鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白增强抗体应答分析

目的：分析鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白增强抗体应答能力的功效以及机制。方法：采用酶联免疫吸附法，来对研究样本血浆中的特异性抗OVA的IgG抗体滴度，以及各种IgG分型抗体的滴度进行测定，从而对其应用鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白增强抗体的应答效果加以分析。结果：在皮下注射免疫与腹腔注射免疫的实验方案中，鞭毛蛋白的抗体应答机制与肌肉免疫方案一致，其与常规的免疫佐剂功效基本一致。结论：在整个实验过程中发现，使用鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白对实验对象的抗体应答加强效果较好，为新型人用疫苗的研发提供了一个良好的佐剂选择。可对其进一步研究，并将其用于临床，以全面提高机体对外源性抗原特异性的免疫反应。     

海南藏族自治州儿童重组酵母乙肝疫苗免疫后抗体调查分析

目的：观察10μg乙型肝炎基因重组（酵母）疫苗对（5～14）岁儿童的免疫后抗体产生效果，为制定有效的免疫策略提供依据。方法：按0、1、6免疫程序对（5—14）岁儿童接种酵母重组乙肝疫苗，对633名乙肝血清标志物全阴的儿童，全程免疫6个月后采集血样，采用定量放免法（PIA）进行抗体检测。结果t全程免疫6个月后，抗体阳转率92．73％，分年龄组几何平均滴度（GMC）差别无明显性（F=1．66，P〉0．05），抗体滴度（GMC）在100mIU／L以上，占81．20％，男女之间抗体阳转率及GMC构成分布差别无显著性。结论：10μg重组酵母乙肝疫苗安全有效，儿童免疫后的抗体阳转率效果明显，抗体应答水平较高。为减少无应答和低应答人数应当增大接种剂量，以增加抗体阳转机会。     

柚皮素增强乙肝疫苗免疫效果的探讨

目的探讨柚皮素作为佐剂增强HBV疫苗的体液免疫效果。方法用柚皮素作为免疫佐剂免疫Balb/c小鼠,以佐剂铝盐作为阳性对照,在免疫3次后取小鼠血清做ELISA检测HBsAb滴度,比较各组的免疫效果。结果与无佐剂组小鼠对比,柚皮素和铝盐作为佐剂均可有效地引起小鼠对HBsAg的体液免疫应答。结论柚皮素可以增强乙肝疫苗的免疫效果,和铝盐相比没有统计学意义。     

祁东县2003～2004年儿童乙型肝炎疫苗接种5年内免疫效果观察

目的分析新生儿接种乙肝疫苗远期免疫应答效果及影响因素，为加强免疫提供科学参考依据。方法选择我县2003～2004年1～18岁全程接种乙肝疫苗儿童为研究对象，选取1960例病例记录，满足父母或共同生活者中无乙型肝炎患者的条件，回顾性对比分析乙肝疫苗的免疫效果。结果基础免疫后1年抗体阳性率最高，随着年龄增长，抗体阳性率逐渐下降，且差异有显著性。结论通过对1～18岁儿童乙肝疫苗免疫效果的调查分析，掌握乙肝疫苗免疫后的抗体保护水平，更有效地控制乙肝病毒的传播。     

两种加强乙型肝炎疫苗注射方法对血液透析患者免疫效果观察

目的:探讨两种加强乙型肝炎(乙肝)疫苗注射方法对血液透析患者免疫效果。方法:44例维持性血液透析患者,HBsAg(-)、HBeAg(-)、anti-HBc(-)及anti-HBs(-),从未接种过乙肝疫苗,分为两组。A组:32例,0、1、6、9个月肌内注射基因重组乙肝疫苗,每次注射剂量为20μg;B组:12例,0、1、3、6个月肌内注射基因重组乙肝疫苗,每次注射剂量也为20μg,以乙肝表面抗体滴度≥l0 mIU/ml为抗体阳性。注射结束后1～2个月检测乙肝表面抗体滴度,分析两组之间抗体阳性率及滴度水平的差异。同时分析抗体滴度水平与患者性别、年龄、病程、肌酐水平、白蛋白水平、血红蛋白水平等相关性。结果:A组患者有25例产生了保护性抗体,抗体阳性率为78.13%,B组患者有9例乙肝表面抗体滴度≥10 mIU/ml,抗体阳性率为75%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。A组患者抗体滴度水平为(372.90±316.18),B组患者抗体滴度水平为(317.53±350.62),两组之间差异无统计学意义(P>0.05,t=0.389)。结论:血液透析患者加强乙肝疫苗注射与传统方法的乙肝疫苗注射相比,均可提高抗体阳性率。虽注射时间略有不同,但注射剂量、频次相同的情况下,抗体阳性率差异无统计学意义(P>0.05),免疫效果类似,同时国人需要的疫苗剂量可能要小于国外患者。由于样本量较小,可能需要扩大样本量进一步研究。     

伤寒Ty21a-CpG佐剂减毒活疫苗诱导抗体应答的研究

目的探讨人工合成的CpG-ODN 作为佐剂对伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导小鼠产生抗体的影响.方法将不同剂量的人工合成的含CpG ODN的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂与伤寒Ty21a减毒活疫苗混合,以小鼠作为免疫动物进行免疫接种,采用试管凝集法检测免疫小鼠的血清特异性抗体滴度.结果 CpG-ODN 30μg佐剂组与不用佐剂的Ty21a减毒活疫苗相比较,应用CpG-ODN 组小鼠产生更强的抗体应答,抗体几何均数滴度相比有明显的差异.结论 CpG-ODN作为佐剂可促进伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答.     

全反式维甲酸对基因免疫应签的调节作用(摘要)

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对TR421-hCG8质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用。方法 肌肉注射重组质粒TR421-hCGβ DNA(每只鼠50μ／100μl)初次免疫小鼠，以灌胃的方式给予ATRA，并以灌溶和TR421质粒免疫为对照；3周与6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠，采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察，分析小鼠血清中IgG抗体亚类；3H-TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结果 ELISA结果表明，TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平，ATRA增强TR421-hCG8质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a／IgG1显著性降低；TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性，ATRA抑制TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结论 ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答，抑制TH1型免疫应答，为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径。     

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的：研究结核分枝杆菌重组16000蛋白（rPA16)诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法：家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组，皮下多点注射分别进行免疫，6次免疫后采血，双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验（ELISA）跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应；同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应，并用rPA16抗原检测人血标本，分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果：兔血清抗体效价结果显示：5个月后，加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体，不加佐剂组2个月后血清抗体检测即为阴性，ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感，rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达1：6400，不加佐剂组的血清抗体滴度仅为1：400，ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异笥较好，仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应，与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性，同时又分析了rPA16抗原的特异性，与人型PPD相比，该抗原只与所试各类分支杆菌，BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应，而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应，ELISA检测血清标本结果：肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性分别为64.8%和75.2%；健康组，卡介苗接种阳转健康组，rPA16和PPD检测特异性分别为96.2%,88.5%和94.3%,66.7%。结论：rPA16具有较强的免疫原性和一定的特异性，可能成为结核病血清学诊断试剂之一。     

CEA串连表位-HSP70融合基因疫苗诱导小鼠的表位特异性免疫应答

目的：观察癌胚抗原(CEA)串联表位-HSP70融合基因疫苗诱导的免疫应答，为开发新型肿瘤特异性基因疫苗奠定基础。方法：在已经构建含有变异热休克蛋白(HSP)序列的基础上，插入重组CEA串联表位的编码片段获得CEA串联表位-HSP融合基因疫苗。3次肌肉注射免疫Balb/c小鼠，设立注射生理盐水的阴性对照组、注射氢氧化铝佐剂混悬CEA串联表位的阳性对照组及注射pCITriCEA_625-667-mtHSP70的实验组。FCM分析脾脏T细胞亚群；体外培养脾细胞，ELISA检测培养上清中干扰素γ(IFNγ)的相对含量；同时测定小鼠血清CEA特异性抗体的滴度。结果：阴性对照组脾细胞中CD3⁺和CD4⁺T细胞分别为55.1%±6.1%和30.2%±4.1%；实验组脾细胞中CD3⁺和CD4⁺T细胞分别为78.7%±9.2%和48.9%±4.7%，两组比较差异有显著性(P<0.01)。其体外特异性抗原肽诱导的IFNγ分泌处于本底水平，可视为生理性参数，体外非特异性和特异性的IFNγ分泌分别增加3和6倍(P<0.01)。血清中CEA表位特异性抗体滴度阴性对照组为0，阳性对照组＜1∶500,而融合基因疫苗免疫组达到1∶4 000。结论：CEA串联表位-HSP融合基因疫苗在体内诱导以激发辅助性T细胞为特征的免疫应答。     

EB病毒膜蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究

目的：制备高效价EB病毒膜蛋白抗体,并对其效价及其与EBV结合的特异性进行鉴定。方法：将B95-8细胞培养至3×10^5/mL时,超声破碎,纯化获得EB病毒膜蛋白抗原;EB病毒膜蛋白抗原经弗氏佐剂乳化,在家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取兔血清,检测兔免疫血清抗体IgG;进一步采用Western blot检测制备的血清抗体与EBV结合的特异性,同时采用ELISA法检测兔血清抗体水平及各周抗体滴度的变化趋势。结果：所有家兔在全程免疫后都产生了高效价膜蛋白的特异性抗体,最高滴度达1：6400。结论：用B95-8细胞制备的EB病毒膜蛋白抗原免疫家兔,可成功制备高效价的特异性血清抗体,为EB病毒膜蛋白抗原的免疫学检测奠定了基础。     

HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答

目的：构建乙型肝炎病毒（HBV)adr亚型基因疫苗pCMV-S2.S(PS），观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法：将PS注射于C57BL／6小鼠胫骨前肌内，应用ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体以及采用^51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果：注射基因疫苗1周后，血清中抗HBs抗体转阳，4周后抗体达到高峰，并以高水平维持至少8周；第12周时PS诱导小鼠产生了良好的HBV特异的细胞免疫应答（P＜0.05）。结论；所构建的HBV adr亚型基因疫苗PS能够诱导小鼠产生较好的体液和细胞免疫应答。     

Montanide ISA-720 and Naloxone in HBsAg Vaccine Formulation: Cytokine Profiling and Monitoring of Long-Lasting Humoral Immune Responses

ObjectiveThis study aimed to investigate the effects of Montanide ISA-720 and Naloxone (NLX) in Hepatitis B surface antigen (HBsAg) vaccine formulation on cytokine and long-lasting antibody responses.MethodsFirst, the HBsAg was formulated in Montanide ISA-720 adjuvant and Naloxone at 5 and 10 mg/kg. The experimental mice were immunized three times at a 2-week interval, and then IL-4, IL-2, TNF-α, and IFN-γ cytokines; long-lasting IgG antibody responses 220 days after the last shot; and IgG1/IgG2a isotypes were assessed by ELISA.ResultsThe HBsAg-Alum group exhibited the highest IL-4 cytokine response among the experimental groups, whereas NLX in HBsAg-MON720 vaccine formulation did not affect cytokine responses. In addition, NLX in Alum-based vaccine suppressed IL-4 cytokine response and increased the IL-2/IL-4 cytokine ratio. Moreover, HBsAg-MON720 was more potent than HBsAg-Alum in the induction of antibody responses, and NLX in Alum- and MON720-based vaccines induced long-lasting antibody responses.ConclusionNLX in Alum-based vaccine decreased IL-4 cytokine response, increased IL-2/IL-4 cytokine ratio, and improved long-lasting humoral immune responses in both vaccine formulations. Therefore, the adjuvant activity of NLX in the vaccine formulation depends on the type of adjuvant and the nature of the antigen in the vaccine formulation.     

成人60μg重组乙肝疫苗免疫效果观察

目的：探讨成人接种60μg重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）的免疫成功率和效果。方法选择我县200名16岁以上已进行乙肝疫苗免疫且没有抗体产生的人群,由深圳康泰生物制品股份有限公司提供60μg重组乙型肝炎疫苗220支,批号20100732-1,一针接种后1个月采血,进行血清免疫学检测。结果接种人群均未出现异常反应。接种一针后1个月,阳转率达98%,抗-HBs几何平均滴度（GMT）为150.88 mIU/mL。结论60μg重组乙型肝炎疫苗安全性良好,免疫成功率高,可用于成人乙肝疫苗加强免疫。     

磷酸钙及不完全弗氏佐剂与乙肝核酸疫苗混合免疫小鼠的研究

目的：观察磷酸钙与不完全弗氏佐剂混合作为乙肝核酸疫苗的佐剂能否提高乙肝核酸疫苗的免疫效果。方法：将乙肝核酸疫苗与磷酸钙形成共沉物,再与不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,不同时间内观察小鼠外周血中ＨＢｓＡｇ与抗一ＨＢＳ的变化,从而观察小鼠的免疫应答。结果：两种佐剂能提高乙肝核酸疫苗的免疫效果。结论：核酸疫苗免疫中使用佐剂值得进一步研究。     

Prevention of intrauterine infection by hepatitis B virus with hepatitis B immune globulin: efficacy and mechanism

Objective　To evaluate the efficacy of hepatitis B immune globulin (HBIG) in preventing intrauterine infection by hepatitis B virus (HBV) and to investigate its mechanism. Methods　Forty-eight pregnant women positive for hepatitis B surface antigen (HBsAg) were randomly divided into 2 groups. The 34 women in the study group were injected with HBIG during pregnancy; the other 14 women were controls. Maternal blood samples were taken before HBIG injection and at delivery. Neonatal blood samples were taken within 24 hours after birth before HBIG and hepatitis B vaccine were given. HBsAg and antibody to HBsAg (anti-HBs) were tested by radioimmunoassay. Results　None of the 35 newborns (including 2 twins) in the study group was positive for HBsAg, but 3 (21%) in the control group were positive (P=0.02). The HBsAg titers in the women in the study group decreased after HBIG injection. Of the 35 newborns in the study group, 32 (91%) were positive for anti-HBs. Conclusion　Systematic injections of HBIG during pregnancy may prevent intrauterine HBV infection, the mechanism of which may be reduction of maternal HBV viremia and production of fetal passive immunity.     

树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

目的 探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响.方法 按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平.结果 除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降.同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组.并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异.结论 通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性.     

细胞因子IL-18基因对Ag85A DNA疫苗诱导产生抗体水平的影响

目的 :研究表达含白介素 (IL) 18基因的质粒 ,对结核分枝杆菌 (MTB)H37Rv Ag85A基因疫苗诱导免疫应答的影响。方法 :从正常人外周血单核细胞 (PMBCs)中提取RNA ,用RT PCR扩增IL 18cDNA ,并克隆入载体pGEM Teasy中。测序证实后 ,亚克隆真核表达载体pcDNA3.1的BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点。将分别表达人IL 18基因的真核表达质粒pcIL18与MTBpcAg85A基因疫苗联合肌注免疫BALB c小鼠 ,共免疫 3次 ,每次间隔 2周。每次免疫后 2周采血 ,分离血清 ,用ELISA检测小鼠血清抗Ag85A抗体的滴度。结果 :用RT PCR成功地从人PMBCs的RNA中扩增IL 18cDNA ,测序结果正确。用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定证实 ,目的基因已插入载体pcDNA3.1中 ,阳性克隆命名为pcIL18。联合应用pcIL18,三次免疫后血清抗Ag85A抗体的滴度明显较单独应用pcAg85A增高。结论 :pcIL18与pcAg85A基因疫苗联合免疫 ,可显著增强Ag85A抗原的特异性体液免疫应答。pcIL18+pcAg85A基因联合免疫是否具有增强Ag85A抗原特异性细胞免疫的作用有待进一步研究     

乙型肝炎表面抗原作为肿瘤免疫攻击靶点的研究

目的　研究乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)作为肿瘤相关抗原用于肿瘤免疫基因治疗的可能性。方法　以 1× 10 6的编码HBsAg的重组腺病毒载体转染的DC(DC HBsAg)、编码增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒载体转染的DC(DC EGFP)、DC以及等体积的 1×PBS静脉免疫B6小鼠 2次 ,每次间隔 1周。于最后一次免疫 1周后 ,每只小鼠皮下接种 7× 10 5B16 HBsAg或等量的B16黑色素瘤细胞。观察各免疫组小鼠皮下肿瘤的生长情况。同法以 1× 10 6的DC HBsAg和DC EGFP、1μg重组HBsAg以及等体积 1×PBS免疫B6小鼠 ,亦于最后一次免疫 1周后 ,处死部分小鼠 ,检测血清中anti HBsAg抗体滴度 ,其余小鼠皮下接种等量的B16 HBsAg ,观察肿瘤生长情况。结果　DC HBsAg疫苗可以诱导出明显强于重组HBsAg疫苗的HBsAg特异的抗瘤免疫 ,但其诱导的体液免疫水平则明显低于重组HBsAg免疫。结论　HBsAg可以作为肿瘤免疫攻击的有效靶点用于抗肿瘤免疫。     

在90例婴儿接种重组酵母乙肝疫苗免疫效果观察及随访

目的:了解珠海市婴儿接种乙肝疫苗的免疫效果,评价防治效果,为制定防治对策提供科学依据。方法:收集本院90例1周岁内按国家免疫规划程序接种完3针重组酵母乙肝疫苗的婴儿作为监测对象,进行乙肝标志物血清学监测。结果:90例监测对象中,抗-HBs阳转率达96%;HBsAg携带率为4.44%;母婴传播阻断保护率为90%;母亲HBsAg阴性婴儿的抗-HBs阳转率和GMT均低于母亲HBsAg阳性的婴儿,两者差异有显著性意义。结论:按国家免疫规划程序接种完3针重组酵母乙肝疫苗抗-HBs阳转率达到较高水平,母亲HBsAg携带状况是婴儿乙肝疫苗抗-HBs阳转率和抗体滴度的主要影响因素之一。