活血益气方药物血清对转染VEGF165脐静脉内皮细胞分泌NO、eNOS的影响

目的探讨活血益气方及其拆方含药动物血清对pcDNA3.1-VEGF165质粒转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌一氧化氮（NO）、内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的影响。方法通过构建pcDNA3.1-VEGF165重组质粒,并瞬时转染至HUVEC,制备血管内皮生长因子（VEGF）信号通路激活细胞模型。同时,制备活血益气方及其拆方含药动物血清,作用于转染后的HUVEC,采用Western blot法检测VEGF蛋白的表达,Griess反应法测定细胞上清NO的表达,ELISA法测定细胞上清eNOS的表达。结果活血益气方不仅可以促进转染后HUVEC表达VEGF蛋白,还可以促进其分泌NO及eNOS。活血方和益气方单用均可以促进转染后HUVEC细胞分泌NO,但对eNOS的分泌未见明显影响。结论活血益气方对VEGF信号通路具有促进作用。活血方药和益气方药在这方面均起主要作用,全方作用优于拆方各组。活血益气方治疗性血管生成作用机制可能与其促进内皮细胞分泌NO,从而促进内皮细胞迁移,提高血管通透性有关。其具体作用机制还有待进一步研究。     

姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型MMP-9表达的抑制作用

目的探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的抑制作用。方法进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定。加入相同浓度TNF-α诱导半个小时后加入不同浓度的姜黄素处理细胞24h。采用免疫细胞化学染色和ELISA的方法测定细胞MMP-9的表达。结果经TNF-α诱导过的人脐静脉内皮细胞加入不同浓度的姜黄素（6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml）作用24h后均能明显抑制细胞MMP-9的表达,并且随着浓度的升高这种抑制作用明显增强。结论姜黄素能明显降低TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达。     

血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞VEGF与PDGF分泌的影响

目的探讨血府逐瘀汤对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌血管内皮生长因子（VEGF）、血小板源性生长因子（PDGF）的影响及其与促进HUVEC增殖的关系。方法采用血府逐瘀汤合药血清体外干预HUVEC培养,通过MTT法和酶联免疫吸附分析（ELISA）法观察血府逐瘀汤对HUVEC的体外增殖和分泌VEGF、PDGF的影响作用。结果MTT检测结果显示血府逐瘀汤含药血清浓度为10％时对HUVEC具有显著增殖作用;ELISA检测结果显示血府逐瘀汤具有促进HUVEC分泌VEGF的作用,而对PDGF的分泌无明显的作用。结论血府逐瘀汤在一定剂量范围内能促进HUVEC增殖和促进HUVEC分泌VEGF,而对PDGF的分泌无明显促进作用;提示血府逐瘀汤可能通过促进HUVEC分泌VEGF而促进细胞增殖,从而起到祛瘀生新的作用。     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P0.05,P0.01)及基因mRNA表达(P0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P0.01,P0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P0.05,P0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P0.05,P0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响北大核心CSCD

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P>0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)及基因mRNA表达(P<0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P<0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P<0.01,P<0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P<0.05,P<0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P<0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

温阳活血解毒复方对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究温阳活血解毒复方(WHJF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及细胞管形成功能的影响,从细胞层面探讨该治疗动脉粥样硬化机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、温阳活血解毒复方低、中、高剂量组(剂量分别为10.35,31.05,93.15 g·kg~(-1)),于第4天首次灌胃2 h后采血制备含药血清,采用CCK8法、Transwell迁移实验、b FGF诱导细胞管形成实验分别观察含药血清对HUVECs增殖、迁移及细胞管形成功能的影响。结果温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖有抑制作用,与空白对照组比较,低、中、高剂量组的含药血清对HUVECs的抑制率均明显升高(P0.05),且两两比较差异有统计学意义(P0.05),呈浓度依赖型。在迁移方面,温阳活血解毒复方组迁移细胞数减少,与空白对照组比较,高剂量组差异有统计学意义(P0.05)。在细胞管形成方面,与模型组比较,温阳活血解毒复方组细胞管数明显减少,差异均有统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,低、高剂量组差异有统计学意义(P0.05)。结论温阳活血解毒复方含药血清可抑制HUVECs的增殖、迁移及细胞管形成,起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用;此外,其可能与b FGF产生协同作用,共同促进新生血管成熟,发挥稳定斑块的作用。     

含溶栓颗粒血清对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞VEGF的影响

目的探讨溶栓颗粒对受损血管内皮细胞保护的可能机制。方法用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）造模,用含大、申、小剂量溶栓颗粒的大鼠血清干预受损HUVEC,应用HE染色,观察细胞形态变化,免疫组化法观察血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果应用TNF-α 40ng／mL可以造成HUVEC损伤,表现细胞数量下降,皱缩、变形,分裂相细胞明显增加,VEGF表达明显增多。含大、中剂量溶栓颗粒的大鼠血清能减少VEGF表达,减少细胞有丝分裂。结论溶栓颗粒可以保护因炎性介质增加而受损的血管内皮细胞,这种保护作用可能与减少VEGF表达有关。     

氟伐他汀对抗磷脂综合征患者血清诱导的人血管内皮细胞MMP-9的影响

目的探讨氟伐他汀对抗磷脂综合征（APS）患者血清诱导的人血管内皮细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响及可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,分别用培养基、健康人血清、APS患者血清、APS患者血清加不同浓度氟伐他汀及APS患者血清加不同浓度氟伐他汀加甲羟戊酸处理。双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养液中MMP-9浓度,RT-PCR检测MMP-9mRNA表达水平,Western-blot印迹法检测核因子-κBp65（NF-κBp65）蛋白表达水平。结果与对照组相比,APS患者血清可诱导MMP-9及NF-κBp65表达增加（P〈0.05）,而氟伐他汀对上述效应有剂量依赖性抑制作用（P〈0.05）,这种作用可以被甲羟戊酸阻断。结论氟伐他汀可能通过抑制NF-κB途径来抑制APS患者血清诱导的人血管内皮细胞MMP-9表达增加。     

宁夏枸杞总黄酮对H2O2损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的: 研究宁夏枸杞总黄酮对过氧化氢(H₂O₂)损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的保护作用及可能的机制. 方法: 采用H₂O₂诱导HUVEC氧化应激损伤模型.实验分为正常组、1 mmol·L^-1H₂O₂损伤模型组、枸杞总黄酮保护(100,200,400 mg·L^-1) 预孵育24 h组,以及阳性对照(维生素C 20 mg·L^-1)组,预孵育24 h.采用噻唑蓝(MTT)法检测枸杞总黄酮对1 mmol·L^-1 H₂O₂损伤 4 h细胞活性,测定细胞上清液中丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮(NO). 结果: 与正常组比较,H₂O₂损伤模型组MDA含量、LDH活性均增高,NO生成量、SOD活性明显下降,其差异均具有显著性(P<0.01).枸杞黄酮保护组MDA含量、LDH活性均下降,NO生成量、SOD活性较H₂O₂损伤模型组明显增高(P<0.01),MDA含量、LDH活性的下降程度,NO生成量、SOD活性的增高程度,与枸杞总黄酮呈剂量依赖性. 结论: 宁夏枸杞总黄酮对H₂O₂所致人血管内皮损伤有保护作用,其机制可能与宁夏枸杞总黄酮抑制损伤细胞的脂质过氧化,以及有效提高机体抗氧化酶的活性、清除自由基,促进一氧化氮(NO)的合成有关.     

四妙勇安汤对缺氧人脐静脉内皮细胞的影响

目的观察四妙勇安汤对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的影响。方法实验分为3组,即正常组、模型组、四妙勇安汤组,后2组建立体外细胞缺氧模型,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察四妙勇安汤对缺氧内皮细胞存活率的影响,测定四妙勇安汤对缺氧内皮细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响,并用免疫荧光法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成量的表达。结果四妙勇安汤能显著增加MTT实验中各孔吸光度值,降低LDH漏出量,增加VEGF的生成量。结论四妙勇安汤具有保护缺氧的HUVEC损伤的作用,其作用机制与增加细胞活性、降低缺氧造成的细胞毒性、增加VEGF的表达、促进血管新生的作用有关。     

千金苇茎汤促进撤血清舌鳞癌细胞凋亡机制的研究

目的: 探讨千金苇茎汤辅助治疗舌鳞癌的分子机制。方法: 体外培养SAS和TCA-8113舌鳞癌细胞,撤除血清模拟体内抗血管生成药物治疗环境,千金苇茎汤3个部位作用撤血清舌鳞癌细胞72 h,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,ELISA检测细胞培养上清前列腺素E₂(PGE₂)含量。结果: 与撤血清对照相比,千金苇茎汤07部位能够降低撤血清舌鳞癌细胞的增殖活性(生长抑制率_max34.36%),促进SAS和TCA-8113细胞凋亡率升高(P<0.05),抑制细胞分泌PGE₂(P<0.05),且具有剂量和时间依赖性。结论: 千金苇茎汤07部位促进撤血清舌鳞癌细胞凋亡的机制与抑制PGE₂合成相关,为深入研究千金苇茎汤辅助治疗恶性肿瘤提供了新的思路和方法。