尾型同源盒基因2沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的逆转

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）沉默对逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响。方法将对数生长期的人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP接种于培养板中,分为3组：感染RNA干扰Cdx2基因沉默重组慢病毒载体（pLL—Cdx2-shRNA）作为实验组;感染慢病毒空载体作为阴性对照组;空白对照组不做任何处理。Westernblot及RT—PCR检测Cdx2及凋亡相关基因C—myc、cyclinD1、survivin等蛋白及mRNA表达水平;MTT法检测3组细胞对化疗药物阿霉素、5．氟尿嘧啶、顺铂的敏感性;流式细胞技术检测3组细胞阿霉素的泵出率、细胞周期分布及细胞凋亡情况。计量资料用面±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SNK—q检验,计数资料采用,检验。结果实验组、阴性对照组、空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP中各蛋白相对表达量：Cdx2分别为0．187±0．060、0．535±0．033、0．567±0．014,C—myc分别为0．086±0．004、0．379±0．006、0．354±0．004,cyclin D1分别为0．016±±0．005、0．141±0．003、0．162±0．008,survivin分别为0．276±0．012、0．672±0．009、0．517±0．313,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义（F=247．385,3．353,597．882,98．628,P〈0．05）。实验组、阴性对照组、空白对照组mRNA相对表达量：cdx2分别为0．184±0．010、0．894±0．056、0．837±0．049,c—myc分别为0．212±0．022、0．538±0．021、0．545±0．032,cyclinD1分别为0．045±0．009、0．163±0．009、0．157±0．010,survivin分另4为0．401±0．027、0．824±0．016、0．782±0．056,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述基因mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义（F=243．776,161．793,138．523,118．426,P〈0．05）。MTT法检测实验组、阴性对照组和空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP阿霉素Ic50值分别为（0．12±0．05）mg／L、（0．33±0．08）mg／L、（0．39±0．15）mg／L,5-氟尿嘧啶Ic50值分别为（0．52±0．13）mg／L、（4．10±1．25）mg／L、（4．05±1．44）mg／L,顺铂Ic50值分别为（0．82±0．13）mg／L、（2．81±0．50）mg／L、（3．28±1．03）mg／L。实验组、阴性对照组、空白对照组中人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素泵出率分别为0．21％、0．37％和0．35％。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素、5一氟尿嘧啶和顺铂的Ic。值及对阿霉素的泵出率显著降低,差异均有统计学意义（F=8．101,13．854,15．159,X2=7．106,P〈0．05）。实验组、阴性对照组与空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDPG0／G1期细胞比例分别为17．87％、34．71％、37．20％,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组G0／G1期细胞减少,差异有统计学意义（X^2=1．055,P〈0．05）;实验组G1／M期的细胞比例为11．93％,细胞凋亡率为31．13％,均明显高于阴性对照组的0．26％、16．58％和空白对照组的0．35％、13．18％,差异有统计学意K（X^2=2．249,11．030,P〈0．05）。结论Cdx2基因沉默可有效提高人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,增加化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的耐药性。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强肿瘤坏死因子α诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡作用的研究

目的研究核转录因子-κb（NF—κb）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝（MTr）法检测不同浓度的PDTC和TNF-α以及两者联合应用对SGC-7901细胞增殖的抑制率：采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况：Westernblot检测SGC-7901细胞survivin和easpase-3蛋白的表达。结果PDTC在15、30、60和100μmol／L浓度时．对SGC-7901的细胞生长抑制率分别为（12．14±0．91）％、（20．00±1．11）％、（37．63±1．01）％和（41.46±1．07）％．均可抑制细胞增殖（P〈0．01）。TNF-α为25mg／L时,对SGC．7901细胞的生长抑制率为（2．38±0．67）％,与对照组（1．50±0．81）％相比,差异无统计学意义（F=28．28,P〉0．05）：而在50、100和150mg／L浓度时,对SGC-7901细胞的生长抑制率分别为（4．53±0．85）％、（4．43±0．70）％和（4．74±1．07）％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。PDTC15μmol／L分别与25、50、100和150mg／L的TNF．仅联合应用时,对SGC-7901的细胞生长抑制率则分别为（18．94±1．10）％、（30．23±0．89）％、（41．55±0．94）％和（53．34±0．98）％,与单用TNF—α或单用15μmol／LPDTC比较,细胞生长抑制率增加（P〈0．01）。Hoechst检测结果显示,TNF-α100mg／L组、PDTC15μmol／L组及两者联合应用组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）,且联合用药组细胞凋亡率增高最为显著（P〈0．01）。PDTC（15μmol／L）与TNF-α（100mg／L）联合用药与单用TNF—α（100mg／L）比较,细胞survivin蛋白表达明显降低（P〈0．01）,与单用PDTC（15μmol／L）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;但caspase-3蛋白的表达联合用药组较两者分别单用时显著增加（P〈0．01）。结论PDTC可增强TNF-α对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能与PDTC阻断TNF-α诱导的NF—κb活性、下调survivin表达并最终上调凋亡蛋白easpase-3的表达有关。     

人胃癌耐药细胞株裸鼠原位移植的实验研究

目的 建立多药耐药人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤模型并探讨移植瘤的耐药性。方法 将人胃癌细胞株SGC－7901和耐药细胞株SGC－7901／VCR分别接种于两组裸鼠胃壁,用MTT法测定瘤细胞对阿霉素的耐药性及RT－PCR技术测定其多药耐药（MDR）基因表达。结果 MTT法测定IC50分别为0．98mg/L和5．78mg/L,与移植前细胞相比差异无显性意义（IC50分别为1．01mg/L和5．20mg/L);RT－PCR测定MDR基因表达：SCG－7901组表达阴性,SGC－7901／VCR组表达阳性。结论 耐药人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤为研究胃癌多药耐药性提供了具有器官微环境的动物模型。     

缺氧诱导因子-1α参与胃癌多药耐药的机制

目的 探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α参与胃癌SGC7901/DDP细胞株多药耐药的机制.方法 采用化疗药物顺氯胺铂(顺铂,DDP)按浓度梯度递增法(0.02～1.00mg/L)诱导胃癌SGC7901细胞株,10个月后成功建立对顺铂稳定耐药并具有MDR、MRP4表型的胃癌SGC7901/DDP细胞株,应用HIF-1α通路抑制剂YC-1(75 μmol/L)抑制HIF-1α在敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中的表达,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测药物敏感性,流式细胞术分析细胞凋亡率,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测敏感株SGC7901和耐药株SGC7901/DDP中HIF-1α和耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)的表达变化.结果 YC-1抑制HIF-1α表达后,耐药株SGC7901/DDP的药物敏感性显著增加,对DDP的半数抑制浓度(IC50)由(52.175±6.163)mg/L降低为(11.078±3.645)mg/L(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的细胞凋亡率由1.03%增加为14.26%(P＜0.01).耐药株SGC7901/DDP的P-gP在基因和蛋白表达水平均明显减低,分别由1.846±0.135和2.017±0.102下降至0.814±0.057和0.962 ±0.039(P＜0.01).结论 HIF-1α可通过调节P-gP表达及抗凋亡信号通路参与胃癌顺铂耐药,可成为逆转胃癌耐药的新的靶点.     

早期肠内营养支持在脑血管意外昏迷患者中的应用

目的观察早期肠内营养支持治疗脑血管意外昏迷患者的临床疗效。方法2008年1月至2009年1月收治的52例脑血管意外昏迷患者,随机分为两组,研究组26例,给予肠内营养支持,对照组26例,给予肠外营养支持。结果研究组治疗的总有效率（73．1％,19／26）明显高于对照组（38．5％,10／26）,而病死率（15．4％,4／26）明显低于对照组（42．3％,11／26）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。研究组血清白蛋白、血红蛋白及胆固醇水平分别为（38．7±5．3）g／L、（125．3±20．2）g／L、（4．43±1．14）mmol／L,明显高于对照组的（34．4±4．2）g／L、（107．3±16．6）g/L、（3．97±1．05）mmol／L,而血糖水平（10．9±5．2）mmol／L低于对照组的（15．7±6．5）mmol／L,差异有统计学意义（P〈0．05）。研究组的呼吸道感染、上消化道出血、肝肾功能损害及电解质代谢紊乱发生率分别为11．5％（3／26）、15．4％（4／26）、3．8％（1／26）、7．7％（2,26）,均明显低于对照组的69．2％（18／26）、57．7％（15／26）、30．8％（8／26）、38．5％（10／26）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论早期肠内营养支持脑血管意外昏迷患者,可改善患者的营养状况,预防或减少并发症发生,对脑血管意外昏迷患者的预后有重要的临床意义。     

丹参酮ⅡA通过抑制磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白-p70S6激酶1通路促进胃癌细胞在体外的自噬

目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)体外对人胃癌SGC7901细胞自噬的影响及机制.方法 不同浓度(0.5、1、2和4 mg/L) TanⅡA作用体外培养的胃癌SGC7901细胞24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力的改变;TanⅡA(1、2和4mg/L)作用48 h,流式细胞术检测细胞自噬小体的含量;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ的蛋白的表达水平及磷酸肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70S6激酶1(p70S6K1)的活性.结果 0.5 mg/L TanⅡA对胃癌SGC7901细胞没有明显的生长抑制作用,1、2和4 mg/L TanⅡA对胃癌SGC7901细胞则有明显的生长抑制作用,且抑制作用呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);流式细胞分析结果显示,1、2和4 mg/L TanⅡA组细胞内酸性自噬小体含量分别为(9.77±1.92)、(13.28 ±2.95)和(16.54±3.28)％,与对照组(4.16±0.64)％比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Westem blot结果显示,1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞中Beclin-1的相对表达量为0.62±0.12、0.71±0.11和0.85±0.13,与对照组(0.37±0.05)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞中LC3-Ⅱ的相对表达量为0.48±0.06、0.65 ±0.11和0.86 ±0.14,与对照组(0.31±0.03)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);此外,1、2和4 mg/L TanⅡA作用后胃癌SGC7901细胞PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1活性则下降(P＜0.05).结论 TanⅡA可通过抑制PI3 K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路促进人胃癌SGC7901细胞自噬.     

损伤调节自噬调控基因对胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的研究损伤调节自噬调控基因（DRAM）对胃癌SGC7901细胞移植瘤放射敏感性的影响。方法取对数生长期的人胃癌SGC7901细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型．随机分为空白对照组、DRAM组（在瘤体约为1．0cm^3时．在瘤周注射携带DRAM基因的腺病毒Admax-pDC315．DRAM—EGFP）、放疗组、放疗联合DRAM组。对瘤体进行剂量为10Gy局部放疗．分别在放疗后3、6、9d处死裸鼠,切取肿瘤,计算抑瘤率。用免疫组化方法检测P53、PCNA、C-myc、Fas—L蛋白的表达。结果放疗联合DRAM组的抑瘤率在3、6、9d分别为9．3％、14．1％、16．7％,均显著高于单纯放疗组（5．0％、8．8％、6．5％）（P〈0．05）;在空白对照组、DRAM组、放疗组、放疗联合DRAM组中．随时间延长PCNA和C-myc蛋白表达的阳性率逐渐下降．而P53和Fas—L蛋白表达的阳性率逐渐增强。结论DRAM基因可通过促进细胞凋亡和抑制细胞增殖．增强裸鼠皮下胃癌移植瘤的放射敏感性。     

索拉非尼联合树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌生长与侵袭转移的作用

目的探讨索拉非尼联合树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肝癌生长与侵袭转移的作用。方法采集健康自愿者外周血50mL,体外培养健康成人细胞因子诱导的DC和CIK。160只雄性ICR小鼠建立H22肝癌细胞小鼠原位肝癌模型,采用随机数字表法分为4组：（1）生理盐水组：仅经胃灌注与索拉非尼组同等的生理盐水;（2）索拉非尼组：经胃灌注索拉非尼100μg/g,1次/d;（3）DC—CIK细胞组：经腹腔注射DC—CIK共培养细胞,1×10^7／只,1次／3d;（4）索拉非尼联合DC—CIK细胞组：经胃灌注索拉非尼,同时腹腔注射DC—CIK共培养细胞,剂量同前。每组40只,治疗3周。各组取20只处死,获取外周血和肝脏肿瘤组织。采用ELISA法检测AFP水平,HE染色检测肿瘤坏死程度,免疫组织化学染色分别检测肿瘤组织Ki-67和CD34表达。各组余下20只小鼠,观察生存时间。多组比较采用单因素方差分析,组问比较采用LSD检验。结果DC和CIK诱导、培养成功。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组AFP分别为（0．675±0．177）ng／L、（0．379±0．052）ng／L、（0．415±0．028）ng／L和（0．288±0．012）ng／L,4组比较,差异有统计学意义（F=0．415,P〈0．05）。生理盐水组肝内和腹腔转移数目分别为（21．2±1．3）个和（29．7±7．6）个,索拉非尼组分别为（16．4±1．6）个和（17．4±1．8）个,DC—CIK组分别为（20．2±1．7）个和（26．4±1．7）个,索拉非尼联合DC—CIK组分别为（15．2±1．3）个和（15．2±1．3）个,4组比较,差异有统计学意义（F=2．137,3．271,（P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组抑瘤率分别为0、21％±3％、9％4-3％和24％±5％,4组比较,差异有统计学意义（F=3．715,P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组生存时间分别为（18．2±2．5）d、（21．6±2．1）d、（24．3±2．8）d和（25．4±1．4）d,4组比较,差异有统计学意义（F=6．247,P〈0．05）。结论索拉非尼联合DC与CIK免疫治疗能够显著延长肝癌荷瘤小鼠生存时间,抑制肝肿瘤生长和转移。     

VEGF—C基因高表达促进胃癌细胞增殖及克隆和小管形成的实验研究

目的：构建人血管内皮生长因子（VEGF）-C基因慢病毒表达载体,并研究其在胃癌细胞中的功能。方法：采用SYBRGreen相对定量逆转录聚合酶链反应（qRT—PCR）及蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测6种不同类型的胃癌细胞系MKN-45、MKN-28、NCI—N87、BGC-823、AGS和SGC-7901中VEGF—CmRNA及其蛋白表达水平;通过构建VEGF—C基因慢病毒表达载体进行细胞增殖、克隆形成和内皮细胞管形成实验,按实验组（MKN-45-GV／C）、对照组（MKN-45-GV）和空白细胞组（MKN-45）加以比较。结果：qRT—PCR和Westernblot实验表明,在6种胃癌细胞中均可检测到VEGF～CmRNA及其蛋白的表达,其中在胃癌细胞MKN-45中表达最低（0．45±1．44）,SGC-7901中表达最高（31.13±0.75）;增殖实验结果显示,与对照组比较,实验组细胞增殖数量明显增加（P〈0．001）;克隆形成结果显示,实验组和对照组细胞在每平均视野形成克隆数分别为6．234±0．32和1．40±1．67,克隆形成率分别为85％和31％（P〈0．05）;内皮细胞管形成实验结果显示,实验组、对照组和空白细胞组小管数目分别为8．14土1．25、12．76±0．79和18．46±0．72（P〈0．01）,小管长度分别为98．56±3．71、105．17±134和151．62±2．51（P〈0．05）。结论：VEGF—C基因真核表达载体构建成功,VEGF—C基因促进胃癌细胞增殖、克隆形成和小管形成。     

单倍体异基因淋巴细胞输注在小鼠移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤效应中的意义

目的建立小鼠免疫耐受模型,探讨单倍体异基因淋巴细胞输注在小鼠移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗肿瘤（GVT）效应中的意义。方法64只BALB／C雌性小鼠按随机数字表法分为4组,每组16只。对照组：实验第4天接种肿瘤细胞（小鼠大肠癌CT26细胞株配制成1×10^7／mL的瘤细胞悬液,接种到雌性小鼠右腋皮下）后不予任何特殊处理;化疗组：实验第4天接种肿瘤细胞,第7天开始化疗;供体淋巴细胞输注（DLI）组：实验开始时进行预处理,第4天接种肿瘤细胞,第13、15、17天输注单倍体异基因淋巴细胞（雄性BALB／C小鼠制备的脾淋巴细胞）;化疗＋DLI组：实验开始时进行预处理,第4天接种肿瘤细胞,第7天开始化疗,第13、15、17天输注单倍体异基因淋巴细胞。预处理方案为输注单倍体异基因淋巴细胞＋环磷酰胺＋输注单倍体异基因淋巴细胞。化疗方案为小鼠接种肿瘤细胞后第3天给予环磷酰胺腹腔化疗。每日观察各组小鼠临床GVHD的指标,并给予临床评分。观察荷瘤鼠肿瘤生长情况,计算接种成功后首日到小鼠死亡的时间和肿瘤质量,计算抑瘤率。应用流式细胞仪检测各组小鼠外周静脉血中T细胞数量,接种后15d各组处死3只小鼠取瘤体制作成观察切片,HE染色后光镜观察。多组比较采用方差分析,组间比较采用LSD—t检验。结果化疗＋DLI组的小鼠GVHD临床表现轻于其他组小鼠。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组GVHD评分分别为（2．3±0．6）分、（1．5±1．1）分、（6．7±0．9）分、（3．4±0．5）分,4组比较,差异有统计学意义（F=148．68,P〈0．05）。4组小鼠全部接种CT26细胞成功。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组小鼠肿瘤质量分别为（3．40±0．20）g、（0．80±0．10）g、（2．20±0．20）g、（0．50±0．30）g,4组比较,差异有统计学意义（F=149．17,P〈0．05）;4组小鼠抑瘤率分别为0、77％±9％、35％±3％、85％±44％;4组小鼠CD3’分别为52．3％±2．9％、44．8％±3．1％、62．9％±3．5％、65．9％±3．3％,4组比较,差异有统计学意义（F：28．04,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD4＋分别为32．1％±2．6％、27．1％±1．1％、42．6％±1．8％、41．7％±2．4％,4组比较,差异有统计学意义（F=40．29,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD8＋分别为22．7％±2．2％、20．7％±1．8％、26．7％±0．8％、26．1％±0．7％,4组比较,差异有统计学意义（F=10．74,P〈0．05）;4组小鼠CD3＋CD＋CD25＋分别为8．7％±0．6％、6．6％±0．6％、11．2％±0．4％、13．3％±0．7％,4组比较,差异有统计学意义（F=82．88,P〈0．05）。4组小鼠的肿瘤组织均有不同程度的坏死、出血,其中DLI组和化疗＋DLI组肿瘤组织大片坏死,瘤细胞变小,间质内有大量炎性细胞浸润,化疗＋DLI组还可见大量增生的淋巴滤泡。对照组、化疗组、DLI组、化疗＋DLI组小鼠生存时间分别为（16．8±2．5）d、（26．3±2．9）d、（23．4±2．5）d、（33．7±4．6）d,4组比较,差异有统计学意义（F=46．45,P〈0．05）。结论（1）预处理方案可以诱导小鼠的特异性免疫耐受。（2）单倍体异基因淋巴细胞输注与化疗具有协同作用,联合应用可以抑制小鼠皮下移植瘤瘤体的生长以及延长小鼠的生存时间。（3）化疗可降低供体淋巴细胞输注后诱发的GVHD效应并且提高了GVT效果。（4）CD3＋CIN＋CD25＋T淋巴细胞在降低GVHD反应中起着重要的作用。     

Roux—en—Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾功能的影响

目的探讨Roux—en—Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾功能的影响。方法采用高脂高糖饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素（streptozocin,STZ,35肛∥g）方法建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的糖尿病SD大鼠分为3组：糖尿病组（8只）,假手术组（8只）,手术组（14只）;另取正常SD大鼠作为正常组（8只）。术前、术后8周检测大鼠空腹血糖,术前及术后4、8周测定血清BUN、Cr;术后8周取肾组织进行病理组织学观察,计算肾脏质量指数;免疫组织化学染色方法检测肾组织纤连蛋白、Ⅳ型胶原和TGF—B1的表达,采用Real—timePCR和Westernblot检测MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白的表达。多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD检验。结果术后8周,糖尿病组大鼠血糖、BUN、Cr、肾脏质量指数分别为（15．9±1．6）mmol／L、（9．24-0．6）mmol／L、（44±4）~mol／L、（10．7±1．5）mg／g,手术组大鼠分别为（5．9±0．7）mmol／L、（6．64-0．4）mmol／L、（304-2）~mol／L、（8．6±0．6）mg／g,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。与正常组比较,糖尿病组、假手术组大鼠肾小球体积增大,系膜增生;手术组有明显改善。正常组大鼠肾脏皮质纤连蛋白、Ⅳ型胶原、TGF—B1免疫组织化学染色积分光密度值、MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白的表达水平分别为664±23、864-5、524-6、1．00-4-0．04、644-4、1．004-0．20、48±5,糖尿病组大鼠分别为16654-44、7894-66、4594-35、0．52±0．13、514-6、0．364-0．05、384-4,假手术组大鼠分别为1701±55、7544-49、4254-42、0．544-0．19、484-5、0．434-0．09、394-4,手术组大鼠分别为11054-61、1954-11、1474-16、1．53±0．29、634-5、1．114-0．14、49-4-5,4组比较,差异均有统计学意义（F=1340．30,4982．50,2025．10,654．19,13．58,610．74,7．86,P〈0．05）。两两比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Roux—eFl—Y胃旁路术可改善糖尿病大鼠肾功能,减少细胞外基质沉积,其作用机制可能与抑制TGF-β1表达和上调MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白水平有关。     

SiewertⅡ型和Ⅲ型食管胃结合部腺癌全胃与近端胃切除术的疗效比较

目的探讨SiewertⅡ、HI型食管胃结合部腺癌（AEG）全胃与近端胃切除术的临床疗效。方法回顾性分析2012年6月至10月安徽医科大学第一附属医院收治的63例SiewertⅡ、llI型AEG患者的临床资料。其中33例患者采用全胃切除术（全胃切除术组）,30例患者采用近端胃切除术（近端胃切除术组）,分析比较两组患者的根治效果、术后胃肠功能恢复与胃食管反流情况及肿瘤复发情况、生命质量等指标。计数资料采用矿检验,计量资料采用t检验。结果全胃切除术组患者R。切除32例、R,切除1例,近端胃切除术组患者R。切除22例、R,切除8例,两组比较,差异有统计学意义（,=5．369,P〈0．05）。全胃切除术组患者A级根治28例、B级根治3例、c级根治2例,近端胃切除术组患者A级根治15例、B级根治5例、c级根治10例,两组比较,差异有统计学意义（,=10．177,P〈0．05）。全胃切除术组和近端胃切除术组近端切缘长度分别为（4．1±1．4）em和（3．9±1．6）em,两组比较,差异无统计学意义（t=0．666,P〉0．05）;而远端切缘长度分别为（8．1±2．6）cm和（4．2±2．6）em;淋巴结清扫数目分别为（25±4）枚和（21±4）枚;阳性淋巴结检出数目分别为（11±3）枚和（8±4）枚,两组比较,差异均有统计学意义（t=6．043,4．300,3．274,P〈0．05）。全胃切除术组和近端胃切除术组术后肠鸣音恢复时间分别为（1．3±0．5）d和（1．6±0．5）d;肛门排气时间分别为（3．1±0．7）d和（3．5±0．7）d;进食时间分别为（4．7±1．0）d和（5．3±1．2）d;术后住院时间分别为（10．0±2．0）d和（12．0±2．0）d,两组比较,差异均有统计学意义（t=-2．443,-2．059,-2．078,-4．037,P〈0．05）。全胃切除术组和近端胃切除术组术后第6天胃液TBil分别为（13±10）txmol／L和（414-18）Ixmol／L;IBil分别为（7±6）Ixmol／L和（26±15）txmol／L;胆汁酸分别为（20±12）ixmol／L和（204±88）ixmol／L;术后6个月反流性疾病问卷（RDQ）评分分别为（14±3）分和（19±5）分;术后6个月胃食管反流病问卷（GERD—Q）评分分别为（9．7±2．3）分和（12．0±2．5）分,两组比较,差异均有统计学意义（t=-7．544,-6．251,-11．379,-4．765,-3．882,P〈0．05）。全胃切除术组和近端胃切除术组患者术后6个月血清CEA水平为（3．8±2．6）¨∥L和（5．4±2．0）分,两组比较,差异有统计学意义（t=-2．611,P〈0．05）。结论全胃切除术治疗SiewertⅡ、Ⅲ型AEG患者的根治效果、术后胃肠功能恢复、胃食管反流和肿瘤复发等方面均优于近端胃切除术。     

不同引流方式对梗阻性黄疸大鼠部分肝切除术后肝再生的影响

目的探讨不同引流方式对梗阻性黄疸大鼠部分肝切除术后肝再生的影响。方法建立梗阻性黄疸70％部分肝切除sD大鼠模型。随后将120只sD大鼠按照随机数字表法分为对照组：行肝中、左叶切除;内引流组：于扩张胆管和十二指肠间置管引流;外引流组：于扩张胆管置管,导管另-端从腹腔引出。每组40只大鼠。内引流组和外引流组引流7d后行肝中、左叶切除,于术后0、1、2、4、12、24、48、72h收集3组大鼠血液及肝脏组织标本,测定肝再生率、有丝分裂指数。采用免疫组织化学染色法观察肝脏组织增殖细胞核抗原（PCNA）及信号传导与转录激活因子3（STAT3）的表达,ELISA法检测血清TNF．OL、IL-6水平,RT．PCR测定肝脏组织TNF—OLmRNA和IL-6mRNA的表达。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK检验。结果部分肝切除术后72h内引流组sD大鼠肝再生率为94．86％±12．72％,显著高于外引流组的62．39％±8．01％和对照组的45．77％±5．41％（F=33．62,P〈0．05）。3组大鼠肝脏组织有丝分裂指数和PCNA水平均于12h明显升高,内引流组有丝分裂指数和PCNA水平均于24h达到高峰,分别为24．47％±4．01％和88．1％±9．2％,对照组和外引流组于48h达到高峰,分别为15．80％±1．08％和58．3％±5．8％、18．40％±1．12％和70．2％±6．9％。内引流组有丝分裂指数和PCNA水平峰值显著高于对照组和外引流组（P〈0．05）。内引流组STAT3表达于术后4h达到高峰,为42．6％±3．6％,对照组和外引流组分别于术后12h达到高峰,分别为22．9％±2．0％和29．2％±3．7％。内引流组STAT3表达峰值显著高于对照组和外引流组（P〈0．05）。内引流组TNF—d和IL-6水平均于术后12h达到高峰,分别为（227±23）U／L和（256±32）U／L;对照组和外引流组TNF—d和IL-6水平均于术后24h达到高峰,分别为（309±41）U／L和（388±40）U／L、（287±30）U／L和（346±33）U／L,内引流组术后0、1、2、4、12、24、48、72hTNF-0l和IL-6水平显著低于相同时相点对照组和外引流组（P〈0．05）。对照组、内引流组和外引流组大鼠肝组织TNF-dmRNA表达均于术后4h达到高峰,分别为0．92±0．14、0．39±0．05、0．80±0．15,IL-6mRNA于术后12h达到高峰,分别为0．79±0．07、0．38±0．06、0．63±0．10,内引流组术后0、1、2、4、12、24、48、72hTNF—dmRNA和IL-6mRNA表达显著低于相同时相点对照组和外引流组（P〈0．05）。结论内、外引流均可改善梗阻性黄疸大鼠剩余肝脏的再生能力,但内引流效果更明显。内引流术可能通过降低TNF-α和IL-6水平,影响STAT3表达而改善梗阻性黄疸大鼠剩余肝脏的再生能力。     

回肠转位手术对猪血糖及肠激素的调节作用

的探讨回肠转位手术对猪血糖代谢的调节作用、肠激素水平及体质量的影响。方法将19只Yorkshire猪按随机数字表法分为回肠转位手术组（10只）及手术对照组（9只），分别实施回肠转位手术及对照手术。术前及术后1～4周，每周测定体质量；术前、术后2周、术后4周静脉采血检测WBC、RBC、红细胞压积（HCT）、Hb等实验室生化指标；术前、术后第4周经十二指肠灌注行葡萄糖耐量实验（DGTT），记录各时相点血糖值，绘制曲线并计算曲线下面积；DGTT中，分别采集0min和40min静脉血样检测血清胰高血糖素样肽1（GLP一1）。实验数据采用Mann—WhitneyU非参数检验。结果回肠转位手术组和手术对照组Yorkshire猪术后1、2、3、4周体质量分别为29．5、30．3、31．6、32．1kg和26．1、28．9、30．5、34．1奴，两组Yorkshire猪术后2、3、4周体质量均分别较术后1周有明显增长（Z日肠转位手糊=2．11，2．21，2．33，Z手术枷目=2．13，2．18，2．27，P〈0．05）；术后4周两组Yorkshire猪体质量比较，差异无统计学意义（Z=0．45，P〉0．05）。回肠转位手术组Yorkshire猪术后2周和4周WBC、RBC、HCT、Hb分别为（19．9±3．2）x10’儿、（5．40±0．21）×10μg/L、（29．8±1．4）×10μg/L、（84±4）g／L和（23．3±2．5）×10μg/L、（5．30±0．22）X10μg/L、（30．1±1．6）×10μg/L、（85±4）g／L，术前分另0为（16．7±1．6）×10μg/L、（5．80±0．22）×10μg/L、（33．1±1．3）×10μg/L、（92±4）g／L，术后与术前各指标比较，差异无统计学意义（Zw。。=1．24，1．54，ZR=0．84，0．88，zHcT=0．95，0．83，ZHb=1．25，1．17，P〉0．05）；手术对照组Yorkshire猪术后2周和4周上述指标分别为（18．7±2．3）X10μg/L、（5．50±0．21）×10μg/L、（33．3±1．1）×10μg/L、（89±4）g／L和（16．2±0．7）×10μg/L、（5．60±0．16）×10”／L、（34．5±1．6）X10μg/L、（89±4）g／L，与术前相应指标（检测值同回肠转位手术组术前指标）比较，差异无统计意义（ZwBc=1．04，0．36，ZRBc=0．78，0．43，ZHcT=0．22，0．42，ZHb=0．78，0．79，P〉0．05）。回肠转位手术组Yorkshire猪血糖峰值为（10．6±2．9）mmol／L，较术前的（13．5±2．6）mmol／L和手术对照组的（13．3±3．7）mmol／L显著降低（Z：2．31，2．30，P〈0．05）；回肠转位手术组Yorkshire猪血糖达峰值时间为（90±11）min，较手术对照组的（50±5）min明显延迟（Z=2．29，P〈0．05）；回肠转位手术组Yorkshire猪糖耐量曲线下面积为（1569±546）mmol／LXrain，明显低于术前基线水平（1938±873）nmlol／LXmin（z：2．26，P〈0．05）。术后第4周，葡萄糖灌注后40rain回肠转位手术组Yorkshire猪血浆GLP-1水平为（10．0±1．6）斗∥L，明显高于手术对照组的（4．3±1．7）μg/L（z=2．12，P〈0．05）。结论在Yorkshire猪大型哺乳类动物模型中，回肠转位手术可以有效改善其血糖代谢，并伴有肠激素GLP一1水平的升高，且手术本身并不导致机体体质量的下降。     

特异性阻断I型磷脂酰肌醇-3激酶信号通路对裸鼠胃癌移植瘤的抑瘤作用

目的研究利用重组腺病毒特异性阻断I型磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）信号转导通路,对裸鼠胃癌移植瘤的影响,并探讨其相关作用机制。方法用人胃癌细胞SGC7901建立裸鼠胃癌移植瘤模型,分为3组,分别给予重组腺病毒P13K（I）-RNAi-AD、空病毒NC-RNAi-GFP-AD和生理盐水处理。给药后第3、6和9天分别取5只裸鼠处死,测量移植瘤体积,计算抑瘤率;应用免疫组织化学法检测移植瘤组织的TNF-α、环氧化酶2（COX2）、P53、增殖细胞核抗原（PCNA）、E-cadherin及nm23／DNPK的表达水平。结果给药后第3、6和9天,P13K（I）-RNAi-AD组的抑瘤率分别为14.2％,21.0％和28.1％,显著高于空病毒组（1.3％、1.9％和2.0％,均P〈0.05）。给药后第9天。P13K（I）-RNAi-AD组TNF-α、P53、E-eadherin、nm23／DNPK蛋白的表达均明显高于空病毒组和对照组;而COX2、PCNA的表达则明显减少（P〈0.05）。结论重组腺病毒P13K（I）-RNAi-AD对裸鼠胃癌移植瘤有一定的抗肿瘤作用,其机制为通过抑制胃癌细胞增殖、血管生成、降低侵袭能力等多个途径共同发挥抑癌效应。     

臭氧氧化预处理在肾缺血再灌注损伤中对内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察臭氧氧化预处理对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用及其对内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的影响.方法 38只8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为4组.（1）假手术组（n＝8）：仅切除右肾;（2）缺血再灌注组（n＝10）：切除右肾、游离左肾后夹闭左肾动、静脉45 min再开通;（3）臭氧氧化预处理组（n＝10）：与缺血再灌注组建模方法一致,但在建模前15 d起每天1次经直肠灌注法吹入氧气和臭氧的混合气体5~5.5 mL;（4）氧气预处理组（n＝10）：与臭氧氧化预处理组建模方法一致,但经直肠仅吹入氧气（13 mg/kg）.建模后24 h检测各组大鼠血清肌酐、血尿素氮和血清一氧化氮浓度;48 h后采用免疫组织化学法和逆转录PCR法检测各组大鼠肾组织eNOS表达;蛋白质印迹法检测肾组织胞浆eNOS含量.结果 建模后24 h,缺血再灌注组大鼠血清肌酐为（117±20）μmol/L,血尿素氮为（32.8±7.6）mmol/L,血清一氧化氮为（58±12）μmol/L,均高于假手术组,差异有统计学意义（均P〈0.05）.臭氧氧化预处理组血清肌酐为（63±16）μmol/L,血尿素氮为（17.4±5.2）mmol/L,低于缺血再灌注组和氧气预处理组,差异有统计学意义（均P〈0.05）;血清一氧化氮为（84±14）μmol/L,均高于缺血再灌注组和氧气预处理组,差异有统计学意义（均P〈0.05）.臭氧氧化预处理组肾组织学Paller评分（41±6）低于缺血再灌注组（62±9）,eNOS灰度值（163±15）高于缺血再灌注组（126±18）,差异有统计学意义（均P〈0.05）.假手术组大鼠肾组织内有微量eNOS mRNA表达,缺血再灌注组、臭氧氧化预处理组和氧气预处理组eNOS mRNA表达增强,均高于假手术组（均P〈0.05）,臭氧氧化预处理组eNOS mRNA表达高于缺血再灌注组和氧气预处理组（均P〈0.05）.假手术组无明显eNOS蛋白表达,缺血再灌注组、臭氧氧化预处理组和氧气预处理组eNOS蛋白表达增强,均高于假手术组（均P〈0.05）,臭氧氧化预处理组eNOS蛋白表达高于缺血再灌注组和氧气预处理组（均P〈0.05）.结论 臭氧氧化预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用,作用机制可能与其诱导eNOS合成增多、一氧化氮产生增多有关.     

Beclin-1在胃癌血管生成拟态形成中的表达及意义

目的 探讨胃癌细胞SGC7901在体外血管生成拟态（VM）的形成过程中,自噬特异性基因Beclin-1的表达情况及其对VM形成的影响.方法 分别将ShRNA整合质粒载体和空白质粒载体转染到胃癌细胞SGC7901中,采用RT-PCR及Western blot法检测SGC7901细胞中Beclin-1表达情况;并在体外构建VM模型,观察不同转染细胞中VM形成能力的差异,同时检测VM形成前后细胞中VM形成基因Notch-1的表达情况.结果 胃癌SGC7901形成VM过程中,Beclin-1及Notch-1 mRNA和蛋白表达均明显升高（均P＜0.05）.与转染空白质粒的SGC7901细胞相比,转染ShRNA整合质粒抑制Beclin-1后,VM形成的细胞管状结构的数目[（15.4±1.1）个比（37.8±1.9）个,P＜0.05]、长度[（316.8±24.6） mm比（385.1±14.2） mm,P＜0.05]和交点数[（11.6±1.1）个比（27.2±1.1）个,P＜0.05]明显减少,同时Notch-1表达亦明显下降（P＜0.05）.结论 Beclin-1通过维持胃癌细胞VM调节基因的稳定表达促使VM形成,抑制Beclin-1为胃癌的基因治疗提供了一个可能的新靶点.     

2型糖尿病肾脏疾病患者尿白蛋白/肌酐比值与25-羟维生素D3的关系

目的 探讨2型糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）患者尿白蛋白/肌酐比值（UACR）与血清25-羟维生素D3 [25-（OH）-VitD3]之间的关系.方法 90例2型糖尿病患者根据UACR分为非糖尿病肾脏疾病组30例（UACR＜30 mg/g）、早期DKD组30例（30mg/g≤UACR＜300 mg/g）、临床DKD组30例（UACR≥300mg/g）,检测空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1C）、血脂、血钙、血磷、血肌酐及C反应蛋白（CRP）,电化学发光法检测3组血清25-（OH）-VitD3水平,采用t检验、Pearson相关分析及Logstic回归分析统计学方法分析.结果 3组中随UACR均值增加（10.32mg/g,156.5mg/g,456.2 mg/g）,血清25-（OH）-VitD3水平逐渐降低[（41.6±10.68） nmol/L,（33.7±7.38） nmol/L,（24.9±6.21） nmol/L],且每2组之间比较均有统计学差异（均P＜0.05）;而CRP逐渐升高[（7.6±3.4） mg/L,（11.8±5.6） mg/L,（15.6±6.9）mg/L],且每2组之间比较均有统计学差异（均P＜0.05）;3组中FPG[（7.12±2.08）mmol/L,（9.84±3.47）mmol/L,（10.97±4.69）mmol/ L]、HbA1C[（7.43±2.06）％,（8.37±1.83）％,（9.52±2.27）％]每2组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）.多因素Logstic回归分析显示,血清25 （OH） VitD3水平与FPG、CRP及UACR呈负相关（r分别为-0.362,-0.421,-0.543,均P＜0.05）,与血钙、血磷、TG及血肌酐无相关性（均P＞0.05）.结论 25-（OH）-VitD3缺乏可能与2型DKD发生、发展相关.