人脑胶质瘤耐药基因mdr1、ERCC2、MGMT的表达及相关性分析

目的：探讨人脑胶质瘤组织中三种耐药基因 mdr1、 ERCC2和 MGMT mRNA表达之间的相关性。方法：采用双管 RT- PCR方法检测 14例正常脑组织和 56例人脑胶质瘤组织中 mdr1、 ERCC2和 MGMT mRNA水平,并分析其相关性。结果：正常脑组织中 mdr1、 ERCC2和 MGMT的表达量分别为 (0.75± 0.36), (1.43± 0.92)和 (2.48± 1.83), mdr1和 ERCC2、 ERCC2和 MGMT之间具相关性 (P< 0.01和 P< 0.001);胶质瘤组织中三种基因表达量分别为 (0.53± 0.42), (1.75± 1.16)和 (2.88± 1.92), ERCC2和 MGMT之间具极显著相关性 (P< 0.001)。结论： ERCC2和 MGMT基因的表达之间可能具有内在的联系,共同参与细胞对 DNA损伤的修复,并形成耐药;而 mdr1与上述两者之间不具有这种关系。     

DNA修复基因ERCC1启动子区甲基化与胶质瘤放射敏感性的相关性研究

背景与目的:胶质瘤的放射治疗效果与其放射敏感性密切相关,有许多因素影响着胶质瘤的放射敏感性。研究已经发现某些基因启动子区CpG岛的甲基化会导致基因的表达沉默,从而影响肿瘤放射敏感性。本文初步探讨了DNA修复基因ERCC1启动子区CpG甲基化与脑胶质瘤放射敏感性的关系。方法:培养4种胶质瘤细胞株MGR1、MGR2、SF767、T98G,集落形成实验法检测其放射敏感性,以2Gy照射后细胞存活集落数(SF2)作为标准表示。应用亚硫酸氢钠修饰后测序的方法对4株细胞中ERCC1基因启动子区CpG岛的甲基化状态进行分析。进而分析其甲基化状态与放射敏感性的关系。结果:4种胶质瘤细胞株的放射敏感性存在较大差异,SF2均数范围从0.18到0.70;在ERCC1启动子区CpG为去甲基化状态细胞株的SF2值较高(MGR1,0.59±0.09;T98G,0.70±0.05),表示对放射线较抗拒;ERCC1启动子区CpG为甲基化状态细胞株的SF2值较低(MGR2,0.18±0.05;SF767,0.32±0.08),表示对放射线较敏感(t=-4.43,P<0.05)。结论:ERCC1启动子区CpG甲基化状态可能与胶质瘤细胞株放射敏感性相关,有希望成为预测胶质瘤放疗敏感性的新指标。     

喉鳞状细胞癌组织中 NDRG1、NDRG2 基因启动子区CpG岛甲基化状态及其蛋白的表达

目的：探讨喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）组织中 N-myc 下游调节基因1（ N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1）及NDRG2 基因启动子甲基化状态和蛋白表达情况及其临床意义。方法：应用甲基化特异性PCR（methylation specific polymerase chain reaction, MSP）技术及免疫组织化学(immunohistochemestry, IHC）法检测45例LSCC组织、18例癌旁组织中 NDRG1、NDRG2 基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白表达情况,分析其与临床特征的关系。结果：LSCC组织中 NDRG1及NDRG2 基因启动子区的甲基化发生率显著高于癌旁正常组织\[66.7%（30/45） vs 33.3%（6/18）,53.3%（24/45） vs 22.2%（4/18）,均 P <0.05\],其高甲基化与淋巴结转移及临床分期有关( P <0.05),与病理分级、临床分型、吸烟史、年龄和性别无关( P >0.05)。在LSCC组织中,NDRG1及NDRG2蛋白的阳性表达率显著低于癌旁组织\[37.8% (17/45） vs 88.9% (16/18）,33.3%(15/45） vs 83.3%(15/18）,均 P <0.01\],其低蛋白表达与淋巴结转移及临床分期有关 ( P <0.05) ,与病理分级、临床分型、吸烟史、年龄和性别无关( P >0.05)。LSCC组织中 NDRG1及NDRG2 启动子区甲基化与其蛋白表达呈负相关(r1＝-0.713, P <0.01; r 2＝-0.472, P <0.01)。结论：在LSCC组织中 NDRG1及NDRG2 基因均呈高甲基化及低蛋白表达状态,这可能与喉癌的发生和发展有关, NDRG1及NDRG2 基因启动子区CpG岛的异常甲基化可能是抑制它们蛋白表达的机制之一。     

人脑胶质瘤细胞株中RIZ1基因启动子甲基化状态的研究

检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中成视网膜细胞瘤蛋白结合锌指结构基因1（retinoblastoma protein-interacting zinc finger gene1,RIZ1）基因启动子区的甲基化状态,进一步认识RIZ1在胶质瘤发病机制中的作用。方法：应用甲基化特异性PCR法（methylation specific PCR,MSP）检测4种人脑成胶质细胞瘤细胞株U87、U251、A172和T98中RIZ1基因启动子区的甲基化水平,其中U87细胞发生甲基化,被选为后续实验对象。RT-PCR检测U87细胞经5-Aza-CdR处理前后RIZ1 mRNA表达量的变化,MTT检测5-Aza-CdR对U87细胞生长增殖的影响。结果：4种人脑成胶质细胞瘤细胞株中U87和U251细胞中检测到RIZ1基因启动子区域发生甲基化;U87细胞经5-Aza-CdR处理后其RIZ1 mRNA的表达量上调;MTT法检测显示5-Aza-CdR能抑制U87的生长增殖,且与5-Aza-CdR的浓度和作用时间呈负相关。结论：RIZ1基因启动子高甲基化是人脑成胶质细胞瘤细胞株中RIZ1基因表达下调的重要机制。     

食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化检测

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系。方法32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小的组织块标本,立即储存于-80℃冰箱中,冻存备提DNA。采用甲基化特异PCR法(MSP法)检测食管癌及正常食管黏膜组织中错配修复基因hMSH2启动子区甲基化的表达。结果32例食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率为34.4%(11/32),正常食管黏膜组织未发现甲基化,两组甲基化阳性率相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。高龄患者(≥70岁)癌组织中启动子区hMSH2甲基化发生率(85.7%)明显高于较低龄患者(<70岁,20.0%;P<0.05)。病理组织学Ⅲ~Ⅳ级食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率(70.0%)明显高于Ⅰ~Ⅱ级(18.2%,P<0.05)。结论食管癌组织中,hMSH2基因启动子区甲基化与年龄和病理组织学分级可能有关。     

肺癌组织中错配修复基因hMLH1 启动子甲基化状态分析

目的 探讨肺癌组织中错配修复基因ｈＭＬＨ１启动子甲基化状态及其与蛋白表达的关系。方法 用ＨｐａⅡ酶切ＰＣＲ及ＳＰ免疫组织化学方法,分析５０例肺癌标本ｈＭＬＨ１启动子甲基化状态及蛋白表达。结果 ｈＭＬＨ１启动子甲基化有１６例,占３２．０％（１６／５０）。ｈＭＬＨ１启动甲基化与性别、吸烟状态及临床病理无明显的相关性。ｈＭＬＨ１蛋白表达阴性的１４例中,１１例有甲基化（７８．６％）;而３２例蛋白表达阳性者中,只有５例甲基化（１５．６％）。结论 ｈＭＬＨ１启动子区在肺癌组织中有中等频率的甲基化,是ｈＭＬＨ１蛋白表达降低的主要原因之一。     

耐紫杉醇人肺腺癌A549细胞株中BRCA1基因启动子CpG岛甲基化的研究

目的检测耐紫杉醇人肺腺癌A549细胞株(A549/Taxol)中BRCA1基因启动子CpG岛甲基化状态,探讨A549/Taxol细胞对紫杉醇的耐药机制。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术,检测耐紫杉醇人肺腺癌A549细胞株BRCA1基因启动子CpG岛甲基化状态。结果 A549/Taxol细胞存在BRCA1基因异常甲基化,呈部分甲基化。结论 A549/Taxol细胞存在BRCA1基因异常甲基化,可能是A549/Taxol细胞对紫杉醇耐药的机制之一。     

食管癌中DNA修复基因MGMT启动子区CpG岛过甲基化研究

目的：探索O~0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏膜细胞中MGMT基因启动子区过甲基化状态。用免疫组织化学SP法检测上述组织中MGMT蛋白表达情况。结果：76例食管癌组织中有26例(34.2%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁组织中有8例发生甲基化,而正常食管黏膜细胞中均无甲基化。所有甲基化的癌组织中均无MGMT蛋白表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和8例正常组织中均有MGMT蛋白表达。结论：MGMT基因启动子区过甲基化而使其蛋白表达缺失,可能是食管癌发生的重要因素。     

食管癌中hMSH2启动子区CpG岛过甲基化研究

[目的]探讨hMSH2甲基化在食管癌发生发展中的作用。[方法]应用实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应(real-time MSP)分别检测130例食管癌患者癌组织及癌旁正常组织中hMSH2甲基化情况,并分析其与临床病理等参数及预后之间的关系。[结果]在130例原发性食管癌组织中,hMSH2甲基化的有63例(48.5%),与之相对应的癌旁正常组织中甲基化的有18例(13.8%)(P<0.05)。hMSH2高甲基化分别与患者的年龄、肿瘤远处转移及不良预后有关(P<0.05),而与患者性别、淋巴结转移及临床分期等无关(P>0.05)。[结论]hMSH2高甲基化是食管癌频发的分子事件,也是导致其错配修复功能缺陷的重要原因之一。hMSH2基因启动子区甲基化可能在老龄化及食管癌的发生发展过程中发挥重要作用,是一个潜在的预后相关因子。     

食管癌组织APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化模型的研究

目的:探讨原发性食管癌组织中结肠腺瘤性息肉(APC)基因启动子区5-′CpG岛甲基化的状况及其与临床病理特征之间的关系。方法:实时荧光甲基化特异性聚合酶链反应检测182例食管癌及癌旁组织中APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化状况。单因素分析采用Kaplan-Meier法,多因素分析采用Cox比例风险模型。结果:在182例食管癌组织中,APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化率为54.40%(99/182),在182例相对应的癌旁组织中,甲基化率为9.90%(18/182),差异有统计学意义,P<0.05。APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化分别与淋巴结转移、肿瘤远处转移、临床分期及不良预后差异有统计学意义,χ2=76.669,P=0.000。单因素结果提示,远处转移、分期及APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化与食管癌患者的生存期相关,P值均<0.05。Cox多因素分析提示,APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化是独立的预后因素,P<0.05。结论:APC基因启动子区5-′CpG岛甲基化在食管癌的发生发展中起重要作用,APC基因可能是食管癌新的肿瘤分子标志。     

脑脊液MGMT启动子甲基化在胶质瘤诊断中的应用

目的 比较胶质瘤患者脑脊液与外周血中MGMT（O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶）启动子甲基化在胶质瘤初期诊断中的敏感度和特异性。方法 收集283例胶质瘤患者肿瘤组织及其对应的术前外周血和脑脊液,10例颅脑外伤患者挫伤的脑组织及其对应的术前外周血、脑脊液。MGMT启动子甲基化状态通过甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR, MSP）确定,比较脑肿瘤组织,外周血和脑脊液中MGMT启动子甲基化率。结果 不同级别胶质瘤组织MGMT启动子甲基化阳性率分别为68.13%（WHO Ⅱ）、65.69% （WHO Ⅲ）以及 67.78%（WHO Ⅳ）,三者之间差异无统计学意义（P>0.05）。胶质瘤瘤体组织、对应的外周血和脑脊液启动子甲基化率为分别为67.14%、44.87%和66.08%,阴性对照组中检测结果均为0。MGMT启动子甲基化阳性瘤体组织,对应的脑脊液中MGMT启动子甲基化敏感度为79.66%（141/177）,较对应的外周血58.82%（110/187）高（P<0.05）。结论 术前患者肿瘤组织、脑脊液和外周血中MGMT启动子甲基化率与肿瘤级别无关。与外周血相比,脑脊液中的 MGMT 启动子甲基化特异性和敏感度更高。     

新疆哈萨克族与汉族食管鳞癌中smad4基因启动子甲基化的状态及意义

目的 研究新疆汉族与哈族(哈萨克族)食管鳞癌中smad4基因启动子区的甲基化水平及意 义。方法 收集哈族食管癌组织37例和正常对照组织33例;汉族食管癌组织31例和正常对照组织 33例。应用Mass ARRAY甲基化DNA定量分析技术对食管组织中smad4基因启动子区的甲基化水平 行定量分析。结果 汉族与哈族食管癌组和对照组中smad4基因启动子区的平均甲基化率分别为 3.4%和2.8%、 3.4%和2.5% ,差异均无统计学意义(P>0.05)。smad4基因启动子区CpG-15、CpG-27 在汉族食管癌中的平均甲基化率(4.7%、4.9%)明显高于对照组 (2.8%、3.5%);CpG-1、CpG-16-19、 CpG-27-28、CpG-31-33在哈族食管癌中的平均甲基化率(1.7%、4.5%、4.9%、6.8%)明显高于哈族对照 组(0.7%、2.2%、3.0%、5.5%),CpG-6在哈族食管癌和正常组织中的平均甲基化水平(1.9%、 1.1%)均 明显高于汉族食管癌组(0.4%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 (1)smad4基因启动子区的高甲基 化可能参与了食管癌的发生。(2)smad4基因启动子区CpG-15、CpG-27的高甲基化可能与汉族食管癌 发生关系密切;而CpG-1、CpG-16-19、 CpG-27-28、CpG-31-33的高甲基化可能 是新疆哈族食管癌高发的原因;smad4 基因启动子区CpG-6的高甲基化可能导 致哈族食管癌较汉族食管癌高发。     

PTEN基因甲基化及其表达异常与胃癌的关系

目的：探讨PTEN基因表达、启动子区甲基化与胃癌及其临床病理特征的关系。方法：采用甲基化特异性PCR法（MSP）和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，分析胃癌组织及相应癌旁正常组织中PTEN基因启动子区甲基化及其mRNA表达情况。结果：48．2％（27／56）的胃癌组织和3．6％（2／56）的癌旁胃组织PTEN基因启动子区发生甲基化．癌组织PTEN基因启动子区甲基化率显著增高（P〈0．05）：其中，2例甲基化癌旁胃组织均为胃癌组织中有甲基化的病例．发生淋巴结转移的29例胃癌组织中．19例PTEN基因启动子甲基化；发生淋巴结转移的PTEN基因启动子甲基化显著高于无淋巴结转移组（P〈0．05）。RT—PCR结果显示，所有甲基化的胃癌组织中PTEN mRNA均无表达，结论：胃癌中PTEN基因mRNA失表达与其启动子区甲基化有关，这可能是胃癌发生、发展以及转移的原因之一。     

PAX6 Promoter Methylation Correlates with MDA-MB-231 Cell Migration,and Expression of MMP2 and MMP9

Objective: Breast cancer is a heterogeneous disease characterized by an accumulation of genetic and epigeneticalterations that lead tumor cells to acquire characteristics like the capacity for invasion and metastasis. Metastasisremains a major challenge in cancer management and understanding of its molecular basis should result in improvedprevention, diagnosis, and treatment of breast cancer patients. The aim of this study was to investigate how promoterDNA methylation regulates PAX6 gene expression and influences breast carcinoma cell migration. Methods: PAX6promoter methylation was detected by Methyl Specific-Multiplex Ligation Probe Amplification (MS-MLPA). Geneexpression was evaluated using qRT-PCR, while the effect of PAX6 on migration was ssessed by wound healing assay.In addition, MMP2 and MMP9 genes were studied using different bioinformatic tools. Results: The PAX6 promoter ismethylated in breast cancer cell lines and methylation in this region impacts on its expression. Migration assays revealedthat PAX6 overexpression promotes cell migration, while PAX6 inhibition decreases it. More importantly, we foundthat migration is affected by PAX6 methylation status. Employing bioinformatic analysis, binding sites for PAX6 onthe regulatory regions of the MMP2 and MMP9 genes were established, PAX6 overexpression increasing MMP2 andMMP9 expression at the mRNA level. Conclusion: Our study provides novel insights into epigenetic events that regulatePAX6 expression and molecular mechanisms by which PAX6 modifies the migration capacity of breast cancer cells.     

LCN2 Promoter Methylation Status as Novel Predictive Marker for Microvessel Density and Aggressive Tumor Phenotype in Breast Cancer Patients

LCN2 (Lipocalin 2) is a 25 KD secreted acute phase protein, reported to be a novel regulator of angiogenesis inbreast cancer. Up regulation of LCN2 had been observed in multiple cancers including breast cancer, pancreaticcancer and ovarian cancer. However, the role of LCN2 promoter methylation in the formation of microvesselsis poorly understood. The aim of this study was to analyze the association of LCN 2 promoter methylation withmicrovessel formation and tumor cell proliferation in breast cancer patients. The LCN2 promoter methylationstatus was studied in 64 breast cancer tumors by methylation specific PCR (MSP). Evaluation of microvesseldensity (MVD) and Ki67 cell proliferation index was achieved by immunohistochemical staining using CD34and MIB-1 antibodies, respectively. LCN2 promoter unmethylation status was observed in 43 (67.2%) of breastcancer patients whereas LCN2 methylation status was seen in 21 (32.8%). Further, LCN2 promoter unmethylationstatus was associated with aggressive tumor phenotype and elevated mean MVD in breast cancer patients.     

大肠癌组织中unc5c基因启动子甲基化的分析

目的分析大肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中unc5c基因启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测73例大肠癌患者手术切除的癌组织和相应的癌旁组织及28例正常组织、36例腺瘤患者手术切除的腺瘤组织中unc5c基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理特征之间的关系。结果73例癌组织样本中甲基化检出率为75％(55/73),相应的癌旁组织为7％(5/73),腺瘤组织为63％(23/36),而正常组织中未检出unc5c基因甲基化。unc5c基因甲基化检出率与年龄、分化程度及TNM分期有关。结论检测unc5c基因启动子区域异常甲基化是大肠癌早期辅助诊断的分子标志物之一。