Hepassocin:一种作用特异的促肝细胞增殖因子

肝细胞增殖的调控机制复杂,众多的细胞因子参与其中,然而,大多数的细胞因子都不具备作用的特异性,它们除了对肝细胞发挥活性作用外,还具有调控其它组织细胞的活性。Hepassocin是一种分子量为34ku的多肽,在肝切除或肝损伤后表达升高,以同源二聚体的形式在肝再生过程中发挥重要功能。与HGF、EGF等其它肝增殖相关因子不同的是:Hepassocin是一种特异性的促肝细胞增殖因子。Hepassocin的特异性主要表现在以下3方面:特异性表达于肝脏实质细胞;特异性的作用于正常肝细胞;只对肝细胞有促增殖活性,对其它组织细胞无促增殖活性,同时具有一定的种属特异性。     

枯否细胞分泌的细胞因子在肝纤维化中的作用

枯否细胞可分泌多种细胞因子，如转化生长因子，肿瘤坏死因子，白介素，血小板源生长因子等。这些细胞因子对肝脏细胞外基质的合成与降解起着调控作用，在肝纤维化的发生发展过程中起着重要作用。     

生物免疫刺激剂对肝癌大鼠枯否细胞和单核细胞抑人肝癌细胞增殖作…

以ＤＥＮ制成实验性肝癌大鼠，同时连续１２周分别给予肝癌大鼠干扰素α－２ｂ（ＩＦＮ）、卡介苗（ＢＣＧ）或两者联用，对照组给予生理盐水。结果显示：１．肝癌大鼠的ＫＣ对肝癌细胞增仍具有一定的自然抑制作用。ＫＣ的作用明显强于ＭＣ；２．上述免疫刺激剂的在体应用或体外对ＫＣ的直接作用，均以ＩＦＮ和ＢＣＧ联用增强ＫＣ的抑肝癌细胞作用最强，最强者可增强５倍以上；３．单用免疫刺激剂者。     

大鼠肝枯否细胞分离培养与免疫活性的研究

应用胶原酶与链霉蛋白酶消化和分解破坏大鼠肝细胞的方法,获得非肝细胞;再经贴壁培养,成功地获得大量高纯度的枯否细胞。枯否细胞获得率为8.3×10~6个/每克肝组织,胞质内均含有在体吞噬的墨汁颗粒。培养成活的枯否细胞呈典型巨噬细胞形态,电镜观察下表而有发达的伪足和微绒毛等结构,胞质内含大量溶酶体。以绵羊红细胞(SRBC)检测枯否细胞免疫活性,90%以上的细胞在特异抗体介导下形成SRBC花环,并能活跃吞噬SRBC。电镜观察了枯否细胞花环和吞噬功能。本实验国内首次分离培养成功大鼠肝枯否细胞,并证明具有良好的免疫活性,这对进一步研究枯否细胞的功能,尤其是它对肿瘤的免疫监视作用有实际意义。     

有机锗（Ge—132）对损伤大鼠肝枯否细胞免疫活性及酶活性的影响

材料与方法一、取日龄1～5天的Wistar 系大鼠乳鼠肝枯否细胞原代单层培养4～8天,选生长良好的细胞瓶分为正常组、损伤组(加入5mol/L 含CC(?)4的20%FCS RPMl1640培养液3ml)、实验组(同上加CC(?)4再加Ge-132 0.1mg/ml)和阳性对照组(CC(?)4加     

脂多糖在肝肺综合症发生中的作用

目的：探讨肠源性内毒素血症在肝肺综合征发生中的作用。 方法： 用复合因素复制大鼠肝硬化模型。腹腔内一次性注射小剂量内毒素以加重肝硬化动物的内毒素血症。另设正常动物注射内毒素组和甘氨酸拮抗内毒素组加以对照。 结果： 实验第8周末的肝硬化大鼠发生了肝肺综合征。小剂量内毒素一次性腹腔内注射后肝硬化动物肺脏的病理变化加剧；甘氨酸在在体和离体实验中均可明显拮抗内毒素的生物学效应，减轻肝肺综合征的各种病理变化。 结论： 肝硬化动物所伴之肠源性内毒素血症很可能在肝肺综合征发病机制中起重要作用；内毒素直接和其诱导产生的TNF-α等细胞因子在肝肺综合征发病机制中起作用。     

人参总皂甙对培养鼠肝枯否细胞免疫活性的影响

分离Ｗｉｓｔａｒ乳鼠肝枯否细胞并作体外培养，取细胞生长良好的培养瓶分为正常组，损伤组，实验组及阳性对照组。正常组为接种后３天定时更换培养液者，损伤组为更换５ｍｏｌ／Ｌ浓度ｃｃＩ４培养基后继续培养６０ｍｉｎ者；实验组为损伤同时加入０．５％人参总皂甙２滴者；阳性对照组为损伤同时加入ＰＨＡ１００μｇ／ｍｌ者。将各组培养瓶继续培养６０ｍｉｈ后取出细胞生长盖玻片，检测各组枯否细胞免疫活性。结果，正常组与损伤     

SMAC类似物Birinapant对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨SMAC类似物Birinapant预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(I/RI)的保护作用及分子机制。方法:将大鼠分为空白对照组(Blank)、对照组(Control)和Birinapant预处理组(Birinapant)。Blank组不做任何处理,Control组腹腔注射30 mg/kg体重的生理盐水,1 h后构建大鼠肝脏I/RI模型,Birinapant组腹腔注射30 mg/kg体重的Birinapant,1 h后构建大鼠肝脏I/RI模型。各组在模型建立4 h后取下肝脏组织,HE染色检测各组肝脏大体形态及炎症反应;收集大鼠外周血,ELISA检测血清中TNF-α、IL-6及IL-1β炎症因子水平;提取肝脏库普弗细胞(KCs),免疫荧光检测KCs中cIAP1和TRAF3的表达;Western blot检测cIAP1和TRAF3与MAPK信号通路密切相关的JNK、p-JNK、p38及p-p38的蛋白表达。结果:与Control组相比,Birinapant预处理可以显著抑制肝脏I/RI诱导的肝组织损伤和炎症反应;Birinapant预处理也可显著降低血清中TNF-α、IL-6及IL-...     

重组肝刺激因子对肝脏卵圆细胞增殖的作用

目的观察重组人肝刺激因子(hHSS)对肝脏卵圆细胞增殖的影响。方法分离大鼠肝卵圆细胞,加以培养,并进行细胞学鉴定。将重组的hHSS作用于肝脏卵圆细胞,以MTT法、流式细胞术观察其对卵圆细胞的增殖作用。结果实验分离的卵圆细胞同时表达肝细胞和胆管细胞特异性标志物。给予重组hHSS作用12～24h后,细胞增殖速度减缓,细胞DNA合成减弱,其作用的最有效浓度为240mg/L。结论重组hHSS能抑制卵圆细胞的增殖。     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肝纤维化发病中的作用。方法:采用TNF-α对体外培养的HSC进行干预, 通过流式细胞术、电镜及TUNEL等方法, 对HSC的增殖与凋亡进行研究。结果:①流式细胞术显示:TNF-α各组的G₀/G₁期细胞比率明显高于对照组, 而S期细胞比率明显低于对照组, 各组的细胞增殖指数均明显低于对照组;在凋亡方面, TNF-α各组的HSC凋亡率明显高于对照组, TNF-α各组HSC中抗凋亡基因bcl-2的表达明显低于对照组, 而促凋亡基因bax的表达明显高于对照组。②TUNEL分析显示:TNF-α(2.0μg/L)组的HSC凋亡率为18.7%±2.5%, 而对照组为5.3%±1.2%, 两者之间有显著差异。结论:TNF-α能够阻止HSC从G₀/G₁期进入S期, 从而具有抑制HSC增殖的作用;TNF-α能够降低HSC中bcl-2的表达、提高bax的表达, 这可能与其促进HSC凋亡有关。     

肝再生增强因子的研究进展

肝再生增强因子的研究进展@黄志刚$邯郸医学高等专科学校医学检验系!河北邯郸056002 @刘殿武$河北医科大学公共卫生学院!河北石家庄050017肝再生增强因子;;基因克隆;;肝再生~~     

肝再生增强因子的免疫组化定位及其在肝炎病患者血清水平观察

目的：探讨肝再生增强因子（ALR）的组织分布，观察肝炎病患者血清ALR的水平。方法：取鼠、人胎儿系列新鲜组织固定后，石蜡包埋切片，以SABC试剂盒进行免疫组化染色定位；用ELISA法检测肝炎病患者血清ALR水平。结果：免疫组化染色结果显示，ALR在组织细胞中呈胞浆、胞膜型分布，尤以睾丸、肝脏染色最深；慢性肝炎患者血清ALR水平升高非常显著（P<0.01），急性肝炎患者血清ALR水平升高显著（P<0.05），急、慢性肝炎患者ALR无显著差异。结论：ALR主要分布于肝脏和睾丸组织，既无种族特异性，也无器官特异性；肝脏是ALR作用的靶器官，其本身也可产生ALR。     

人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究

目的:建立一种灵敏、简便、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法，并分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法:通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组：①ALR组；②ALR-FAD组；③ALR突变体-FAD组；④无蛋白对照组。以还原型谷胱甘肽(GSH)为底物，于不同时点测定每组巯基浓度。结果:ALR-FAD组巯基浓度随时间的推移不断下降；其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论:建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的方法；并证明ALRp必须在FAD辅助下发挥酶活性，且ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。     

重组大鼠肝再生增强因子抑制庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的机制研究

目的： 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR）在体外对庆大霉素（GM）诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E细胞）凋亡的影响及其作用机制。方法: 将NRK-52E细胞分为正常对照组、庆大霉素处理组（GM 1.6 g/L）和rrALR干预组（分别加入GM 和不同浓度的rrALR）,培养细胞24 h、48 h。吖啶橙/溴乙啶（AO/EB）染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及Annexin V/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡状态。Western blotting和RT-PCR检测各组细胞不同时点Bcl-2和Bax蛋白、mRNA的表达。结果: (1)rrALR对庆大霉素诱导的NRK-52E细胞凋亡具有抑制作用（P＜0．05）。 (2)rrALR能够呈剂量依赖方式增加细胞Bcl-2蛋白及核酸的表达（P＜0．05）、降低细胞Bax蛋白及核酸的表达(P＜0．05),使Bcl-2/Bax比值升高（P＜0．05）。结论: rrALR可以通过调节Bcl-2家族Bax和Bcl-2蛋白及核酸的表达水平,抑制庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡,减轻肾毒性药物对小管上皮细胞的损伤。     

人肝再生增强因子在体外可与Na+-K+-ATPase 特异性结合

目的： 用体外下拉实验证明人肝再生增强因子（hALR）与其相互作用蛋白Na+-K+-ATPase的体外结合作用。方法：将Na+-K+-ATPase β亚基部分基因片段定向克隆到pGEX-4T-1 中, 转化大肠杆菌DH5α，IPTG 诱导, 获得Na+-K+-ATPase β亚基部分蛋白与谷胱甘肽（GST）的融合表达，经GST偶联的琼脂糖珠纯化, 以GST下拉实验检测其与hALR蛋白的体外直接相互作用。结果：还原型SDS-PAGE 显示GST- Na+-K+-ATPase 融合蛋白泳道有hALR蛋白单体和二聚体条带，Western blotting 结果进一步证实为hALR蛋白。结论：Na+-K+-ATPase可在体外与hALR蛋白特异地结合。     

人肝再生增强因子单克隆抗体的制备:以非纯化的大肠杆菌表达抗原筛选杂交瘤

目的 :利用杂交瘤技术、以非纯化的大肠杆菌表达重组蛋白作为筛选抗原 ,制备小鼠抗人肝再生增强因子(hALR)的单克隆抗体。方法 :用实验室纯化的重组hALR 硫氧环蛋白融合蛋白免疫BALB c小鼠 ;小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合后经HAT选择培养基筛选杂交瘤 ;以重组质粒pQE30 hALR与空质粒pQE30在大肠杆菌中诱导表达后的细菌裂解产物作为筛选抗原和对照抗原 ,用ELISA方法筛选能分泌抗hALR单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞克隆 ;进一步以ELISA方法和免疫印迹方法检测该杂交瘤细胞产生的抗体对真核细胞表达的重组hALR及人体血清中天然hALR的反应性。结果 :成功筛选出一株能稳定分泌抗hALR单克隆抗体的杂交瘤细胞 ;其产生的抗体能对真核细胞表达的重组hALR及人体血清中天然的hALR发生特异的抗原抗体反应。结论 :大肠杆菌表达的重组蛋白在以空质粒表达产物作为对照下 ,不经过任何纯化步骤也能够用于单克隆抗体制备中的杂交瘤筛选 ;hALR单克隆抗体为深入研究hALR提供了研究手段。     

应用酵母双杂交系统发现hALR与Na,K-ATPase间的相互作用

目的:采用酵母双杂交系统寻找与人肝再生增强因子(hALR)相互作用的蛋白质, 探讨ALR的作用机理。方法: 构建hALR诱饵质粒pGBKT7-hALR, 醋酸锂法转化AH109酵母菌, 转化菌在SD/-Trp-His培养基上培养及滤纸法β一半乳糖苷酶活性检测排除自身激活作用后, 与人肝cDNA文库质粒预转化的酵母菌Y187进行接合试验, 接合产物在QDO培养基上筛选, 阳性克隆进一步在含X-α-Gal的QDO平板上鉴定, X-α-Gal活性呈阳性的克隆, 进行PCR及酶切鉴定排除完全相同克隆, 进一步进行回交试验排除假阳性, 对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果:得到数个阳性克隆, 序列分析结果表明其中1个阳性克隆是Na⁺, K⁺-ATPaseβ亚基部分基因, 长669bp, 3'端非编码区224bp, 编码区长445bp, 编码Na⁺, K⁺-ATPaseβ亚基C端的147个氨基酸残基。结论:应用酵母双杂交系统筛选出Na⁺, K⁺-ATPase与hALR具有相互作用。     

Expression of augmenter of liver regeneration (ALR) in human liver cirrhosis and carcinoma

AIMS: To determine the expression of a protein termed augmenter of liver regeneration (ALR), recently found to have a specific and beneficial effect on the process of liver regeneration in normal and diseased human liver. METHODS AND RESULTS: ALR expression in normal and cirrhotic human livers with various underlying diseases as well as in tissue samples of hepatocellular carcinoma (HCC) and cholangiocellular carcinoma (CCC) was analysed by immunohistochemistry and quantitative reverse transciptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Expression analysis of ALR in total liver protein extracts by Western blotting showed mainly dimeric ALR protein. Immunohistochemically, cytosolic and perinuclear immunosignals were found in hepatocytes and cholangiocytes in normal, cirrhotic or cancerous liver tissue and only weak signals in some endothelial cells in normal livers. Quantitative mRNA analysis revealed significantly increased ALR expression in cirrhosis compared with normal liver tissue. In HCC and CCC ALR mRNA expression was also significantly enhanced compared with normal liver tissue, but expression levels did not differ from the matching non-neoplastic tissue in the same patient. CONCLUSIONS: The findings suggest an important role for ALR in hepatocellular regeneration in liver cirrhosis as well as in hepatocarcinogenesis and therefore its potential value in the clinical diagnosis of hepatic cirrhosis and cancer.     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

Effect of Kupffer cell blockade at different times after partial hepatectomy on hepatocyte regeneration

The system of mononuclear phagocytes of the liver was blocked in male Wistar rats weighing 140–160 g by iron carbonyl (brand R-100 F) with a particle size of 1–1.5 . The blockade was carried out 2 h before partial hepatectomy and also 3 and 18 h after the operation. Injection of the iron compound before the operation and in the early prereplicative period of regeneration led to substantial delay of the peak of the index of labeled nuclei and mitotic index of the hepatocytes accompanied by a general reduction in proliferative power of the hepatocytes. Blockade of the system of mononuclear phagocytes in the period of intensive DNA synthesis by hepatocytes of the regenerating liver was less effective. The facts are evidence of the important role of the Kupffer cells in regulation of reparative regeneration of the liver.Laboratory of Pathophysiology, Department of General Pathology, Institute of Clinical and Experimental Medicine, Siberian Branch, Academy of Medical Sciences of the USSR, Novosibirk. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR V. P. Kaznacheev.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 84, No. 11, pp. 616–618, November, 1977.