牙本质非胶原蛋白对人牙髓干细胞增殖活性及矿化能力的影响

目的：明确牙本质非胶原蛋白（dentin non—collagenous proteins,dNCPs）对人牙髓干细胞（human dental pulp stemcells,hDPSCs）增殖及矿化能力的影响。方法：通过细胞活性噻唑蓝（MTT）比色法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红钙化结节染色和氯代十六烷基吡啶定量分析钙离子浓度,检测10¨g／mLdNCPs对hDPSCs增殖和矿化能力的影响。结果：dNCPs分别诱导1、3、5、7、9d,人牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无显著性差异（P〉0．05）;诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异（P〈0．01）;诱导2周后,茜素红染色显示10μg／mLdNCPs组出现较大钙化结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组（P〈0．001）。结论：10μ∥mLdNCPs可明显促进人牙髓干细胞的矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显。     

成骨生长肽对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响

目的 观察成骨生长肽(OGP)对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响.方法 酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞(hDPCs),倒置相差显微镜观察hDPCs的形态.CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测筛选最佳浓度OGP;最佳浓度组、对照组、单纯矿化液组和含最佳浓度的矿化液组做茜素红、Von Kossa染色和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 酶消化组织块法可以良好的体外培养hDPCs;OGP浓度在10-7 ～ 10-11 mol/L均能促进hDPCs增殖和ALP活性:促增殖最佳浓度为10-10 mol/L,随时间延长,与10-9 mol/L浓度组间差异无统计学意义;OGP浓度为10-9 mol/L时能显著增强ALP活性.茜素红和Von Kossa染色观察第14、21天,四组均有钙化结节形成,联合组结节最大,数量最多;RT-PCR结果显示第7、14、21天,联合组的Ⅰ型胶原、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OCN)的mRNA表达量均高于其他各组(P ＜ 0.01).结论 OGP能促进体外hDPCs的增殖和分化,结合两者最优浓度为10-9 mol/L;茜素红和Von Kossa染色可以观察钙化结节形成过程;OGP联合矿化诱导液可以显著提高体外hDPCs的矿化.     

高糖对人牙髓细胞增殖及氧化应激的影响

目的 探讨高糖对人牙髓细胞(HDPCs)增殖和氧化应激的影响,以探索高糖环境对牙髓的影响机制.方法 分离培养牙髓细胞,鉴定组织来源,实验分为4组:低糖组(葡萄糖5.5 mmol/L)、正常组(葡萄糖25 mmol/L)、高糖组(葡萄糖50mmol/L)、高渗组(与50 mmol/L组渗透压相等,并与5.5 mmol/L...     

卵黄高磷蛋白对人牙髓细胞增殖的影响

目的研究卵黄高磷蛋白对体外培养的人牙髓细胞增殖的影响。方法 4个实验组分别采用1、10、100、1000ng/mL的卵黄高磷蛋白,对照组采用10%胎牛血清,分别作用于体外培养的第6代人牙髓细胞,每组8个标本,培养3、6day后分别对每组作MTT法检测,OD值进行t检验。实验组用100ng/mL卵黄高磷蛋白,对照组用10%胎牛血清作用上述人牙髓细胞,培养48h,常规消化,固定,经DNA荧光染色后,用流式细胞仪测定DNA含量。结果 1～100ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均促进人牙髓细胞增殖。10、100ng/mL卵黄高磷蛋白作用6day,对人牙髓细胞增殖的促进作用与对照组相比有显著差异(P<0.05)。1000ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均抑制人牙髓细胞增殖。100ng/mL卵黄高磷蛋白作用人牙髓细胞,与对照组相比DNA合成前期细胞比例明显降低,而DNA合成期细胞比例和细胞增殖指数均显著增高。结论卵黄高磷蛋白具有促进人牙髓细胞增殖和DNA合成的作用,可能主要通过促进处于合成前期的细胞进入合成期来实现的。     

体外人牙髓细胞的矿化特性

为探讨体外人牙髓细胞的生物学特性，采用体外细胞连续培养、钙质染色、Ｘ射线能谱分析与透射电镜观察等方法，对体外人恒牙牙髓细胞的矿化特性进行了研究并与人牙龈成纤维细胞（ｈｕｍａｎｇｉｎｇｉｖａｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＧＦｓ）进行了比较。结果表明，人牙髓细胞在体外可以复层生长并形成细胞结节，ＨＧＦｓ则无此能力，牙髓细胞的碱性磷酸酶活性亦较ＨＧＦｓ者高；细胞结节钙质染色呈阳性，结节内钙磷含量明显增高；人牙髓细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构特征，胞间基质中可见致密晶状小体。结果提示，体外连续培养的人牙髓细胞有向成牙本质细胞分化的可能，这可为研究人牙髓细胞的分化和矿化提供有价值的思路。     

凝溶胶蛋白gelsolin对人牙髓细胞增殖及迁移的影响

目的研究凝溶胶蛋白gelsolin（GSN）对人牙髓细胞（hDPC）增殖及迁移的影响。 方法激光共聚焦检测gelsolin在hDPC中的表达。以小干扰RNA（siRNA）沉默hDPC中的gelsolin,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;Transwell实验观察细胞的迁移情况。采用单因素方差分析数据。 结果激光共聚焦显示gelsolin普遍表达于hDPC胞浆。沉默gelsolin,hDPC的增殖率在24、48、72 h时分别下降47.8%（F= 6.182,P= 0.035）、48.9%（F= 5.520,P= 0.044）、64.1%（F= 15.440,P= 0.004）;流式结果显示干扰gelsolin,hDPC的凋亡率增加约4.5%（F= 21.162,P= 0.002）,而细胞周期未发生明显阻滞,S期细胞比例升高约5%（F= 4.526,P>0.05）,G1期细胞比例下降约8%（F= 4.743,P>0.05）;Transwell结果显示,24 h内hDPC的迁移能力降低约60%（F= 12.781,P<0.001）。 结论gelsolin对hDPC的增殖及迁移具有调控作用。     

矿化液对人牙周膜细胞增殖和功能的影响

目的 比较人牙周膜细胞在矿化条件与非矿化条件下增殖和分化的过程,评价矿化液对其功能的影响.方法 人牙周膜细胞原代培养,鉴定.将增殖稳定的细胞分别在矿化条件和非矿化条件下培养,检测其形态、碱性磷酸酶活性、细胞周期等.结果 人牙周膜细胞增殖基本稳定后矿化组与非矿化组细胞分裂增殖指数相似,但前者碱性磷酸酶活性明显较高且持久,表现出较强的钙化能力.结论 人牙周膜细胞增殖基本稳定后加入矿化液对细胞增殖无影响但可明显促进细胞矿化功能,说明人牙周膜细胞在矿化条件下可以表现其成骨特性.     

模拟微重力对人牙髓干细胞-PLGA复合物矿化的影响

目的:研究模拟微重力(SMG)对人牙髓干细胞(hDPSCs)在聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上矿化的影响。方法:采用酶消化法分离、培养人牙髓干细胞,并进行鉴定。hDPSCs常规接种于PLGA支架,24h后,模拟微重力环境和普通环境下分别矿化诱导。矿化诱导第3、5、7、10、14天时进行碱性磷酸酶活性检测,第21天时进行茜素红染色以观察人牙髓干细胞在PLGA支架上矿化结节形成情况。结果:模拟微重力环境下的碱性磷酸酶活性明显低于普通环境(P<0.01),茜素红染色显示模拟微重力环境下形成的矿化结节较普通环境下的小且数量少。结论:模拟微重力环境抑制hDPSCs在PLGA支架上的矿化。     

血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响

目的：观察血小板血浆及其细化成分对人牙髓细胞增殖的影响。方法：使用因正畸而拔除的人牙的牙髓细胞，用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果：5％的多血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）、5％和10％的洗净血小板（washed platelet，WPLT）均明显地促进了人牙髓细胞的增殖，而且WPLT的作用较PRP更显著。乏血小板血浆（platelet-poor plasma，PPP）呈浓度依赖性地抑制了人牙髓细胞增殖，5％WPLT促进人牙髓细胞增殖的作用。结论：去除血浆成分的WPLT对培养的人牙髓细胞增殖有明显的促进作用；血浆中可能存在对抗血小板生长因子作用的因子。     

NGF、bFGF对体外培养人牙髓细胞增殖与分化的作用

目的:研究NGF、bFGF及两者联合应用对体外培养人牙髓细胞(HDPC)的增殖与分化作用的影响。方法:用MTT和ALP活性检测法,观察对照组(10ml/L FBS的DMEM培养液)与实验组(10U/ml NGF、10μg/L bFGF、10U/ml NGF 10μg/L bFGF、5U/ml NGF 5μg/L bFGF、1U/ml NGF 1μg/L bFGF)对体外培养的第5~8代HDPC增殖与分化作用的影响。对实验数据行Dunnett-t检验。结果:与对照组相比,10U/ml的NGF可显著促进HDPC的增殖(P<0.05);对ALP的活性没有明显的增强作用(P>0.05);10μg/LbFGF可显著促进HDPC的增殖(P<0.05),但对HDPC的ALP活性,却有一定的抑制作用(P>0.05);10U/ml NGF 10μg/L bFGF和5U/ml NGF 5μg/L bFGF既可显著地促进HDPC增殖(P<0.05),又可增强HDPC的ALP活性(P<0.01)。结论:一定浓度的NGF与bFGF组合既可促进HDPC增殖,又可促进其分化,两者对HDPC有显著的功能放大性协同增强作用。     

姜黄素对人牙髓细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对人牙髓细胞（human dental pulp cells,HDPCs）细胞周期及凋亡的影响.方法：体外培养人健康牙髓细胞,不同浓度姜黄素（curcumin）处理细胞后流式细胞术检测细胞周期,TUNEL染色法观察细胞凋亡,实时荧光定量PCR及免疫蛋白印迹分别检测p300 mRNA及蛋白水平.结果：流式细胞术及TUNEL结果显示姜黄素处理人牙髓细胞后,G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,凋亡细胞增加;实时荧光定量PCR及免疫蛋白印迹结果显示姜黄素抑制p300 mRNA及蛋白的表达.结论：姜黄素使细胞周期停滞在G0/G1期,诱导牙髓细胞凋亡,其机制可能是通过下调p300活性.     

EPO对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的体外探究促红细胞生成素(EPO)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)增殖及分化的影响。方法体外常规培养hDPSCs后,不同浓度EPO(0、0.1、1、10、20、50 U/ml)刺激hDPSCs,CCK-8法检测细胞增殖能力变化;采用碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定、茜素红染色、Real-time PCR来研究EPO对hDPSCs分化的影响。结果 10U/ml EPO可以促进hDPSCs的增殖(P<0.05);20U/ml EPO组碱性磷酸酶染色加深,活性提高,钙化结节形成增多;成血管成牙成骨向分化相关基因VEGF、bFGF、DSPP、Runx2、ALP的表达上调(P<0.05)。结论适宜浓度的EPO可以促进hDPSCs的增殖及分化。     

机械压应力刺激对人牙髓干细胞体外增殖矿化的影响

目的:研究不同大小的周期性机械压应力刺激对人牙髓干细胞(h DPSCs)体外增殖和矿化的影响。方法:用体外离心力加压模式,对各组h DPSCs施加30 min/d、大小分别为170、210、250 g的周期性机械压应力刺激,以不加力组作为对照。分别利用CCK-8试剂盒及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组h DPSCs的增殖情况及ALP活性;茜素红染色检测各组h DPSCs的矿化能力;透射电镜观察各组h DPSCs的超微结构。结果:3种大小的机械压应力刺激均可显著抑制h DPSCs增殖、ALP活性显著下降(P<0.05);各加力组形成的矿化结节明显减少,且以250 g的应力刺激对矿化能力的抑制最为显著(P<0.05)。结论:一定大小、频率范围内的周期性机械压应力刺激可抑制人牙髓干细胞体外增殖和矿化,且对矿化的抑制作用与周期性机械压应力大小成正相关。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对体外培养人牙髓细胞增殖、迁移活性的影响。方法以常规组织块培养法体外获得人牙髓细胞,实验组分别加入终浓度为1.0、5.0、10.0和50.0ng/ml的bFGF,对照组仅加入等量的空白培养基,采用CCK-8法分别测定450nm下各组光吸收度A值,研究bFGF对牙髓细胞增殖活性的影响;应用Transwell小室培养法,研究bFGF对牙髓细胞迁移活性的影响。结果与对照组相比,bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下可促进牙髓细胞的增殖（P〈0.05）,bFGF最低显效浓度为1.0ng/ml,最佳显效浓度为10.0ng/ml。bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下诱导细胞迁移（P〈0.05）。结论 bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞的增殖和迁移,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。     

沉默N-cadherin对人牙髓干细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨沉默N-cadherin对人牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）增殖和迁移能力的影响,为基于DPSCs的牙髓再生提供实验依据。方法采用N-cadherin sh RNA慢病毒转染DPSCs,q RT-PCR、Western blot检测N-cadherin的表达水平,验证沉默效率。实验分为阴性对照组（sh RNA-NC）和N-cadherin sh RNA沉默组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移能力。结果N-cadherin sh RNA可显著降低DPSCs的N-cadherin m RNA和蛋白的表达水平（P<0.001）。N-cadherin sh RNA组细胞增殖活性分别在细胞接种的第3、4天高于sh RNA-NC组,第6～8天低于sh RNA-NC组,差异均具有统计学意义（P<0.05）;在第3天时,N-cadherin sh RNA组处于S期和G2期的细胞比例大于sh RNA-NC组（P<0.05）;在第6天时,N-cadherin sh RNA...     

降钙素基因相关肽对人牙髓细胞的矿化影响

目的：分析降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP)对人牙髓细胞促矿化功能的影响，探讨CGRP在牙髓炎症状态下表达量增多的生物学意义。方法：人牙髓细胞分实验组和对照组培养，实验组加入适量的CGRP。分别测定细胞的碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、I型胶原mRNA表达量变化。结果：培养3、6、9、12、15d,5个时间点实验组比对照组细胞碱性磷酸酶活性增强、骨钙素含量增加，且有显著性差异（P＜0．01）。培养6d的实验组的细胞I型胶原mRNA表达比对照组明显高。结论：CGRP刺激牙髓细胞分化，促进矿化形成，CGRP表达增高将有助于修复性牙本质形成。     

瘦素对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的 探讨瘦素(leptin)对体外培养的牙髓干细胞增殖、分化的影响.方法 体外培养牙髓干细胞,采用MTT法及流式细胞技术检测不同浓度瘦素对牙髓干细胞增殖作用的影响,通过碱性磷酸酶、Yon Kossa染色及矿化相关蛋白(DSP、OCN)的免疫组化染色来检测瘦素对牙髓干细胞分化的影响.结果 瘦素对牙髓干细胞增殖没有显著作用,但是对牙髓干细胞的ALP活性呈浓度依赖性促进.Von Kossa染色可见矿化结节形成,DSP及OCN表达阳性.结论 瘦素可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞分化.     

矿化液对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的 探讨矿化液对人牙髓干细胞(DPSCs)生长特性的影响.方法 用含一定浓度的β-甘油磷酸钠、抗坏血酸和地塞米松的矿化液诱导人牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学染色、von Kossa染色方法,观察和检测矿化液诱导后细胞形态、超微结构、表型和矿化基质分泌的变化,以未诱导组为对照.结果 矿化液连续培养7d,人DPSCs细胞形态明显改变,呈牙本质样极化细胞表现,另一侧为增大的胞体;超微结构显示,诱导后的细胞体积增大,核浆比例下降,胞浆细胞器丰富;诱导前细胞不表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OC),诱导后均表达;连续培养21d,诱导组细胞形成多个矿化结节.结论 矿化液能诱导人DPSCs向成牙本质细胞样细胞分化并产生矿化基质.本研究从细胞水平上揭示了人DPSCs向成牙本质细胞分化机理,为人DPSCs应用于牙髓损伤的修复再生提供了依据.     

模拟微重力对人牙髓干细胞在裸鼠体内矿化能力的影响

目的:研究模拟微重力环境对聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)在裸鼠体内矿化能力的影响。方法:分离、培养hDPSCs并进行鉴定,然后将hDPSCs接种到PLGA支架上培养72 h后随机分为两组,普通重力组和模拟微重力组,经矿化诱导液培养1周后分别将细胞支架复合物移植到裸鼠体内,植入术后4周取材,进行组织学(HE和Vonkossa)和免疫组织化学(DSPP)检测。结果:HE染色均可见有血管生成,Vonkossa染色均为阳性,模拟微重力组DSPP的表达水平明显高于普通重力组(P<0.05)。结论:模拟微重力有利于hDPSCs在裸鼠体内的矿化。     

脉冲Nd:YAG激光照射对牙髓细胞增殖的影响

目的了解脉冲Nd：YAG激光照射对牙髓细胞增殖的影响。方法应用体外组织细胞培养技术，MTT比色法测量不同能量参数的Nd：YAG激光照射对牙髓细胞增殖的影响。结果80mj20Hz的能量最有利于细胞生长，频率超过40Hz即对细胞生长无促进作用。结论合适的能量能够促进细胞生长。能量过大抑制细胞增长。