（Ｐ〈０     

β_3肾上腺素能受体基因突变的研究进展

β3 肾上腺素能受体 (β3 ａｄｒｅｎｒｇｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒ,β3 ＡＲ)基因位于人第 8号染色体上 ,由两个外显子 ,一个内含子组成。β3 ＡＲ是一种与Ｇ蛋白偶联的膜表面受体 ,主要分布于脂肪组织 ,特别是棕色脂肪 ,介导脂肪分解及热生成 ,对于维持能量利用和储存起重要作用[1] 。β3 ＡＲ基因发生突变 ,使热生成作用减弱而可能影响体重及与肥胖有关的胰岛素抵抗及脂代谢异常。1　β3 ＡＲ基因突变的分子结构及生化代谢特征1995年 ,Ｗａｌｓｔｏｎ[2 ] 在中年Ｐｉｍａ印第安人 (肥胖和 2型糖尿病患病率非常高的人群 )中 ,进行了 β3 ＡＲ…     

β3 肾上腺能受体基因多态性分析及其初步应用

目的：建立β３－肾上腺能受体基因多态性检测方法。了解其表型行征。方法：应用ＰＣＲ－限缺性片段长度多态性ＰＣＲ－双脱氧链终止法测序技术分析β３－肾上腺能受体（β３－ＡＲ）基因型,结果：４８例北方汉族糖尿病人和３２例正常对照者中均存在β３－ＡＲ基因１９０位Ｔ→Ｃ的单碱基变异,两组人群中基因型的构成比例无显著差异。结论：Ａｒｇ６４Ａｒｇ纯合子可能具有糖尿病早发的特点。但β３－ＡＲ基因不是造成肥胖、脂质紊     

利用PCR—SSCP及克隆分析对HERG基因突变的新发现

为研究ＱＴ延长综合征（ＬＱＴＳ）致病的分子遗传学基础。我们在ＰＣＲ基础上建立ＳＳＣＰ方法对ＬＱＴ患者和正常对照者ＨＥＲＧ基因的突变进行研究。并且利用克隆技术对突变进行确证。通过ＳＳＣＰ分析,在１例正常对照者中发现异常条带,该突变无法用直接测序确证,因此我们将其转入质粒,克隆后再进行测序。结果提示在ＨＥＲＧ基因７５２位点（５′→３′）异常插入９个碱基。突变型为杂合子。突变导致蛋白通道氨基酸序列中插入ＧｌｙＡｌａＧｌｙ。与其他已报道的突变不同,本文所发现的３个氨基酸的插入突变不是ＬＱＴＳ发生的遗传基础。     

20例中国Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区突变分析

目的检测Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区序列,进一步明确STK11基因可能存在新的突变位点。方法收集空军总医院2009年1月~2010年10月期间收治的20例Peutz-Jeghers综合征患者的血液样本,采用PCR扩增技术及DNA测序方法检测STK11基因编码区序列,与STK11基因的正常序列比对分析。结果 20例Peutz-Jeghers综合征患者中有14例患者检测到STK11基因的编码区发生突变,1例患者携带2个突变位点,13例患者携带单一突变位点。测序发现1例患者在3号外显子第460位发现一错义突变(460C→G),在第154密码子处形成另一种新的氨基酸,为一新的突变位点。2个家系中4例患者在同一位点发生突变;同一家系患者的突变位点一致。其余6例患者STK11基因编码区未见突变位点。结论 STK11基因突变是Peutz-Jeghers综合征发生的主要病因,3号外显子第460位错义突变,即460C→G,是导致Peutz-Jeghers综合征发生新的突变位点。     

关于alKA基因启动子不同点突变对诱导酶活性的比较研究

ａｌＫＡ基因启动子上游区的不同位点突变诱导β－半乳糖苷酶活性不同。上游区及－３５盒子的Ａ→Ｃ或Ｔ→Ｇ也使酶活性低于野生型，但当－１０Ｔ→Ｇ时酶活性明显高于野生型。     

人乳头瘤病毒18型晚期基因L1的克隆及测序

人乳头瘤病毒是宫颈癌的主要致病因素，其中ＨＰＶ１８致病进程晚具侵袭性，其晚期基因Ｌ１现被有竽疫苗学研究。本实验从ＨＰＶ１８－ＰＢＲ３２２质粒中克隆ＨＰＶ１８Ｌ１片段，构建了ＨＰＶ１８Ｌ１－ＰＧＥＭ重组质粒。对Ｌ１片段峡谷端测序时发现，原始报道序列在５７０１和６８４２位置的碱基为Ｃ，而实际测序结果均为Ｇ，推断其相应三联密码子编码的氨基酸变化分别为Ｐｒｏ→Ａｒｇ，Ｐｒｏ→Ｐｒｏ。     

肺癌细胞p53基因第282位密码子点突变后蛋白三级结构改变的预测

利用最新的蛋白质三级结构预测分析平台-Phyre系列软件,运用生物信息学分析软件对p53基因的第282位密码子点突变后的三级结构进行预测。结果表明16HBE肺癌细胞株p53基因第282位密码子出现一个G→T的点突变,其编码氨基酸由精氨酸（CGG）→亮氨酸（CTG）。由于氨基酸的极性改变,可能破坏了p53蛋白与DNA结合面β-发夹结构上的接触,导致p53的H2螺旋与DNA大槽结合的不稳定。     

肝细胞癌患者中p53基因的突变研究

为了解肝细胞癌（ＨＣＣ）中ｐ５３基因的突变情况，收集８６例ＨＣＣ手术切除标本，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ／ＳＳＣＰ）、聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）和ＤＮＡ序列分析，研究了ｐ５３基因的突变情况。８６例ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变率为３６％，其中，密码子２４９的突变率为３３．７％，１例ＳＳＣＰ和ＲＦＬＰ均提示密码子２４９存在突变者经ＤＮＡ序列分析显示密码子２４９的第三个碱基发生了ＡＧＧ／ＡｒｇＡＧＴ／Ｓｅｒ突变。以上结果提示，ＨＣＣ中，ｐ５３基因的突变主要以点突变为主，主要发生在密码子２４９，其突变率、突变谱和突变方式与启东等ＨＣＣ高度流行区相似     

用PCR体外定点突变技术诱导霍乱毒素A亚基突变体的构建

目的： 有效去除霍乱毒素Ａ 亚基（ ＣＴ Ａ） 的毒性作用而保存其佐剂性能。方法： 采用ＰＣＲ 体外定点突变技术（ＰＣＲ ＳＤＭ） ,设计两对引物,引入一个突变位点,通过重叠延伸法两次ＰＣＲ 扩增,使ＣＴ Ａ 编码基因第６３ 位密码子由ＣＴＣ 突变为ＴＴＴ,亦将扩增片断克隆入ＰＵＣ１９ 载体。结果： ＤＮＡ 测序结果表明在预期位点已发生突变,用ＰＣＲ 诱导成功ＣＴ Ａ 突变体。结论： ＰＣＲ 诱导突变准确、简便,为深入研究ＣＴ 免疫佐剂的作用打下了基础