全氟辛烷磺酸对人胎盘合体滋养细胞影响的研究

目的 研究全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate, PFOS)对人胎盘合体滋养细胞中糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ型(11β-HSD2)和胎盘合体滋养细胞凋亡的影响,探讨PFOS对胎儿的影响。方法 利用改良的Kliman法分离提纯原代人胎盘滋养层细胞,体外培养3 d,待滋养层细胞完全合体化为合体滋养细胞后,使用不同浓度的PFOS(0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L)处理细胞,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹等方法检测PFOS对胎盘合体滋养细胞11β-HSD2的mRNA和蛋白质表达水平,以及酶活性的影响,检测PFOS对天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase3)蛋白质表达水平和酶活性的影响。结果 体外培养第1、2、3天,胎盘滋养层细胞中11β-HSD2的mRNA和蛋白质相对表达量逐渐升高,与未处理时(即第0天)比较的差异具有统计学意义(P值均<0.01)。0.01μmol/L PFOS处理的人胎盘合体滋养细胞11β-HSD2的mRNA和蛋白质相对表达量较未处理时显著降低,且11β-HSD2的mRNA和蛋白...     

慢性地塞米松对海马神经元损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响

目的:研究慢性地塞米松(dexamethasone,DEX)对海马神经元NLRP-1炎症小体激活的影响及在慢性GCs诱导海马神经元损伤中的作用。方法:原代培养海马神经元到第5天,随机分成6组:对照组,DEX(0.1、1.0、5.0μmol·L~(-1))组,RU486(5.0μmol·L~(-1))组和DEX(5.0μmol·L~(-1))+RU486(5.0μmol·L~(-1))组。乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测海马神经元细胞损伤情况;Hoechst 33258染色测定海马神经元凋亡情况;Western blot检测NLRP-1、ASC、Caspase-1、IL~(-1)β的蛋白表达变化;ELISA检测细胞上清液中IL~(-1)β、IL~(-1)8的含量变化;Q-PCR检测NLRP-1、ASC、Caspase-1、IL~(-1)β的m RNA表达变化情况。结果:与对照组比较,DEX 1.0、5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显增加细胞上清液中LDH的含量和凋亡。免疫荧光结果显示,与对照组比较,DEX 1.0μmol·L~(-1)和5.0μmol·L~(-1)处理5 d海马神经元MAP2的表达明显降低;DEX 0.1,1.0和5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显减少海马神经元GR的表达。Western blot结果表明,与对照组比较,DEX 0.1,1.0和5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显减少海马神经元GR的表达以及明显增加NLRP-1和ASC的表达;DEX 0.1μmol·L~(-1)处理3 d能明显减少海马神经元caspase-1和IL~(-1)β的表达,DEX 5.0μmol·L~(-1)处理3 d的海马神经元caspase-1和IL~(-1)β表达明显增加;DEX 1.0μmol·L~(-1)和5.0μmol·L~(-1)处理3 d可明显下调海马神经元NF-κB的表达;与DEX 5.0μmol·L~(-1)组比较,RU486能明显抑制DEX诱导的海马神经元caspase-1和IL~(-1)β表达增高。ELISA结果表明,与对照组比较,DEX 1.0和5.0μmol·L~(-1)处理3 d能明显增加海马神经元细胞上清液中IL~(-1)β和IL~(-1)8的含量,而RU486能明显减少IL~(-1)β和IL~(-1)8的释放。结论:慢性DEX暴露可能通过下调海马神经元GR表达,激活NLRP-1炎性小体,增加海马神经元的炎症反应和诱导海马神经元损伤。     

11β-HSD1和11β-HSD2在妊娠期糖尿病患者胎盘组织中的差异表达及临床意义

目的 研究妊娠糖尿病患者胎盘组织中11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)和11β-HSD2基因和蛋白表达的变化及意义.方法 选择妊娠期糖尿病(GDM)和糖耐量正常孕妇(NGT)各30例,化学发光法测定皮质醇、胰岛素的水平,免疫组织化学法检测11β-HSD1和11β-HSD2在胎盘的表达部位,分别运用荧光定量PCR(real time PCR)和Western blot法测试11β-HSD1和11β-HSD2基因和蛋白水平的差异表达.结果 与NGT组相比,GDM组空腹胰岛素、HOMA-IR、胰岛素分泌指数、母血皮质醇水平明显增高(P<0.05),而空腹血糖、胎儿脐血皮质醇则差异无统计学意义(P>0.05).1β-HSD1和11β-HSD2均在胎盘中有表达,表达部位及水平不同.real time-PCR和Western blot检测结果提示GDM组胎盘11β-HSD1 mRNA和蛋白的表达明显低于NGT组(P<0.05),11β-HSD2 mRNA明显高于NGT组(P<0.05),而蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 妊娠期糖尿病胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2差异表达调整免除母体不佳的妊娠环境将会给胎儿造成的长远伤害.     

胎盘11β-HSD的表达差异与双胎生长不一致的关系

目的 研究胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD）的表达差异与双胎生长不一致的关系。方法 选取2021年1月至2022年12月在嘉兴市妇幼保健分娩的双绒毛膜双胎27对,根据双胎出生体质量差是否在20%及以上,分为双胎生长不一致（discordant twins,DT）组（实验组）及双胎生长一致（concordant twins,CT）组（对照组）。采用qRT-PCR法检测两组胎儿胎盘组织中11β-HSD1和11β-HSD2 mRNA的表达水平及差异。结果 两组胎儿胎盘组织中11β-HSD1 mRNA的表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;CT组A孩与B孩的11β-HSD2 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）,而DT组小孩胎盘11β-HSD2 mRNA的表达水平显著低于DT组大孩的表达水平,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 胎盘11β-HSD2的表达差异可能与双绒毛膜双胎生长不一致的发生有关。     

医疗机构“管办分离”的经济法原理分析

目的:探讨高浓度葡萄糖刺激下糖皮质激素对大动脉内皮细胞11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达的影响.方法:将猪髂动脉内皮细胞培养于高糖(30 mmol/L)中,分别加入不同浓度糖皮质激素刺激,用RT-PCR法检测11β-HSDI,11β-HSD2mRNA表达情况,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:正常对照组中,仅有少量的11β-HSD1 mRNA及蛋白表达,高糖状态下,11β-HSD1 mRNA和蛋白表达升高,且随着可的松浓度的增加而增加(P<0.05);高糖状态下,11β-HSD2 mRNA和蛋白表达元明显变化.结论:糖皮质激素使高糖培养下的动脉内皮细胞11β-HSD1表达增加,可能与糖尿病血管病变的发生发展有关.     

不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶基因表达的影响

目的:观察葡萄糖下对大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的影响,及11β-HSD1与TGF-β1,ET-1等细胞因子之间的关系;同时观察反义寡核苷酸对高糖条件下大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的干预作用.方法:猪髂动脉内皮细胞分别培养于不同浓度葡萄糖(5.6,10.0,20.0,30.0 mmol/L)中,用RT-PCR法检测11β-HSD1,11β-HSD2,TGF-β1,ET-1 mRNA的表达,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:高糖状态干预48 h后,11β-HSD1,TGF-β1mRNA表达随葡萄糖浓度的增加而增加,呈现一定的相关性;11β-HSD1蛋白表达随葡萄糖浓度增加而增加.采用11β-HSD1与11β-HSD2反义寡核苷酸干预后11β-HSD1与11β-HSD2 mRNA和蛋白质表达完全被抑制,同时TGF-β1的表达降低.结论:葡萄糖刺激血管内皮细胞11β-HSD1 mRNA和蛋白质表达增加,且在高糖状态下,11β-HSD1 mRNA的表达与TGF-β1RNA表达有直线相关性,11β-HSD1可能与糖尿病及其血管并发症相关.     

妊娠期过多接触糖皮质激素对子代大鼠肝脏11β-HSD1表达的印迹效应

目的:探讨妊娠期过多接触糖皮质激素对子代大鼠肝脏再生糖皮质激素代谢酶11β羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)表达的印迹效应.方法:根据大鼠发情周期进行合笼,次晨阴道涂片发现精子作为受孕0.5 d.孕鼠共8只,随机分为地塞米松(DEX)组和生理盐水(NS)组,每组4只.DEX组孕鼠整个妊娠期注射DEX 0.05 mg/(kg·d),NS组孕鼠同等条件注射NS.取DEX和NS组出生后120 d子代大鼠肝脏组织, 采用Western印迹法检测11β-HSD1蛋白,RT-PCR方法检测11β-HSD1 mRNA、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK) mRNA,葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.结果:DEX组大鼠子代出生时的体质量比NS组明显降低, 但生后120 d子代大鼠的体质量与NS组无显著性差异.生后120 d子代大鼠中DEX组雌性子代肝脏组织内11β-HSD1蛋白和mRNA表达、PEPCK mRNA表达以及血糖浓度均显著高于NS组雌性子代(P<0.05), 但雄性子代大鼠没有显著差异.结论:妊娠期过多接触糖皮质激素可以印迹雌性子代大鼠肝脏11β-HSD1的表达增加,从而可能进一步导致PEPCK表达的增加和血糖浓度升高.这可能是妊娠期过多接触糖皮质激素印迹糖尿病发生的重要机制之一.     

硫酸脱氢表雄酮对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的探讨硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)对胰岛β细胞株MIN6葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法以葡萄糖刺激浓度为2.8mmol/L和16.7mmol/L的对数生长期MIN6细胞作为实验对象,分别以1、5、10μmol/LDHEAS干预10min和24h(不同浓度DHEAS组),以5μmol/LDHEAS或与10μmol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486联合干预24h(DHEAS和DHEAS+RU486组),设立空白对照组。ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Real-TimePCR检测细胞胰岛素mRNA表达。结果干预后10min和24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞培养上清液中的胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P<0.05);干预后24h时点,DHEAS+RU486组与DHEAS组MIN6细胞培养上清液中胰岛素分泌量比较差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于空白对照组(P<0.05)。干预后24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞胰岛素mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 DHEAS对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素...     

人股骨头不同区域骨微血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶表达的差异

目的探讨人股骨头内不同区域骨微血管内皮细胞(BMECs)11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达水平及活化差异。方法选用于2017年1月至2018年6月在中日友好医院接受髋关节置换术切除的人新鲜股骨头组织标本,分别对人股骨头松质骨区与软骨下骨区的BMECs进行分离、纯化、鉴定和培养,用一系列低浓度梯度氢化可的松(0、0.03、0.06、0.10 mg/ml)分别对两个区域BMECs进行干预,观察股骨头不同区域的BMECs的细胞表型与功能状态,划痕实验检测细胞迁移能力,观察血管生成能力。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测比较不同部位BMECs内11β-HSD1、11β-HSD2 mRNA的表达,采用Western蛋白印迹法检测11β-HSD1、11β-HSD2蛋白表达情况。结果随着氢化可的松浓度升高,股骨头松质骨区和软骨下骨区BMECs 11β-HSD1 mRNA及蛋白相对表达量均明显增加,软骨下骨区BMECs 11β-HSD1 mRNA及蛋白相对表达量明显低于松质骨区(均P<0.05)。11β-HSD2 mRNA及蛋白相对表达量在股骨头松质骨区BMECs...     

11β-羟基类固醇脱氢酶在人肠癌细胞株中的表达及甘草次酸的作用

目的:在大肠癌肿瘤细胞中,11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)与肿瘤生物学行为密切关联,其抑制剂甘草次酸具有抗肿瘤增殖作用,具体机制尚不清楚.文中研究11β-HSD 2种同工酶在人肠癌细胞株中的表达情况,同时观察糖皮质激素及11β-HSD抑制剂甘草次酸对肠癌细胞增殖的影响. 方法:用RT-PCR、Western blot检测肠癌细胞株HCT-8中11β-HSD 2种同工酶mRNA及蛋白的表达.HCT-8分别培养于糖皮质激素及甘草次酸单用和联合用药环境中,用MTT法观察细胞增殖能力. 结果:11β-HSD1 mRNA及蛋白在HCT-8中未见表达,11β-HSD2 mRNA及蛋白在HCT-8中均表达.活性糖皮质激素氢化可的松及甘草次酸对肠癌细胞生长具有抑制作用且呈时间、剂量依赖性.100μmol/L氢化可的松应用后12h肠癌细胞生长抑制率(40.87±1.47)% ,加入11β-HSD2辅酶NAD 0.5mmol/L后细胞生长抑制率(5.79±0.20)%,差异有统计学意义(P<0.01).氢化可的松、NAD联合甘草次酸后肠癌细胞生长抑制率(45.55±1.01)% ,明显高于单药各组(P<0.05). 结论:11β-HSD2可能通过灭活糖皮质激素促进肠癌细胞增殖.甘草次酸可抑制11β-HSD2活性,提高氢化可的松的抗肠癌细胞增殖作用,并与自身抗细胞增殖有协同作用,可用于抗肿瘤治疗.     

促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist, GnRHa)(10-5mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L)和GnRH 拮抗剂(GnRH-antagonists, GnRHant)(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD) mRNA表达的改变. 结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA 分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01).同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45% (p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义. 结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSD mRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究.     

地塞米松对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及机理研究

目的 观察地塞米松(dexamethasone，DEX)以及DEX和RU486共同作用时对hCG诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌的影响和间质细胞中原癌基因c-myb表达的情况，从而探讨DEX的作用机制。方法 用放射免疫方法测定离体大鼠间质细胞的睾酮分泌量；用S-P免疫组织化学方法观察离体大鼠间质细胞中c-Myb蛋白表达的变化。结果 10^-8mol／L的DEX可降低hCG诱导的离体大鼠间质细胞睾酮分泌．并使间质细胞c-Myb蛋白免疫组织化学染色明显下降。上述DEX作用可被糖皮质激素受体功能阻断剂RU486(10μmol／L)所阻断。结论 DEX很可能通过降低间质细胞中c-Myb蛋白表达而抑制hCG诱导的间质细胞睾酮分泌。     

20-羟二十烷四烯酸对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响

目的探讨20-羟二十烷四烯酸（20-HETE）对人胎盘绒毛膜滋养细胞生物学行为的影响。方法体外培养人胎盘绒毛膜滋养细胞,分成正常对照组、药物介质组、20-HETE组、HET0016组,分别加入细胞培养基、二甲基亚砜、20-HETE及20-HETE抑制剂HET0016作用48h;采用ELISA法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）浓度,RT-PCR法检测人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGALmRNA表达。结果与正常对照组比较,药物介质组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量差异均无统计学意义（均P＞0.05）,20-HETE组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显降低（均P＜0.05）,HET0016组人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA相对表达量均明显升高（均P＜0.05）。结论20-HETE可抑制人胎盘绒毛膜滋养细胞MMP-9、NGAL浓度及mRNA表达,而其抑制剂HET0016起促进作用。     

螺内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的抑制作用

目的 观察醛固酮拮抗剂--螺内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响.方法 采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG+不同浓度螺内酯体外培养大鼠系膜细胞.以RT-PCR检测PAI-1、醛固酮受体(MR)和保护其配体特异性的11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)的mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中PAI-1蛋白的浓度.结果肾小球系膜细胞表达MR和11β-HSD2 mRNA;高糖刺激系膜细胞后PAI-1 mRNA表达明显升高,培养上清液蛋白浓度增加,加入螺内酯干预后系膜细胞PAI-1 mRNA和蛋白表达明显下降,且随螺内酯浓度增大,作用更明显.结论 螺内酯可能通过降低高糖对系膜细胞PAI-1表达的刺激作用而发挥其肾脏保护作用.     

促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达

目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成.GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用.文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h.GnRHa(10-7 mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达. 结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90min后,p-ERK水平在5min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90min时恢复到正常水平.加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平.用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05). 结论:GnRH激动剂可能通过ERK MAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌.     

大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制?方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa (10-7 mol/L)分别处理间质细胞6?12?24?36?48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059 (50 μmol/L) 和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化?结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性?GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45% (P < 0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P < 0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平?加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61% (与GnRHa组相比,P < 0.05),睾酮水平也随之显著下降45% (与GnRHa组相比,P < 0.05)?结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成?     

Leptin mRNA在早孕绒毛滋养细胞中的表达

目的测定早孕绒毛滋养细胞中leptin mRNA表达,探讨leptin在胎盘形成过程中的可能作用.方法取妊娠6～8周绒毛80份,分离、培养细胞滋养细胞并经光电镜、免疫细胞化学鉴定;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定滋养细胞leptin mRNA表达.结果①经光电镜、免疫细胞化学染色鉴定,细胞角蛋白-7(CK-7)染色强阳性,β-hCG染色个别细胞弱阳性,vimentin染色阴性,表明分离培养的细胞为滋养细胞.②滋养细胞表达leptin mRNA在235 bp处有区带.结论培养的早孕绒毛滋养细胞表达leptin mRNA,leptin可能在胚胎着床、滋养细胞浸润过程中起调控作用.     

阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的差异表达

目的 探讨阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的表达差异,以及该通道蛋白的表达改变与绒癌发生的关系.方法 人正常绒毛滋养细胞的原代培齐、纯化及鉴定;人绒毛膜癌JAR细胞株的培养.将原代纯化培养的人正常绒毛细胞设为正常组,人绒毛膜癌JAR细胞株设为绒癌组.以免疫组织化学法检测人正常绒毛滋养细胞和绒毛膜癌细胞株JAR细胞膜上AE2的表达.以RT-PCR技术检测人正常绒毛滋养细胞及绒癌JAR细胞中AE2 mRNA的表达水平.结果 在正常组中,原代培养的人正常绒毛滋养细胞上仅能从显微镜中肉眼观察到AE2的极低表达,以致摄影效果不佳.而在绒癌组中,绒癌JAR细胞膜上AE2的阳性细胞率为(91.59±12.10)%,远高于正常组.在正常人绒毛滋养细胞与人绒癌JAK细胞株中,均检测到AE2 mRNA的表达.绒癌组AE2的OD值为(0.85±0.21);正常组AE2的OD值分别为(0.19±0.01).绒癌组AE2的OD值明显高于正常组(P＜0.05).结论 AE2表达异常上调,滋养细胞内、外的水电解质平衡将被破坏,可能是导致绒癌发生的原因之一.     

甲状腺激素对新生大鼠海马11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型表达的影响

目的:探讨在大鼠脑的晚期发育过程中,甲状腺激素对海马组织中糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)表达的影响及意义.方法:将妊娠末期SD母鼠用丙基硫氧嘧啶(PTU,50mg/d)灌胃,制造孕晚期甲状腺功能低下的模型;应用Western免疫印迹法,检测实验性妊娠晚期甲状腺功能低下对新生大鼠海马组织11β-HSD1表达的影响;应用薄层层析法和Western免疫印迹法,观察三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine,T3)和人工合成的糖皮质激素(Dex)对体外培养的新生大鼠海马神经元11β-HSD1活性和蛋白的影响.结果:妊娠晚期甲状腺功能低下的母鼠分娩的新生鼠海马组织11β-HSD1酶蛋白的表达量比对照组降低41.6%.T3(10-9、10-8、10-7mol/L)及Dex(10-7mol/L)分别上调原代培养的新生大鼠海马神经元中11β-HSD1酶的活性达29.4%、45.6%、60.9%、39.8%,分别上调酶蛋白的表达量达26.0%、43.2%、64.9%、41.1%,而且T3与Dex之间表现出显著的协同效应,Dex(10-7mol/L) T3(10-7mol/L)组上调该酶活性达114.1%,上调该酶蛋白质表达达123.3%.结论:T3可以单独或与糖皮质激素协同作用上调11β-HSD1酶的蛋白表达和活性,从而进一步增加海马组织局部有活性的糖皮质激素的水平,这可能是甲状腺激素调节脑发育成熟的机制之一.     

11β-羟类固醇脱氢酶1型在小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系NIT-1中的表达

目的 探讨 11β-羟类固醇脱氢酶 1 型(11β-HSD1)在 C57BL/6J 小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系 NIT-1 中的表达及其生物学意义.方法 以11β HSD1 肝脏组织中的表达为阳性参照,RT-PCR 法和 Western blot 法检测小鼠胰腺组织中 11βHSD1 mRNA 和蛋白表达.细胞免疫化学法检测 NIT-1 细胞中 11β-HSD1 的分布与表达,RT-PCR 法和Western blot 法检测 NIT-1 细胞中 11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达.结果 ①在正常 C57BL/6J 小鼠胰腺组织中有 11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达,其表达量均低于肝脏组织(均P<0.01).②细胞免疫化学染色示 NIT-1 细胞胞质见棕黄色染色阳性颗粒,同时 NIT-1 细胞中有11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达.结论 小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系 NIT-1 中有11β-HSD1 基因表达,为研究糖皮质激素代谢对胰岛细胞功能的影响以及其它潜在的生理功能,提供了一条研究途径.