20(S)-原人参二醇药学与生物活性研究

20(S)-原人参二醇是人参皂苷元中非常重要的一类,在治疗疾病及保健方面,一直是研究热点。在抗肿瘤方面,20(S)-PPD可以通过增强机体免疫和直接的细胞毒作用来杀死肿瘤细胞,还可以抑制肿瘤间质血管生成,阻止肿瘤细胞的生长;在神经系统方面,20(S)-PPD可以抗癫痫、抗抑郁、增强学习能力等。20(S)-PPD是一个具有开发价值的化合物。     

HPLC测定20(S)-原人参二醇脂质体的含量及包封率

摘要:目的:建立测定20(S)-原人参二醇脂质体的含量及包封率的方法。方法:采用高效液相色谱法测定20(S)-原人参二醇的浓度,色谱柱:Zorbax 80A Extend C18柱(4.6 mm × 250 mm, 5 μm);流动相:乙腈-水（85∶5）;流速:1.0 mL?min-1;检测波长:203 nm。采用微柱离心法分离20(S)-原人参二醇脂质体和游离药物。结果:20(S)-原人参二醇与其他组分分离良好,线性范围10.00～160.00 μg?mL-1 (r＝1.000 0),回收率为99.0％～l00.8％,日内精密度≤0.83%及日间精密度≤1.05%。微柱离心法能完全分离20(S)-原人参二醇脂质体和游离药物。结论:方法准确、简便,可用于20(S)-原人参二醇脂质体含量及包封率的测定。      

20(S)-原人参二醇氨基酸衍生物的合成

目的 对20(S)-原人参二醇进行结构修饰,合成其氨基酸衍生物,从而提高药物的水溶性。方法 以二环己基碳化二亚胺为催化剂、吡啶为溶剂进行反应,合成20(S)-原人参二醇的氨基酸衍生物。结果 得到20(S)-原人参二醇的氨基酸衍生物14个,其结构通过1H-NMR、13C-NMR图谱进行确证,同时总结了20(S)-原人参二醇的氨基酸衍生物的合成规律。结论 本方法合成工艺简单易行,操作简便,适合工业化生产,所得产物的水溶性较合成前有所提高,有利于提高生物利用度。     

20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人参二醇对抗肝癌药物的增敏作用研究

目的:探讨 20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷-20(S)-原人参二醇(人参皂苷 IH901) 与医学上常用抗肝癌药物环磷酰胺 (CTX)、5-氟尿嘧啶 (5-FU)、顺铂 (cDDP) 单独用药及联合用药 体外抗肝癌细胞 Bel-7402、SMMC-7721 的活性。方法 应用 MTT 法检测人参皂苷 IH901、CTX、5-FU、cDDP 分别在不同质量浓度下单独及联合用药对肝癌细胞的增殖抑制率,并根据金氏公式计算其协同指数(Q值),进而评价两药联用的增敏效果。结果 IH901 与 CTX 联合用药后对 Bel-7402、SMMC-7721 抑制作用明显增强,且二者合用具有协同作用;而 IH901 与 5-FU 联合用药后对2种细胞仅相加效果;IH901 与 cDDP 联合用药,对 Bel-7402 仍然是相加的效果,对 SMMC-7721 则是具有轻微的协同效果。结论 人参皂苷 IH901 可增强 CTX 对肝癌细胞增殖的抑制作用,具有化疗协同效果,且具有一定的广谱性,可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

20（S）-原人参三醇及其ocotillol型差向异构体代谢物的排泄

目的：考察20（S）-原人参三醇（PPT）及其ocotillol型差向异构体代谢物（简称为M1、M2）在尿液、粪便中的排泄情况和两代谢物在胆汁中的排泄情况。方法采用LC-MS/MS法分别测定大鼠尿液、粪便样品和其经葡萄糖醛酸酶水解后PPT、M1和M2的浓度,以及大鼠胆汁样品和其经葡萄糖醛酸酶水解后M1和M2的浓度。结果灌胃给予PPT后72 h,PPT、M1和M2的粪便累积排泄量分别为给药剂量的14.88%、1.34%和0.084%,经酶水解后,其累积排泄量分别为14.77%、1.36%和0.085%,它们基本不经尿排泄;灌胃给予M1或M2后72 h粪便累积排泄量分别为给药剂量的4.41%、47.20%,基本不经尿排泄。灌胃给予M1或M2后36 h胆汁累积排泄量分别为给药剂量的3.01%和0.068%,静注给药M1、M2后36 h,其胆汁累积排泄量分别为给药剂量的8.80%、1.24%。结论灌胃给予PPT后,PPT及其代谢物M1、M2少量经粪便排泄,基本不经尿排泄;M1和M2在大鼠的胆汁排泄具有立体选择性差异。     

20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的:研究20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝染色、噻唑蓝(MTT)法、Hochest33258染色和DNA Ladder方法分别测定20(S)-原人参二醇对DU145和PC3细胞凋亡诱导作用。结果:20(S)-原人参二醇可明显降低DU145和PC3细胞存活率和细胞活性,IC50分别为38.0μmol/L和28.6μmol/L。20(S)-原人参二醇处理后DU145和PC3细胞核出现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNA Ladder条带。结论:20(S)-原人参二醇可有效诱导人前列腺癌DU145和PC3细胞的凋亡并有剂量依赖关系。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

20(s)-原人参二醇诱导体外培养Siha细胞凋亡的作用

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对体外培养人宫颈癌Siha细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法：体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)、阳性对照组(40 μg/L顺铂)及PPD 10、20和40 μmol/L组。分别用乙醇、顺铂和PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,采用Annexin V-EGFP/PI双染色法、TUNUL染色法检测细胞凋亡情况,分别采用RT-PCR、Western blotting方法检测bax基因的转录及蛋白表达情况。结果：不同剂量的PPD处理后,Siha细胞变圆回缩并出现碎片,Annexin V-EGFP/PI染色呈现不同程度的绿染和红染,TUNUL染色可见绿色荧光,bax基因的转录与蛋白表达升高。结论：PPD可诱导人宫颈癌Siha细胞出现凋亡,其作用与bax基因表达上调有关。     

20(s)-原人参二醇对前列腺癌RM-1细胞的生长抑制作用及其机制

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对前列腺癌RM-1细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法：建立前列腺癌RM-1细胞动物模型,将36只C57小鼠随机分为3组：模型组（橄榄油等体积灌胃每天1次、生理盐水等体积腹腔注射每周1次）,紫杉醇（Taxol）组（20 mg/kg,腹腔注射每周1次）,PPD组（20 mg/kg,灌胃每天1次）,连续给药4周。每隔3 d测量肿瘤体积1次,给药第4周末处死动物。观察指标：动物一般状态、肿瘤体积、瘤重、抑瘤率、死亡率,采用RT-PCR和Western blotting法检测肿瘤组织Cyclin D1蛋白表达水平。结果：PPD组小鼠一般状态明显好于模型组,表现为活泼好动、毛色光亮;而模型组小鼠步履蹒跚、行动迟缓、精神萎靡;肿瘤组织出现破溃、糜烂、出血。给药13 d时,PPD组小鼠肿瘤体积明显减小（P<0.05）;21 d时PPD组肿瘤体积明显小于Taxol组(P<0.05）。与模型组比较,PPD组小鼠瘤质量明显降低（P<0.05）,死亡率为零;与Taxol组比较,PPD组小鼠抑瘤率增高（P<0.05）,死亡率降低（P<0.05）。各给药组小鼠肿瘤组织Cyclin D1基因转录、蛋白表达水平均明显低于模型组（P<0.05）,与Taxol组比较,PPD组Cyclin D1基因转录明显减弱（P<0.05）,而蛋白表达水平差异无显著性（P>0.05）。结论：PPD有明显抑制前列腺癌RM-1细胞生长的作用,其作用机制可能与下调Cyclin D1蛋白表达有关。     

RP-HPLC法测定西洋参茎叶皂苷酸、碱降解物中20（S）-原人参二醇的含量

目的：利用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定西洋参茎叶皂苷酸、碱降解物中20（S）-原人参二醇含量。方法：RP-HPLC法具体条件为：ZORBAX extend C18柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）, 流动相为甲醇-水90∶10,流速1.2 mL·min^-1,检测波长203 nm, 柱温25℃。采用以上方法分别测定西洋参茎叶皂苷盐酸、醋酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇含量。结果：20（S）-原人参二醇对照品溶液的进样量在0.2~23 μg 范围内有良好的线性关系,回归系数r为0.999 9 (n=7);测定西洋参茎叶皂苷的盐酸、醋酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇含量的准确度,以平均加样回收率表示分别为98.4%、96.7% 和100.2％,RSD分别为1.24%、1.08% 和0.91％;测定西洋参茎叶皂苷的盐酸、醋酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇含量的精密度,以重现性实验考察,其RSD分别为0.65%、0.79% 和0.27％;经测定,醋酸、盐酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇的含量分别为0.93%、0.88%和25.40%。结论：RP-HPLC法测定西洋参茎叶皂苷降解物中20（S）-原人参二醇的含量,方法简便快捷,精密度高、准确度高,可为20（S）-原人参二醇的制备及质量控制提供可靠的检测方法;利用碱降解方法制备20（S）-原人参二醇的效率高于酸降解方法。     

20(S)-原人参二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其机制

目的：探讨20(S)-原人参二醇(PPD)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用,并阐明其成骨诱导机制。方法：采用全骨髓法提取SD大鼠BMSCs,分为对照组和不同剂量(2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mg·L^-1) PPD组,采用CCK-8法检测各组BMSCs增殖活性,采用Calcein/PI染色法观察各组BMSCs存活情况,筛选合适浓度PPD用于后续实验。将BMSCs分为对照组和PPD组,于成骨诱导第7天,采用BCIP/NBT比色法进行碱性磷酸酶(ALP)染色并定量检测各组BMSCs中ALP活性;成骨诱导第21天,采用茜素红染色检测各组BMSCs中矿化结节形成情况并定量分析细胞矿化活性;成骨诱导第7天,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组BMSCs中ALP、1型胶原蛋白(COL^-1)、骨钙素(OCN)和Runt相关转录因子2 (Runx-2) mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测各组BMSCs中Runx-2和OCN蛋白表达荧光强度。结果：PPD处理第1和3天,与对照组比较,40.0 mg·L     

(25S)-26-OH-人参二醇的合成及抗宫颈癌活性研究

日的 合成人参皂苷元(25S)-26-OH-人参二醇,并评价其抗宫颈癌活性.方法 以(20S)-原人参二醇为原料,经乙酰化、加成、消除等反应步骤制备中间体25-烯-PPD,再经过手性结构修饰制备出(25S)-26-OH-人参二醇.CCK8法评价其对HeLa细胞增殖的影响.结果 产物经过MS、1H NMR、13C NMR...     

20(s)-原人参二醇对体外培养的人前列腺癌PC3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：观察20 (s)-原人参二醇 (PPD) 对体外培养的人前列腺癌（PCa）PC3 细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法：将体外培养的PC3 细胞分为对照组及 20、30和40 μmol?L-1PPD组。采用PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖抑制情况,采用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western blotting方法检测 Bcl-2、Bax和γH2Ax蛋白的表达情况。结果：不同剂量PPD处理后,PC3细胞变圆回缩并出现碎片,AO/EB染色呈现不同程度的黄绿色;不同剂量PPD作用后,各组细胞增殖抑制率均显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量PPD作用PC3细胞48 h后,Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达变化不明显,γH2Ax蛋白表达上调(P<0.05)。结论：PPD可诱导PC3细胞凋亡,其作用机制可能与 Bcl-2、Bax信号通路以及DNA断裂基因γH2Ax蛋白表达上调有关。     

20(s)-原人参二醇对体外培养宫颈癌Siha细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对体外培养宫颈癌Siha细胞生长周期的作用及其对p53、p21及细胞周期素E(cyclin-E)基因转录和表达的影响,探讨PPD抑制Siha细胞增殖的机制。方法：体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组（乙醇）和实验组（20  μg•L^-1 PPD）,分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48 h后流式细胞术检测细胞周期,Real time PCR和Western blotting法检测宫颈癌Siha细胞内p53、p21及cyclin-E　mRNA及蛋白的表达情况。结果：与阴性对照组比较,20  μg•L^-1 PPD处理48 h后,G0/G1　期Siha细胞比例增加（P<0.01）,G1期阻滞作用明显增强;Siha细胞中p53与p1 mRNA及蛋白表达水平上调（P<0.01）,cyclin-E  mRNA及蛋白表达水平下调（P<0.01）。结论：PPD可抑制人宫颈癌Siha细胞增殖,其机制可能与上调p53、p21基因表达,下调cyclin-E基因表达有关。
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20（S）-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用

目的：研究20（S）-原人参二醇（PPD）对人胚肾293细胞（HEK-293细胞）生长抑制作用。方法：采用台盼蓝染色和噻唑蓝（MTT）法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果：PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度（IC50）为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论：PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。     

20(s)-原人参二醇对体外培养Siha细胞caspase-3表达激活的影响

目的：观察20(s)-原人参二醇（PPD）对体外培养人宫颈癌Siha细胞中caspase-9和caspase-3转录表达的影响,以及caspase-3的活化形式cleaved caspase-3含量的变化,阐明其诱导Siha细胞凋亡的机制。方法：体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组（乙醇）和实验组（20　 μgL^-1 PPD）,分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48　h后流式细胞仪检测细胞的凋亡峰,半定量RT-PCR、Western blotting和免疫细胞化学染色方法检测PPD处理后Siha细胞中caspase-9和caspase-3基因的转录与表达水平。结果：与阴性对照组比较,20　 μg?L-1 PPD处理48 h后,Siha细胞凋亡率增加(P<0.05),Siha细胞中caspase-9与caspase-3转录水平升高(P<0.01),表达上调(P<0.01),caspase-3的活化形式cleaved caspase-3含量增加(P<0.01)。细胞免疫化学检测可见实验组细胞出现棕色颗粒。 结论：PPD可促进人宫颈癌Siha细胞凋亡,其机制与激活caspase家族级联反应有关。     

20(S)-原人参二醇对体外培养siha细胞自噬的影响

目的：观察20(S)-原人参二醇（PPD）对人子宫颈癌siha细胞生长的抑制作用及其对自噬基因Beclin 1及MAP1-LC3转录和表达的影响,探讨PPD抑制siha细胞增殖的机制。方法：体外培养人宫颈癌siha细胞分为阴性对照组（乙醇）、阳性对照组（40 μmol·L^-1顺铂）及PPD 10、20和40 μg·L^-1组,分别用乙醇、顺铂和PPD处理细胞24、48、72和96h后,MTT法检测siha细胞增殖抑制率,RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学染色法观察各组siha细胞自噬相关基因Beclin 1及MAP1-LC3的转录及蛋白表达情况。结果：与对照组比较,PPD 10、20和40 μg·L^-1组细胞增殖抑制率明显增加（P<0.05）,且随时间延长和剂量的增加而逐渐提高,自噬相关基因Beclin 1及MAP1-LC3的转录水平及蛋白表达水平明显上调（P<0.01）。结论：PPD可抑制体外培养siha细胞增殖,诱导siha细胞发生自噬。其机制可能与上调自噬相关基因Beclin 1及MAP1-LC3表达有关。     

提高碱水解法制备原人参二醇得率的初步研究

目的：提高碱水解法制备原人参二醇的得率。方法：以人参二醇组皂苷为原料,用碱水解法制备原人参二醇,水解产物经硅胶柱层析分离;比较溶剂种类、水解压力和水解时间对原人参二醇得率的影响,从而确定碱水解制备原人参二醇的最佳条件。结果：以异戊醇、正丁醇、正丙醇或丙三醇为溶剂时原人参：二醇的得率分别为2．23％、0．93％、0、0;以异戊醇为溶剂,碱水解8h、16h、24h或32h时原人参二醇得率分别为2．01％、2．63％、3．54％、2．81％;正丁醇常压、正丁醇加压（0．1～0．15MPa）、异戊醇常压、异戊醇加压（0．1～0．15MPa）时原人参二醇得率分别为1．10％、0．47％、2．20％、0．77％。结论：碱水解制备原人参二醇的最佳条件是以异戊醇为溶剂,常压,加热回流24h。     

盐酸川芎嗪水凝胶透皮贴剂的初步研究

目的:对含盐酸川芎嗪的水凝胶透皮贴剂进行初步研究,确定其基质处方、成型工艺条件以及透皮吸收率,为该类制剂进一步研究、开发、应用奠定基础。方法:采用均匀实验,利用高效液相色谱法,测定不同时间段盐酸川芎嗪的透皮量,以盐酸川芎嗪的累积透皮吸收量为指标,优选水凝胶透皮贴剂的基质配比。结果:用均匀设计优选出的,盐酸川芎嗪水凝胶透皮贴剂的最佳基质配比结果可靠,药物单位面积累计渗透量平均值为(2.4440±0.0513)mg/cm2,透皮吸收率较高。结论:水凝胶透皮贴剂具有临床应用价值,值得深入研究开发。     

大鼠肌内注射20(S)-人参皂苷Rg3的药动学研究

目的 研究20(S)-人参皂苷Rg3经肌内注射后在大鼠体内的药动学情况,包括血药动力学研究,组织分布情况,在尿和胆汁中的排泄情况等方面的内容.方法 本实验采用蒸发光散射检测法测定药物在血液和组织中的浓度,用3P97药动学程序进行数据处理,方法快捷、简便,结果的精密度、稳定性和回收率均好.结果 20(S)-人参皂苷Rg3肌内注射后(1.5 mg&#183;kg-1),其药动学模型为一室模型,t1/2(ke)为0.75 h,t(peak)为0.116 h,pmax为13.9 mg&#183;L-1,AUC为16.6 mg&#183;h&#183;L-1;肌注后在心、肝、脾、肺、肾中可以检测到有20(S)-人参皂苷Rg3存在,而在脑、胃、肠、体脂、肌肉和生殖腺中均未检测到;药物主要经尿液排泄,给药8 h内,20(S)-人参皂苷Rg3经尿液排出药物总量的72.1%,经胆汁排泄的药物占药物总量的10.1%;药物与蛋白的结合率为15%～17%,且不随浓度的变化而改变.结论 20(S)-人参皂苷Rg3肌内注射后可以很快被吸收进入血液,迅速达到血药浓度的峰值,它在体内的代谢速度较快,且大部分药物经尿液由肾脏排出体外,在体内基本无蓄积.