移植物抗宿主病的防治和保留移植物抗肿瘤效应的研究进展

造血干细胞移植领域的进展使其在临床的应用越来越广泛,如何解决复发和移植物抗宿主病(GVHD)成为干细胞移植急待解决的核心问题。人们已经认识到移植物抗肿瘤效应(GVL)是清除微小残余病灶、减少复发的基础,也发现在防治GVHD的同时往往伴随GVL的减弱。本文回顾了近年来在这一领域内的探索和尝试,力图探讨区分GVHD和GVL可能的途径。     

移植物抗宿主病的防治和保留移植物抗肿瘤效应的研究进展

造血干细胞移植领域的进展使其在临床的应用越来越广泛，如何解决复发和移植物抗宿主病(GVHD)成为干细胞移植急待解决的核心问题。人们已经认识到移植物抗肿瘤效应(GVL)是清除微小残余病灶、减少复发的基础，也发现在防治GVHD的同时往往伴随GVL的减弱。本文回顾了近年来在这一领域内的探索和尝试，力图探讨区分GVHD和GVL可能的途径。     

致敏供者淋巴细胞输注对受者免疫功能重建及移植物抗宿主病发生率的影响

目的探讨非清髓异基因外周血造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注(DLI)对受者免疫重建及移植物抗宿主病(GVHD)发生率的影响。方法以C57BL/6小鼠(H-2b)为受鼠, BALB/c小鼠(H-2d)为供鼠,建立异基因外周血造血干细胞移植模型(实验组),移植当天受者接受60Coγ射线全身照射,移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200 mg/kg。以不行造血干细胞移植,仅行γ射线全身照射和环磷酰胺腹腔注射的正常C57BL/6小鼠为对照。实验组存活小鼠在移植后第28天分别接受致敏供鼠淋巴细胞输注(n=8)、未致敏供鼠淋巴细胞输注(n=8),另有6只不输注供鼠淋巴细胞。移植后检测受者异基因嵌合率,观察GVHD的发生情况以及T淋巴细胞亚群变化,并行供受者间以及供受者与第三方小鼠(昆明鼠)间的单向混合淋巴细胞反应。结果实验组受鼠SRY基因均为阳性,嵌合率为(30.881±3.962)%。DLI后,接受未致敏DLI者均出现不同程度的GVHD,死亡3只(7.5%,3/8),而接受致敏DLI者无明显GVHD及死亡者。移植后45 d,接受致敏DLI者的CD8 T淋巴细胞明显高于正常C57BL/6小鼠(P<0.05),而接受未致敏DLI者的CD8 T淋巴细胞与正常对照的差异无统计学意义(P>0.05),至移植后60 d,接受DLI者的T淋巴细胞亚群接近正常(P>0.05);对照组T淋巴细胞亚群持续低于正常对照(P<0.05)。实验组小鼠淋巴细胞对供者淋巴细胞刺激的反应性均下降(P<0.01),以接受致敏DLI者最明显,而对昆明鼠淋巴细胞刺激的反应性维持正常水平。结论造血干细胞移植后输注致敏供者的淋巴细胞能促进受者的免疫功能重建,并可减少GVHD的发生。     

非清除性异基因骨髓移植后输注供者淋巴细胞诱导的GVHD和GVL效应

目的　探讨非清除性异基因骨髓移植后输注逐渐增量的异基因供者淋巴细胞 ,是否能在减轻移植物抗宿主病 (GVHD)的同时保留移植物抗白血病效应 (GVL)。方法　L6 15白血病小鼠(H 2 k)为受者 ,于接种白血病细胞后的第 3d接受60 Coγ射线全身照射 ,总剂量 5Gy ,照射当天移植BALB/c小鼠 (H 2 d)的骨髓细胞 (3× 10 7个 )和脾细胞 (1× 10 7个 ) ,移植后 2d腹腔注射环磷酰胺 2 0 0mg/kg ,并分别于移植后 14d或 14、2 1、2 8d输注 2× 10 7个和 1× 10 7、2× 10 7、4× 10 7个供鼠脾细胞。结果　未处理的对照组受鼠平均存活时间为 (14 .1± 1.1)d ,均死于白血病 ;移植后未接受供鼠脾细胞组的小鼠平均存活 (2 6 .2± 3.6 )d ,均死于白血病复发 ;移植后 14d接受供鼠脾细胞输注的小鼠平均存活 (2 9.3± 3.7)d ,均死于GVHD ;移植后输注逐渐增量的供鼠脾细胞者 ,平均存活 (5 9.4± 5 .6 )d ,6 0 %的受者存活超过 5 0d ,均未发生GVHD。结论　非清除性异基因骨髓移植后输注逐渐增量的异基因供者淋巴细胞可在减轻GVHD的同时保留抗白血病效应。     

延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻移植物抗宿主病的探讨

目的 探讨延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻急性移植物抗宿主病(aGVHD)的作用及其机制.方法 选择BALB/c(H-2d)/b鼠为受者,C57BL/6(H-2b)小鼠为供者.受者接受60Coγ射线全身照射(TBI)后,建立骨髓移植模型.实验分为5组.对照组:TBI后4 h经受者尾静脉输注RPMI 1640液0.4 ml;经典移植组:TBI后4 h经受者尾静脉输注供者的骨髓细胞(BMC)和脾细胞(SC)各1×107个/0.2 ml;连续移植组:TBI后4 h、1 d、2 d和3 d分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5 × 106个/0.05 ml;延迟移植组:TBI后第4天经受者尾静脉输注供者的BMC和SC各1× 107个/0.2 ml;延迟并连续移植组:TBI后第4、5、6和7天分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5×106个/0.05 ml.移植后观察受者的临床表现、病理学改变及存活时间,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定受者外周血中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10及γ干扰素(IFN-γ)的水平,应用流式细胞仪测定受者H-2b细胞、T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的百分率.结果 对照组和经典移植组受者均在TBI后3周内因造血功能衰竭和/或aGVHD死亡;连续移植组和延迟移植组受者TBI后60 d存活率分别为30%和50%;延迟并连续移植组受者TBI后60 d的存活率为70%,高于其它4组(P＜0.05).延迟并连续移植组IL-4、IL-10的表达高于经典移植组(P＜0.05);IL-2和IFN-γ的表达低于经典移植组(P＜0.05).延迟并连续移植组TBI后20 d时外周血白细胞计数恢复正常,30 d时外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达恢复正常,60 d时H-2b细胞的百分率为(98.13±1.11)%.结论 延迟并连续小鼠异基因骨髓移植能减轻移植后的aGVHD.其作用机制主要是避开了TBI后炎症冈子表达的高峰期,下调了炎症因子和Th1类细胞因子的表达,促进了Th2类细胞因子的表达.     

阻断T细胞生长因子信号通路治疗移植物抗宿主病

目的探讨通过抗γ公共链单克隆抗体封闭T细胞生长因子受体治疗小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的效果。方法通过混合淋巴细胞培养观察抗γ公共链抗体在体外对T细胞的抑制作用。经静脉输注C57BL／6(H-2b)脾细胞给F1代小鼠(C57BL／6×Balb／cH-2b/d),建立移植物抗宿主病模型。对GVHD模型小鼠短期内给予抗γ公共链抗体,一共3次,并观察其治疗效果。结果抗γ公共链抗体可抑制T细胞增殖,使凋亡细胞数增加及M期细胞数下降。输注同种脾细胞能成功建立急性GVHD模型,主要引起肝脏损伤的病理改变。单次注射抗γ公共链抗体可使GVHD小鼠肝内浸润的淋巴细胞发生凋亡;短期内连续3次注射抗γ公共链抗体可使丙氨酸转氨酶、天冬氮酸转氨酶明显低于对照组(P<0．05),但肝内仍然可观察到淋巴细胞浸润。结论体外阻断T细胞生长因子受体途径可以完全清除反应性T细胞,亦适用于GVHD治疗;但短期治疗不能完全清除反应性T细胞。     

异种移植中的移植物抗宿主病

目的 了解异种移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的组织学特点,与同种ＧＶＨＤ的区别及异种脾脏移植的关系。方法 对近十年来有关异种移植中ＧＶＨＤ的特点及其与同种ＧＶＨＤ区别的文献进行检索、综述。结果异种ＧＶＨＤ由于共刺激信号、粘附分子的不匹配及所识别抗原的差异、其发生发展速度,组织学特点等均与同种ＧＶＨＤ不同。受体脾切除加异种脾移植有利于异种ＧＶＨＤ的发生。结论 可利用异种ＧＶＨＤ模型来观测异种移植排斥反应     

树突状细胞与移植物抗宿主病

树突状细胞是迄今发现的体内最强的抗原呈递细胞,本文阐述了其在移植物抗宿主病中的作用及与其有关的预防措施。     

肝移植术后急性移植物抗宿主病

肝移植术后急性移植物抗宿主病是一种少见并发症,是来源于移植肝的同种反应性T细胞激活、增殖,达到一定数量对受体组织发起的破坏性的细胞免疫反应;主要临床表现为发热、皮疹、严重的腹泻和明显的低白细胞、低血小板血症,最终导致严重的感染和出血,但肝功正常.该病的诊断目前还缺乏敏感和特异性的方法,治疗主要依靠糖皮质激素、减低免疫抑制剂与支持治疗,但效果不佳,死亡率高达85%.     

Ly49A转基因淋巴细胞对异基因骨髓移植后GVHD和GVL的影响

目的　观察Ly49A基因转染淋巴细胞对异基因骨髓移植后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法　经逆转录病毒介导将Ly49A基因转染至C57BL/ 6小鼠的淋巴细胞 ,以C57BL/ 6(H 2 b)小鼠为供者 ,以接种EL961 1红白血病细胞的BALB/c(H 2 d)小鼠为受者 ,进行脾淋巴细胞和骨髓细胞联合移植 ,建立异基因急性GVHD模型 ,观察Ly49A基因转染的淋巴细胞对GVHD和GVL的影响。结果　在未进行移植的单纯照射组 ,小鼠的存活时间为 (6 .50±2 .41 )d ;仅以环磷酰胺治疗的小鼠存活时间为 (2 0 .90± 2 .88)d ;非转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (1 7.1 0± 4 .65)d ;空载体转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为(1 7.40± 5 .32 )d ;Ly49A转染淋巴细胞与骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (35 .2 0± 1 2 .52 )d ,较上述各组明显延长 (P =0 .0 0 0 )。结论　Ly49A基因转染的淋巴细胞在异基因骨髓移植模型上具有一定程度的降低GVHD并保留GVL的作用     

肝移植术后移植物抗宿主病的诊治进展

肝移植术后移植物抗宿主病(GVHD)发生率低，但病死率极高，典型症状包括不明原因发热、皮疹、腹泻和骨髓抑制。其发病机制目前尚未完全阐明，诊断缺乏统一标准，治疗缺乏特异性手段。近年来，针对GVHD免疫反应进程中的病理生理学研究，为开辟新的诊断方法和治疗手段提供可能。目前，大剂量糖皮质激素联合静脉注射免疫球蛋白冲击、免疫抑制剂减少或停用可能是较为有效的治疗方案。而对于糖皮质激素难治性GVHD，应用多种不同的分子靶向药物可能对改善受者预后起到积极作用。     

亲属脾移植术后移植物抗宿主反应和移植脾亢的成功治疗经验

移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）和移植脾亢是脾移植的两个棘手问题，因二者来势凶猛，控制困难，既往治疗切除移植脾脏。我们介绍一例你亲供脾移植术后天和２１天发生ＧＶＨＲ和移植脾亢，分别采用深部Ｘ线及钴６０局获得成功的治疗经验。     

第三方脐血预防异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病

目的 探讨无关供者和单倍型亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前输注第三方脐血预防移植物抗宿主病(GVHD)的效果.方法 2007年至2011年接受无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT的受者共41例.脐血预防组(25例),于移植前1d予以HLA配型为4/6～6/6的第三方脐血细胞输注,平均输入有核细胞数为(1.64±0.49)×107/kg,次日再输入供者造血干细胞.其余患者作为对照组(16例).两组均采用抗胸腺细胞球蛋白+环孢素A+甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯预防急性GVHD.比较两组间急性GVHD的发生率、严重程度以及移植相关死亡率.结果 脐血预防组和对照组aGVHD累积发生率分别为44.0％(11/25)和68.8％(11/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=2.403,P＞0.05);Ⅲ～Ⅳ度aGVHD累积发生率分别为16.0％(4/25)和37.5％(6/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=2.445,P＞0.05),100 d治疗相关病死率分别为12.0％(3/25)和12.5％(2/16),两组比较,差异无统计学意义(x2=0.002,P＞0.05).结论 在无关供者及单倍型亲缘供者allo-HSCT前应用第三方脐血细胞,可能有效预防GVHD的发生或减轻GVHD的严重度,但尚需要进一步设计扩大规模的随机对照临床试验验证其有效性.     

肝移植后移植物抗宿主病的诊断和治疗

目的 探讨肝移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)的诊断和治疗方法.方法 回顾性分析2002年4月至2006年3月间8例肝移植后发生GVHD受者的临床资料,通过观察这8例受者的临床症状与体征,以及分析肝功能、血常规、骨髓细胞学、细菌培养、病毒检测和皮肤病理学等检查结果,总结诊断与治疗经验.结果 肝移植受者发生GVHD的临床表现为:术后1～4周出现发热、全身皮疹、全血细胞减少、腹泻和腹痛等,但肝功能正常.皮肤组织病理学表现为:表皮角化不良、松解,棘层细胞水肿,基底层液化变性,真皮浅层淋巴细胞浸润.8例受者经减少免疫抑制剂的用量、有效控制非特异性炎症反应、改善造血功能、防治感染和加强营养支持等治疗后,其中7例康复出院,并长期健康存活;仅1例治疗无效死亡.结论 肝移植后GVHD的诊断主要依据典型的临床表现和特异性的皮肤组织病理学改变.诊断明确后应最大程度的减少免疫抑制剂的用量,有效控制GVHD引起的急性炎症反应,促进造血功能恢复.     

Multidonor bone marrow transplantation improves donor engraftment and increases the graft versus tumor effect while decreasing graft‐versus‐host disease

In partially matched donor transplantation, mandatory T‐cell depletion (TCD) increases the risks of rejection/graft failure, relapse, and post‐transplant infections. A multi‐donor approach was offered to resolve some of these drawbacks. This hypothesis was previously tested in a TCD fully mismatched murine model. However, the effect of multi‐donor transplantation (MDT) on graft‐versus‐host disease (GVHD) and graft versus tumor (GVT) effect were never tested. To assess the safety and efficacy of MDT, we used it in non‐TCD transplantation and murine breast carcinoma model. We found that when transplanting non‐TCD MDT composed by C57Bl/6 and C3H cells into BALB/c, a consistent trichimerism is established, dominated by C57Bl/6 cells. Following MDT the study animals experienced reduced GVHD compare with those transplanted from C57Bl/6 alone, while the GVT effect was superior. We conclude that MDT may serve as a technique that suppresses GVHD while maintaining the GVT effect.     

慢性移植物抗宿主病相关性肌炎一例

目的总结1例异基因造血干细胞移植后并发与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)相关的多发性肌炎的诊治体会。方法1例急性淋巴细胞白血病患者在处于完全缓解状态下接受同胞间供髓异基因造血干细胞移植,移植后采用环孢素A和甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病(GVHD)。结果移植后11 d,WBC＞0．5×10~9/L,移植后13 d,血小板＞20×10~9/L；27 d时,骨髓细胞染色体分析显示99%为供者型。移植后17 d,发生Ⅰ度急性皮肤型GVHD,经静脉注射地塞米松及甲氨蝶呤后,GVHD被完全控制。移植后8个月,患者发生轻度肝脏cGVHD,经他克莫司及硫唑嘌呤治疗,效果不佳,血清肝酶升高,后改为他克莫司和西罗莫司治疗,血清肝酶逐渐下降,但肌酸激酶从9 U/L上升至272 U/L,随后患者出现全身乏力,并逐渐加重,上下肢近端处活动出现障碍,肌酸激酶升至3010 U/L,股四头肌、肱二头肌的肌电图表现为肌源性损害,双侧大腿磁共振成像符合多发性肌炎表现,给予甲泼尼龙、血浆置换治疗,但无显著效果,患者突发阵发性呼吸困难,经抢救无效,患者死亡,死亡时肌酸激酶为21 010 U/L。结论多发性肌炎为cGVHD的一种较少见形式,累及重要肌组织者预后较差。     

Microbial metabolites and graft versus host disease

The health of mammals is a reflection of the diversity and composition of the intestinal microbiota. Alterations in the composition and functions of the intestinal microbiota have been implicated in multiple disease processes. The impact of the microbiota in health and disease is in part a function of the nutrient processing and release of metabolites. Recent studies have uncovered a major role for microbial metabolites in the function of the host immune system by which they influence disease processes such as acute graft versus host disease (GVHD), which is the main complication of allogeneic hematopoietic cell transplantation (allo‐HCT). The mechanisms of acute GVHD regulation by the complex microbial community and the metabolites released by them are unclear. In this review we summarize major findings of how microbial metabolites interact with the immune system and discuss how these interactions could impact acute GVHD.