染料木黄酮不是通过雌激素受体促进成骨细胞增殖

目的:探讨染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其可能机制,为染料木黄酮防治骨质疏松提供理论依据。方法:实验于2001-05/2003-01在卫生学环境医学研究所完成。无菌条件下用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化乳鼠颅盖骨获得成骨细胞,传代后细胞用于实验。染料木黄酮组分别加入10-5～10-7mol/L染料木黄酮,对照组以吐温20为对照。分别用噻唑蓝比色法和3H-胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞增殖和DNA合成,用反转录-聚合酶链式反应和Westernblot测定雌激素受体mRNA和蛋白表达。结果:①成骨细胞培养基中加入(10-5～10-6mol/L)染料木黄酮,培养48h和72h后噻唑蓝的吸光度值与对照组相比均明显升高[培养48h:(0.39±0.03),(0.45±0.03),(0.46±0.02),(0.19±0.05);培养72h:(0.29±0.04),(0.32±0.02),(0.37±0.02),(0.15±0.04)]。②染料木黄酮组3H-胸腺嘧啶掺入量均显著增加[染料木黄酮组为(101.20±10.06),(844.60±366.90),(512.20±197.6);对照组为(68.67±10.39)],未发现成骨细胞雌激素受体基因和蛋白表达。结论:染料木黄酮不是通过促进雌激素受体基因和蛋白的表达来促进成骨细胞增殖。     

染料木黄酮对乳鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化的影响及其与白细胞介素6的关系

目的:观察染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其相关机制。方法:实验于2001-05/2003-05在卫生学环境医学研究所实验室完成。①成骨细胞培养:无菌条件下分离出生3d的乳鼠颅盖骨,剪碎,加入胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶,用含体积分数为0.1的胎牛血清的F-12培养基重悬,调整细胞浓度后接种于25mL细胞培养瓶,Ⅱ代细胞用于实验。②实验方法:实验分为染料木黄酮组、雌激素组和对照组(吐温20),染料木黄酮剂量分别为10-5,10-6、10-7mol/L,雌激素剂量分别为10-9,10-10mol/L,培养48,72h后,应用MTT和3H-TdR掺入实验观察不同剂量的染料木黄酮和雌激素对成骨细胞活性影响,免疫组化的方法测定白细胞介素6表达。结果:①A570nm值:培养48h,染料木黄酮10-5,10-6,10-7mol/L组分别比对照组增加105%,136%和143%;10-9,10-10mol/L雌激素组分别比对照组增加84%和100%;培养72h,染料木黄酮3个剂量组分别比对照组增加93%,113%和146%,各剂量组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。②3H-TdR掺入量:10-5,10-6,10-7mol/L染料木黄酮组分别比对照组增加0.47,11.29,6.45倍;10-9和10-10mol/L雌激素组增加15.4倍和16.5倍(P<0.05)。③白细胞介素6表达:各组成骨细胞周围均有较强的呈棕色的阳性颗粒,但染料木黄酮组组与对照组相比无明显差别。结论:①10-5～10-7mol/L染料木黄酮和雌激素一样可促进成骨细胞增殖和DNA合成。②染料木黄酮不是通过促进白细胞介素6表达来促进成骨细胞增殖与分化。     

染料木黄酮不是通过雌激素受体促进成骨细胞增殖

目的：探讨染料木黄酮对成骨细胞活性的影响及其可能机制。为染料木黄酮防治骨质疏松提供理论依据。 方法：实验于2001—05／2003-01在卫生学环境医学研究所完成。无菌条件下用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化乳鼠颅盖骨获得成骨细胞。传代后细胞用于实验。染料木黄酮组分别加入10^5 ～10^-7 mol／L染料木黄酮，对照组以吐温20为对照。分别用噻唑蓝比色法和^3H-胸腺嘧啶掺入法测定成骨细胞增殖和DNA合成。用反转录-聚合酶链式反应和Western blot测定雌激素受体mRNA和蛋白表达。 结果：①成骨细胞培养基中加入（10^-5～10^-6mol／L）染料木黄酮，培养48h和72h后噻唑蓝的吸光度值与对照组相比均明显升高[培养48h，（039&;#177;0．03），（0．45&;#177;0．03）,（0．46&;#177;0．02），（0．19&;#177;0．05）；培养72h：（0．29&;#177;0．04），（032&;#177;0．02），（0．37&;#177;0．02），（0.15&;#177;0．04）]。②染料木黄酮组^3H-胸腺嘧啶掺入量均显著增加[染料木黄酮组为（101．20&;#177;10．06），（844．60&;#177;366．90），（512．20&;#177;197．6）；对照组为（68．67&;#177;10．39）]未发现成骨细胞雌激素受体基因和蛋白表达。 结论：染料木黄酮不是通过促进雌激素受体基因和蛋白的表达来促进成骨细胞增殖。     

转化生长因子β1对小鼠巩膜成纤维细胞DNA和胶原合成的影响及其在近视形成中的作用

目的:巩膜成纤维细胞和胶原合成参与巩膜重塑和近视发生中的巩膜变薄,观察转化生长因子β1对其的干预作用。方法:实验于2004-05/10在中山大学中山眼科中心和基础医学院完成。采用3H-胸腺嘧啶核苷掺入试验测定细胞DNA合成,采用3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成,观察转化生长因子β1对巩膜成纤维细胞DNA及胶原合成的影响。并通过电镜观察巩膜成纤维细胞的细胞超微结构改变。结果:①除0.1μg/L组外,转化生长因子β1各浓度组均能明显促进巩膜成纤维细胞3H-胸腺嘧啶摄入(P<0.05),呈一定范围内的剂量依赖性,浓度为100μg/L时达到最大效应。除0.1μg/L浓度组外,其他各组均能明显促进巩膜成纤维细胞3H-脯氨酸摄入(P<0.05),并呈剂量依赖性,在浓度为100μg/L时达到最大效应。②电镜下显示巩膜成纤维细胞核仁明显、边移,内质网增多、轻度扩张。结论:转化生长因子β1可以在一定范围内呈剂量依赖性地促进体外培养的巩膜成纤维细胞DNA合成和胶原合成,当转化生长因子β1表达下调时可使巩膜成纤维细胞成分减少胶原含量下降,形成了巩膜变薄的组织学基础。     

转化生长因子β1对小鼠巩膜成纤维细胞DNA和胶原合成的影响及其在近视形成中的作用

目的：巩膜成纤维细胞和胶原合成参与巩膜重塑和近视发生中的巩膜变薄，观察转化生长因子β1对其的干预作用。方法：实验于2004—05／10在中山大学中山眼科中心和基础医学院完成。采用^3H-胸腺嘧啶核苷掺入试验测定细胞DNA合成，采用^3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成，观察转化生长因子β1对巩膜成纤维细胞DNA及胶原合成的影响。并通过电镜观察巩膜成纤维细胞的细胞超微结构改变。结果：①除0．1μg／L组外，转化生长因子β1各浓度组均能明显促进巩膜成纤维细胞^3H-胸腺嘧啶摄入(P&;lt;0．05)，呈一定范围内的剂量依赖性，浓度为100μg／L时达到最大效应。除0．1μg／L浓度组外，其他各组均能明显促进巩膜成纤维细胞^3H-脯氨酸摄入(P&;lt;0．05)，并呈剂量依赖性，在浓度为100μg/L时达到最大效应。②电镜下显示巩膜成结维细胞核仁明显，边移，内质网增多，轻度扩张。结论：转化生长因子β1可以在一定范围内呈剂量依赖性地促进体外培养的巩膜成纤维细胞DVA合成和胶原合成，当转化生长因子β1表达下调进可使巩膜成纤维细胞成分减不胶原含量下降，形成了巩膜变薄的组织学基础。     

阿司匹林对骨髓间充质干细胞生长的影响及可能的作用途径

目的:观察阿司匹林对骨髓间充质干细胞生长和参与细胞信号传导的β-连环素表达的影响。方法:实验于2003-08/2005-01在阜外心血管病医院再生医学中心完成。选用体质量80g左右SD大鼠24只。体外分离培养SD大鼠的骨髓间充质干细胞,应用3H-胸腺嘧啶核苷掺入法观察不同浓度(1,5,10mmol/L)的阿司匹林作用24h后对骨髓间充质干细胞DNA合成的影响。以免疫印迹法观察上述浓度的阿司匹林作用24h后骨髓间充质干细胞表达总β-连环素的情况和β-连环素的磷酸化水平。结果:①不同浓度(1,5,10mmol/L)的阿司匹林作用于骨髓间充质干细胞24h后,其3H-胸腺嘧啶核苷掺入值明显降低。1,5和10mmol/L的阿司匹林作用后的细胞3H-胸腺嘧啶核苷掺入的每分钟脉冲数明显低于对照组犤(11061.83±1004.37),(6609.33±1432.60),(133.33±51.56),(13080.83±1869.96)min-1,P<0.05～0.01犦。说明阿司匹林抑制了骨髓间充质干细胞的DNA合成。②3H-胸腺嘧啶核苷掺入能力与阿司匹林浓度(1～10mmol/L)呈显著负相关(r=-0.95,P<0.05)。在10mmol/L浓度下,骨髓间充质干细胞的3H-胸腺嘧啶核苷掺入几乎全部被抑制。③免疫印迹法结果表示,阿司匹林浓度与骨髓间充质干细胞33位丝氨酸磷酸化的β-连环素表达呈正相关(r=0.89,P<0.05)。说明阿司匹林的作用使β-连环素的磷酸化水平增高,即促进其降解。④3个浓度的阿司匹林作用24h后骨髓间充质干细胞总β-连环素的表达水平与对照组比较,无明显差异(P>0.05)。因此结合③可知阿司匹林使胞浆内未磷酸化的β-连环素降低。结论:阿司匹林对骨髓间充质干细胞的生长有明显抑制作用,这种作用可能是通过提高骨髓间充质干细胞中β-连环素磷酸化,促进其降解,进而抑制β-连环素参与的Wnt/β-连环素信号通路所致,其抑制作用的发生与阿司匹林的药物浓度相关。     

胎鼠成骨细胞骨保护素及其配体mRNA表达与阿胶强骨口服液含药血清的影响

背景阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效肯定,但其确切作用机制有待探讨.目的观察阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体表达的影响,探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子水平作用.设计完全随机分组,对照实验.材料实验于2003-06/2004-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合骨代谢实验室完成.选用3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为3组,阿胶强骨口服液组和雌激素组及对照组,每组10只.选用清洁级新生SD大鼠12只用于成骨细胞的分离和培养.方法①各组Wistar大鼠灌胃7 d后,制备各组的含药血清.②将清洁级新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液.阿胶强骨口服液组分别加入用培养液稀释为100和500及1 000 g/L浓度的阿胶强骨口服液含药血清;雌激素组分别加入100及1 000 g/L替勃龙含药血清;对照组仅加培养液.同时各组再加入含100g/L小牛血清的培养液,继续培养.③采用四甲基偶氮唑盐比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内骨钙素含量,反转录聚合酶链反应测定胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.④组间比较采用单因素方差分析.主要观察指标胎鼠成骨细胞经阿胶强骨口服液或利维爱含药血清干预后,细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.结果①成骨细胞增殖四甲基偶氮唑盐比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷测定结果阿胶强骨口服液组和替勃龙组各药物血清组明显高于对照组(P＜0.05～0.01),并在500g/L时达到最大效应(P＜0.01),当浓度大于500g/L时,其作用趋于饱和.各浓度阿胶强骨口服液及替勃龙含药血清均可增加成骨细胞骨钙素含量(P均＜0.05).②骨保护素基因mRNA表达阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L时最强,明显高于100和500g/L(P＜0 05),阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显高于对照组(P＜0 01).③RANKL基因表达阿胶强骨口服液组含药血清1 000g/L时最强,明显低于100和500 g/L(P＜O 05),阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显低于对照组(P＜0 01).结论①阿胶强骨口服液对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,并且这种作用呈现剂量依赖性和可饱和性,与替勃龙相近.②阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效机制之一可能与其促进成骨细胞的增殖,调节OPG/RANKL表达有关.     

胎鼠成骨细胞骨保护素及其配体mRNA表达与阿胶强骨口服液含药血清的影响

背景：阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效肯定,但其确切作用机制有待探讨.目的：观察阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体表达的影响,探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子水平作用.设计：完全随机分组,对照实验.材料：实验于2003-06/2004-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合骨代谢实验室完成.选用3月龄Wistar大鼠（雌雄各半）30只,随机分为3组,阿胶强骨口服液组和雌激素组及对照组,每组10只.选用清洁级新生SD大鼠12只用于成骨细胞的分离和培养.方法：①各组Wistar大鼠灌胃7 d后,制备各组的含药血清.②将清洁级新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液.阿胶强骨口服液组分别加入用培养液稀释为100和500及1 000 g/L浓度的阿胶强骨口服液含药血清;雌激素组分别加入100及1 000 g/L替勃龙含药血清;对照组仅加培养液.同时各组再加入含100g/L小牛血清的培养液,继续培养.③采用四甲基偶氮唑盐比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内骨钙素含量,反转录聚合酶链反应测定胎鼠成骨细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.④组间比较采用单因素方差分析.主要观察指标：胎鼠成骨细胞经阿胶强骨口服液或利维爱含药血清干预后,细胞中骨保护素及保护素配体mRNA的表达.结果：①成骨细胞增殖四甲基偶氮唑盐比色分析法及3H-胸腺嘧啶核苷测定结果：阿胶强骨口服液组和替勃龙组各药物血清组明显高于对照组（P＜0.05～0.01）,并在500g/L时达到最大效应（P＜0.01）,当浓度大于500g/L时,其作用趋于饱和.各浓度阿胶强骨口服液及替勃龙含药血清均可增加成骨细胞骨钙素含量（P均＜0.05）.②骨保护素基因mRNA表达：阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L时最强,明显高于100和500g/L（P＜0 05）,阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显高于对照组（P＜0 01）.③RANKL基因表达：阿胶强骨口服液组含药血清1 000g/L时最强,明显低于100和500 g/L（P＜O 05）,阿胶强骨口服液组含药血清1000g/L及雌激素组含药血清100和1 000g/L明显低于对照组（P＜0.01）.结论：①阿胶强骨口服液对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,并且这种作用呈现剂量依赖性和可饱和性,与替勃龙相近.②阿胶强骨口服液治疗骨质疏松疗效机制之一可能与其促进成骨细胞的增殖,调节OPG/RANKL表达有关.     

雌激素对成骨细胞血管内皮生长因子表达的影响

背景:在众多的血管生长因子中,血管内皮生长因子是最有力的血管生成因子,它具有促进血管内皮细胞分裂、增殖,细胞质钙化聚集并能诱导血管生成等作用,且对于成骨细胞、破骨细胞的增殖、分化及功能活性具有重要调节作用.目的:观察雌激素对成骨细胞上血管内皮生长因子表达的影响.方法:取新生48 h大鼠颅盖骨,酶解消化得到成骨细胞,并进行体外培养.采用RT-PCR法测定10-10,10-8,10-6,10-4 mol/L17β-雌二醇作用成骨细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达.结果与结论:RT-PCR检测结果显示,血管内皮生长因子mRNA在原代成骨细胞内稳定表达;半定量分析证实,不同浓度17β-雌二醇组间血管内皮生长因子mRNA的表达量呈现一定规律,随着17β-雌二醇浓度的升高,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐增加,10-6mol/L左右时,血管内皮生长因子mRNA的表达量最高,超过此剂量,血管内皮生长因子的表达下降.提示雌激素促进成骨细胞上血管内皮生长因子的表达上调,并存在剂量依赖性.     

巴戟天多糖及其水提取物对体外培养成骨细胞活性的影响

目的:体外培养成骨细胞,观察巴戟天多糖和巴戟天水提物对成骨细胞活性的影响。方法:实验于2004-09/2005-08在福建省骨伤研究所骨伤分子生物学实验室完成。①提取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,分别用50,100,200g/L巴戟天多糖及50,100,200g/L巴戟天水提物药物血清进行体外培养。对照组用含50,100,200g/L无药血清的DMEM培养液培养。培养72h后进行相关指标检测。②通过MTT方法检测巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞增殖的影响。③检测碱性磷酸酶、细胞内骨钙素、转化生长因子β1基因表达等指标,观察巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞活性的影响。结果:①药物血清对成骨细胞增殖的影响:100g/L巴戟天水提物组和100g/L巴戟天多糖组吸光度大于对照组,差异有非常显著性(P<0.01),且100g/L巴戟天多糖组吸光度高于100g/L巴戟天水提物组(0.4302±0.0193,0.3829±0.0228,P<0.01)。②药物血清对成骨细胞活性的影响:巴戟天水提物组与巴戟天多糖组碱性磷酸酶比活性、细胞内骨钙素含量、转化生长因子β1mRNA相对表达量均高于对照组[碱性磷酸酶比活性:(16.89±2.09),(20.68±2.44),(11.23±2.40)μkat/g;骨钙素含量:(3.74±0.82),(3.97±0.69),(2.63±0.34)ng/106;转化生长因子β1 mRNA相对表达量:2.97±0.37,4.23±0.30,0.07±0.27,P均<0.01]。巴戟天多糖碱性磷酸酶比活性、转化生长因子β1 mRNA相对表达量高于巴戟天多糖组(P<0.01)。结论:巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著促进体外培养成骨细胞增殖、促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶与骨钙素、促进成骨细胞转化生长因子β1 mRNA的表达,并且巴戟天多糖优于巴戟天水提物。     

Dragons as amulets, dragons as talismans, dragons as counselors

In diverse historical and cultural settings, dragons have served as protective amulets or powerful talismans to protect or enhance the powers of those who possess them. The use of such personal symbols in dealing with personal adversity is explored, and methods in which the dragon symbol can he used to promote discussion of feelings, problems, and solutions to life crises are suggested.     

妊娠中肾细胞因子及变异体与肿瘤的关系

Ｍｉｄｋｉｎｅ(ＭＫ)是 1988年Ｋａｄｏｍａｔｓｕ等在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系ＨＭ 1细胞ｃＤＮＡ文库中发现的一种新基因[1] 。根据其来源 ,将其称为妊娠中肾细胞因子。作为一种肝素结合生长 /分化因子 ,ＭＫ促进神经元生长[2 ] ,加强纤溶酶原激活剂活性[3 ] ,参与创伤修复和发展[4 ] 。近年的研究发现 ,ＭＫ过表达与肿瘤的发生发展密切相关[5～ 8] 。 1996年 ,Ｋａｎａｍｅ等在肿瘤组织和细胞中发现一种ＭＫ变异体 ,称为截短型ＭＫ(ｔｒｕｎｃａｔｅｄＭＫ ,ｔＭＫ) [9] 。它仅表达于恶性肿瘤组织 ,而不表达于良性肿瘤组织及正常…