丹参酚酸对人K562细胞株增殖抑制的体外研究

【目的】研究丹参酚酸B对人(K562)细胞系生长的抑制效应,并探讨其作用机制。【方法】用不同浓度的丹参酚酸B加入体外培养K562细胞中,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化;用MTT法检测丹参酚酸B的细胞毒作用;用Hoechest33342和PI双荧光染色法检测细胞凋亡。【结果】丹参酚酸B明显抑制K562细胞生长;IC50值为2.5×10-5mol/L;其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系;凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关。【结论】丹参酚酸B能有效抑制K562细胞的增殖。     

参附注射液、高乌甲素注射液诱导白血病细胞株HL-60分化、凋亡的研究

[目的] 观察参附注射液及高乌甲素注射液诱导白血病细胞株 HL-60 分化、凋亡的作用,初步验证温阳法治疗肿瘤的理论.[方法] 采用人类急性白血病细胞株 HL-60 为模型,设参附注射液组 (终浓度分别为 12.5、25、50、100μL/mL),高乌甲素组 (终浓度分别为 25、50、100 μL/mL),亚砷酸钠对照组 (终浓度分别为 0.25、2、15 μmol/L) 及阴性对照组;检测细胞增殖、细胞形态、硝基四氮唑蓝 (NBT) 还原能力、细胞周期分布、凋亡率等指标.[结果] 参附注射液作用后 HL-60 细胞增殖受抑制,高乌甲素注射液对 HL-60 的生长无抑制作用;经药物处理 60 h 后 HL-60 细胞均出现程度不同以凋亡为主的形态改变;低浓度参附注射液 (12.5 μL/mL)、高乌甲素注射液(50μL/mL) 作用60 h 后 HL-60细胞NBT 还原能力增强,而其他浓度组NBT还原能力反未增强;药物处理 60 h后,100 μL/mL 高乌甲素液及 25.50 μL/mL 参附液流式细胞仪检测直方图上呈现亚二倍体凋亡峰,凋亡率呈不同程度增高.[结论] 参附注射液、高乌甲素注射液对人类急性白血病细胞株 HL-60 具有不同程度的诱导分化和凋亡的双重作用,为温阳法治疗肿瘤提供了一定的理论依据.     

青蒿素及其衍生物抑制K562细胞生长作用比较

【目的】比较青蒿素、青蒿琥酯、双氢青蒿素对K562细胞生长的抑制作用。【方法】体外培养白血病K562细胞,3种药物作用于细胞,观察不同浓度的药物作用不同时间后,细胞数目的变化。【结果】3种药物在浓度为10-4、10-5、10-6mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性,且不同药物其抑制作用强弱有明显差异。【结论】青蒿素、双氢青蒿素及青蒿琥酯可以抑制肿瘤细胞K562的生长,且相同浓度下青蒿琥酯的作用最强。     

叶酸对白血病细胞周期分布的影响

目的研究叶酸(FA)影响白血病细胞增殖和细胞周期分布,以探讨FA抑制白血病细胞增殖的机理.方法体外培养白血病细胞株HL-60、K562.利用台盼蓝拒染法进行细胞计数,流式细胞术检测细胞周期分布.结果 10nmol/L和300nmol/L的FA对HL-60细胞无显著性抑制.而100nmol/L FA对HL-60细胞作用48h后出现显著性抑制作用.不同的是,10nmol/L和100 nmol/L FA对562细胞具有显著性促进作用.FCM结果提示:100nmol/L FA对HL-60细胞的抑制是由于G1期阻滞所致,而对于K562细胞则具有促进增殖生长的作用.结论 FA的作用机制可能类似于Vit B12,具有促癌和抗癌的双重作用.我们的结果提示不能单纯地给白血病患者补充FA,而应与其它抗癌药物结合共同使用,以达到最佳治疗效果.     

通关藤提取物对白血病细胞的抑制作用及诱导凋亡研究

目的:探讨通关藤提取物对白血病细胞的抑制和凋亡作用。方法:以通关藤提取物处理白血病HL-60细胞、K562细胞,MTT法检测其对2种细胞的抑制作用,Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡程度,JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm) 水平。结果:通关藤提取物对HL-60细胞的抑制作用强于K562细胞,增加药物作用的浓度和时间可以增强其对K562细胞的抑制作用。较高浓度的通关藤提取物能降低细胞内ΔΨm,并促进HL-60和K562细胞的凋亡。结论:通关藤提取物对不同白血病细胞有不同程度的抑制作用,可能是通过降低ΔΨm途径触发白血病细胞凋亡。      

刺五加多糖对人白血病K562细胞作用的研究

目的：研究刺五加多糖对体外培养人白血病K562细胞有无增殖抑制和凋亡诱导作用。方法：取培养至对数生长期的K562细胞（密度为5×10^4／mL和1×10^4／mL）分别接种于96孔培养板（100μL／孔）及50mL培养瓶（1．5mL／瓶）中。加入不同浓度的刺五加多糖作用24h后。用CCK-8法检测刺五加多糖对K562细胞增殖抑制作用；荧光显微镜检测细胞凋亡。结果：不同浓度刺五加多糖（0．405、0．810、1．620、2．430、3．240mg／mL）作用K562细胞24h．抑制率分别为16％、27％、48％、50％、55％；荧光显微镜下观察发现培养K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。结论：刺五加多糖对体外培养K562细胞生长有明显的抑制作用．可诱导K562细胞凋亡。     

H101腺病毒对K562白血病细胞的作用

目的 探讨E1B缺陷型腺病毒(H101)对K562白血病细胞的生长抑制作用.方法 选用不同浓度H101腺病毒,体外感染K562白血病细胞株,通过白血病细胞感染率、细胞生长曲线、台盼蓝蓝染细胞数、MTT法检测细胞抑制率等检测细胞的增殖受抑和细胞毒作用情况.结果 H101腺病毒转导K562细胞随浓度增加而有所增加, 但为很低的转染率; 诱导K562白血病细胞株死亡效率很低, 仅在高剂量组达到30%的死亡率; 对K562细胞的生长有一定的影响,与未转染组比较,随剂量加大, 生长受抑制程度逐渐明显, 高剂量组第4天为19.5%; MTT法测定细胞抑制率提示随剂量加大,对K562细胞抑制程度逐渐加大,高剂量组抑制率为22.7%.结论 E1B缺陷型腺病毒(H101)在体外人白血病细胞K562的生长有一定的抑制作用,但是杀伤作用不显著.     

青蒿素CQ-189对K562细胞增殖的抑制作用研究

目的 探寻可有效抑制人白血病细胞恶性增殖,为抗肿瘤药物的开发提供理论和实验依据.方法 以人白血病K562细胞为研究对象,柔红霉素为对照,采用MTT比色法考察AACQ-189对人白血病细胞生长的抑制作用.结果 柔红霉素0.038～0.300 mg/L与AACQ-189 1.562～25.000mg/L分别作用于K562细胞24 h、48 h后,均对K562细胞生长表现出不同程度的抑制作用,随着药物浓度增加、作用时间延长,抑制作用越明显.AACQ-189的抑制率可达90％以上.结论 AACQ-189有望成为有效的抗白血病治疗药物.     

黄芩素对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄芩素对人白血病细胞K562生长的抑制作用及对细胞凋亡率的影响。方法:体外培养K562细胞,将对数生长期K562细胞数调整到1×105/m l,将黄芩素加入各实验孔,将黄芩素的终浓度调整为25.0,50.0,100.0,200.0,400.0μg/m l,每个浓度设4个复孔,分别培养细胞48 h和72 h,采用MTT比色法观察黄芩素对K562细胞的生长抑制作用。将对数生长期K562细胞数调整为1×107/m l,加入黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l作用48 h后,收集细胞用流式细胞仪进行检测,并计算凋亡细胞百分数。结果:黄芩素对人白血病K562细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性。黄芩素50.0,100.0,200.0μg/m l诱导K562细胞凋亡,有明显的凋亡峰(AP峰)出现。结论:黄芩素对人白血病细胞K562的增殖有抑制作用,其机制可能与促进K562细胞的凋亡有关。     

芒果甙对白血病K562细胞增殖抑制作用的研究

目的：研究芒果甙在体外对慢粒白血病细胞系K562细胞生长的抑制作用。方法：采用MTT法、集落形成试验及生长曲线绘制分别观察不同浓度芒果甙对K562细胞生长的影响。结果：3种方法均显示不同浓度的芒果甙在不同时间对K562细胞均有抑制作用,并随浓度升高和作用时间延长而抑制作用增强,其中MTT法显示,25、50、100、150、200μmol／L,浓度芒果甙作用K562细胞72h后,其抑制率分别为31．99％、50．74％、60．24％、62．65％和70．41％;200μmol／L浓度芒果甙作用于K562细胞24、48、72和96h后,其抑制率分别为48．19％、68．88％、74．38％、76．93％和83．50％。结论：芒果甙能明显抑制K562细胞的增殖,其抑制作用呈时间和剂量依赖关系。     

袁氏生脉成骨胶囊对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用

【目的】观察中药袁氏生脉成骨胶囊(主要由丹参、川芎、鸡血藤、黄芪组成)对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用,探讨袁氏生脉成骨胶囊防治激素性股骨头坏死的病理机制。【方法】采用骨髓细胞体外培养技术和血清药理学方法,分离培养大鼠骨髓基质细胞;地塞米松诱导骨髓基质细胞的成脂分化,以含中药血清作为拮抗剂。检测培养细胞的甘油三酯含量和碱性磷酸酶活性。【结果】分离细胞培养4d后可以观察到大量成骨细胞、成纤维细胞、破骨细胞;模型组加入地塞米松造模;成骨胶囊药物组地塞米松用法同模型组,同时加入含药血清。6d后,光镜下观察成骨胶囊药物组见少量脂肪细胞,模型组脂肪细胞明显增多。成骨胶囊药物组碱性磷酸酶活性高于模型组(P<0.05);甘油三酯含量低于模型组(P<0.01)。【结论】中药袁氏生脉成骨胶囊能够有效拮抗激素诱导骨髓基质细胞成脂分化。提示活血化瘀类中药防治股骨头坏死的机理不仅是改善了股骨头的微循环,而且抑制了骨髓基质细胞成脂分化,增加了成骨细胞的表达。     

龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用

[目的]探讨补肾中药龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用。[方法]采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血大鼠模型。应用免疫组织化学技术检测神经上皮干细胞蛋白（Nestin)的表达。[结论]提示补肾中药龟板可减轻神经损伤症状和对局灶性脑缺血后神经干细胞有促进增殖作用。     

小檗碱诱导大鼠神经元毒性死亡的研究

目的：研究小檗碱（Ｂｅｒ）对原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元的直接作用及Ｂｅｒ与间接胆红素的相互作用。方法：采用二乙酸荧光素（ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＤＮＡ染色法，观察神经元的存活率及形态学特征；用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析Ｂｅｒ诱导神经元死亡的生化学特征。结果：Ｂｅｒ呈剂量（０～２０μｍｏｌ／Ｌ）依赖性地诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元死亡。其死亡的机制呈现坏死的特征：包括神经元胞体肿大、无明显核染色质浓缩、ＤＮＡ随机断裂而在凝胶电泳图上呈弥散样改变、流式细胞仪分析未见凋亡峰。用蛋白质合成抑制剂预处理神经元，不能阻断Ｂｅｒ的神经毒性作用。无毒性剂量下的Ｂｅｒ（１μｍｏｌ／Ｌ）与无毒性剂量下的胆红素相加，可产生神经元的毒性。结论：Ｂｅｒ诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元坏死，并增强胆红素的神经毒性作用。     

人参总皂甙诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验研究

【目的】观察人参总皂甙(GS)对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的诱导作用。【方法】取成年SD大鼠骨髓细胞,采用密度梯度分离法与贴壁法结合获取MSCs,进行原代培养和克隆培养;采用流式细胞仪检测细胞表面抗原 CD34和CD44以鉴定该法所获细胞是否为MSCs;对传至第8代的MSCs进行分组诱导,分别为GS组(终末浓度为 250 mg／L)、5-氮胞苷(5-aza)组(终末浓度为10μmoL／L)、GS 5-aza组(终末浓度分别为250 mg／L、10μmol／L),每组再分 3个亚组,分别对MSCs进行24、48、72 h诱导,并设空白对照组;采用共聚焦荧光显微镜观察细胞数及阳性细胞数,计算心肌样细胞转化率;采用免疫组化法检测分化的心肌样细胞的特异性蛋白结蛋白(Desmin)和肌钙蛋白(cTnI),采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测诱导前后心肌细胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β-心肌肌球蛋白重链(β- MHC)的表达。【结果】分离培养后的细胞生长密集,形态呈纺锤状,表面抗原鉴定为CD44表达阳性,表明所获细胞为 MSCs;经GS、5-aza诱导后,MSCs分化成类心肌细胞,3组的心肌样细胞转化率无显著性差异(分别为38％、35％、39％); 免疫组化和RT-PCR检测结果显示Desmin、cTnI和MHC表达均阳性,阳性细胞呈梭形和成纤维细胞样形态,表明MSCs在 GS体外诱导下已向心肌样细胞转化,并具有心肌样细胞的特性。【结论】GS可体外诱导MSCs分化为心肌样细胞,为细胞移植治疗心肌梗死提供了实验依据。     

银杏总内酯对老龄小鼠学习记忆功能的影响及抗氧化作用

目的 研究银杏总内酯对自然衰老小鼠学习记忆及抗氧化能力的影响。方法 采用自然衰老小鼠模型、小鼠学习记忆功能跳台实验判定并取小鼠血液和脑组织测定MDA含量和SOD活性。结果 银杏总内酯可减少训练和测验时小鼠跳台错误次数，提高血和脑组织中SOD活性，降低脑组织中MDA含量。结论 银杏总内酯具有促进学习记忆能力的作用，其作用可能与增强机体抗氧化能力有关。     

复方葛根注射液对血液流变学及血小板聚集功能的影响

目的观察复方葛根注射液对大鼠血小板聚集功能及兔血液流变学的影响.方法 SD大鼠50只,随机分为正常组、试药组(20、40、80 mg/kg)及阳性药(川芎嗪40 mg/kg)组,测定给药3 d后血小板聚集率;家兔30只,随机分为正常组、试药组(10、20、40 mg/kg)及阳性药(川芎嗪20 mg/kg)组,测定给药3 d后血液流变学指标.结果复方葛根注射液能显著抑制血小板的聚集率;显著降低全血黏度、血浆黏度、红细胞压积及纤维蛋白原.结论复方葛根注射液对血液流变学有改善作用.     

吡咯喹啉醌对培养的鼠海马神经元的促生长作用

目的:探讨吡咯喹啉醌(PQQ)对培养海马神经元的促生长作用。方法:原代培养新生大鼠海马神经元,观察PQQ对海马神经元胞体、突起生长和存活率的影响,测定MTT代谢率和脂褐素。结果:PQQ处理后,海马神经元突起的长度和胞体的长径显著大于对照组,细胞的存活率增加、存活的时间延长,尼氏小体的光密度值和MTT代谢率显著高于对照组,脂褐素的含量降低。结论:PQQ能促进海马神经元的生长,增加其存活率、延长存活时间。     

体外氰戊菊酯暴露抑制小鼠海马神经元突起形成

目的 探讨氰戊菊酯对小鼠海马神经元突起的影响.方法 取孕18 d的ICR小鼠胚胎海马细胞体外培养,建立小鼠海马神经元和星形胶质细胞混合培养体外模型.以1、5、10、50 mg/L的氰戊菊酯对培养8 d后的细胞进行染毒,乳酸脱氢酶(LDH)比色法测定染毒48 h后的细胞毒性;采用荧光免疫细胞化学的方法研究小鼠海马神经元和星形胶质细胞的相对含量及海马神经元突起状况.结果 在对海马神经细胞不产生明显细胞毒性的前提下,氰戊菊酯可以引起神经元缺失,而且随着剂量的增加,神经元突起的数目及长度均随之明显下降.结论 氰戊菊酯可能特异损害和(或)抑制发育中神经元的突起     

三七总皂甙对成年地鼠视网膜节细胞存活的影响

目的：探讨三七总皂甙对提高切断视神经后节细胞存活的作用。方法：用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察正常和经三七总皂甙处理的动物于切断视神经５、７、１４ｄ后视网膜节细胞的密度。结果：①正常视网膜节细胞平均密度为（２００７±１１５）／ｍｍ２；②切断视神经５、７、１４ｄ后其视网膜节细胞平均密度分别下降至：（１１９８±１０７）／ｍｍ２，（８２５±４０）／ｍｍ２和（１９６±１０）／ｍｍ２；③给予生理盐水的对照组在上述各时间组视网膜节细胞平均密度与单纯切断视神经组结果相似；④给予三七总皂甙的实验组在５、７、１４ｄ视网膜节细胞的平均密度分别为（１４６１±９６）／ｍｍ２；（１０６４±９１）／ｍｍ２）和（３０２±１９）／ｍｍ２，与切断视神经组和生理盐水对照组相比在各时间组上均存在显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：三七总皂甙可提高切断视神经后成年金黄地鼠视网膜节细胞的存活，三七总皂甙的抑制钙内流作用可能与提高切断视神经后视网膜节细胞的存活有关。     

姜黄素对Hela细胞周期各时相的影响

目的：探讨姜黄素对Hela细胞(人宫颈癌细胞)增殖周期各时相的影响,为宫颈癌化疗寻求有 效药物。 方法：应用MTT比色法和流式细胞术测定不同浓度姜黄素（0、10、20和40 mg·L^-1） 对Hela细胞增殖的抑制率和细胞周期各时相的变化,并应用电子显微镜观察Hela细胞的亚细胞改变。 结果：0、10、20和40 mg·L^-1姜黄素对Hela细胞增殖的抑制率分别为3.0%、21.4%、32.8%和49.2%,且呈剂量依赖性;流式细胞术显示,G₁期细胞增多,S期细胞减少,G ₂／M期细胞相对增多;细胞结构显示,细胞空化、染色质凝集、凋亡小体增多。 结论：姜黄素能够抑制HeLa细胞增殖,阻止G₁期细胞向S期转化的进程,促进Hela细胞凋亡。