Genistein对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　探讨染料木黄酮 (genistein)对体外培养的兔晶状体上皮细胞增殖的影响。方法　用不同浓度的 genisteinDMSO溶液处理常规培养的第 3代兔晶状体上皮细胞 ,采用细胞计数法以及MTT法检测对晶状体上皮细胞增殖的影响。结果　 12 .5mg·L-1genistein对晶状体上皮细胞增殖无显著影响 ,genistein在 2 5mg·L-1可显著抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖 ,抑制率为 32 .86 % ,5 0mg·L-1genistein抑制率为 4 9.2 4 % ,10 0mg·L-1genistein抑制作用最强 ,抑制率达 70 .72 % ,且genistein在 2 5～ 10 0mg·L-1其抑制作用呈剂量依赖性。结论　genistein在浓度≥ 2 5mg·L-1时可显著抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖 ,且呈剂量依赖性。提示genistein可能在临床防治后发性白内障中有所帮助。     

体外培养兔晶状体上皮细胞胞间通讯的研究

目的　应用荧光淬灭后恢复 (fluorescenceredistributionafterphotobleaching,FRAP)技术研究兔晶状体上皮细胞胞间通讯 ,以及地塞米松和肝素对兔晶状体上皮细胞胞间通讯的影响。方法将体外培养兔晶状体上皮细胞接种于 96孔板 ,培养 2 4h后分别加入地塞米松 (浓度分别为 10、10 0、30 0mg/L)和肝素 (浓度分别为 1× 10 5、2× 10 5、4× 10 5U/L)。各组加入药物后 ,于 37℃继续培养 48h ,以羧基荧光素乙酰乙酸盐 ( 6 carboxyfluoresceindiacetate,CFDA)作荧光染色。以激光扫描仪 (ACASUltima)进行光淬灭并测定平均荧光恢复速率 (meanfluorescenceredistributionrate ,MFRR)。结果　地塞米松组 ,细胞内荧光淬灭后 ,平均荧光恢复速率 ( % /min)分别为 :对照组 0 375± 0 2 36 ,10mg/L组0 491± 0 2 39,10 0mg/L组 0 96 6± 0 44 7,30 0mg/L组 0 984± 0 379(F =2 6 0 7,P <0 0 5 ) ;肝素组 ,平均荧光恢复速率 ( % /min)分别为 :对照组 0 375± 0 2 36 ,1× 10 5U/L组 0 6 94± 0 491,2× 10 5U/L组1 0 97± 0 5 0 4,4× 10 5U/L组 1 0 82± 0 5 0 1(F =19 0 1,P <0 0 5 )。提示地塞米松和肝素可增强兔晶状体上皮细胞间的通讯 ,其作用与二者剂量有关。结论　应用FRAP技术证实兔晶状体上皮     

染料木黄酮对体外人LECs增生的抑制作用

目的研究染料木黄酮对人晶状体上皮细胞（LECs）增生的影响。方法通过集落实验和四唑溴盐（MTT）比色法观察不同质量浓度染料木黄酮作用12、24、48、72h后对LECs增生的影响，流式细胞仪检测其对人LECs周期的影响及凋亡的诱导作用。结果12．5、25、50、75mg／L组对细胞集落形成均有抑制作用（P〈0．05），随质量浓度增加，集落形成率减少。作用12h、24h组质量浓度75mg／L、48h组质量浓度12．5、25、50、75mg／L以及72h组各质量浓度对LECs的抑制作用与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪结果显示随质量浓度的增大，S期细胞明显增多。作用12h、24h诱导凋亡不明显；48h组12．5mg／L组出现凋亡峰，50mg／L组凋亡明显；72h组6．25mg／L组出现凋亡，随质量浓度的增加凋亡细胞数量增加。结论不同质量浓度的染料木黄酮可以抑制LECs的增生，有剂量效应关系和时间效应关系；作用一定时间，达到一定浓度可诱导人LECs凋亡。     

MTT比色法检测苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响

目的研究苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞增生的影响,探索白内障术后晶状体后囊浑浊的治疗药物。方法取第2代对数生长期的兔晶状体上皮细胞,培养24h后,加入不同浓度的苦参碱(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mg/mL)作用24h后,采用MTT法观察苦参碱对兔晶状体上皮细胞增生的影响。结果苦参碱随着浓度的增加,其抑制兔晶状体上皮细胞增生的作用逐渐增强,增生抑制率的升高呈现明显的剂量依赖性。结论苦参碱能有效抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞增生,在防止白内障术后晶状体后囊浑浊方面有一定的应用前景。     

类肝素、甘糖酯对体外培养的晶状体上皮细胞的影响

目的　观察类肝素及甘糖酯 (PGMS)对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞 (LECs)增殖的影响。方法　将质量浓度为 0 .2 ,0 .4,0 .8mg/ml的类肝素和PGMS作用于培养细胞 ,72h后行结晶紫染色比色测定 ,并对 2 4h内的 3H TdR掺入率进行测定。结果　类肝素、PGMS可使LECs增殖明显降低 (P <0 .0 5 ) ,DNA合成明显受抑 (P <0 .0 1) ,相同质量浓度下类肝素的作用强于肝素。结论　类肝素、甘糖酯对体外培养的大鼠晶状体上皮细胞有明显抑制作用     

苦参碱体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响

目的:研究苦参碱(matrine,Mat)体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响。方法:将0.5,1.0和1.5g/L的苦参碱作用于体外培养的兔晶状体上皮细胞,通过流式细胞仪检测其细胞周期各时相的百分比。结果:不同浓度梯度的苦参碱作用体外培养的兔晶状体上皮细胞72h后,与对照组及各浓度的Mat组之间相互比较,随着苦参碱浓度增高,G0-G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.05),呈明显的剂量-效应关系。结论:苦参碱能明显抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖活性和细胞有丝分裂。     

MTT法检测紫杉醇对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　研究紫杉醇 (Taxol)对体外培养的兔晶状体上皮细胞生长的影响。方法　取 2～ 3代对数生长期的兔晶状体上皮细胞 ,于 96孔板中培养 2 4 h后 ,用不同浓度的紫杉醇分别作用 2 4及 72 h,MTT比色测定法观察紫杉醇对兔晶状体上皮细胞增殖的影响。结果　我们发现 ,浓度为 0 .312 5 m g· L- 1的紫杉醇作用于培养的兔晶状体上皮细胞 2 4 h对其生长无明显的抑制 ,而作用 72 h则能抑制其生长。 2 4 h的半效抑制量 (ID50 )为 14 .6 81mg· L- 1 ,72 h的 ID50 为 4 .0 0 7mg· L- 1 ,紫杉醇还能抑制细胞贴壁。结论　紫杉醇对传代培养的兔晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用 ,紫杉醇对预防后囊膜混浊的发生可能有一定作用     

bFGF诱导的兔晶体上皮细胞TPK及PKC磷酸化的研究

目的 :探讨bFGF对培养的兔晶体上皮细胞酪氨酸蛋白激酶 (TPK )活性的影响 ,及对兔晶体上皮细胞蛋白激酶C (PKC)活性的影响。研究TPK及PKC信号系统在LEC增殖调控中的作用。方法 :家兔晶体上皮细胞原代及传代培养 ,应用同位素掺入法检测不同浓度 (0 1、 1、 10ng/ml)bFGF作用 2 4小时后 ,1 兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化。 2 细胞膜PKC及细胞质PKC活性的变化。结果 :bFGF作用 2 4小时后 ,晶体上皮细胞膜TPK、PKC及胞质PKC活性均较对照组明显升高 (P <0 0 5 )。结论 :bFGF可促进兔晶体上皮细胞膜TPK活性及胞膜、胞质PKC活性升高 ,该机制可能与促进晶体上皮细胞增殖有关。     

N-乙酰-L-半胱氨酸和过氧化氢酶抑制晶状体上皮细胞凋亡及对caspase-3酶活性的影响

目的　观察抗氧化剂N 乙酰 L 半胱氨酸 (NAC)和过氧化氢酶 (catalase ,CAT)对晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及对凋亡关键蛋白酶caspase 3酶活性的影响。方法　Sprayue Dawley(SD)大鼠 84只分成 4组 ,每组 2 1只。取晶状体于MEM培养液中培养 ,过氧化氢 (H2 O2 )组加入终浓度为 2mmol/L的H2 O2 ,对照组不加H2 O2 ,H2 O2 +NAC组及H2 O2 +CAT组除加入 2mmol/LH2 O2 外再分别加入 10 0 μmol/LNAC和 9× 10 5U/LCAT。培养 2 4h后观察晶状体透明度改变 ,透射电镜下观察细胞超微结构改变 ,流式细胞AnnexinV PI双染色法检测细胞凋亡率 ,并用Westernblot法分析caspase 3相对分子量为 2 0 0 0 0的活性亚单位的表达。结果　 2mmol/LH2 O2 作用 2 4h后可引起晶状体明显混浊 ,透射电镜下晶状体上皮细胞出现典型的凋亡形态学改变 ,细胞凋亡率上升为 (31 2± 3 3) % ,并伴随caspase 3酶活性增高 ;分别加入抗氧化剂NAC和CAT后 ,晶状体混浊度明显减轻 ,细胞凋亡率下降为(2 0 9± 3 2 ) %和 (15 0± 2 4 ) % (P <0 0 1) ,caspase 3酶活性均降低。结论NAC和CAT可有效抑制氧化损伤引起的晶状体混浊及上皮细胞凋亡 ,其抑制作用可能与降低caspase 3酶活性有关。     

依地酸二钠预防兔后发性白内障的实验研究

目的研究不同药物浓度的依地酸二钠（ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA）在白内障术中的应用,探讨其预防兔后发性白内障形成的效果及其对角膜的毒性作用。方法30只兔（60眼）随机分为5组,即对照组（BBS组）和4个药物实验组（5、10、15、30mmol/L EDTA组）,每组6只兔（12眼）,在麻醉下行透明晶状体超声乳化吸除术,术中用不同浓度的EDTA0．2ml进行水分离,并停留2min。于术后第3天和第1、第2、第3、第4、第12用对各组兔眼进行裂隙灯显微镜观察。在术后第3天时行角膜内皮电镜检查。在术后第12周时行晶状体后囊膜病理学检查．并对晶状体后囊膜中央湿重进行比较。结果①术后角膜及前房的炎症反应：术后第3天,对照组及5、10、15mmol／L EDTA实验组炎症反应轻微;而30mmol／L EDTA组炎症反应重,并有纤维素性渗出物。术后第4周,对照组及5、10、15mmol／L EDTA实验组均未见炎症反应,角膜清亮：而30mmol／L EDTA组仅6只眼角膜清亮,仍有4只角膜有持续水肿,色灰,并伴有眼球进行性增大。②后囊膜混浊情况：术后第12周,10、15mmol／L EDTA组的后囊膜混浊的程度较轻,评分后经统计学分析,差异有统计学意义（X2=32．775,R0．01）。⑧后囊膜中央湿重：术后第12周,10、15mmol／L EDTA组明显轻于对照组与5mmol／LEDTA组．差异有统计学意义（F=40．94．P〈0．01）。④病理学检查结果：电镜扫描,术后第3天,对照组与5、10、15mmol/L EDTA实验组角膜内皮细胞大小均匀,未见明显病理性损害：30mmol／L EDTA组角膜内皮细胞不规则．微绒毛稀少．可见病理性损害。光镜,术后第12周,光镜下可见各组均有晶状体上皮细胞增生,但以10、15mmol／L EDTA组为轻,仅为单层晶状体上皮细胞增生。结论白内障手术中用10、15mmol／L药物浓度的EDTA进行水分离,可有效预防后发性白内?     

干扰素抑制晶体上皮细胞生长的实验研究

研究α－干扰素和γ－干扰素对体外培养的免晶体上皮细胞生长的抑制作用有效药物浓度。方法取第２、３代传培养的晶体上皮细胞做药物抑制试验。     

甘糖酯体外对兔晶状体上皮细胞增殖的抑制作用(英文)

目的:观察甘糖酯(propylene glycol mannate sulfate,PGMS)对囊袋培养的兔晶状体上皮细胞(RLEC)增殖、移行的抑制作用。方法:新鲜处死的兔眼,模拟白内障囊外摘除术,体外环形撕囊,水核分离,去除核与皮质,游离晶状体囊袋并固定,建立RLEC体外培养的囊袋模型。实验组分别用0.2,0.4,0.8g/L的PGMS浸泡晶状体囊袋,作用时间分别为2,5,10min,同时设空白对照组。上述处理后,囊袋标本置含50mL/L胎牛血清的DMEM营养液中培养。7d后观察RLEC增殖、移行情况并行组织病理学、电镜检查。结果:实验组随着PGMS浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖、移行的速度明显减慢,其中浓度为0.8g/L,作用时间5min和10min两组,显著抑制RLEC生长(P<0.05)。对照组后囊上RLEC增殖、移行速度较快,培养7d后所有标本后囊细胞覆盖率达100%。电镜下对照组细胞结构完整;0.4g/L及0.8g/L实验组细胞退变明显。结论:甘糖酯能有效抑制体外培养的RLEC的增殖和移行。     

Inhibitory effect of propylene glycol mannate sulfate on growth of rabbit lens epithelial cells in vitro

AIM: To investigate the inhibitory effect of rabbit lens epithelial cell (RLEC) survival and growth by propylene glycol mannate sulfate (PGMS) on the rabbit capsular bag in vitro. · METHODS: Capsular bags were prepared from rabbit eyes after extracapsular cataract extraction (ECCE) and incubated in 0.2, 0.4, 0.8g/L PGMS in 2, 5, 10 minutes incubation periods. After treatment, the capsular bags were cultured for 7 days in Dulbecco minimum essential medium (DMEM) supplemented with 50mL/L fetal calf serum (FCS). The specimens were examined with light microscopy and transmission electron microscopy (TEM). Capsular bags without receiving PGMS only served as controls. · RESULTS: PGMS inhibited the proliferation of RLEC in the manner of concentration and time dependent. At the threshold protocol of incubation in PGMS at 0.8g/L for 5 or 10 minutes, proliferative activity of cells were largely arrested and nearly no RLEC was seen on the posterior capsule (P < 0.05). Control group had no effect on structure and proliferative activity of RLEC, and the growth proceeded rapidly so that the posterior capsule were totally covered by a confluent monolayer of cell by the end of 7 days. Under TEM, the cells in the control group were tightly arrayed with clearly defined cellular boundary and structure; while cellular deformity and undefined intracellular structure could be seen in the 0.4g/L and 0.8g/L experimental groups. · CONCLUSION: PGMS can effectively inhibit the proliferation of RLEC.     

Dexamethasone Modulation on Cultured Human Retinal Pigment Epithelial Cell

Purpose: Dexamethasone(DEX) was tested for its ability to modulate human retinalpigment epithelium (hRPE)cell proliferation in cell culture.Methods: DEX in different concentrations was added to cultured hRPE cells. The effectswere measured with MTT method, 3H-thymidine(3H-TdR) incorporation and flowcytometry.Results :DEX increased survival rate and DNA synthesis from 32 mg/L to 320 mg/Lunder hRPE culture conditions, but paradoxically reduced them at 1 000 mg/L and3 200 mg/L in dose and time dependent fashion by both MTT assay and 3 H-TdRincorporation. The cell numbers in S phase and G2/M phase increased 28. 32 % at DEXconcentration 320 mg/L, in contrast, reduced 41. 84 % at 1 000 mg/L.Conclusion: DEX increased proliferation from 32 mg/L to 320 mg/L, and inhibitedproliferation at concentrations greater than 320 mg/L. The inhibiting effect of DEX mayhappen in s phase and G2/M phase.     

Stimulation of maxi-K channels in trabecular meshwork by tyrosine kinase inhibitors.

PURPOSE: Muscarinic agonists contract and tyrosine kinase inhibitors relax precontracted trabecular meshwork, a smooth muscle-like tissue involved in the regulation of aqueous humor outflow. The effect of tyrosine kinase inhibitors on membrane currents of cells stimulated by acetylcholine was examined. METHODS: Cells from bovine trabecular meshwork were studied using both the perforated patch-clamp technique with nystatin and the single-channel technique. RESULTS: Application of the tyrosine kinase inhibitor genistein (5 x 10(-5) M) on trabecular meshwork cells stimulated with acetylcholine resulted in a reversible increase in outward current to 578%+/-154% (n = 16) of the initial current level. The effect of genistein was dose dependent. Reversal potential was hyperpolarized by 15+/-3 mV (n = 9). Tyrphostin 51, a synthetic inhibitor of tyrosine kinases, had the same effect (433%+/-46%; n = 7). Daidzein, a nonactive structural analogue of genistein, had no effect (n = 4). The stimulation of outward current by tyrosine kinase inhibitors was blocked by substitution of tetraethylammonium (TEA+) for potassium, whereas the potassium channel blockers glibenclamide (K-ATP) and apamin (low-conductance calcium-activated potassium channel) had no effect. Blockage of the high-conductance calcium-activated potassium channel (maxi-K) by charybdotoxin or iberiotoxin (10(7) M) suppressed 86%+/-18% (n = 4) of the response. Depleting the cells of calcium did not have an effect on the current stimulated by genistein. In the excised inside-out configuration, open probability increased to 417%+/-39% (n = 3) after exposure to genistein. CONCLUSIONS: In trabecular meshwork, tyrosine kinase inhibitors activate maxi-K (K(Ca)) channels. Hyperpolarization caused by efflux of potassium could lead to the relaxation of trabecular meshwork by tyrosine kinase inhibitors.     

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor ,bFGF)对兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelia cell,RlECs)的作用。方法：采用bFGF作用于第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞对增殖的影响;电观察细胞形态的变化,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果：bFGF可促进晶状体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg.L^-1作用最明显,透射电镜显示细胞增殖活跃,流式细胞仪观察进入S期的细胞明显增加。结论：bFGF是促进培养兔晶状体上皮细胞增殖的重要因素。     

染料木黄酮对兔结膜成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:观察染料木黄酮(genistein,Geni)对体外培养的兔结膜成纤维细胞(rabbitconjunctivalfibroblasts,RCF)增殖的影响。方法:应用MTT法测定不同生长时间及浓度的Geni,5-FU及二者联合药物对RCF生长的影响。结果:2.5￣40mg/LGeni对RCF生长抑制率分别为27.2%,34.0%,44.6%,55.1%,58.9%;不同浓度的Geni作用1,3,5,7d的生长抑制率,随时间、剂量增加而加大。Geni(5,10mg/L)与5-FU(1mg/L)联用的抑制率分别为45.6%和49.1%。结论:Geni对RCF的增殖有抑制作用,呈时间和剂量依赖性;与5-FU有协同效应。