显微操作仪快速分离癌细胞并提取微量RNA的方法

目的建立一种快速分离、纯化肿瘤组织癌细胞并提取微量RNA的方法。方法将肿瘤组织冰冻切片,快速染色,在镜下用显微操作仪从切片上分离癌巢,收集癌细胞,提取RNA并鉴定。结果冰冻切片染色清楚,癌巢分离准确,成功抽提到高质量的RNA。结论显微操作仪可以代替激光捕获显微切割仪进行特定细胞的分离,该方法可用来从少量组织的特定细胞中抽提RNA。     

手工组织显微切割食管癌不同病变阶段细胞提取高质量RNA

目的 建立手工组织显微切割方法准确挖取食管癌不同病变阶段细胞,从中提取高质量RNA,以满足后续基因表达分析的需要。方法 常规制备冰冻组织切片,用无水乙醇一次性脱水固定,显微镜下用1ml注射器针头从组织冰冻切片中分别挖取不同病变阶段的细胞,用TRIzol提取总RNA。结果 手工挖取面积可准确到1／25mm^2,从挖取的细胞中提取出高质量的总RNA,凝胶电泳分析见清晰的18S和28S rRNA带,可满足后续分子水平研究的要求。结论 无水乙醇固定冰冻组织切片可有效保存RNA的完整性,手工组织显微切割能够准确挖取小至1／25mm^2面积的细胞,方法简单、易掌握、易操作,不须特殊仪器设备,适合在一般实验室推广应用。     

野罂粟微量生物碱的提取分离

本文报道了从野罂粟的蒴果中分离得到５个极微量样极性生物碱单体。     

小鼠血浆中微量阿魏酸提取分离方法实验研究

目的考察从含阿魏酸的小鼠血浆中提取分离微量阿魏酸并制成HPLC微量检测样品的不同方法.方法在小鼠血浆中外加二定量的阿魏酸,分别用甲醇法、乙醇法、加热法提取分离小鼠血浆中微量阿魏酸并进行HPLC检测.结果用乙醇法提取分离小鼠血浆中微量阿魏酸的方法最适用于HPLC检测.结论乙醇法简便快速,重现性好,稳定性强,提取分离效果好,是较理想的小鼠血浆中微量阿魏酸提取分离方法;适用于从小鼠血浆中提取分离微量阿魏酸并用于HPLC法测定小鼠体内阿魏酸血药浓度及药代动力学研究.     

一种从微量组织中提取RNA的方法

实验动物模型是生命科学领域内一项非常重要的组成部分，小鼠模型因其再现性好，复制率高而被广泛应用。但由于其体积小、组织小，在对某些病变进行分子水平观察时，尤其对微小病变组织的RNA提取更受到了很大限制。用传统的研钵碾碎组织会使微小组织损失更严重，回收率很低，导致实验无法顺利进行。为此，作者改变了传统的研钵碾碎的方法，     

一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法

目的 建立一种简易可行的激光捕获显微切割样本RNA质控方法.方法 分别提取捕获样本和染色前、染色后1和2 h、持续捕获1和2 h切片及残余组织的RNA,琼脂糖电泳检测;激光捕获显微切割(LCM)样本RNA的产率可通过理论值初步估计.结果 当染色前后、捕获后的切片或切片残余组织RNA质量完好时,捕获样本的RNA质量完好,实时定量PCR亦获得了良好的扩增结果.结论 使用琼脂糖凝胶电泳分别检测染色前后、捕获后的切片或切片残余组织RNA的质量,可以从不同的环节和过程对捕获样本RNA进行间接检测,该方法简单方便有效,并可进一步用于LCM样本蛋白质及DNA等大分子的质控.     

从培养细胞中快速提取总RNA的简便方法

在分子生物学实验中 ,RNA提取常常是令研究人员尤其是初学者头疼的项目 ,因为 RNA酶在自然环境中广泛存在 ,且不易失活 ,所以 ,很难方便地提取纯度和完整性均满足分子生物学实验需要的 RNA分子。尽管目前已有异硫氰酸胍 - Cs Cl超速离心法 [1 ]、TRIzol试剂法 [2 ]等各种各样提取RNA的方法 ,但是 ,这些方法中有些方法步骤繁琐 ,耗时长 ,有些方法所需试剂昂贵 ,消耗大。笔者在实验中使用肝素作为 RNase抑制剂 ,结合 L i Cl特异沉淀 RNA,摸索一种新的从培养细胞中提取总 RNA的快速简便方法。1　材料与方法1.1　试剂1.1.1　 TEL　 …     

Rapid Isolation of Large Amount of Plasma VLDL and LDL by a Two Step Ultracentrifugation

ＲａｐｉｄＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＬａｒｇｅＡｍｏｕｎｔｏｆＰｌａｓｍａＶＬＤＬａｎｄＬＤＬｂｙａＴｗｏＳｔｅｐＵｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎＷＡＮＧＣｈｕｎ－ｂｅｎ（王淳本）；ＦＥＮＧＹｏｕ－ｍｅｉ（冯友梅）；ＺＯＮＧＹｉ－ｑｉａｎｇ（宗义强...     

成人脂肪源多能干细胞的分离与鉴定

目的:分离人脂肪源干细胞,并检测其多能性.方法:用淋巴细胞分离液梯度分离得到低密度成人脂肪源单个核细胞后,用免疫磁珠除去CD45 及GlyA 细胞,通过极限稀释法获得单克隆细胞,体外扩增并鉴定其生物学特性.结果:分离纯化得到的单克隆源细胞体外传35代,超过92%的细胞仍处于细胞周期的G0/G1期;细胞倍增时间约为30 h;细胞的主要表型一直保持为:Flk1 、CD34-、CD45-、CD31-、GlyA-、vWF-、HLAⅠ类抗原-及HLA-DR-;该单克隆源扩增细胞体外维持着自我更新及向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞和肝上皮样细胞分化的潜能.结论:该脂肪源单克隆细胞属于多能干细胞,极有可能作为一种理想的种子细胞,用于治疗一些遗传及退行性疾病.     

成人多组织器官中胚胎后亚全能干细胞的分离与鉴定

目的:探讨成人多种组织中是否存在胚胎后亚全能干细胞.方法:用免疫磁珠从成人的多种组织中分离到CD105 细胞后,通过极限稀释法获得单克隆细胞,体外扩增并鉴定其生物学特性.结果:从成人的多种组织中分离得到的单克隆源细胞体外已传35代,免疫表型与脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞一致,即Flk1及CD44阳性,而CD31、CD34、CD45、HLAⅠ类抗原及 HLA-DR 阴性;细胞形态与脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞相似,呈成纤维样;在对数生长期,细胞倍增时间也与脂肪源Flk1 CD31-CD34-细胞一致,约为30 h;体外可被定向诱导为在细胞形态及表型上与脂肪细胞、成骨细胞、神经细胞及肝上皮样细胞一致的细胞.结论:人体多种组织中均存在胚胎后亚全能干细胞,可用胚胎后亚全能干细胞学说来解释干细胞的可塑性.     

少量外周血提取RNA方法的研究

目的建立从少量外周血中提取RNA的方法,为相关分子生物学及遗传学研究提供条件。方法从13例健康成人各抽取外周血3份,每份0．3ml,一份立即提取RNA,一份放置室温3d,另一份放置-20℃保存21d,提取RNA,测定RNA产量、RNA的完整性及用RT—PCR方法检测其对不同基因的表达。结果从新鲜全血中提取RNA的产量相对较高,与从室温及冰冻保存的全血中提取的RNA的产量相比有统计学意义。三组提取RNA均有良好的完整性,均可用于RT—PCR。结论在用少量外周血标本做RT—PCR等研究时,可以用PreAnlytix方法提取少量血中RNA,为留取标本的方便。也可用室温或冰冻保存的全血标本     

Efficient new method for extraction and isolation of three flavonoids from Patrinia villosa Juss. by supercritical fluid extraction and high-speed counter-current chromatography

Supercritical fluid extraction （SFE） of orotinin, orotinin-5-methyl ether and licoagrochalcone B from Patrinia villosa was performed. The optimization of parameters including pressure, temperature, modifier and sample particle size on yield was carried out using an analytical-scale SFE system. The process was then scaled up by 100 times using a preparative SFE system under the optimized conditions of 25 MPa, 45 degrees C, a sample particle size 40-60 mesh and modified CO2 with 20% methanol. The yield of the preparative SFE was 2.82% （crude extract Ⅰ ） and the combined yield of orotinin, orotinin-5- methyl ether and licoagrochalcone B was 0.82 mg/g of dry sample mass. Then the crude extract Ⅰ was re-dissolved in methanol and methanol soluble fraction （crude extract Ⅱ , 0.17 %） was obtained, which was successfully isolated and separated by a preparative high-speed counter-current chromatography （HSCCC） with a two-phase solvent system composed of n-hexane-ethyl acetate-methanol-water （5 ： 6 ： 6 ： 6, V/V/V/V） by increasing the flow-rate of the mobile phase stepwise from 1.0 to 2.0 ml/min after 3 h. The target compounds isolated and purified by HSCCC were analyzed by high performance liquid chromatography. The separation produced total of 38.2 mg of orotinin at 99.2% purity, 19.8 mg of orotinin-5-methyl ether at 98.5% purity and 21.5 mg of llcoagrochalcone B at 97.6% purity from 400 mg of the crude extract in a one-step separation. The recoveries of orotinin, orotinin-5-methyl ether and licoagrochalcone B were 91.1, 91.6 and 90.3%, respectively, and the chemical structure identification was carried out by UV, IR, MS, ^1 H NMR and ^13C NMR.     

用RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的肠道病毒RNA

目的:应用逆转录PCR技术(RT-PCR)在石蜡包埋的心肌组织切片中检测肠道病毒(柯萨奇病毒B3,CVB3)RNA.方法:用Trizol法从石蜡包埋的心肌组织切片中提取CVB3RNA,用适当的引物合成cDNA第一链,从中取出适量进行聚合酶链反应(PCR).PCR结果用琼脂糖凝胶电泳检测并将PCR产物做核苷酸序列分析.阳性对照采用CVB3感染的人羊膜细胞.结果:用RT-PCR技术可扩增出一条约500 bp(540 bp)的核苷酸片段,测序结果表明是CVB3的一个片段.结论:RT-PCR技术应用于长期保存的石蜡包埋的组织切片进行肠道病毒的检测可获得较满意结果,可将RT-PCR技术用于回顾性研究.     

lncRNA HOTAIR在宫颈癌组织及HeLa细胞中的表达及其生物学功能研究

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR在宫颈癌组织中的表达及其生物学功能.方法 选取简阳市人民医院2014年8月至2016年7月收治并手术治疗的宫颈癌患者47例,采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织及癌旁正常宫颈组织中HOTAIR RNA的相对表达量;以人宫颈癌Hela细胞为研究材料,应用小RNA干扰技术下调宫颈癌Hela癌细胞HOTAIR RNA表达,分别应用CCK-8实验、Wound Healing实验检测小干扰RNA下调HOTAIR表达前后Hela细胞增殖和迁移能力变化情况.结果 HOTAIR在宫颈癌患者癌组织与癌旁正常宫颈组织中的相对表达量分别为(6.89±2.12)与(4.02±1.89),癌组织显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组细胞相比,外源性小干扰RNA可显著敲低Hela细胞中HOTAIR的表达并影响其增殖和迁移(P<0.05).结论 宫颈癌患者癌组织中HOTAIR表达水平高于癌旁正常宫颈上皮;HOTAIR可能参与了宫颈癌细胞增殖和迁移等生物学功能.     

RNA酶(RNase)-胶体金法显示艾氏腹水癌细胞RNA的分布

用RNase-胶体金法显示艾氏腹水癌细胞的RNA分布。在癌细胞核的颗粒区RNase-胶体金颗粒的分布比在纤维部密集,癌细胞质内的RNase-胶体金颗粒分布比较均匀。荷瘤小鼠腹腔连续4次注射大蒜乳剂后,多数艾氏腹水癌细胞的细胞核固缩,胞质内出现大量的空泡,癌细胞核及细胞质内的RNase-胶体金颗粒明显减少。结果表明RNase-胶体金标记是显示肿瘤细胞内RNA含量与分布的比较理想的半定量方法。也表明大蒜乳剂可能具有抑制艾氏腹水癌细胞RNA合成的作用。