人参皂苷Rg3对HT-29细胞株MMP-1表达和迁移能力的影响

目的：研究人参皂苷Rg3对结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-1（MMP-1）表达和细胞迁移能力的影响。方法：体外培养HT-29细胞,分为人参皂苷Rg3高剂量组（100μg/mL）、中剂量组（50μg/mL）、低剂量组（25μg/mL）和空白对照组,培养HT-29细胞24、48、72h,RT-PCR法测MMP-1 mRNA表达。利用划痕实验观察Rg3对HT-29细胞迁移能力的影响。结果：24h高剂量组与对照组相比,有显著的统计学差异（P〈0.01）;48h低、中、高剂量组与对照组相比均有显著的统计学差异（P〈0.05、P〈0.01、P〈0.01）;72h低、中、高剂量组与对照组相比均有显著的统计学差异（P〈0.01、P〈0.01、P〈0.01）。划痕实验中空白对照组过河时间为（47.33±2.49）h,低、中、高剂量组过河时间分别为（55.33±2.49）h（P〈0.01）、（64.00±1.63）h（P〈0.01）和（73.33±1.89）h（P〈0.01）。结论：人参皂苷Rg3能抑制HT-29细胞MMP-1的表达和抑制HT-29细胞的迁移能力,并且随着药物浓度的增加及时间的延长,抑制作用增强。     

尼美舒利对结肠腺癌细胞MMP-2表达的影响

目的 探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂——尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞的生长及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响。方法实验分为尼美舒利组、二甲亚砜（DMSO）对照组及不接种细胞的空白对照组，采用MTT法检测不同浓度的尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29（COX-2高表达）及HCT-116（COX-2低表达）增殖的抑制效应；采用改良明胶酶谱分析法检测MMP-2的表达。结果尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29和HCT-116生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性，且对HT-29细胞的抑制作用强于HCT-116细胞；尼美舒利抑制了HT-29细胞的MMP-2表达，而对HCT-116细胞MMP-2的表达的抑制作用不明显。结论尼美舒利可明显抑制COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29的增殖和生长，提示尼美舒利可能通过抑制COX-2活性而降低细胞MMP-2的表达。     

MMP-9介导结肠癌细胞sMICA蛋白脱落的研究

【摘要】 目的 探讨金属基质蛋白酶9(MMP-9)在结肠癌细胞膜型MICA(mMICA)脱落为可溶型MICA(sMICA)过程中的作用。方法 HT-29细胞转染MMP-9 siRNA质粒沉默48小时后,检测MMP-9、MICA mRNA表达以及MMP-9、mMICA及sMICA蛋白生成情况。结果 MMP-9 siRNA质粒转染HT-29细胞后显著降低MMP-9 mRNA,不影响MICA mRNA;细胞膜表面mMICA蛋白显著增加同时sMICA蛋白生成明显减少。结论 抑制MMP-9表达,可减少结肠癌细胞mMICA蛋白降解,同时下调sMICA蛋白生成。     

JAK2激酶抑制剂AG490对结肠癌HT-29细胞侵袭性的影响

目的观察JAK2激酶抑制剂AG490对结肠癌HT-29细胞侵袭以及对基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响，探讨STAT3信号转导通路在结肠癌侵袭转移调控中的作用。方法应用JAK2激酶抑制剂AG490处理结肠癌HT-29细胞，Matrigel肿瘤体外侵袭模型检测肿瘤细胞侵袭；Western blot检测STAT3蛋白表达；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测MMP2mRNA表达。结果AG490可抑制JAK2／STAT3信号转导通路活化及结肠癌HT-29细胞侵袭，在此过程中AG490在mRNA水平抑制MMP-2表达。结论STAT3信号转导通路参与结肠癌细胞侵袭调控，阻断STAT3通路活化可抑制结肠癌细胞侵袭，这一作用可能是通过抑制MMP-2表达实现的。     

转录信号传导子和激活子3信号传导通路调控选择性环氧化酶2抑制剂抗结肠癌的机制

目的探究转录信号传导子和激活子3(Stat3)信号传导通路与选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂抗结肠癌细胞株HT-29机制的关系,明确COX-2抑制剂抗结肠癌细胞内信号传导机制。方法将选择性COX-2抑制剂NS-398,作用于结肠癌细胞系HT-29,运用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测药物作用前后HT-29中COX-2mRNA的表达;ELISA法测定体系前列腺素E2(PGE2)水平;Westernblot检测药物作用前后Stat3通路相关蛋白JAK2、Stat3的磷酸化活性和cyclinD1、Bcl-2的表达。结果结肠癌细胞系HT-29中COX-2mRNA呈高表达,NS-398呈时间、剂量依赖性方式抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡。NS-398使HT-29细胞COX-2mRNA和PGE2表达水平显著下降。同时p-JAK2、p-Stat3、cyclinD1、Bcl-2表达水平随作用时间延长而下降。结论癌基因Stat3信号传导通路调控了NS-398抗结肠癌的细胞内信号传导机制,最终通过其下游靶基因cyclinD1、Bcl-2影响结肠癌细胞系HT-29的增殖与凋亡。     

肿瘤坏死因子α对人腹膜间皮细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制物表达的影响

目的 观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对人腹膜间皮细胞(HPMC) 基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP-9及其组织抑制物（TIMP）2、TIMP-1 mRNA和Ⅰ型胶原表达的影响，同时观察TNF-α、TGF-β、IL-1单独或协同作用对HPMC的MMP-9活性的影响。 方法 采用半定量RT-PCR法测定细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-2及TIMP-1 mRNA 的表达。采用Biotrak MMP-9 活性检测系统来精确定量测定MMP-9活性及MMP-9原的含量。ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达。 结果 TNF-α(1~10 μg/L)分别刺激HPMC 4、16、24及48 h后， HPMC的MMP-9 mRNA表达显著上调，为基础的2.3～4.9倍（P ＜ 0.05），呈时间依赖性。TNF-α（1 μg/L）作用48 h后显著下调TIMP-1、TIMP-2 mRNA 表达，为基础的77.2％、61.3％（P ＜ 0.05），而MMP-2 mRNA表达没有显著变化。TNF-α+TGF-β１ （1~10 μg/L）、 TNF-α+TGF-β1+IL-1(1~10 μg/L)和TNF-α(5~10 μg/L)刺激HPMC 24 h后，促其分泌MMP-9 的作用最为明显。同时，TNF-α明显上调Ⅰ型胶原蛋白表达（P ＜ 0.05）。 结论 TNF-α 明显上调HPMC的MMP-9 mRNA的表达和MMP-9 的活性；联合其他细胞因子后促MMP-9分泌的作用更明显。TNF-α单独或协同其他因子在腹膜纤维化的过程中可能发挥了重要作用。     

丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞整合素β1、基质金属蛋白酶-7表达影响

目的：通过观察丹参酮ⅡA对胃癌MKN-45细胞的增殖抑制及对整合素β1、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）表达的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法：MTT法检测不同浓度的丹参酮IIA对体外培养的人胃癌MKN-45细胞增殖的影响 RT-PCR法测丹参酮IIA作用后人胃癌MKN-45细胞整合素β1、MMP-7的表达。结果：与阴性对照组相比,丹参酮ⅡA各浓度组（4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL）对肿瘤细胞增殖的抑制率有显著差异（P〈0.05）,其24h、48h、72h半数抑制浓度分别为42.5μg/mL、19.4μg/mL和7.4μg/mL。PCR半定量分析表明丹参酮ⅡA作用后整合素β1和MMP-7mRNA的表达受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加。结论：丹参酮ⅡA能有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性。丹参酮ⅡA可能通过降低人胃癌MKN-45细胞整合素β1和MMP-7mRNA的表达,而抑制肿瘤细胞增殖。     

咖啡酸苯乙酯对结肠癌细胞JNK-paxillin信号通路的影响

目的:探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)对结肠癌细胞增殖抑制作用及对c-jun氨基酸末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法:体外培养人结肠癌细胞株(HT-29),采用MTT法观察不同浓度的CAPE在不同时间段对HT-29细胞生长的抑制率;不同浓度的CAPE处理HT-29细胞24 h后,用Western blot法检测细胞中JNK及paxillin两种蛋白表达量的变化。结果:4个浓度(2.5,5.0,7.5,10.0μg/L)的CAPE均能明显抑制结肠癌细胞HT-29的增殖,且呈现明显的浓度和时间依赖性(均P<0.01);4个浓度的CAPE均能降低JNK和paxillin蛋白表达水平,且呈明显的浓度依赖性(均P<0.01)。结论:CAPE可在体外抑制人结肠癌细胞HT-29的增殖,机制可能与其降低JNK-paxillin信号通路的活性有关。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（insulin-like growth factorⅠ receptor,IGF-ⅠR）在人结肠癌细胞株HT-29上的表达,以及两种胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体（IGF-ⅠRMcAb）对HT-29细胞增殖的影响.方法免疫组织化学法检测HT-29的IGF-ⅠR表达,MTT法检测两种IGF-ⅠR McAb对HT-29的抑制增殖作用及诱导凋亡情况.结果人结肠癌细胞株HT-29细胞膜高表达IGF-ⅠR.IGF-ⅠR McAb能抑制HT-29细胞增殖,McAb对HT-29细胞的抑制作用随抗体浓度增大而增大.IGF-ⅠR McAb诱导HT-29凋亡,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.结论IGF-ⅠR McAb通过阻断IGF-ⅠR抑制结肠癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

人参皂苷Rg3对人前列腺癌细胞EphB4及抗凋亡蛋白bcl-xl表达的影响

目的：研究人参皂苷Rg3对人前列腺癌细胞株PC-3中EphB4及抗凋亡蛋白bcl—xl表达的影响。方法：用浓度为0、5、10、20和40μmol／L的人参皂苷Rg3处理PC-3细胞24h,然后采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测人参皂苷Rg3对PC-3细胞增殖的抑制作用,用倒置显微镜和流式细胞术观察人参皂苷Rg3对PC-3细胞凋亡的诱导作用,用RT—PCR和Western blot方法检测经不同浓度人参皂苷Rg3处理后PC-3细胞中EphB4和bcl-x1的表达情况。结果：5、10、20和40μmol／L的人参皂苷Rg3对PC3细胞增殖的抑制率分别为20．93％、31．32％、51．63％、65．43％。5～40μmol／L的人参皂苷Rg3处理细胞呈明显的凋亡形态学改变,40umol／L人参皂苷Rg3处理PC-3细胞24h后,凋亡细胞占（12．10±1．2）％,处理组比正常对照组（3．18±2．1）％凋亡明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：不同浓度人参皂苷Rg3处理PC-3细胞24后,EphB4的表达随人参皂苷Rg3浓度的增加而逐渐减弱,而且bcl—xl的表达随人参皂苷Rg3浓度的增加逐渐减弱。     

人参皂甙Rg3对胰腺癌血管生成拟态的作用研究

目的探究人参皂甙Rg3对胰腺癌血管生成拟态作用。方法体外用鼠尾I型胶原蛋白建立三维培养体系,观察胰腺癌SW-1990、Panc-1、Bxpc-3、MiaPaCa-2四株细胞株形成血管生成拟态能力,应用PASR染色筛选出能够形成血管生成拟态的细胞株;用该株细胞建立体外模型,不同浓度人参皂甙Rg3（0、25、50、100、200μmol／L）处理模型,观察人参皂甙Rg3对该细胞株形成血管生成拟态的影响;进一步利用荧光定量PCR技术和Western blotting检测血管生成拟态相关指标MMP-2、MMP-9表达。结果胰腺癌SW-1990、Panc-1、Bxpc-3、MiaPaCa-2四株细胞株中,SW-1990在体外用鼠尾Ⅰ型胶原蛋白建立三维培养体系中培养72h后能够形成血管生成拟态。荧光PCR技术和Western blotting检测发现,与对照组相比,用药组MMP-2和MMP-9在mRNA水平和蛋白水平表达均下降：与空白组相比,各用药组MMP-2 mRNA水平和蛋白水平表达差别均有统计学意义（P〈0．05）;MMP-9在mRNA水平和蛋白水平表达情况,25μmol／L组与空白组比较无统计学意义（P〉0．05）,50μmol／L组、100μmol／L组、200μmol／L组与空白组比较差别有统计学意义（P〈0．05）。结论人参皂甙Rg3能够抑制胰腺癌血管生成拟态的形成,下调MMP-2和MMP-9的表达可能是其机制之一。     

人参皂甙Rg3对乳腺癌MCF-7线粒体凋亡途径的影响

目的探讨20（R）–人参皂甙Rg3（SPG-Rg3）对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制。方法人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为空白对照组、实验对照组及SPG-Rg3多个浓度组。利用MTT法观察人参皂甙Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并计算出IC-50,进一步确定其有效浓度;流式细胞术检测人参皂甙Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化;利用AnnexinV-EGFP/PI双染法,检测人参皂甙Rg3诱导MCF-7细胞凋亡情况;免疫细胞化学染色检测MCF-7细胞凋亡与Fas、FasL蛋白表达的关系。结果 SPG-Rg3作用48h的IC-50为244.54μg/mL。流式细胞仪检测Rg3使MCF-7的S期细胞比率明显增加（P〈0.01）,凋亡率明显增加（P〈0.01）。免疫细胞化学显示Rg3能使MCF-7细胞胞浆内细胞色素C增加（P〈0.01）。结论 SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体释放细胞色素C有关。     

上调miRNA-34a表达对人结肠癌细胞体外生长的影响

目的:探讨上调miRNA-34a表达对人结肠癌细胞株体外生长的影响。方法:分别用人工合成的miRNA-34a模拟物与阴性对照序列转染人结肠癌HT-29细胞,培养一定时间后,用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞的凋亡;q RT-PCR、Western blot法检测SIRT1的m RNA和蛋白的表达。结果:与转染阴性序列的HT-29细胞比较,转染miRNA-34a模拟物的HT-29细胞48 h后增殖能力明显降低;72 h后细胞凋亡率明显增加,miRNA-34a靶基因SIRT1的m RNA与蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:miRNA-34a可能通过调节其靶基因SIRT1的表达影响结肠癌细胞的生物学行为,上调miRNA-34a的表达能抑制结肠癌细胞的生长。     

血清胰岛素样生长因子-1对小鼠乳腺癌组织凋亡相关基因表达的影响

目的 在肝特异性胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因缺失小鼠(LID小鼠)及正常小鼠体内建立原发性乳腺癌模型,比较不同血清IGF-1水平下凋亡相关基因的表达情况.方法 LID小鼠及正常小鼠各50只,用化学致癌剂7,12-二甲基苯蒽诱导原发性乳腺癌;分别随机选取25只小鼠使用人参皂甙Rg3进行干预治疗.比较各组肿瘤发生情况,应用流式细胞术及基因芯片技术分析凋亡相关基因的表达情况.结果 未管饲人参皂甙Rg3的正常小鼠乳腺癌发生率为66.7%,高于其他各组(P＜0.05);而管饲人参皂甙Rg3的LID小鼠乳腺癌发生率为12.0%,低于其他各组(P＜0.05).未管饲人参皂甙Rg3的正常小鼠肿瘤细胞凋亡比例为(2.7±0.7)%,而管饲人参皂甙Rg3的LID小鼠凋亡比例为(14.0±1.7)%.基因芯片显示正常小鼠与LID小鼠相比,LTA、LTB、TNF-α、TRAIL、TRANCE、BLK、BOK、CASP8、TRAF5、APAF1等基因表达下调,LTBR、TRAF4等基因表达上调.而应用人参皂甙Rg3治疗可改变以上基因的表达情况.结论 降低血清IGF-1水平可影响一系列凋亡相关基因的表达,从而促进细胞凋亡,对乳腺肿瘤的发生发展具有抑制作用.人参皂甙Rg3对这一效应具有协同作用.     

RNA干扰沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因对结直肠癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对结直肠癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 应用PRL-3基凶小干扰RNA(siRNA)转染处理结直肠癌细胞系HCT116后,分别采用实时定量PCR和Western印迹检测PRL-3基因和基质金属蛋白酶家族(MMP)-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力;其次,将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察其在体内生长情况.结果 体外实验结果显示,PRL-3 siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P＜0.05,P＜0.01));转染组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平明显下调(P＜0.05).体内实验结果显示,对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管,而转染组未见这些现象.结论 采用PRL-3siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭,其机制可能与下调MMP表达有关.     

αVβ6-ERK直接通路在乌司他丁抑制结肠癌侵袭转移中的作用机制

目的：探讨αVβ6-ERK直接通路在乌司他丁（UTI）抑制结肠癌侵袭转移中的作用。方法：100例结肠癌患者随机分为对照组和治疗组,ELISA检测血清MMP-9／2水平,免疫组织化学检测结肠癌组织αVβ6表达;HT-29细胞按UTI不同浓度分组,TransweⅡ小室检测细胞侵袭能力,明胶酶谱检测MMP-9／2水平,WestemBlot检测细胞αVβ6和ERK变化。结果：UTI可降低结肠癌患者血清MMP-9／2水平及肿瘤组织aV136表达强度;UTI可抑制HT-29细胞侵袭能力及MMP-9／2分泌水平,并显著下调αVβ6表达和ERK磷酸化水平。结论：UTI可显著抑制结肠癌的侵袭浸润,αVβ6-ERK直接通路介导的MMP-9／2分泌可能在其中发挥重要作用。