嗅鞘细胞移植治疗自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的研究嗅鞘细胞(OECs)的培养及其对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。方法取36只EAE模型大鼠,将其随机分为移植组18只,假手术组18只。用新生Wistar大鼠嗅球培养出OECs,移植组将OECs悬液注入EAE大鼠的侧脑室;假手术组按以上方法注入等量生理盐水。观察2组大鼠运动功能评分、组织病理学变化以及血管内皮生长因子(VEGF)表达情况。结果(1)OECs移植组运动功能评分从第1天的(6.8±0.7)分降至第20天的(1.1±0.3)分,显著优于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)组织病理切片可见OECs移植组髓鞘修复明显优于假手术组;(3)OECs移植组VEGF的表达从第1天的(22.1±2.8)个/mm2增至第10天的(300.6±5.1)个/mm2,后逐渐降至第21天的(99.0±3.5)个/mm2,在各时间点的表达均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论OECs移植可以促进EAE的髓鞘修复,改善运动功能,同时可使VEGF大量表达,诱导病灶周围新生血管的生成。     

游离血红蛋白对体外培养成年大鼠嗅鞘细胞存活的影响

目的观察不同浓度游离血红蛋白（FHb）对体外培养大鼠嗅鞘细胞（OECs）存活的影响。方法采用成年大鼠（2．5月）嗅球培养OECs，培养第8天用S-100免疫组化鉴定纯度后，将培养的OECs根据加入的FHb浓度分为1，10，50，100μmol／L组及正常对照组，观察不同浓度FHb下OECs形态学变化；培养24h后采用MTT实验检测不同浓度FHb组细胞活力；并用碘化丙啶（PI）和Hocchst33342荧光双染色观察检测细胞死亡。结果大鼠OECs纯度为（72±6）％；MTT试验显示各组细胞活力随血红蛋白浓度的升高而降低；PI／Hoechst33342双荧光染色显示在对照组未见PI染色阳性细胞，各FHb组细胞PI／Hoechst33342比例随血红蛋白浓度增加而升高。结论FHb对OECs有毒性作用且随浓度的增加而增加。     

不同组织来源人嗅神经鞘细胞生物学与免疫学特性的对比研究

目的 比较成人嗅球与嗅黏膜来源的嗅神经鞘细胞(OECs)的生物学与免疫学特性,探讨后者取代前者行细胞或组织移植治疗的可行性. 方法 分别分离、培养、纯化两种来源的OECs,应用MTT法测定细胞活力,结合对比骨髓间充质干细胞(BMSCs)的免疫特性,应用免疫细胞化学染色、定量技术、流式细胞术、双向混合淋巴细胞反应等方法来比较分析不同组织来源的人OECs的生物学与免疫学特性.结果 两种OECs开始分化时间相同,细胞形态基本一致:生长曲线与活力曲线均走行一致,曲线大部分重合;免疫细胞化学p75~(NTR)染色两者均呈阳性;流式分析两种OECs均不表达CD34与B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、HLA-DR、CD40、CD40L等移植免疫标志:嗅球源性嗅神经鞘细胞组双向混合淋巴细胞反应抑制率(51.18%±6.01%)与嗅黏膜源性嗅神经鞘细胞组(51.00%±5.87%)、BMSCs组(52.79%±3.12%)比较,差异均无统计学意义(P<0.05).结论 成人嗅球与嗅黏膜来源的OECs在生物学与免疫学特性方面基本一致,可考虑使用来源更为便捷的成人嗅黏膜源性OECs代替嗅球源性OECs行细胞或组织移植治疗.     

银杏内酯K通过PI3K/Akt/mTOR通路促进血管生成改善缺血性卒中

目的 探究银杏内酯 K（Ginkgolide K ，GK）通过磷脂酰肌醇 -3- 激酶（PI3K）/ 蛋白激酶 B （Akt）/ 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对缺血性卒中小鼠血管内皮生长因子（VEGF）表达 和脑血管生成的作用。方法 将 40 只 C57BL/6 小鼠随机分为对照组、大脑中动脉闭塞（MCAO）组、低 剂量 GK（GK-L）组（3.5 mg/kg）、中剂量 GK（GK-M）组（7 mg/kg）和高剂量（GK-H）组（14 mg/kg），每组各 8 只。建立 MCAO 模型和氧葡萄糖剥夺发（OGD）体外模型；采用改良后的神经系统严重程度评分（mNSS） 评估法检测小鼠神经功能缺损；2，3，5- 三苯基氯化四氮唑（TTC）染色检测小鼠脑缺血面积；免疫荧 光染色检测小鼠梗死灶周围皮质血管生成和星形胶质细胞覆盖。培养 hCMEC/D3 细胞，分为对照组， OGD 组、OGD+CK 组、OGD+LY 组（LY 为 PI3K 信号通路抑制剂）和 OGD+GK+LY 组，采用细胞计数试 剂盒 -8（CCK-8）检测内皮细胞活性；Western blot 检测内皮细胞缺氧诱导因子 1α（HIF-1α）、VEGF 和 PI3K/Akt/mTOR 通路相关基因蛋白表达；细胞划痕实验检测内皮细胞迁移能力；血管形成实验检测内 皮细胞管腔形成能力。结果 与 MCAO 组［（5.37±1.25）分、（11.99±1.72）%］比较，GK-M 组和 GK-H 组 小鼠 mNSS 评分［分别为（3.37±1.32）、（2.23±0.38）分］和脑缺血面积［（4.75±0.89）%、（2.42±0.42）%］ 均 显 著 降 低（P＜ 0.05）。 与 MCAO 组 EdU+ /CD31+ 细 胞 数、EdU+ /GFAP+ 细胞数和星形胶质细胞覆盖 率［分 别 为（3.33±0.58）个、（4.33±1.53）个、（69.20±5.60）%］比 较，GK 组 小 鼠 EdU+ /CD31+ 细胞数 ［（13.67±2.08）个，t=3.576］、EdU+ /GFAP+ 细 胞 数［（8.33±1.53）个，t=6.008］和 星 形 胶 质 细 胞 覆 盖 率 ［（82.26±7.77）%］显著升高（均P＜ 0.05）。与对照组细胞活力、HIF-1α、VEGF 蛋白表达、Akt 和 mTOR 磷酸化水平［分别为（100.31±3.01）%、（0.09±0.03）、（0.13±0.03）、（0.20±0.04）、（0.18±0.03）］比较，OGD 组细胞活力［（52.37±9.06）%］、HIF-1α（0.17±0.02）和 VEGF 蛋白表达（0.18±0.03）、Akt 和 mTOR 磷酸 化水平［（0.28±0.06），（0.38±0.05）］均显著升高（均P＜ 0.05）；与 OGD 组比较，OGD+GK 组细胞 HIF-1α （0.22±0.03）和 VEGF 蛋白表达（0.23±0.03）、Akt 和 mTOR 磷酸化水平［（0.48±0.09），（0.52±0.05）］、细胞 活力［（61.07±3.48）%］、迁移率［（85.26±11.03）%］和管状结构数量［（81.97±5.79）%］均显著升高（均 P＜0.05），OGD+LY组则表现出相反变化；PI3K信号通路抑制剂LY294002可逆转GK对OGD细胞的影响。 结论 GK 通过 PI3K/Akt/mTOR 信号通路上调 VEGF 表达促进脑血管生成，改善小鼠缺血性卒中。     

黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用

目的 探讨黏附分子CD44在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）发病中的作用。方法 将20只大鼠随机分为正常对照组及EAE组,EAE组采用粗制髓鞘碱性蛋白（MBP）抗原注入大鼠后足掌皮下（0.2 ml/100 g）制作EAE模型,观察大鼠的发病情况及病理表现;并采用免疫组织化学法检测两组大鼠脑组织CD44的含量。结果 正常对照组大鼠未发病,EAE组大鼠均有不同程度的发病。HE染色后,光镜下观察,正常对照组大鼠脑和脊髓无异常;EAE组大鼠可见脑及脊髓实质内小血管充血,小静脉周围有大量炎性细胞浸润,血管周围白质脱髓鞘改变。免疫组化显示,正常对照组大鼠脑和脊髓组织未发现CD44阳性细胞;EAE组大鼠中枢神经系统（CNS）白质及灰白质交界处可见大量CD44阳性细胞。结论 EAE模型中存在黏附分子CD44的高表达,其对EAE的发病可能起到促进作用。     

应用供体抗原特异性CD4+CD25+ Treg细胞延长大鼠移植肾的存活

背景：随着磁分选技术的完善,体外分选、扩增足量的对移植抗原具有特异性的细胞已成为可能,但就其在体内应用剂量及免疫耐受的效能问题目前鲜有报道。 目的：探索供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞在体内应用诱导移植免疫耐受的量效关系。 方法：以SD大鼠为供体、Wistar大鼠为受体,建立同种异体肾移植动物模型;体外分选、富集Wistar大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞,并诱导其对SD大鼠供体抗原的特异性表型;根据不同数量(2×105、5×105、1×106、2×106)供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞在肾移植中单剂量尾静脉注射,并以未注射组为对照。术后15 d分析移植肾脏存活状况。术后4,9,15 d采血检测各组肌酐水平,同时进行移植肾脏病理检查,按照Banff Schema标准进行诊断,并根据Watanabe的方法进行半定量评分。 结果与结论：术后15 d内对照组死亡率最高83.3%,2×105组次之66.7%,2×106组为58.3%,5×105组为33.3%,1×106组则全部存活;各实验组术后4,9,15 d血肌酐水平均明显低于对照组(P < 0.05,P < 0.01);术后第9,15天,2×105组、5×105组血肌酐水平均明显高于1×106组、2×106组(P < 0.05);术后第4,9,15天移植肾脏病理检查的半定量评分结果显示,各时间段5×105组、2×105组与对照组间差异无显著性意义,各时间段1×106组与2×106组优于对照组 (P < 0.05)。结果初步证实供体抗原特异性CD4+CD25+Treg细胞受体内应用能够改善大鼠移植肾功能,延长移植肾存活时间,1×106为相对理想的单次应用剂量。     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内CD4 、CD8、CD28和CD152表达的影响

目的 探讨左旋咪唑（Levamisole,LMS）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152表达的影响及其意义。方法 采用临床症状评分、病理学检查和流式细胞术，观察LMS处理和非处理条件下豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE临床表现、病理改变及脊髓内单个核细胞CD4、CD8、CD28及CD152分子表达水平。结果 LMS同时给药促发组和预处理组EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28表达水平明显高于非LMS处理的EAE模型组（P〈0．01），病理变化更加明显。而CD8、CD152表达水平差异无统计学意义。结论 LMS可促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞CD4、CD28的表达，提示LMS上调CD4、CD28的表达可能与LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病有关。     

雌二醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎调节性T细胞及细胞因子的影响

目的 探讨雌二醇(E2)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠调节性T细胞及细胞因子的影响.方法 将大鼠随机分为E2干预组和EAE对照组,记录其临床评分, 测定外周血CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+ T细胞水平以及TNF-α、IL-12表达水平,并观察腰膨大处炎细胞浸润情况.结果 (1)E2干预组发病率仅为30% ,低于EAE对照组(100%), 且发病高峰延迟;临床评分E2干预组[(1.8±1.3)分]比EAE对照组[(3.4±0.5)分]低, 差异有统计学意义(P<0.05);(2)E2干预组CD4+CD25+/CD4+ T细胞比值 (5.6±0.9)、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+ T细胞比值(9.3±1.0)均高于EAE对照组[分别为(4.4±0.9)与(7.6±0.8)], 差异有统计学意义(均P<0.05);(3)血管"套袖"样改变EAE对照组较E2干预组明显;(4)E2干预组TNF-α及IL-12表达明显低于EAE对照组, 差异有统计学意义(均P<0.05).结论 E2可能通过改变调节性T细胞比例及细胞因子表达参与EAE免疫调节过程, 推测EAE临床症状缓解可能也与此机制相关.     

用于移植的嗅鞘细胞的纯化培养方法研究

目的 探讨移植用成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方法.方法 取成年SD大鼠嗅球,将分离消化所得细胞悬液进行接种.然后分别于接种后2 h、6 h和18 h 3个时间点进行单步骤差速贴壁法去除成纤维细胞,纯化嗅鞘细胞,纯化培养约11 d时采用神经生长因子受体P75(NGFRP75)和碘化丙啶(PI)双染OECs并对其纯度及细胞数量进行免疫荧光鉴定分析.结果 纯化培养11 d后在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,数量级达106/mL,形态以梭形、双极或三极突起为主,亦有少量多极或单极细胞.2 h、6 h和18 h组嗅鞘细胞纯度分别为(53±5)%、(73±8)%和(69±13)%,组间差异有统计学意义(F=11.766,P<0.001). 结论分别经2、6、18 h单步骤差速贴壁法纯化的OECs在纯度和数量级上均可满足移植用细胞的要求,且方法简单、经济、快捷.     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后炎性细胞因子表达的调节*☆

目的：近来研究表明，骨髓间充质干细胞具有独特的免疫调节特性，实验拟观察骨髓间充质干细胞移植对梗死心脏炎性细胞因子表达的影响，以进一步认识干细胞治疗心肌梗死的可能机制。 方法：实验于2006-11/2007-08在中南大学湘雅二医院心内科实验室和实验动物中心完成。①实验材料：清洁级SD大鼠由中南大学湘雅二医院实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：提取体质量120~150 g SD大鼠骨髓间充质干细胞，以溴脱氧尿嘧啶核苷标记。取体质量180~200 g 雄性SD大鼠，结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型，将模型随机分为3组：假手术组：仅穿线不接扎血管；PBS溶液注射组：模型制作成功即刻心外膜注射PBS液；干细胞移植组：模型制作成功即刻心外膜注射溴脱氧尿嘧啶核苷标记的骨髓间充质干细胞，每组8只。③实验评估：于术后1 ，28 d行心脏超声检测，测量大鼠射血分数、左室短轴缩短率和左室舒张末期直径以评价心脏功能，并进行免疫组织化学和western blot检测，分析移植细胞存活和炎性细胞因子的表达情况。 结果：24只建模成功大鼠均进入结果分析。①术后28 d，心脏超声检测显示与注射PBS溶液相比，移植骨髓间充质干细胞可以延缓心室重构，改善心功能[射血分数：（30.76±3.39）%，（24.06±4.71）%，P < 0.05；左室短轴缩短率：（29.33±4.87）%，（23.05±3.94）%，P < 0.05；左室舒张末期直径：（6.45±0.47）mm，（7.81±0.31）mm，P < 0.05] 。②免疫组织化学检测显示，心肌梗死后即刻心外膜移植的骨髓间充质干细胞可以在宿主体内存活。③ 与注射PBS溶液相比，骨髓间充质干细胞移植可以明显降低肿瘤坏死因子α、白细胞介素6表达（P < 0.05） ，同时增加白细胞介素10表达（P < 0.05) 。western blot检测与免疫组织化学结果一致。 结论：骨髓间充质干细胞移植可以延缓心肌梗死大鼠心室重构，同时下调大鼠梗死心脏促炎细胞因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6表达，上调抗炎细胞因子白细胞介素10表达。     

5000/高氧液对大鼠肝移植的保护作用研究

目的 探讨高氧液对大鼠肝移植的保护作用。方法 40只SPF级Wistar 大鼠,随机分成2组,实验组实验高氧液灌注,对照组使用普通林格液灌注,比较两组灌注末、术后第1天、7天透明质酸、转氨酶、CD8+CD28-T细胞的变化,比较两组术后肝组织病理急性排斥评分。结果 术前两组无统计学差异,术后实验组透明质酸（87.9±6.3;65.4±5.1）、转氨酶（130.3±20.8;87.44±7.2）低于对照组（351.4±53.9;105.5±49.6）、（283.9±24.7;111.7±27.7）,CD8+CD28-T细胞（11.84±0.73; 14.76±0.62）高于对照组（6.22±0.2; 8.66±0.29）,（p<0.05）结论高氧液可减轻缺血再灌注损伤,对大鼠肝移植有一定的保护作用。     

逆转录病毒介导神经营养因子-3基因转染嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的 研究逆转录病毒介导神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)基因转染的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs),即OECs-NT-3基因工程细胞对自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)的髓鞘及轴突的修复作用并探讨其机制.方法 构建OECs-NT-3基因工程细胞,将其移植入EAE大鼠的侧脑室,观察其在体内的迁徙、分布特点、NT-3mRNA转录水平,从组织病理变化、神经突触素灰度值、功能学评分等方而对髓鞘及轴突修复进行评价.结果 (1)OECs-NT-3细胞在EAE体内存活,可广泛迁徙至病灶远端且至少可以持续存活4周;(2)转基因组NT-3 mRNA转录水平为(212.3±16.1)×10-2,明显高于OECs组[(1.23±0.13)×10-2]及对照组[(1.98±0.19)×10-2],差异有统计学意义(t=-31.161、-31.928,P<0.01);(3)转基因组髓鞘完整,炎性病灶数少于OECs移植组及对照组,差异有统计学意义(t=11.388～22.728,P<0.01);(4)转基因组突触素灰度值(80.02±7.10)明显高于OECs移植组(53.65±8.90)及对照组(39.08±7.30),差异有统计学意义(P<0.01).结论 OECs-NT-3细胞在EAE大鼠体内稳定、高效表达NT-3,可促进EAE的髓鞘修复及轴突再生.     

载脂蛋白E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响

目的 探讨载脂蛋白(Apo)E拟肽对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑脊髓CD4+、CD8+T淋巴细胞表达的影响.方法 40只C57BL/6J雌性小鼠随机分成EAE组、EAE治疗组、正常对照组、正常治疗组;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白制备的完全抗原诱导EAE模型小鼠.免疫诱导次日,EAE治疗组和正常治疗组小鼠每隔2d皮下注射ApoE拟肽,EAE组和正常对照组小鼠皮下注射等量的生理盐水.免疫诱导后各组每日进行神经功能缺损评分(NDS);35 d后用免疫组化检测各组小鼠脑脊髓CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达.结果 EAE治疗组NDS的峰值及终末评分显著低于EAE组(均P＜0.05).与正常对照组及正常治疗组比较,EAE组大脑、脑干和脊髓中CD4+T细胞数明显增高,大脑CD8+T细胞数明显增高(均P＜0.05).EAE治疗组小鼠大脑、脑干、脊髓组织CD4+T细胞表达显著低于EAE组(均P＜0.05);两组间CD8+T细胞表达水平的差异无统计学意义.结论 ApoE拟肽可抑制CD4+T细胞的表达,减轻免疫炎症反应,对EAE小鼠有神经保护作用;而对CD8+T细胞的表达无明显影响.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血CD4+CD25+T细胞的研究

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型血CD4 CD25 T细胞的变化及其意义。方法以豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)为抗原免疫Wistar大鼠,建立EAE的动物模型,采用三色流式细胞仪检测EAE和正常大鼠外周血CD4 CD25 T细胞的细胞数并进行比较;通过观察大鼠行为学及脑和脊髓的病理改变确定EAE。结果EAE模型大鼠的成功率为48.9%,EAE大鼠外周血CD4 CD25 T淋巴细胞数(5.29±4.00)显著低于正常对照组(12.61±2.24)(P<0.01)。结论EAE大鼠血CD4 CD25 T细胞数明显减少,CD4 CD25 T淋巴细胞对神经系统脱髓鞘疾病是一种保护因子。     

嗅鞘细胞移植联合督脉电针治疗大鼠前脊髓综合征

背景：电针在脊髓损伤的康复过程中有其一定的临床作用,同时以嗅鞘细胞为代表的细胞治疗在部分患者的康复过程中亦起到了一定的作用,两者是否具有协同应用尚不清楚。 目的：观察督脉电针联合嗅鞘细胞移植对前脊髓综合征大鼠神经营养因子3水平及P75NTR表达的影响。 方法：将40只成年大鼠随机分为对照组、督脉电针组、嗅鞘细胞移植组、督脉电针+嗅鞘细胞移植组,经嗅鞘细胞移植和督脉电针治疗2周后 ELISA法检测脊髓组织神经营养因子3水平,免疫组化检测P75NTR的表达。 结果与结论：督脉电针+嗅鞘细胞移植组神经营养因子3水平较对照组及其他实验组高(P < 0.05);嗅鞘细胞移植组和督脉电针+嗅鞘细胞移植组的脊髓损伤部位以及相邻的组织内均有P75NTR表达,且督脉电针+嗅鞘细胞移植组阳性表达明显较嗅鞘细胞移植组多。实验证实督脉电针联合嗅鞘细胞移植能够明显增高大鼠前脊髓综合征邻近组织的神经营养因子3水平;督脉电针可以有效促进移植的嗅鞘细胞在宿主内存活。     

黏附分子CD44介导的雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠保护作用的研究

目的 探讨雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠的保护作用及其与黏附分子CD44的关系。方法 将40只大鼠随机分为4个组：正常对照组、EAE组、大小剂量雌激素治疗组,每组10只。观察大鼠发病情况及脑组织病理变化,并采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织CD44的含量。结果 EAE组及大小剂量雌激素治疗组大鼠均有不同程度的发病,但大小剂量雌激素治疗组EAE临床症状均较EAE组轻。免疫组织化学显示,EAE组及大小剂量雌激素治疗组大鼠中枢神经系统（CNS）白质及灰白质交界处可见不同程度的CD44阳性细胞表达。图像分析结果显示,与EAE组比较,大小剂量雌激素治疗组CNS白质CD44表达水平均明显降低（P<0.01）;与小剂量雌激素治疗组比较,大剂量雌激素治疗组CNS白质的CD44表达水平显著降低（P<0.01）。结论 多发性硬化动物模型EAE大鼠中存在黏附分子CD44的高表达,雌激素可能通过抑制黏附分子CD44的表达而发挥对EAE大鼠的保护作用。     

有自杀企图史的抑郁症住院患者临床特征 研究

目的 探讨沉默信息调节因子 1（SIRT1）在癫痫中对小胶质细胞及炎症因子的影响及作 用机制。方法 建立氯化锂 - 匹罗卡品致痫大鼠模型,免疫组化观察各组（对照组和癫痫组）大鼠脑组 织内小胶质细胞活化;采用脂多糖（LPS）建立小胶质细胞活化模型,构建 pcDNA-SIRT1 和 si-SIRT1 载 体,转染至大鼠小胶质细胞中。定量即时聚合酶链反应（qRT-PCR）测定大鼠海马组织及小胶质细胞中 SIRT1 表达,Western blot 检测小胶质细胞的活化标志物 Iba1 和核因子 -κB（NF-κB）通路相关蛋白（p65 和 IκBα）的蛋白表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测促炎因子［白细胞介素 1β（IL-1β）、白细 胞介素 6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）］的表达水平。结果 与 Control 组比较,癫痫大鼠海马组织中 SIRT1 mRNA 表达量显著降低（P＜ 0.05）,Iba1 蛋白表达量显著增加（P＜ 0.05）,且对照组 CA1、CA2 区 Iba1 阳性细胞数分别为（180±21）、（190±18）/mm2 ,癫痫组 CA1、CA2 区 Iba1 阳性细胞数分别为（412±35）、 （470±37）/mm2 ,两组比较差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。同样,与 Mock 组比较,LPS 活化小胶质细 胞中 SIRT1 表达水平显著降低, Iba1 蛋白表达水平显著增加,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。转染 pcDNA-SIRT1及si-SIRT1至LPS活化的小胶质细胞中, LPS+pcDNA-SIRT1组IL-1β［（50.0±3.3）ng/L］、IL-6 ［（55.0±3.2）ng/L］和TNF-α［（56.1±3.0）ng/L］表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组（均P＜ 0.05）; LPS+si-SIRT1 组中 IL-1β［（98.2±4.3）ng/L］、IL-6［（108.1±4.5）ng/L］ 和 TNF-α［（124.5±4.1）ng/L］表达 水平显著高于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均P＜ 0.05）;同时 LPS+pcDNA-SIRT1 组 NF-κB p65 的表达水平 显著低于 LPS 组和 LPS+pcDNA-NC 组（均P＜ 0.05）,IκBα 的表达水平显著高于 LPS 组和 LPS+pcDNANC 组（均P＜ 0.05）;而 LPS+si-SIRT1 组 NF-κB p65 的蛋白表达水平显著高于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均 P＜ 0.05）,IκBα 的表达水平显著低于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均P＜ 0.05）。加入 NF-κB 通路激活剂 Aconine 后,与 LPS+pcDNA-SIRT1 组比较,LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine 组大鼠中Iba1表达水平显著升高 （P＜0.05）;LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中IL-1β［（72.2±4.3）ng/L］、IL-6［（80.1±4.0）ng/L］和TNF-α ［（87.2±4.5）ng/L］表 达 水 平 显 著 高 于 LPS+pcDNA-SIRT1 组 的［（50.1±2.3）］ng/L、［（55.0±3.4）］ng/L 和 ［（56.3±4.9）ng/L］（均P＜ 0.05）。结论 SIRT1 可能通过抑制 NF-κB 通路活性来抑制癫痫大鼠小胶质 细胞的作用。     

嗅鞘细胞脑出血大鼠脑内移植的运动神经功能改变和形态学研究

目的 探索嗅鞘细胞脑出血大鼠脑内移植后运动神经功能及形态学改变.方法 差速贴壁法培养出较高纯度的嗅鞘细胞,用PI和P75荧光双染鉴定细胞,制作30只脑出血大鼠模型,分A、B、C 3组.A组10只为单纯脑出血组;B组10只为培养液移植组;C组10只为嗅鞘细胞移植组.3组大鼠分别在术前1h,术后7d、14d、21d、28d进行运动功能学评分,并于细胞移植后第4周、第8周取脑组织做冰冻切片,通过免疫荧光检测移植细胞在大鼠脑内形态学改变.结果 试验中分离、培养的嗅鞘细胞经标记移植入大鼠脑内后,经免疫荧光检测证实能在血肿腔边缘分化为成熟神经元细胞和星形胶质细胞.对3组大鼠术后进行评分,细胞移植组从第21天起其功能恢复明显优于其它两组(P<0.001).结论 嗅鞘细胞在脑出血大鼠脑内能存活并分化为成熟神经元及星形胶质细胞,能促进运动神经功能恢复.

Abstract：

Objective The olfactory ensheathing cells ( OECs) transplanted into cerebral hemorrhage mode to alter motor nerve function and the study of morphology. Methods Get high purification of olfactory ensheathing cells by using the method of the differing rates of attachment of the various cells type, use the technology of fluoresceinstain identificated the OECs by both PI and P75 ,make 30 rats of cerebral hemorrhage mode,and separate 3 groups. Ten rats in the A group are the blank group;Ten rats in the B group are the DPBS transplanting group;Ten rats in the C group are the OECs transplanting group. The three groups are all scored in 1 hour before operation and 7 days, 14 days,21 days and 28 days after operation by Rosenberg GA method. Evaluate the contribution of OECs transplanting curing rat cerebral hemorrhage by statistics method. And get brain of rat to make frozen section in 4weeks,8weeks after operation. Detection the morphology of transplanting cells by immunofluorescence technique. Results We get in experiment transplantd in cerebral hemorrhage rats brain. We found these OECs differentiating to riped neuron cell and horizontal cell unround cavity of blood tumor by immunofluorescence way. After scoring the three groups by Rosenberg GA method and statisticing them. We found that olfactory ensheathing cells injected significantly reduced motor deficits compared with control groups which cerebral hemorrhage after 21 days (P <0.001). Conclusions The OECs survival in the brain of rat cerebral hemorrhage, then differentiating to ripe neuron cell and horizontal cell. The treatment of OECs transplanting for rat cerebral hemorrhage could promote recovery of motor nerve function.     

神经梅毒患者外周血T淋巴细胞亚群水平检测 及临床意义

目的 探讨外周血 T 淋巴细胞亚群 CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 水平和 CD4+ /CD8+ 比值识别早期 神经梅毒的作用。方法 回顾性分析 2020 年 2 月至 2022 年 1 月杭州市西溪医院神经内科因梅毒就诊 的 100 例患者的临床资料,根据有无神经系统累及分为神经梅毒组和非神经梅毒组,每组 50 例。选取 同期我院的 50 名健康体检者作为对照组。比较患者和对照组受试者 CD3+ 、CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞水 平和 CD4+ /CD8+ 比值。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析外周血 T 淋巴细胞亚群识别早期神经梅毒 的价值。结果 神经梅毒组、非神经梅毒组和对照组的 CD4+ T 淋巴细胞水平分别为（30.48±4.08）%、 （32.16±4.08）%、（34.50±4.49）%,CD4+ /CD8+ 比值分别为（1.25±0.19）、（1.35±0.25）、（1.47±0.23）,3 组比 较差异有统计学意义（F=11.428、11.970;P＜ 0.01）;两两比较,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。将神 经梅毒组患者分为早期组（n=30）、晚期组（n=20）并与对照组进行比较,结果显示 CD4+ T 淋巴细胞水平分 别为（31.23±4.28）%、（29.35±3.57）%、（34.50±4.49）%,CD4+ /CD8+ 比值分别为（1.29±0.21）、（1.18±0.13）、 （1.47±0.23）,3 组比较差异有统计学意义（F=12.289、15.350;P＜ 0.01）。晚期组的 CD4+ T淋巴细胞水 平、CD4+ /CD8+ 比值低于对照组,CD4+ /CD8+ 比值低于早期组,差异有统计学意义（P＜ 0.05）。CD4+ / CD8+ 比值预测神经梅毒的 ROC 曲线下面积为 0.725（95%CI：0.645～0.805）,高于 CD3+ 、CD4+ 和 CD8+ 。 结论 CD4+ T 淋巴细胞水平或 CD4+ /CD8+ 比值下降高度提示神经梅毒,CD4+ /CD8+ 比值更有助于早期识 别神经梅毒。     

CD20分子在移植肾切除标本中的表达

背景：肾移植是治疗肾功能衰竭最有效的手段，如何提高移植物及受者的长期生存率和生存质量仍然是肾移植的重要课题。B细胞群的浸润与移植肾失功间的关系尚处于争论阶段。 目的：分析CD20+ B细胞浸润与移植肾存活时间的相关性，探讨浸润B细胞在移植肾排斥反应病变中的作用。 设计、时间及地点：回顾性病例分析，于1989-01/2006-12在解放军总医院第二附属医院器官移植研究室完成。 对象：纳入40例难治性排斥反应导致移植肾失功并行移植肾切除的患者。 方法：切除的移植肾组织经石蜡包埋、切片后行免疫组化染色，检测肾组织中CD20的表达情况，CD20+ B细胞群在肾间质呈弥漫性浸润者视为阳性。计算移植肾的存活时间。 主要观察指标：统计分析CD20表达对移植肾存活时间的影响及其与移植肾排斥反应导致失功的相关性。同时统计分析性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、术后高血压以及是否为二次移植对CD20表达的影响。 结果：①40例切除的移植肾组织免疫组化染色结果中，CD20+ 19例(48%)。②失功的移植肾中CD20的表达与其性别、年龄、冷缺血时间、热缺血时间、免疫抑制方案、术后高血压以及是否为二次移植不相关。③40例移植肾的存活时间最长为110个月，最短为2周，平均为35个月。CD20+组移植肾存活时间明显短于CD20-组[（34.9±5.4），（45.8±5.9）个月（P﹤0.05）]。 结论：CD20+的B细胞群浸润可使移植肾的存活时间减少，导致移植肾预后较差。