实验性单侧前牙反牙合修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白和PTH/PTHrP受体-1表达的影响

目的 探讨实验性单侧前牙反牙合修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）及PTH/PTHrP 受体-1（PTH1R）表达的影响。方法 在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反牙合关系,2、 4、8周后取颞下颌关节（TMJ）,苏木精-伊红（HE）染色观察组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应检测PTHrP、PTH1R的表达情况。结果 8周时,实验组髁突软骨出现明显退行性变,PTHrP阳性细胞较对照组显著增多（P<0.01）, PTH1R阳性细胞明显减少（P<0.01）;实验组髁突软骨PTHrP mRNA的表达显著高于对照组（P<0.01）,而PTH1R mRNA表达明显降低（P<0.01）。结论 髁突软骨PTHrP的高表达因PTH1R的低表达不能有效发 挥作用,可能是髁突软骨骨关节病样变的重要分子机制之一。     

实验性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中PTHrP及其受体PTH1R表达的影响

目的：探讨实验性咬合紊乱致大鼠髁突软骨异常改建过程中PTHrP及其受体PTH1R的表达变化情况。方法：在8周龄SD大鼠第二、三磨牙之间填塞正畸用橡皮筋推第三磨牙向远中移动,8周后取双侧颞下颌关节,苏木精-伊红染色观察组织形态变化,免疫组化及RT-PCR方法检测PTHrP及其受体PTH1R表达情况。结果：实验组髁突软骨后部明显增厚（P=0.032）,且出现典型退行性变,软骨中PTHrP（P=0.034）及PTH1R（P=0.031）的mRNA表达明显低于空白对照组。结论：PTHrP及其受体PTH1R参与实验性咬合紊乱所致髁突软骨异常改建。     

高脂饮食对小鼠颞下颌关节骨关节炎的影响

目的:通过检测髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达,探讨高脂饮食对小鼠颞下颌关节骨关节炎的影响。方法:48只小鼠随机分为正常饮食(ND)组、常规建模(MF+ND)组、高脂建模(MF+HFD)组、混合建模(MF+MD)组。采用前牙单侧反牙合法建立异常咬合模型,建模后的第2、4、6、8周处死小鼠取双侧颞下颌关节。通过HE和番红-O固绿染色进行病理观察及评分。免疫组织化学染色检测髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达。结果:HE和番红-O固绿染色结果显示,建模组可见髁突软骨破坏,Mankin评分增高;而MF+HFD组破坏更加严重,Mankin评分更高;免疫组织化学染色结果显示,各建模组IL-1β、TNF-α和VEGF的阳性细胞数明显增加,并且MF+ND、MF+HFD和MF+MD三组IL-1β、TNF-α、VEGF阳性细胞表达比较均具有显著差异(P<0.05)。结论:长期的高脂饮食可以加重咬合异常所诱导的颞下颌关节骨关节炎小鼠的髁突软骨破坏,加重小鼠颞下颌关节骨关节炎的程度。     

生长分化因子11对小鼠颞下颌关节骨关节炎髁突软骨细胞脂肪化的影响

目的 观察生长分化因子11(GDF11)对小鼠颞下颌关节(TMJ)骨关节炎(OA)髁突软骨细胞脂肪化的影响.方法 对雌性6周龄C57小鼠施加单侧前牙反(牙合)(UAC)刺激并局部注射GDF11.取TMJ髁突软骨进行番红O染色;GDF11、脂联素(Adiponectin)免疫组织化学染色;实时定量聚合酶链式反应(real...     

单侧前牙反牙合对大鼠下颌髁突软骨内CaR、PTHrP表达的影响研究

目的　探索单侧前牙反牙合（unilateral anterior crossbite,UAC）对大鼠下颌髁突软骨内钙离子敏感受体（calcium-sensing receptor,CaR）、甲状旁腺激素相关蛋白（parathyroid hormone-related protein,PTHrP）分子表达以及软骨细胞增殖和发育的影响。方法　选择6周龄雌性SD大鼠48只,根据实验时间点（2、4、8周）随机分为3大组,每大组再随机分为2组（对照组、UAC实验组）,每组动物数量8只。对SD大鼠施加UAC刺激,于2、4、8周后分别处死各组大鼠,对颞下颌关节软骨进行CaR、PTHrP、PTHrP 受体（PPR）分子的免疫组化染色,提取软骨内mRNA进行增殖标志分子、软骨细胞表型分子和终末分化相关分子的Real-time PCR检测。结果　UAC实验组大鼠髁突软骨2周时即开始出现CaR的表达增高,4周时继发有PTHrP的表达上调,但是其惟一受体PPR的表达从2周时即显著降低;增殖标志分子和软骨细胞表型分子的表达从2周时开始显著降低,终末分化相关分子的表达从4周开始显著增高。结论　UAC可导致下颌髁突软骨内CaR、PTHrP表达改变,进而影响软骨细胞的增殖和分化状态。     

实验性咬合紊乱对大鼠髁突软骨局部雌激素表达的影响

目的探讨实验性咬合紊乱所致大鼠髁突软骨改建过程中的雌激素表达变化规律。方法通过正畸方法前移幼年及青春期雌性大鼠右侧上颌及左侧下颌第一磨牙,造成大鼠的实验性咬合紊乱模型,咬合紊乱组分别于2、4、6、8周后取材,去除咬合紊乱组则在实验6周时拔除第一磨牙,2周后取材。应用免疫组织化学SABC方法检测髁突软骨中雌激素的表达,并通过计算阳性细胞个数来探讨雌激素在不同时间点的表达变化规律。结果1）雌激素主要表达于大鼠髁突软骨的成熟层和肥大层;2）正常对照组大鼠髁突软骨中的雌激素表达水平自6周龄到16周龄呈逐渐降低的趋势;3）无论幼年组还是青春期组,咬合紊乱2周时雌激素表达均高于对照组（P<0.05）,4、6、8周时与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。去除咬合紊乱组雌激素表达高于正常对照及咬合紊乱8周组（P<0.01）。结论大鼠髁突软骨中雌激素的表达随年龄增长而减少,实验性咬合紊乱可以一过性升高髁突软骨中雌激素的表达水平。     

甲状旁腺相关蛋白在大鼠髁突软骨中的表达及其季节性变化规律

目的 探讨生长发育期大鼠下颌髁突软骨中甲状旁腺相关蛋白（PTHrP）的表达特征及其季节性变化规律。方法 采用64只SD大鼠,随机等量分为白天12 h加力组和对照组,应用免疫组织化学技术检测大鼠下颌髁突软骨中PTHrP的表达,图像分析半定量研究PTHrP的季节性变化规律,应用宏观和微观分析法进行统计分析。结果 所有大鼠髁突软骨各层细胞中均有PTHrP的表达,并有季节性变化规律。戴用功能矫治器后其表达信号增强。冬末春初增强的最明显。结论 生长发育期大鼠下颌髁突软骨中有PTHrP的表达,且表达呈现季节性变化规律。功能矫形治疗可增加大鼠髁突内源性PTHrP的表达,冬末春初效果更明显。     

双侧下颌牵张成骨对转化生长因子β1在颞下颌关节髁突表达的影响

目的　研究狗的双侧下颌牵张成骨中颞下颌关节髁突的形态改变及转化生长因子β1(TGF-β1)在髁突的 表达。方法　16只狗随机分为4组,每组4只,分别为牵张6 d组、牵张后固定2周组、牵张后固定8周组及正常对 照组。各实验组的牵张频率均为1 mm/d,1次/天。对每组动物的髁突标本进行苏木精-伊红染色及TGF-β1的免 疫组化染色观察。结果　苏木精-伊红染色可见实验组动物的髁突纤维软骨早期有不同程度的损伤,增殖带、肥 大带细胞增生活跃,软骨钙化层及其深层软骨成骨活跃;TGF-β1阳性染色主要定位在肥大带细胞胞浆、周围基质和 成骨反应活跃处的成软骨细胞、成骨细胞及周围基质。牵张后固定2周时这种改建修复现象最明显,8周时逐渐恢 复至正常对照组的表现。结论　双侧下颌牵张成骨对颞下颌关节髁突影响主要表现为髁突纤维软骨组织形态学 的改变和软骨、骨的改建活动,但随着固定时间的延长这种改变逐渐修复。     

甲状旁腺相关蛋白及其受体PTH1R及Ihh信号在鼠胚髁突软骨中的分布特征

目的探讨甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)及其受体PTH1R及Ihh信号在髁突软骨发育过程中的分布特征及意义。方法取E14~18 d鼠胚,以免疫组化及原位杂交染色方法,检测PTH1R抗体及PTHrPI、hh mRNA在下颌髁突软骨发生过程中的分布特征。结果在鼠胚下颌髁突软骨发育过程中,PTHrP、PTH1R主要表达于软骨膜间质细胞、软骨细胞及大部分肥大软骨细胞中,Ihh主要位于肥大软骨细胞上层及其与扁平细胞层交界处,PTHrP及Ihh信号可能通过自分泌和(或)旁分泌作用调控髁突软骨细胞的增殖和分化。结论鼠胚下颌髁突软骨发育过程中,PTHrP、PTH1RI、hh的分布特征与其在生长板分布不同,提示PTHrP可能对髁突全层软骨细胞均具有增殖促进作用。     

偏颌大鼠模型的构建及其髁突CT影像和组织学评价

目的:构建下颌偏斜大鼠模型,观察该实验性偏颌大鼠髁突显微CT(micro-CT)影像及其组织学变化.方法:选取12只6周龄雌性SD大鼠,将其随机等量分为对照组和偏颌组,每组6只.偏颌造模方法:将上颌左侧中切牙及下颌双侧中切牙分别粘接金属套筒冠不良修复体,上颌金属套筒冠制备唇向斜面导板,使上下颌切牙有正常方向的覆牙合覆盖关系,下颌金属套筒冠制备与牙长轴呈45°角的近远中向斜面导板,使动物咬合时导板可以引导下颌向右.对照组不做任何处理.2组大鼠饲养12周后取材,对双侧髁突进行micro-CT检测及组织学染色.将对照组双侧髁突测量的数据合并取平均值,将偏颌组分为偏颌组-左侧和偏颌组-右侧,分别与对照组比较.结果:Micro-CT结果显示,对照组大鼠髁突关节面光滑、完整,骨质致密.与对照组髁突相比,偏颌组髁突长度和宽度出现不同程度的增加,但骨小梁有明显的吸收;12个髁突中有3个左侧髁突表面出现陷窝.组织学染色结果显示,对照组大鼠髁突软骨细胞层次分明,而偏颌组大鼠左侧髁突骨性陷窝内有软骨组织或纤维组织充填.组织测量学结果显示,偏颌组双侧大鼠髁突未矿化软骨的中带较对照组有显著增厚(P<0.05),偏颌组左侧髁突未矿化软骨的后带较对照组有明显增厚(P<0.05).结论:实验性偏颌可致大鼠双侧髁突骨和软骨出现非对称性异常改建,偏颌对侧髁突表面可出现局部纤维软骨样组织增厚,在影像学上表现为关节面上缺损样陷窝.     

经颧弓后上牵引下颌后髁突软骨中PTHrP的表达及意义

目的:观察经颧弓后上牵引下颌后兔颞下颌关节髁突软骨中PTHrP的分布特征,探讨PTHrP在髁突软骨改建过程中的作用。方法:手术在颧弓和下颌角之间放置弹簧持续地将兔右侧下颌骨向后上方牵引,分别于术后2、4、6周处死动物,观察实验组与对照组PTHrP的分布特征。结果:经颧弓后上牵引下颌,髁突受到过度负荷后髁突软骨发生改建。经颧弓后上牵引2周,增殖层和上肥大层软骨细胞PTHrP表达明显增强,而4和6周PTHrP表达强度不均,软骨细胞丛附近软骨细胞前体细胞内PTHrP表达较强。对照组PTHrP在整个实验过程中均处于弱表达。结论:PTHrP可能与髁突软骨的修复性改建密切相关。     

异常咬合对小鼠髁突软骨细胞内质网应激性凋亡的影响研究

目的探讨异常咬合对小鼠髁突软骨细胞内质网应激性凋亡的影响。方法选取6周龄雌性C57BL/6J小鼠54只,随机分为4组,分别饲养1、3、7、11周,其中饲养1、3、7周的小鼠(各12只)再随机分为对照组和单侧前牙反(unilateral anterior crossbite,UAC)组,饲养11周的小鼠(18只)再随机分为对照组、UAC组和去冠组(UAC刺激7周后去除UAC刺激继续饲养至11周),每组小鼠均为6只。各组小鼠处死取材后对髁突软骨进行HE染色、糖相关蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,Caspase12)免疫组织化学染色以及TUNEL染色。结果(1)HE染色结果显示:各饲养期对照组小鼠髁突软骨细胞层次鲜明,软骨内细胞排列整齐;UAC组小鼠髁突软骨内软骨细胞数目减少,排列紊乱,随着时间延长这些变化逐渐加重。与同饲养期对照组相比,UAC组小鼠髁突软骨细胞密度、软骨厚度均显著减小(均P<0.05);去冠组小鼠髁突软骨细胞分层情况明显改善,软骨细胞密度、软骨厚度较UAC组有显著增加(均P<0.05),而与同饲养期对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)免疫组织化学染色、TUNEL染色结果显示:各饲养期对照组小鼠髁突软骨中GRP78阳性细胞在软骨浅层和深层均有分布,Caspase12阳性细胞主要分布在软骨深层,但数量均很少;UAC组小鼠髁突软骨中出现大量GRP78和Caspase12阳性细胞。UAC组小鼠髁突软骨GRP78、Caspase12和TUNEL阳性细胞率均高于同饲养期对照组(均P<0.05);去冠组小鼠髁突软骨GRP78、Caspase12和TUNEL阳性细胞率均显著低于UAC组(均P<0.05),而与同饲养期对照组相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论异常咬合促进髁突软骨细胞内质网应激性凋亡,从而加重髁突软骨的退行性变。     

甲状旁腺相关蛋白在鼠胚髁突外植体软骨内成骨中的作用

目的探讨甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)对体外培养的鼠胚髁突软骨内成骨的影响。方法体外解剖分离鼠胚髁突,行外植体培养,通过组织学、免疫组化等方法观察PTHrP对体外培养的髁突外植体软骨内成骨的影响。结果髁突外植体在无血清半固态培养系统中能正常发育。加入人PTHrP(1-34)后,实验组髁突长度的增加较对照组明显,两组间差异有显著性(P<0.05);组织学及免疫组化染色显示:加入人PTHrP(1-34)后培养的髁突外植体增殖层和肥大软骨细胞层明显增厚,同时Ⅱ及Ⅹ型胶原在增殖层和肥大软骨细胞层中表达增强。结论PTHrP可刺激髁突外植体软骨增殖层和肥大层软骨细胞的增殖,促进髁突软骨内成骨的形成。?     

颞下颌关节软骨对咬合力刺激响应特征的动物实验启示

关节软骨主要的功能之一是承受一定的运动负荷,颞下颌关节髁突软骨所承受的功能负荷与咬合密切相关,因而颞下颌关节髁突软骨可以随咬合的变化而进行相应的改建。我们利用大鼠、小鼠进行的实验研究显示,用佩戴金属冠的方法加高小鼠双侧前牙咬合(bilateral anterior elevation,BAE),可导致小鼠髁突软骨明显增厚;而用金属冠制作单侧前牙反[牙合](unilateral anterior crossbite,UAC)不良修复体,则可导致髁突软骨出现明显的退行性变,直至髁突变形。我们利用这些可导致髁突软骨出现增殖性或退行性改建的动物模型进行在体基因修饰实验,探索髁突软骨改建过程中与细胞自噬、凋亡、终末分化等活动密切相关的信号通路,例如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapmycin,mTOR)信号,印第安刺猬信号(India hedgehog,Ihh),以及甲状旁腺素及其相关蛋白受体信号等,其结论有望指导临床工作中在纠正异常咬合基础上,从细胞和分子水平干预软骨细胞功能,预防和治疗颞下颌关节软骨退变。     

FAM20C在小鼠下颌髁突发育过程中的时空表达

目的 观察小鼠髁突发育过程的不同阶段,FAM20C在髁突软骨中的时空表达特点,试探究其在小鼠髁突发育过程中的可能作用机制。方法 苏木精-伊红(HE)染色和改良番红O-固绿染色观察胚胎17.5 d和出生后0、7、21 d 4组小鼠髁突软骨及软骨下骨的形态学变化。免疫组化染色观察相应时间点FAM20C在小鼠髁突软骨组织中的定位及表达。测量FAM20C阳性表达的平均光密度值,并进行单因素方差分析。结果 HE染色和改良番红O-固绿染色结果表明：随着软骨内骨化的进展,髁突软骨细胞层长度减少,软骨下骨体积增加,下颌髁突体积增大;免疫组化结果表明：4组小鼠髁突软骨组织中均有FAM20C阳性表达,FAM20C主要表达于髁突软骨增殖软骨细胞层和前肥大软骨细胞层,少量表达于肥大软骨细胞层及软骨下骨层,随着髁突发育,FAM20C表达逐渐减少。统计学结果显示,各时间点FAM20C阳性表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FAM20C参与小鼠下颌髁突发育,可能通过调节髁突软骨细胞的增殖和分化在髁突形成中发挥重要作用。     

渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 48只8周龄大鼠,随机分为实验组和对照组各4个时间点,雌雄各半,每组3只.以皮筋弹性力推右侧下颌、左侧上颌第一磨牙近中移动,4周后同样方式推右侧下颌、左侧上颌第三磨牙远中移动,造成渐进性咬合紊乱动物模型,实验2、4、6、8周后处死动物.苏木精一伊红染色观察髁突软骨组织学变化及软骨厚度变化,免疫组织化学方法检测和阳性细胞面积百分比法分析髁突软骨口TNF-α的表达特点.结果 实验4、6、8周组髁突软骨均较对照组增厚P＜0.05),实验组出现以无菌坏死为主的软骨退行性变.TNF-α主要集中表达于髁突软骨的肥大层,实验2、6、8周组表达高于同龄对照组(P＜0.05),实验4周组与同龄对照组之间无差异(P＞0.05),雌雄变化趋势基本相同.结论 TNF-α参与了异常咬合所导致的髁突软骨病理性改建活动,随时间延长,咬合紊乱较重者,髁突软骨的分解代谢活动更加明显.     

生长期兔颞下颌关节盘前移位对髁突软骨内Ihh和PTHrP表达的影响

目的：研究颞下颌关节盘前移位对生长期兔髁突软骨印度豪猪蛋白（Ihh）和甲状旁腺相关蛋白（PTHrP）表达的影响,探讨关节盘前移位与下颌骨髁突生长发育之间的关系。方法：取3个月龄日本大耳白兔21只．建立颞下颌关节盘前移位动物模型,分别于建模后4、8、12周处死取材,观察髁突软骨组织学变化,并通过免疫组织化学方法检测Ihh、PTHrP在髁突软骨中的表达与定位。结果：关节盘移位后4周,髁突软骨结构轻度紊乱;8周时,髁突前部软骨形态结构发生显著改变;12周时．软骨正常结构丧失进一步加剧。关节盘移位后4周,可见Ihh、PTHrP在增殖带深层细胞内明显表达,8周、12周时在髁突深层软骨细胞内表达。结论：颞下颌关节盘前移位导致髁突软骨结构进行性病理性损害．Ihh和PTHrP在盘移位后髁突软骨病理性改变的过程中发挥重要作用．提示关节盘前移位可能通过Ihh-PTHrP负反馈信号通路对生长期髁突软骨内成骨过程产生影响。     

两种异常咬合刺激对小鼠髁突影像及组织形态学影响研究

目的 探究异常咬合刺激对小鼠髁突影像及组织形态学影响.方法 选取6周龄雌性C57BL/6J小鼠36只,根据饲养时间(3、7周)均分小鼠后,再随机分为对照组、单侧前牙反(unilateral anterior crossbite,UAC)组和双侧前牙咬合抬高(bilateral anterior elevation,B...     

单侧前牙反牙合大鼠髁突异常分化的软骨细胞中CaMKⅡ的表达变化

目的:研究实验性单侧前牙反牙合(unilateral anterior crossbite,UAC)对大鼠髁突软骨的致病意义及对促软骨细胞分化的CaMKⅡ表达的影响。方法:40只6周龄SD雌性大鼠,随机等分为UAC组和对照组,其中UAC组左侧上下切牙各戴一套筒冠并形成反牙合关系,对照组不作处理。于实验开始后4周和8周取材,HE和番红O染色观察髁突软骨的组织形态变化,免疫组织化学染色观察CaMKⅡ的表达,Real-time PCR测量相关基因表达水平的变化。结果:UAC组髁突软骨细胞分化异常,软骨变薄,基质减少,且随时间的延长而加重(P<0.05),CaMKⅡ阳性细胞百分数以及CaMKⅡ和Mmp-13的mRNA表达水平上调,但促增殖的Pcna以及软骨基质Col2a1、 Aggrecan的mRNA的表达水平下调。结论:UAC可导致髁突软骨异常分化并伴有CaMKⅡ的高表达。     

甲状旁腺素相关蛋白核定位序列及C-末端缺失对幼年小鼠下颌切牙发育影响及机制研究

目的:研究甲状旁腺素相关蛋白(PTHrP)对2周龄小鼠下颌切牙发育的影响及作用机制.方法:分别选取2周龄PTHrP KI小鼠及同窝WT小鼠各20只,对下颌切牙行影像学、组织学、细胞凋亡、RT-PCR检测.结果:PTHrP KI组小鼠下颌切牙长度、切缘厚度、髓腔壁牙本质厚度、I型胶原阳性面积、ALP、OCN、SOD1、S...