葆生精改善少弱精子症模型大鼠生殖功能的实验研究

目的研究葆生精对奥硝唑所致少弱精子症模型大鼠生殖功能的保护作用。方法取34只雄性SD大鼠,将大鼠按体质量随机分为溶剂对照组(7只)、少弱精子症模型组(8只)、生理盐水对照模型组(9只)和葆生精治疗模型组(10只)。除溶剂对照组外,其他各组灌服奥硝唑400 mg/(kg·d)。从奥硝唑灌胃的第15天开始,葆生精治疗模型组加用葆生精514 mg/(kg·d),生理盐水模型组加用葆生精等体积的生理盐水,连续给药三周。观察各组大鼠附睾精子浓度、活力和运动参数等指标变化,睾丸作HE染色观察组织形态学改变,检测睾丸中抗氧化酶SOD、GSH-Px酶活性,抗凋亡蛋白Bcl-2和凋亡蛋白Caspase-3的表达变化。结果与溶剂对照组相比,少弱精子症模型组大鼠附睾精子密度明显降低[(16.92±1.31)×10~6/m L vs (31.62±4.44)×10~6/m L],活力也明显降低[(54.13±2.58)%vs (88.33±4.04)%],差异均有统计学意义(P均0.01)。葆生精治疗模型组大鼠附睾的精子密度和活力比少弱精子症模型组明显增加,两组的密度分别为(26.34±3.16)×10~6/m L和(16.92±1.31)×10~6/m L,两组的活力分别为(78.4±2.43)%和(54.13±2.58)%,两组比较,P均0.01,而生理盐水对照组与少弱精子症模型组无明显差异,各组中直线速率、曲线速率等精子运动参数也表现为相同趋势。少弱精子症模型组大鼠睾丸组织中部分生精细胞脱落,层次排列紊乱,生精上皮细胞变薄,管腔内精子数量明显减少;葆生精治疗组大鼠睾丸中虽然各级生精细胞排列略稀疏,但生精上皮形态基本恢复,各级生精细胞及管腔内精子数目都有明显增加。与溶剂对照组相比,少弱精子症模型组大鼠睾丸中SOD和GSH-Px的酶活力均明显降低,分别为[(10.71±1.34) U/mg vs (30.02±5.42) U/mg和(58.33±20.23) U/mg vs (175.00±27.9) U/mg,差异均有统计学意义(P均0.01),葆生精治疗组两种酶活力均明显增加,分别为(34.30±8.24) U/mg和(220±55.41) U/mg。同时我们观察到与对照组相比,少弱精子症模型大鼠睾丸组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有所下降而凋亡蛋白Caspase-3的表达明显增加,葆生精治疗组Bcl-2表达增加而Caspase-3的表达下降。结论葆生精可通过提高少弱精子症模型大鼠的抗氧化能力,修复生殖系统的氧化损伤,抑制生精细胞凋亡,从而提高精子密度和活力,发挥对生殖系统的保护作用。     

补肾生精方促进少弱精症大鼠精子发生的作用机制研究

目的：研究补肾生精方对腺嘌呤诱导的少弱精症大鼠精子发生的作用机制。方法：采用腺嘌呤灌胃诱导SD大鼠制备少弱精症大鼠模型,将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、五子衍宗丸组（1 g/kg）和补肾生精方高、中、低剂量组（2.8 g/kg、1.4 g/kg、0.7 g/kg）,给药3周。干预结束后采用放射免疫法测定血清睾酮水平;利用计算机辅助精子分析系统评估精子密度、活动力;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠睾丸组织病理形态学改变;免疫组织化学（IHC）检测大鼠睾丸组织支持细胞中波形蛋白表达水平。结果：与模型组相比,给药组的大鼠睾丸病理损伤有所改善,睾丸组织部分生精小管增厚,细胞排列紧密,部分管腔缩小,生精细胞和精子数量增加。与模型组相比,五子衍宗丸组及补肾生精方各剂量组血清睾酮水平均上调（P<0.05）,其中,五子衍宗丸组、补肾生精方高剂量组上升明显（P<0.05）,差异有统计学意义。与模型组相比,给药后大鼠精子质量有所改善,精子活动力差异有统计学意义（P<0.05）,同时,补肾生精方高剂量组在改善精子密度方面优于模型组（P<0.05）;补肾生精方高剂量组在改善精子...     

大鼠骨髓间充质干细胞对雄性生殖系统的修复作用

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在无精子症大鼠模型中对睾丸内环境的修复能力。方法:将同种异体BMSCs移植入无精子症模型大鼠睾丸生精小管中,注射后30 d HE染色观察生精小管细胞组成和结构,免疫组化检测CD44、CD106和c-kit表达情况。结果:与正常大鼠相比,20 mg/kg白消安组中大鼠附睾中精子数量明显减少(P0.01)。分离得到的BMSCs表达CD44和CD106,而不表达c-kit。BMSCs注射移植30 d后,HE染色显示移植组生精小管内形成新的细胞,部分细胞表达CD106,部分细胞表达生殖细胞表面标记c-kit。结论:BMSCs在移植组无精子症大鼠生精小管中能够分化为生殖细胞,对受损的不育大鼠生精小管进行修复。     

L-肉碱在奥硝唑所致大鼠睾丸和附睾损伤中的保护作用

目的:探讨L-肉碱(LC)在奥硝唑(ORN)所致大鼠附睾和睾丸损伤中的的保护作用。方法:40只雄性SD大鼠(200～230g)随机均分为5组:①A组:给予0.5%的羧甲基纤维素钠(溶剂)灌胃;②B组:每天给予400mg/kgORN灌胃;③C组:每天给予800mg/kgORN灌胃;④D组:每天给予[ORN(400mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃;⑤E组:每天给予[ORN(800mg/kg)+LC(100mg/kg)]灌胃。上述各组均连续灌胃20d,末次给药24h后,所有大鼠麻醉后处死,分别取睾丸、附睾,进行称重和HE染色,计算睾丸、附睾系数并观察睾丸和附睾病理组织学改变。结果:①与A组相比,B组睾丸、附睾系数明显降低(P<0.05);而C组睾丸、附睾系数为极显著性降低(P<0.01);D组与A组相比无差异,E组与A组相比有极显著性差异(P<0.01);②HE染色显示,与A组相比,B组睾丸生精小管内各级生精细胞排列基本整齐,部分生精小管管腔内有脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目下降,有时可见散在的生精细胞;C组大鼠睾丸生精小管管腔内均可见坏死脱落的生精细胞,附睾管腔中精子数目明显减少,且有较多的非精子细胞成分。D组睾丸生精小管无明显改变,附睾管腔中精子数目也未见明显下降;E组睾丸生精小管管腔内精子数目减少,可见坏死脱落的生精细胞,附睾腔中精子数目明显减少,并伴有较多的非精子细胞成分。结论:奥硝唑(ORN)可导致雄性大鼠附睾和睾丸病理组织学改变,LC对ORN引起大鼠附睾和睾丸损伤具有一定的保护作用。     

菟丝子黄酮对少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达的影响

目的:探究菟丝子黄酮对少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达的影响。方法:SD雄性大鼠30只,随机分为空白对照组、模型组和菟丝子黄酮组,每组各10只,菟丝子黄酮组和模型组腹腔注射环磷酰胺,建立少弱精子症模型。菟丝子黄酮组灌服菟丝子黄酮混悬液,空白对照组和模型组灌服等量生理盐水,连续4周。取附睾液进行精子计数及活动率测定,制作睾丸切片并分别在光镜和电镜下观察睾丸组织学变化及超微结构改变。用蛋白芯片检测各组大鼠睾丸GM-CSF的表达情况。结果:模型组大鼠与空白对照组、菟丝子黄酮组大鼠相比,附睾液精子数目降低(P0.01)且活动率下降(P0.01),睾丸形态学发生明显改变,生精小管变形,生精细胞数目减少且排列混乱。菟丝子黄酮组大鼠的睾丸组织结构正常,精子数目、活动率与空白对照组的差异无统计学意义。菟丝子黄酮组和空白对照组大鼠睾丸GM-CSF的表达量均低于蛋白芯片可测得的最小值故而未测得准确数值,模型组大鼠睾丸GM-CSF表达显著上升。结论:环磷酰胺所致少弱精子症大鼠睾丸GM-CSF表达增强,经过菟丝子黄酮干预后GM-CSF表达与空白对照组的差异无统计学意义。     

环磷酰胺对雄性大鼠生精功能的影响

目的 观察环磷酰胺对大鼠生精功能的影响.方法 8周龄成年雄性sD大鼠,分6组,每组16只.前5组为实验组,给药方法分别为每日10、20、40、80、100 mg/kg,另1组为对照组.胃管给药2周和4周后,处死大鼠,取附睾精子行CASA检查;取睾丸组织苏木素.伊红(HE)染色分析睾丸曲细精管结构变化,TUNEL法检测睾丸曲细精管细胞凋亡情况.留取血清标本采用电化学发光法检测性激索水平.结果 环磷酰胺每日40 mg/kg喂养4周,大鼠存活率93.8%,精子数量明显减少(29.36±8.64)X 106个/ml,精子活力降低(22.25±2.03)%,睾丸生精上皮细胞明显损伤变性(58.1±1.2)%,血清睾酮水平下降(0.149±0.020)μg/L.这些指标的变化与环磷酰胺给药剂量及时间旱负相关(P<0.05).结论 通过环磷酰胺诱导可以成功建立大鼠少精/无精症动物模型,环磷酰胺主要通过坏死和凋亡两种途径导致睾丸曲细精管结构变化,导致生精细胞减少并最终引起少精/无精症.     

慢性疼痛应激对雄性SD大鼠生殖相关参数的影响

目的 观察不伺时间段慢性疼痛应激后,SD大鼠生殖相关参数的变化.方法 建立坐骨神经分支选择性损伤模型.经不同时间疼痛应激后,于14 d、21 d和28 d处死大鼠,取睾丸、附睾称重,并对附睾尾精子计数,HE染色显示睾丸结构变化,western blot检测3 β-HSD蛋白表达的改变.结果 14 d和21 d手术组大鼠体重均略低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).不同时间段各组大鼠睾丸和附睾系数均无明显变化.28 d后手术组附睾尾精子相对计数显著低于对照组(P<0.05).HE染色显示,坐骨神经分支选择性损伤诱导疼痛应激28 d后睾丸生精上皮中生精细胞减少,生精小管腔内精子数量减少.Western blot结果显示28 d手术组3 β-HSD表达显著低于正常照组和假手术组(P<0.05).结论 慢性疼痛应激如其他方式应激一样,能引起大鼠附睾尾精子相对计数减少,睾丸生精上皮中生精细胞减少,睾丸内3 β-HSD含量降低,慢性疼痛应激降低了大鼠的生精功能.     

基于L-肉碱通路探讨灵归方对弱精子症大鼠生殖系统保护作用的实验研究

目的:探讨灵归方对奥硝唑(ORN)所致弱精子症大鼠生殖系统保护作用及其可能机制。方法:将40只体重200～230 g的雄性SD大鼠随机将其分为空白组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组各10只。模型组:予400 mg/kg ORN灌胃;灵归方组:予灵归方浓缩液,按17.5 g生药/kg体重+400 mg/kg ORN灌胃;左卡尼汀组:予左卡尼汀100 mg/kg+400 mg/kg ORN灌胃;空白组:予等量0.5%羧甲基纤维素钠(CMC2Na);均1次/d,连续灌胃4周后,检测各组大鼠精液质量、附睾中L-肉碱的含量,大鼠附睾OCTN2 mRNA的表达并观察睾丸组织病理。结果:与模型组相比,各组精子浓度无统计学差异(P0.05),前向运动精子(PR)和前向+非前向运动(NP)精子百分率均高于模型组,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,各组附睾的肉碱含量均提高,有统计学差异(P0.01)。灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达量明显高于模型组,有统计学差异(P0.05)。睾丸病理观察结果发现,与空白组比较,模型组异常结构生精小管明显增多,排列不整齐,生精小管管腔缩小加重,管腔内精子及精子细胞数量减少,空腔型生精小管明显增多,生精小管内部各级生精细胞缺失,排列层次紊乱,上皮部分变性并出现空泡征;左卡尼汀组及灵归方组大鼠睾丸组织结构趋于正常,生精小管中各级生精细胞排列基本规整,生精小管结构基本正常。结论:①ORN可诱导大鼠产生弱精子症,且与降低附睾L-肉碱含量可能有关;②灵归方可以改善奥硝唑诱导的弱精子症大鼠精液活力;③灵归方可以改善ORN诱导睾丸的病理组织结构;④灵归方可以提高附睾中OCTN2 mRNA在附睾中的表达,其可能与提高附睾肉碱浓度有关。     

淫羊藿苷对酒精致雄性小鼠生殖损伤的影响

目的探讨淫羊藿苷对酒精致雄性小鼠生殖损伤的保护作用,为临床治疗酒精致男性不育提供理论依据。方法成年雄性小鼠随机分为正常组(蒸馏水)、模型组(酒精组)和给药组(酒精+淫羊藿苷组),灌胃5周后处死并制备附睾精子悬液,分别测定精子密度、精子活动率、存活率、精子畸形率;JC-1染色法检测线粒体膜电位改变;制备睾丸组织切片,观察睾丸组织病理改变。结果模型组小鼠精子密度、精子活动率和存活率明显低于正常组,精子畸形率明显增加;给药组精子密度、精子活动率和存活率较模型组明显升高,精子畸形率明显降低。线粒体膜电位分析,模型组去极化细胞(凋亡细胞)比例明显高于正常组;给药组去极化细胞(凋亡细胞)比例低于模型组。睾丸组织切片观察发现,与正常组比较,模型组生精细胞层数减少,结构紊乱稀疏;给药组生精小管结构明显改善。结论淫羊藿苷对酒精致雄性小鼠生殖损伤有一定保护作用。     

抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子表达的影响分析

目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)对雄性大鼠睾丸、精原干细胞及相关因子八聚体结核转录因子4(OCT-4)、胶质细胞源神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响.方法 选取16只8周龄Wister雄性大鼠采用随机数字表法分为CTX组和对照组各8只,CTX组采取连续3d腹腔注射CTX(50 mg/kg),对照组采取等量生理盐水,对比两组大鼠给药后1、2、4周的精子细胞凋亡数及S期细胞所占比例的变化;对比两组大鼠给药4周后的睾丸、附睾重量、生精小管直径差异;采用免疫组化染色检测两组睾丸OCT-4、GDNF蛋白的表达情况.结果 CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞凋亡数均显著的高于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药后1、2、4周的生精细胞S期所占细胞比例均显著的低于同期的对照组(P＜0.05);CTX组大鼠在给药4周的睾丸、附睾重量显著地低于同期的对照组(P＜0.05);两组大鼠的生精小管直径差异无统计学意义(P＞0.05);CTX组大鼠睾丸组织中GDNF蛋白阳性表达显著地低于对照组大鼠(P＜0.05);两组大鼠的OCT-4蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CTX具有诱导精原细胞凋亡的作用,干扰精原细胞增殖分化功能,可能与下调睾丸组织中GDNF有关.     

青春期前邻苯二甲酸二丁酯持续暴露对大鼠睾丸发育的影响

目的:研究青春期前邻苯二甲酸二丁酯(DBP)持续暴露对睾丸发育的影响。方法:21日龄断乳青春期前雄性SD大鼠随机分为对照组(n=24)和实验组(n=54),每日分别用玉米油或DBP玉米油溶液灌胃,DBP暴露剂量分别为50mg/(kg.d)(低剂量组,n=18)、200mg/(kg.d)(中剂量组,n=18)和600mg/(kg.d)(高剂量组,n=18),各组动物持续暴露14、21、28d后(即PND35,PND42和PND49)断颈处死。记录大鼠体重变化,检测睾丸重量和体积、附属性器官重量及附睾精子,化学发光免疫分析法检测血清睾酮含量,苏木精-伊红染色观察睾丸组织形态学变化,测量生精小管平均直径及进行睾丸活检评分。结果:低剂量组PND35少量生精小管生精细胞排列紊乱,PND42和PND49睾丸、附属性器官发育及生精功能正常;中剂量组PND35和PND42生精细胞排列紊乱、数目减少,PND49生精小管内可见各级生精细胞及精子,睾丸未见萎缩,附属性器官发育正常;高剂量组大鼠体重增长减缓,血清睾酮水平低下,睾丸生精小管变性萎缩,生精上皮发育阻滞,生精细胞大量凋亡坏死,青春期大鼠睾丸萎缩,无精子,附睾、前列腺和精囊等附属性器官发育迟缓。结论:青春期前DBP持续暴露可损害睾丸组织发育和正常生精功能形成,其毒性效应具有剂量依赖性,高剂量DBP持续暴露引起的睾丸毒性在青春期前发育过程中不可修复,而低中剂量暴露引起的睾丸毒性在PND49之前可完全或部分逆转性恢复。     

多菌灵对大鼠睾丸发育和生精功能影响的研究

目的:探讨多菌灵对雄性大鼠睾丸发育和生精功能的影响及其作用机制。方法:40只清洁级未成年Wistar雄性大鼠随机分为4组(对照组,低、中、高剂量组,每组10只),低、中、高剂量组经口灌胃不同浓度的多菌灵溶液(分别为20、100、200mg/kg体重),对照组给予吐温80溶液,1次/d,连续80d。染毒结束后,立即取睾丸和附睾,观察其形态。测定各组大鼠体重及右侧睾丸和附睾重量;取左侧附睾尾测定精子活率和精子数量;采用HE染色法、原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化SABC法观察大鼠睾丸组织的病理学变化、细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达情况。结果:中、高剂量组大鼠睾丸和附睾均明显萎缩、右侧睾丸和附睾重量减轻,左侧附睾尾精子活率和精子数量均低于对照组(P<0.01);中、高剂量组睾丸组织病理学检查可见明显异常;随多菌灵染毒浓度的增加,各剂量组生精细胞凋亡率逐渐升高,Bcl-2表达下降,Bax表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:多菌灵可影响雄性大鼠的睾丸发育和生精功能,可能与下调Bcl-2和上调Bax致细胞凋亡增加有关。     

L-肉碱对糖尿病大鼠生精细胞凋亡及附睾精子数量和活动率的影响

目的:探讨L-肉碱(LC)对糖尿病(DM)大鼠生精细胞凋亡及附睾精子数量和活动率的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机均分为3组,一组作为对照组,剩余两组分别注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)建立DM模型。建模成功后,各组大鼠分别给予如下灌胃剂量:对照组:生理盐水;DM模型组:生理盐水;LC组:300 mg/kgLC溶液,连续灌胃6周。末次给药24 h后,麻醉处死所有大鼠,分别进行附睾精子计数并检测精子活动率,流式细胞术检测各组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况。结果:用LC治疗后的大鼠附睾头、尾精子活动率(%)分别为53.7±1.8和60.3±1.6,显著高于DM模型大鼠(分别为32.2±2.0和40.5±1.4,P<0.05),但低于对照组大鼠精子活动率63.1±2.4和68.9±1.3。与对照组附睾尾精子相对计数[(37.8±1.1)×106/100 mg]相比,DM组显著减少[(25.5±1.1)×106/100 mg],且具有统计学差异(P<0.05);LC治疗后大鼠附睾尾精子相对计数[(32.0±1.5)×106/100 mg]比DM组显著增加(P<0.05),但仍低于对照组。与对照组生精细胞凋亡率[(3.7±1.3)%]相比,DM组生精细胞凋亡率[(52.5±4.4)%]显著上升(P<0.05);经LC治疗后,LC组大鼠生精细胞凋亡率为(35.3±3.5)%,比DM组显著降低(P<0.05),但仍显著高于对照组。结论:LC(300 mg/kg)灌胃DM大鼠6周,可以减少DM大鼠生精细胞凋亡,增加附睾精子数量,提高精子活动率。     

雷公藤多甙抑制大鼠精子发生的研究

目的探讨雷公藤多甙对大鼠精子发生的抑制作用及其可能的信号通路。方法成年雄性大鼠给予雷公藤多甙(16 mg/kg)灌胃,每日1次,在2及6周检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和可的松水平;光镜观察睾丸组织的形态学变化;原位末端标记法(TUNEL)观察睾丸生精细胞凋亡;免疫组织化学法观察凋亡通路相关蛋白Bax/Bcl-2的表达。结果给药组与对照组相比,性激素、肾上腺皮质激素均无显著变化(P均>0.05);给药2周后精子数下降和畸形率上升(P<0.05),给药4和6周精子数下降和畸形率升高更显著(P<0.001);组织学检查给药组大鼠生精小管内各级精母细胞和精子细胞数明显减少,生精细胞排列紊乱,原始精原细胞和支持细胞(Sertoli细胞)未见明显改变。与正常对照组相比,生精小管内生精细胞凋亡显著增加(2周P<0.05,4和6周P<0.001)。凋亡相关蛋白Bax表达明显上调,Bcl-2表达无显著差异。结论雷公藤对大鼠精子发生的抑制作用表现为增加生精细胞凋亡,导致精子计数下降,精子的畸形率升高。雷公藤多甙使睾丸Bax表达增加,与诱导生精细胞凋亡相关,可能是相关的信号通路之一。进一步研究雷公藤多甙作用的分子信号机制有助于今后降低剂量、减少毒副作用,探讨其作为一种安全的男性避孕药可能性。     

烟雾暴露大鼠氧化应激生精损害的中医药治疗实验研究

目的 研究补肾填精中药麒麟丸对烟雾暴露造成氧化应激所致大鼠睾丸、附睾与精子的抗氧化作用。方法 随机将60只雄性成年大鼠均分6组:空白组、模型组、五子衍宗丸组、麒麟丸低剂量组、麒麟丸中剂量组、麒麟丸高剂量组。除空白组外,每天上午烟雾暴露制备大鼠睾丸生殖毒性模型,下午灌胃给药,每周测量体质量,调整给药剂量,连续56d后,处死大鼠取样检测,取血清测定睾酮(T)水平;分别称取大鼠精囊腺、附睾、睾丸的质量并计算相应器官指数;留取附睾内精液,进行计算机辅助的精液分析(CASA)及精子DNA完整率分析;酶联法测定睾丸谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;睾丸附睾病理组织学检查。结果 模型组大鼠精子总活力[前向运动(PR)%+非前向运动(NP)%]显著下降,睾丸附睾匀浆MDA水平(28.0±3.2)显著升高,而SOD(13.2±2.0)、GSH-Px(21.1±8.3)明显降低,与空白组相比均有显著差异(P0.05);麒麟丸各剂量组大鼠精子浓度及总活力比空白组下降,但仍显著高于模型组(P0.05),MDA显著低于模型组(P0.05),SOD及GSH-Px显著高于模型组(P0.05);麒麟丸中、高剂量组大鼠精子正常形态率及各剂量组DNA完整率显著高于模型组(P0.05)。病理检查:与空白组相比,模型组呈生精功能减低改变。表现为睾丸生精小管萎缩,排列变稀疏,生精上皮变薄,生精细胞减少;附睾管腔内成熟精子变少;精囊腺管腔内分泌物减少,上皮乳头萎缩、数量减少。麒麟丸组与模型组相比,随着剂量增加,生精功能减低的例数逐渐减少,疗效与剂量间有依从关系。结论 补肾填精中药麒麟丸可通过提高抗氧化酶活性,抑制氧化应激的发生,起到抗氧化作用,同时可以修复烟雾暴露对睾丸、附睾、精囊腺造成的病理损伤,最终可以保护生精功能,提高精子浓度、总活力与正常形态率,降低精子DNA碎片率。     

苯甲酸雌二醇诱导不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的研究

目的:探讨外源性雌激素苯甲酸雌二醇(EB)对诱导雄性不育小鼠中生精细胞增殖紊乱的影响。方法:60只雄性昆明小鼠随机分为3组,对照组肌肉注射150μl玉米油,EB处理组注射浓度分别为5、10 mg/kg的EB,隔天1次,持续4周。实验结束后取睾丸称其质量并计算睾丸指数;睾丸、附睾尾常规石蜡切片,HE染色;附睾尾制备精子悬液进行精子计数;免疫组化检测睾丸PCNA表达;qRT-PCR分析睾丸细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA、p53的表达变化;Western印迹检测p53及磷酸化p53蛋白表达。结果:与对照组相比,EB处理组小鼠睾丸指数显著下降[(0.56±0.09)%vs(0.43±0.08)%、(0.38±0.10)%,P0.05],精子悬液镜下观察未见精子,HE染色附睾管内未见精子;生精小管中精原细胞、初级精母细胞及支持细胞数量显著下降(P0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,EB处理组生精小管中细胞PCNA阳性表达细胞数量显著下降(P0.05)。qRTPCR结果表明EB处理组PCNA、细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA mRNA表达与对照组相比显著下降(P0.05);p53表达随EB剂量升高而显著升高(P0.05)。Western印迹结果显示,与对照组相比,EB处理组p53及磷酸化p53蛋白表达水平显著升高,且存在剂量依赖效应,10 mg/kg组显著高于5 mg/kg组(P0.05)。结论:EB以剂量依赖的方式下调细胞周期相关因子表达抑制生精细胞的增殖,是导致雄性不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的重要原因。     

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠精子线粒体膜电位及超微结构影响

目的:研究五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠精子线粒体膜电位(MMP)水平及线粒体超微结构的影响。方法:取体重为200～220 g雄性SD大鼠60只,随机分成正常组,模型组,对照组(黄精赞育胶囊组),五子衍宗丸低、中、高剂量组,除正常组外,其他各组大鼠灌服雷公藤多苷[30 mg/(kg.d)],连续8周,制备少弱精子症模型。造模结束后,正常组、模型组给予等容量蒸馏水[10 ml/(kg.d)],对照组给予黄精赞育胶囊溶液[3.01 g/(kg.d)],五子衍宗丸各组分别给予水提液,低剂量组[2.30 g生药/(kg.d)],中剂量组[4.60 g生药/(kg.d)],高剂量组[9.20 g生药/(kg.d)],连续30 d。末次给药后30 min,采用荧光流式细胞技术(JC-1染色)测定精子MMP水平(JC-1+%),并通过透射电镜观察精子线粒体超微结构的改变。结果:①MMP:JC-1+%和强度分别为:正常组70.80±4.92、4 360±945;模型组33.77±6.19、1 4685±496;对照组56.34±10.35、3 277±895;五子衍宗丸低剂量组40.80±10.40、2 016±767;中剂量组59.40±6.51、3 897±643;高剂量组60.71±7.81、3 371±6467。造模各组大鼠精子线粒体JC-1+%及强度均明显下降,与正常组比较差异有显著性意义(P均<0.05);连续给药30 d后,给药各组均能明显提高精子MMP,增加JC-1+%,除低剂量组外,其他用药各组与模型组比较差异有显著性意义(P均<0.05)。②精子线粒体超微结构:雷公藤造模后,精子外膜松散、变性,线粒体肿胀、大小不一、线粒体膜不完整,轴丝结构不清或出现断裂。给予五子衍宗丸30 d后,精子外膜及线粒体膜结构完整,减少线粒体肿胀,轴丝及微管结构基本正常。结论:雷公藤多苷能降低精子MMP水平,破坏线粒体的结构。五子衍宗丸能明显提高少弱精子症模型大鼠精子MMP水平,减轻精子线粒体结构损伤。保护精子线粒体结构与功能的完整是五子衍宗丸治疗少弱精子症的机制之一。     

还少胶囊对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠生殖功能损伤的保护机制研究

目的:探讨还少胶囊对奥硝唑(ORN)诱导的弱精子症模型大鼠生殖功能损伤可能的保护机制。方法:将SD雄性大鼠随机分为4组,每组10只,分别是空白对照组、模型组、还少胶囊组和左卡尼汀组,除空白对照组外,其余3组采用ORN 400 mg/(kg·d)灌胃大鼠28 d,制成弱精子症大鼠模型。并同时连续给药28 d后,处死大鼠,检测大鼠附睾中左卡尼汀的含量,精子浓度、活率,附睾组织中有机阳离子转运子2(OCTN2)mRNA的表达,并观察大鼠睾丸组织病理结构。结果:还少胶囊组、阳性对照药左卡尼汀组与模型组相比,附睾左卡尼汀的含量均可明显提高(6 366.5、6 934.7 mg/L vs 2 880.3 mg/L,P<0.01);改善精子浓度[(46.19±14.23)、(42.25±6.11)×10~6/ml vs(34.58±10.25)×10~6/ml,P<0.01]、活率[(61.34±7.98)%、(61.34±7.98)%vs(42.59±7.54)%,P<0.01];上调附睾OCTN2 mRNA的表达量(27.26、27.15 vs 26.07,P<0.01);同时还少胶囊组能保护ORN造模导致的睾丸生精细胞的病理损伤,使生精细胞在生精小管形态、排列方式、生精细胞的活跃程度上与空白对照组更加接近。结论:还少胶囊对ORN诱导的弱精子症大鼠模型生殖功能损伤具有保护作用,能提高模型大鼠的精子浓度与活率,其机制可能与上调附睾OCTN2 mRNA的表达量、提高附睾左卡尼汀的含量有关。     

硫辛酸对奥硝唑所致少弱精子症大鼠精子发生的保护作用研究

目的:研究硫辛酸(LA)对奥硝唑(ORN)所致少弱精子症模型雄性大鼠生精功能的保护作用。方法:取70只雄性SD大鼠,随机分成7组,每组10只,分别为:A组(溶剂对照组):1 ml 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+1 ml橄榄油;B组(低剂量ORN造模组):400 mg/kg ORN+1 ml橄榄油;C组(低剂量ORN+低剂量LA治疗组):400 mg/kg ORN+50 mg/kg LA;D组(低剂量ORN+高剂量LA治疗组):400 mg/kg ORN+100 mg/kg LA;E组(高剂量ORN造模组):800 mg/kg ORN+1 ml橄榄油;F组(高剂量ORN+低剂量LA治疗组):800 mg/kg ORN+50 mg/kg LA;G组(高剂量ORN+高剂量LA治疗组):800 mg/kg ORN+100 mg/kg LA。连续给药20 d,处死大鼠,称量大鼠体重、睾丸、附睾、精囊重量,计算脏器指数,检测附睾精子计数及活力,睾丸、附睾做HE染色观察组织形态学改变。结果:与A组相比,E组大鼠体重增量、睾丸、附睾脏器指数明显减少[(117.67±11.53)g vs(88.11±12.65)g;(1.06±0.12)%vs(0.65±0.13)%;(0.21±0.03)%vs(0.17±0.01)%,P均0.01];与E组相比,F组大鼠附睾脏器指数明显增加[(0.17±0.01)%vs(0.20±0.02)%,P0.01],G组大鼠体重增量、睾丸、附睾脏器指数明显增加[(88.11±12.65)g vs(102.70±16.10)g,P0.05;(0.65±0.13)%vs(0.95±0.06)%,P0.01;(0.17±0.01)%vs(0.19±0.02)%,P0.05],精囊脏器指数各组之间并无明显差异。与A组相比,B组大鼠精子活力明显降低[(74.12±8.73)%vs(40.25±6.08)%,P0.01],E组大鼠精子计数与活力明显降低[(38.59±6.40)×105/100 mg vs(18.67±4.59)×105/100 mg;(74.12±8.73)%vs(27.58±8.43)%,P均0.01];与B组相比,C、D组大鼠精子活力明显增加[(40.25±6.08)%vs(58.13±7.62)%;(40.25±6.08)%vs(76.04±8.44)%,P均0.01];与E组相比,F、G组大鼠精子计数及活力明显增加[(18.67±4.59)×10~5/100 mg vs(25.63±9.66)×10~5/100 mg,P0.05;(18.67±4.59)×10~5/100 mg vs(29.92±4.15)×10~5/100 mg,P0.01;(27.58±8.43)%vs(36.56±11.08)%,P0.05;(27.58±8.43)%vs(45.05±9.59)%,P0.01]。A、B、C、D组大鼠睾丸、附睾组织形态学无明显改变。E组大鼠睾丸与A组相比,生精小管腔内可见坏死脱落的生精细胞,生精细胞层次不清,排列紊乱;附睾管腔中精子数目明显减少,并伴有较多非细胞成分存在。F、G组大鼠睾丸生精小管内精子数目增加,但仍可见到生精小管内有生精细胞脱落,生精细胞层次不清晰,排列紊乱,但较E组有明显改善;F、G组大鼠附睾管腔中精子数目明显减少,可见散在、脱落的生精细胞,但较E组有明显改善。结论:LA能够改善ORN对大鼠造成的生殖系统损伤,提高精子质量,对生殖系统有较好的保护作用。     

酒精染毒后大鼠睾丸生精小管超微结构的改变

目的:观察酒精染毒后大鼠睾丸生精小管超微结构的变化。方法:将48只W istar雄性性成熟健康大鼠随机分为对照组(A组)、染毒组(B组),每组24只,B组用50度酒精(6 m l/kg)每天灌胃染毒1次,连续39 d,A组用生理盐水灌胃(6 m l/kg);在第14、27、40 d分别从A、B两组中各处死8只大鼠,取睾丸组织,常规电镜制片,透射电镜观察大鼠睾丸生精小管超微结构。结果:透射电镜发现:对照组各时间段睾丸生精小管超微结构无明显变化,基膜平滑、致密、厚薄均匀,支持细胞胞质丰富、粗面内织网及线粒体较多,核大、核质均匀、核仁清楚,精原细胞与基膜和支持细胞之间连接紧密,紧密连接层次清楚。染毒组第1生精周期末(相当于第14 d)超微结构开始变化;第2、3个生精周期末(分别相当于第27、40 d)超微结构变化最明显,主要表现为:①支持细胞溶酶体增多,线粒体肿胀空泡化,细胞器模糊且数量减少,支持细胞内出现较大空泡,甚至支持细胞出现萎缩;②精原细胞与支持细胞及生精小管的基膜之间出现较多较大空泡;③精原细胞凋亡,凋亡小体边集;④生精小管内的精子有过多的胞质且有大小不一的空泡,尾部断面线粒体排列不整齐、缺失或堆积;⑤紧密连接层次改变、模糊不清;⑥基膜厚薄不均,基膜外胶原组织疏松增厚,成波浪式皱褶,可见基膜断裂。结论:酒精可引起大鼠睾丸生精小管的基膜、紧密连接、支持细胞等超微结构异常,并可引起精原细胞凋亡。