慢性HBV C基因启动子变异的检测

目的 了解慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子变异的情况以及对病毒血清学的影响。方法 应用错配聚合酶链反应特异性扩增含有ＨＢＶ Ｃ基因启动子的片段,扩增产物用限制性内切酶Ｂｃｌ Ｉ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切后的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）图谱,分析Ｃ基因启动子区段的核苷酸（ｎｔ）１７６２由碱基Ａ→Ｔ和（ｎｔ）１７６４碱基由Ｇ→Ａ的变异,并经直接测序分析证实ＲＦＬＰ结果。结果 １１０例慢     

土拨鼠肝炎病毒野毒及前C人工变异株的体外表达

１８９６和１８９８的Ｇ→Ａ变异是乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ变异的热点，１８９６变异导致ＨＢｅＡｇ翻译中断。这种变异被认为改变了ＨＢＶ的生物学特性，因而与慢性肝炎和重症肝炎相关。我们以人工变异的方法分别使野毒株土拨鼠肝炎病毒ＷＨＶ－８相当于ＨＢＶ１８９６及１８９６和１８９８位点产生Ｇ→Ａ变异，并构建了首尾相连的双体质粒。分别用这些质粒转染ＨｅｐＧ２细胞，结果其ＤＮＡ复制水平和转录水平未见明显差异。说明这种前Ｃ热点变异不影响ＷＨＶ复制。     

乙型肝炎病毒C基因调节序列变异分析

ＨＢＶＣ基因上游约 2 0 0ｂｐ序列(ｎｔ 16 0 0～ｎｔ 185 0 )是重要ＨＢＶ基因调控区。Ｔ 176 2Ａ 176 4(ｎｔ 176 4Ａ→Ｔ ,ｎｔ 176 4Ｇ→Ａ ,)变异在慢性ＨＢＶ感染者是变异的热点。为了解我国ＨＢＶ流行株Ｃ基因调节序列及变异情况 ,分别对 7例慢性无症状ＨＢＶ携带者和 7例亚急性重症乙型肝炎患者ＨＢＶＣＰ区序列进行了分析。1　研究对象　 7例慢性无症状ＨＢＶ携带者 (ＡｓＣ) (3例来自广东地区 ,4例自东北地区 )、7例亚急性重症乙型肝炎患者 (ＦＨ) (为我科 1993～ 1996年间收治的住院患者 )。酶联免疫法检测ＨＢＶ血清标志物。2…     

重型乙型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因启动子变异的研究

目的　了解重型乙型肝炎（ 乙肝） 病人血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡＣ基因启动子（ＣＰ） 的变异。方法　对用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 法扩增的血清ＨＢＶＤＮＡ 直接测序。结果　７ 例亚急性重型肝炎病人的ＨＢＶ 分离株ＣＰ区分别有２～１２ 个替代变异，１ 例病人有１１ｂｐ 的碱基插入。ＣＰ变异主要发生于ＣＰ的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，ｎｔ１ ７６２ 和ｎｔ１ ７６４ 的替代变异见于７ 例亚急性重型肝炎病人的４ 例中，是ＣＰ变异的热点，其中３ 例ＨＢｅＡｇ 阴性，说明和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关。ＣＰ的第３ 个ＡＴ丰富区、ＨＢＶ逆转录起始位点（ＤＲ１） 和前Ｃ基因、前基因组转录起始位点未见变异。结论　重型肝炎病人的ＨＢＶＣＰ区存在较多的变异，ＣＰ变异主要发生于和前Ｃ基因相关的第１ 和第２ 个ＡＴ丰富区，可能和ＨＢｅＡｇ 阴性表型相关     

乙型肝炎病毒前C区1 896位点突变的PCR分析法

近年研究表明,乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者体内,可能存在ＨＢＶ前Ｃ区突变。我们根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列,建立了３′碱基特异性聚合酶链反应（３′ＢＳＰＣＲ）法,检测ＨＢＶ前Ｃ区第１８９６位核苷酸的突变,并检测了７２例ＨＢＶ感染者、１４例甲型肝炎患者的血清ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位的突变。病例选择为１９９６年１１月～１９９７年８月期间,在安徽医科大学附属医院传染科就诊的门诊和住院病人。７２例ＨＢＶ感染者中,抗ＨＢｅ阳性７２例,其中慢性乙型肝炎４７例、慢重肝９例、肝炎后肝硬化１６例、另有甲型肝炎患…     

e抗体阳性的慢性乙型肝炎病人携带乙肝病毒前C区变异的研究

某些抗－ＨＢｅ（＋）的慢性乙型肝炎病人血清仍可检出ＨＢＶＤＮＡ。本工作对９例这类病人的病毒基因组，在聚合酶链反应后直接进行序列分析，发现８例其前Ｃ区第８３位核苷酸发生Ｇ→Ａ（Ａ８３）点突变，使编码色氨酸（ＴＧＧ）的第２８个密码变异为终止密码（ＴＡＧ）。其中２例Ａ８３变异发生在ＨＢｅＡｇ→抗－ＨＢｅ血清转换过程中。分析１例肝内ＨＢＶＤＮＡ，亦与其血清有相同的Ａ８３变异。以３例抗－ＨＢｅ（＋）的慢性无症状携带者为对照，均无Ａ８３变异。本文６例为慢性活动性肝炎，３例为慢性重症肝炎。变异病毒逃避了免疫清除，可能与病变持续活动甚至重症化有关。     

乙丙型肝炎病毒重叠感染时病毒的相互作用

目的　探讨乙、丙型肝炎病毒（ＨＢＶ、ＨＣＶ） 重叠感染时,病毒之间的相互作用。方法　检测３０ 例ＨＢＶ、ＨＣＶ重叠感染患者血清病毒标志物的变化、ＨＢＶ前Ｃ区１ ８９６ 位点突变的发生比率及血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α、白细胞介素（ＩＬ）６ 含量。结果　与单纯ＨＢＶ或ＨＣＶ 感染者相比,重叠感染患者乙肝表面抗原（ＨＢｅＡｇ） 、ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ 阳性比率明显降低,乙肝ｅ 抗体（ 抗ＨＢｅ） 阳性比率明显升高,ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｃ ＩｇＧ 及抗ＨＣＶ 几何平均滴度也明显降低,部分患者ＨＢｓＡｇ 阴转。而ＨＢＶ前Ｃ区１ ８９６ 位点突变发生率及血清ＴＮＦα、ＩＬ６ 含量却明显高于单纯感染者。结论　ＨＢＶ、ＨＣＶ感染同一宿主时,存在相互干扰、抑制;ＨＢｅＡｇ 的消失、抗ＨＢｅ 的阳转既与ＨＣＶ对ＨＢＶ 复制的直接抑制有关,又与ＨＢＶ的前Ｃ区变异有关,且ＨＣＶ 的重叠感染可能是导致ＨＢＶ 前Ｃ区变异的原因之一,其作用机制可能与导致机体免疫压力升高有关     

丙型肝炎病毒1b型NS5 A区基因结构变异与α干扰？…

目的 观察丙型肝炎患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）１ｂ型基因组部分ＮＳ５ Ａ区核苷酸,氨基酸的变异情况并探讨其与α干扰素疗效的相关性。方法 患者干扰素治疗前,中,后留血标本,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＣＶ病毒ＮＳ５ Ａ区部分基因片段并用直接测序法测序。与ＨＣＶ－Ｊ株及ＨＣＶ－河北株（ＨＣＶ－ＨＢ）比较核苷酸及氨基酸序列的同源性,根据α干扰素疗效分析ＨＣＶ１ｂ是否存在干扰素敏感决定区。     

乙/丙型肝炎病毒双重感染患者前C区终止变异低频率

目的了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）双重感染患者前Ｃ区基因变异，及其可能的临床意义。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）与限制片段长度多态性（ＲＦＬＰ）来分析２５例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性（Ａ组）和３１例ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ阳性但抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性（Ｂ组）的慢性肝病患者前Ｃ区密码２８终止变异（终２８）。结果ＨＢＶ和ＨＣＶ双重感染患者（Ａ组）血清ＨＢＶＤＮＡ第１次ＰＣＲ阳性率（１６％）明显低于单独ＨＢＶ感染组（６５％）（Ｐ＜０．００１）；前Ｃ终２８检出率（２８％）亦明显低于单独ＨＢＶ感染（６８％）（Ｐ＜０．００１）。结论提示双重感染患者ＨＢＶ前Ｃ终止变异低频率可能与ＨＢＶ低水平复制有关     

乙型肝炎病毒前C基因突变及其临床意义

分析了２１例慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒ＤＮＡ前Ｃ区序列，发现１６例抗－ＨＢｅ阳性血清中９例发生前Ｃ区第１８９６位Ｇ－Ａ点突变，产生一个终止密码，而５例ＨＢｅＡｇ阳性血清均未发生变异。     

乙肝病毒前C基因/C启动子变异与不同症状乙型肝炎患者的相关性

乙型肝炎的病情与宿主及病毒均有关。乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｃ区编码ＨＢｃＡｇ及ＨＢｅＡｇ ,其调控序列位于前Ｃ区及Ｃ基因启动子 (ＣＰ) ,ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ区变异可以通过阻止或减少ＨＢｅＡｇ合成和分泌来影响宿主的免疫应答。我们采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)直接测序法 ,测定 4 5例慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者血清ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ区核苷酸序列 ,以探明ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ基因区变异的临床意义。材料和方法病例选择 :共 4 5例 ,其中慢性乙型肝炎 (Ａ组 ) 2 0例 ,男 12例 ,女 8例 ,年龄 2 1～ 5 7岁 ,其中ＨＢｅＡｇ阳性 6例 ,抗 Ｈ…     

中国地方株人乳头瘤病毒16型E7基因一级结构及其…

从湖北地区一宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ，采取加端聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，获得了人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因（ＨＰＶ１６Ｅ７）。将该基因克隆于载体ｐＵＣ１８后，进行了该基因一级结构顺序分析。完整的ＨＰＶ１６Ｅ７湖北株基因（ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ）全长２９４ｂｐ，与已发表的德国株（ＧＳ）大小一致，但其核苷酸顺序中有２处发生了变异，均为Ｃ→Ｔ变异。第４３位ＣＡＡ→ＴＡＡ使相应的谷氨酰胺密码子变为终止密码     

乙型肝炎病毒新的免疫逃避株的S基因序列分析

目的分析乙型肝炎患者体内ＨＢＶＳ基因的变异情况及对乙型肝炎的免疫预防的现实意义。方法采用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）、Ｍ１３噬菌体克隆和核苷酸序列分析方法对一例乙型肝炎免疫失败儿童患者体内ＨＢＶＳ基因序列进行分析。结果发现该患儿所感染ＨＢＶ的Ｓ基因上有一个重要的点突变,即第５５１位碱基由野生型的Ａ变为Ｇ。该突变使乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）１３３位氨基酸由甲硫（ＡＴＧ）变为缬（ＧＴＧ）。这一氨基酸替换恰恰发生在ＨＢｓＡｇ中和性α抗原决定簇区段（ａａ１２４～ａａ１４７）内。结论鉴于该患者接种乙型肝炎疫苗,其血清呈抗－ＨＢｓ阳性和ＨＢｓＡｇ阴性,推测其体内的ＨＢＶ为一个新的疫苗诱导的免疫逃避株     

重型乙型肝炎病人中乙型肝炎病毒C基因启动子变？…

目的 了解重型乙型肝炎（乙肝）病人血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ Ｃ基因启动子（ＣＰ）的变异。方法 对用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增的血清ＨＢＶ ＤＮＡ直接测序。结果 ７例亚急性重型肝炎病人的ＨＢＶ分离株ＣＰ区分别有２￣１２个替代变异,１例病人有１１ｂｐ的碱基插入。ＣＰ变异主要发生于ＣＰ的第１和第２个ＡＴ丰富,ｎｔｌ７６２和ｎｔｌ７６４的替代变异见于７例亚急性重型肝炎病人的４例中,是ＣＰ变异的热点,     

中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断

β地中海贫血是一组高度异质性的遗传性血液病。中国人中已发现２１种β地贫基因，其突变类型包括碱基替代、小的缺失和插入。我国南方常见的类型是密码子（ＣＤ）４１－４２（－ＴＣＴＴ）移码突变，ＩＶＳ２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）突变，ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变，ＴＡＴＡ盒ｎｔ－２８（Ａ→Ｇ）突变和ＣＤ７１－７２（＋Ａ）移码突变，其基因频率分别为４１．６％、２１．８％、１８．０％和８．０％及３．９％。     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测     

20例中国人HCVⅡ/1b型高变区1序列变异的动态观察

目的 动态研究中国人群ＨＣＶⅡ／１ｂ型包膜蛋白Ｅ２／ＮＳ１高变区１（ＨＶＲ１）序列变异规律、意义及影响因素。方法 应用逆转录巢式ＰＣＲ技术从２０例ＨＣＶⅡ／１ｂ型感染的中国病人血清中扩增了ＨＣＶ部分包膜区基因片段（ｎｔ１４４９～１５８６，ＨＣＶ－Ｊ），纯化后直接采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。结果 中国人群ＨＣＶ ＨＶＲ１位于氨基酸（ＡＡ）３８４～４１０位，有６个较保守的ＡＡ位点；３８５位Ｔｈ     

乙型肝炎病毒核心基因变异的研究

用聚合酶键反应（ＰＣＲ）对３份肝癌组织及１份乙型肝炎表面抗原阳性但核心抗体（抗－ＨＢｃ）为阴性的无症状携带者血清，扩增及克隆了核心（Ｃ）基因。经核苷酸序列分析，与我国ＨＢＶ克隆株ＰＡＤＲ－１比较，发现无症状携带者的Ｃ基因与ＰＡＤＲ－１的基因差别不大；但自肝癌组织克隆的Ｃ基因平均每例有１５．６个核苷酸变异。结果提示，ＨＢＶ核心基因的变异与疾病的严重程度可能有关。     

通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV蛋白表达的初步研究

应用半乳糖末端糖蛋白受体（ＡＳＧＰ－Ｒ）介导的内吞作用，将外源基因导入真核细胞，与脂质体介导的转染和细胞表面转铁蛋白受体（Ｔｆ－Ｒ）介导的内吞作用相比，虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移，但ＡＳＧＰ－Ｒ法具有肝细胞特异性，而脂质体法和Ｔｆ－Ｒ法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｍＲＮＡＰｒｅＣ／Ｃ区的核酶质粒ｐＣＭＶ－Ｒｉｐｃ特异性导入肝细胞并发挥作用，通过酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测细胞培养液中的乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ），评价核酶在细胞水平对ＨＢＶ抗原表达的阻断作用。结果表明当核酶质粒ｐＣＭＶ－Ｒｉｐｃ与ＨＢＶ抗原表达质粒ｐＵＣ－２ＨＢＶ共转染ＨｅｐＧ２细胞时，核酶对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ表达的抑制率分别为５５．２９％和６８．７３％。     

乙型肝炎病毒C基因启动子及前C变异的动态研究

目的明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）与前Ｃ变异株在慢性乙型肝炎患者中的动态消长,及与ＨＢｅＡｇ血清学状态的关系。方法对３２例慢性乙型肝炎患者的１０５份系列血清进行错配聚合酶链反应（ＰＣＲ）－限制性片段长度多态性分析,并对其中１５例患者系列血清标本的ＰＣＲ产物进行直接测序。结果ＢＣＰ和Ａ８３变异株感染率均明显增高（６２．５％＞４６．９％;３１．３％＞１２．５％）;ＢＰＣ变异株更多地（１４／１６）表现为优势积累,且先于ＨＢｅＡｇ血清阴转;ＢＣＰ野株／变异株比例变化影响ＨＢｅＡｇ血清学的稳定性。结论两种类型的变异株在炎症活动中均具有选择优势,最终造成ＨＢｅＡｇ（－）的ＨＢＶ感染;可能与ＨＢＶ感染之持续有关。