维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡及细胞内钙变化

目的:探讨钙通道拮抗剂—维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(humanretinalpigmentepithelium,hRPE)细胞凋亡诱导作用及凋亡过程中细胞内钙浓度[Ca2 ]i的变化。方法:应用80mg/L的Ver作用体外培养hRPE细胞12,24及48h,采用吖叮橙(AO)荧光染色法、透射电镜、流式细胞术观察hRPE细胞凋亡;Fluo-3/AM负载技术,观察凋亡过程中细胞[Ca2 ]i的变化。结果:一定浓度Ver可诱导hRPE细胞凋亡,荧光显微镜及电镜观察hRPE细胞具有早期凋亡特征:核荧光呈黄绿色,电镜下核染色质浓染、边集。流式细胞术显示,Ver作用后的hRPE细胞凋亡百分率增加(F=12.3415,P<0.05)。Ver作用的hRPE细胞内钙浓度([Ca2 ]i)呈下降趋势(F=23.607,P<0.01)。结论Ver能诱导体外培养的hRPE细胞凋亡,细胞内[Ca2 ]i浓度的变化可能是诱导hRPE凋亡的机制之一。     

Bcl-2及bFGF在维拉帕米诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡中的表达

目的探讨维拉帕米(verapamil,Ver)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的凋亡作用,观察凋亡过程中原癌基因蛋白质(Bcl2)和碱性成纤维细胞生长因子(baic fibroblast growth factor,bFGF)的表达变化。方法应用80mg·L-1Ver作用于体外培养的人RPE细胞12h、24h、48h,吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色及透射电镜观察RPE细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测Bcl2mRNA和bFGFmRNA表达变化。结果经Ver作用的体外培养的人RPE细胞具有典型的凋亡形态学特征:核染色质浓染、边集;细胞体积缩小。同时RPE细胞Bcl2mRNA表达下降;而bFGFmRNA表达随着作用时间延长,呈增高趋势。结论Ver可诱导体外培养人RPE细胞凋亡,凋亡过程中Bcl2表达逐渐下降,而bFGF表达增强。     

水蛭渗滤液对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞周期的影响

目的 研究水蛭渗滤液对凝血酶诱导的人视网膜色素上皮细胞周期的影响,从而探讨中药水蛭用于防治PVR的作用机制.方法 (1)采用消化培养法,对人视网膜色素上皮细胞进行体外传代培养. (2)在前期实验基础上选择128mg/ml、64mg/ml、32mg/ml、16mg/ml、8mg/ml浓度的水蛭渗滤液,用流式细胞仪测定细胞周期,观察水蛭渗滤液单独或与0.5NIHU/ml凝血酶共同作用于人视网膜色素上皮细胞24h对细胞周期的影响. (3)选择64mg/ml水蛭渗滤液,观察单独或与0.5NIHU/ml凝血酶共同作用于人视网膜色素上皮细胞6、12、24和48h对细胞周期的影响.结果 (1)水蛭渗滤液在所选择浓度范围内具有使人视网膜色素上皮细胞抑制在G0/G1期的趋势,其中最显著的是64mg/ml水蛭渗滤液可以将77.9%的人视网膜色素上皮细胞抑制在G0/G1期,使进入S期的细胞数减少.细胞增殖活性降低. (2)在观察的时限内,64mg/ml水蛭渗滤液随作用时间的延长,能使更多的人视网膜色素上皮细胞抑制在G0/G1期,增殖活性降低.结论 证实了水蛭渗滤液能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖.其机制可能是作用于细胞周期,使更多的视网膜色素上皮细胞抑制在G0/G1期,进人S期的细胞数减少,细胞增殖活性降低.     

神经生长因子对N-甲基-D-门冬氨酸诱导人胚胎RPE细胞凋亡的保护作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)对体外培养的人胚胎视网膜色素上皮(hFRPE)细胞凋亡的保护作用。方法 将传代培养的hFRPE细胞,用200μmol/L,300μmol/L N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)建立诱导的hFRPE细胞凋亡模型,并用吖啶橙(AO)荧光染色计数和透射电镜(TEM)观察NGF对凋亡细胞的保护作用。 结果 用AO荧光染色及TEM均观察到经200 μmol/L,300μmol/L NMDA处理72 h后的hFRPE细胞出现典型的凋亡形态学改变。200μmol/L.NMDA作用72 h后hFRPE细胞凋亡指数为(32.587 9±1.488 0)％和200 μmol/L NMDA+300 μmg/L NGF作用72 h后的hFRPE细胞凋亡指数(20.768 7±1.302 4)％相比,差异有显著性(q=2.941 4,P=0.005 0);300 μmol/L NMDA作用72 h后hFRPE细胞凋亡指数为(42.506 4±3.014 8)％,与300 μmol/L NMDA+300 μg/L NGF作用72 h后的hFRPE细胞凋亡指数(25.687 2±1.8974)％相比,差异有非常显著性的意义(q=4.117 8,P=0.000 0)。 结论 NCF能拈抗NMDA诱导的hFRPE细胞凋亡。     

盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的观察盐酸甲氯芬酯对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响。方法通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察盐酸甲氯芬酯对人视网膜色素上皮细胞增生的影响。结果不同浓度盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,在10~1000mg·L-1的范围内呈剂量效应关系,并随时间的延长,促进效应增强。嗜银蛋白染色结果:10mg·L-1盐酸甲氯芬酯作用24h后其胞核内AgNORs的数量增加,平均数为2.0(P=0.029);100mg·L-1盐酸甲氯芬酯作用12h即有胞核内AgNORs的增多,平均数为2.0(P=0.029)。随剂量的增加和时间的延长,胞核内AgNORs的数量增加。结论盐酸甲氯芬酯可以促进人视网膜色素上皮细胞增生,并与剂量和作用时间有一定的关系。     

ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路在高糖诱导视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含Pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体在高糖诱导人视网膜色素上皮细胞ARPE-19增生及凋亡中的作用及机制。方法:将体外培养的ARPE-19细胞分为正常对照组和高糖组,分别用常规培养液和含终浓度30 mmol/L葡萄糖培养液培养48 h,采用荧光探针检测各组细胞活性氧簇...     

中药复明眼液对过氧化氢诱导体外培养的兔晶状体上皮细胞凋亡的c-fos蛋白表达的影响

目的：观察中药复明眼液对H2O2诱导体外培养的兔晶体上皮细胞凋亡的 c-fos蛋白表达的影响，进一步探讨中药抗氧化作用的机制。方法：采用终浓度250μmol/LH2O2诱导体外培养的兔晶体上皮细胞凋亡，免疫组化方法检测凋亡的兔晶体上皮细胞的c-fos蛋白的表达。结果：正常对照组兔晶体上皮细胞未见胞核阳性染色；模型对照组在H2O2处理后2h胞核阴性染色，处理后4h和8h均见部分细胞胞核呈棕褐色阳性染色。处理后12h和24h可见大量细胞胞核呈棕褐色阳性染色；中药治疗组在H2O2处理后2h，4，h8h胞均呈性染色，处理后12h和24h仅见少量细胞胞核呈棕褐色阳性染色；阴性对照组兔晶体上皮细胞胞未见阳性染色。结论：终浓度250μmol/LH2O2可以诱导体外培养的兔晶体上皮细胞凋亡的c-fos蛋白表达，中药复明眼液可能是通过保护兔晶体上皮细胞的抗氧化作用而减少或延缓凋亡的兔晶体上皮细胞的c-fos蛋白表达。     

姜黄素抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的研究

目的观察姜黄素对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0～160μmol/L姜黄素作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度姜黄素对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在20～160μmol/L浓度作用24～72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在20～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。     

姜黄素抑制人血管内皮细胞增殖的研究

目的观察姜黄素对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0~160μmol/L姜黄素作用体外培养的HUVEC,24~96h后观察不同浓度姜黄素对HUVEC的影响。MTT法及免疫组织化学染色增殖细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在40~160μmol/L浓度作用24~72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HUVEC增殖(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在40~160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制HUVEC增殖,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。提示姜黄素通过抑制新生血管治疗翼状胬肉具有潜在的应用前景。     

高糖对人晶状体上皮细胞凋亡的作用

目的:研究不同浓度的高糖(HG)对人晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法:用不同浓度的HG诱导人晶状体上皮细胞凋亡,处理组:DMEM+HG;对照组:DMEM。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测人晶状体上皮细胞的生长活性;原位末端核苷标记(TUNEL)法检测细胞凋亡的凋亡指数(AI),并在电镜下观察TUNEL染色阳性细胞的形态及分布。结果:HG可抑制人晶状体上皮细胞生长,诱导细胞的凋亡,并呈剂量及时间依赖性,HG诱导组细胞凋亡率明显高于正常组(P<0.01)。TUNEL染色法在电镜下观察到HG诱导24h后,TUNEL染色阳性细胞核固缩或碎裂呈棕黄色,细胞大小不一;而TUNEL染色阴性细胞着色均匀,大小均一。结论:高糖具有促使人晶状体上皮细胞凋亡形成的作用,尤其是在120~150mmol/L浓度范围内。     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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