一种新的HLA分型方法的介绍

<正>人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)是由Dausset在1958年首先发现,HLA基因位于人类第6号染色体短臂6p21.31区域,全长3 600 kb,占人类基因组的1/3 000,分为HLA-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类基因。HLA是人类主要组织相容性复合物抗原,经典的HLA-Ⅰ、Ⅱ基因包含三个主要位点(HLA-Ⅰ:A、B、C;HLA-Ⅱ:DP、DQ、DR),并具有高度的多态性~([1])。     

NKT细胞调控1型糖尿病的相关分子机制研究进展

1 1型糖尿病 1型糖尿病(Type 1 diabetes,T1D)是器官特异性的自身免疫反应疾病,因基因表达、免疫调节、环境因素等相互作用而引起[1].胰岛炎性损伤或胰岛炎是这种病的共同特征,主要是因为一些个体基因对人类白细胞抗原、胰岛炎、CTLA4、PTPN2以及IL2Rα.基因、环境等因素易感[2].第一个易感基因位点位于6号染色体短臂2区1带的HLA区域,这个区域还可分为3个亚区域:即HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、HLA-Ⅲ.与1型糖尿病有关的最重要的基因位点是HLA-Ⅱ分子(HLA-DR,-DQ,-DP),主要编码α、β链,当抗原递呈细胞(如树突状细胞、B淋巴细胞以及活化的T淋巴细胞)表面编码的这些分子将抗原递呈给CD4+T细胞后即可激活CD4+T细胞效应.     

人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究

目的：探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系。方法：采用Western blot，免疫组化和流式细胞术，检测卵巢癌细胞中HLA分子表达，以RT-PCR技术，分子卵巢癌细胞TAP，LMP和MHCⅡ类分子反式激活蛋白（CⅡTA）基因表达。结果：被检测的11株卵巢癌细胞中，HLA-I类分子异常的表达率达为45%，而HLA-I类分子表达的异常与TAP1，TAP2，LMP2和LMP74种基因表达的异常有关，卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子的表达与CⅡTA基因的表达一致。组成性或诱导性表达CⅡTA基因的肿瘤细胞，经IFNγ作用后，其HLA-I，-Ⅱ类分子的表达增强；而诱导后仍不表达CⅡTA基因的肿瘤细胞，其HLA分子的表达无增强作用。结论：卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷，是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素。提示CⅡTA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-Ⅰ，-Ⅱ类分子的表达。     

HLA-E的结构和功能研究进展

HLA-E分子是一类非经典HLA-Ⅰ分子。其提呈的抗原肽主要是经典的HLA-l类分子及某些HLA-G亚类分子的信号肽;通过与细胞表面的CD94／NKG2类受体结合,可抑制或激活NK细胞的生物学活性;在肿瘤、病毒感染的逃避机制中可能起重要作用。本文对HLA-E分子的结构特点、生物学功能研究进展作一综述。     

宫颈病变中抗原呈递元件成员蛋白和人类白细胞共同抗原Ⅰ类分子表达的关系

抗原呈递元件(APM)成员蛋白作为一组抗原呈递相关功能蛋白,在协助人类白细胞共同抗原(HLA)Ⅰ类分子组装、负载和提呈内源性抗原肽,介导抗病毒T细胞免疫中发挥着重要作用[1].其成员蛋白抗原处理相关转运体(TAP)负责将内源性抗原肽向内质网腔转运.TAP相关蛋白对HLA-Ⅰ类分子在内质网中的装配发挥关键作用[2].分子伴侣钙连接蛋白和钙网蛋白以及疏基二硫键氧化还原酶Erp57协助新合成的HLA-Ⅰ蛋白正确折叠和组装[3].人乳头状瘤病毒(HPV)是宫颈癌发生的始动因素,也可能通过协助肿瘤细胞影响HLA-Ⅰ基因表达调控.因此,探讨HPV感染引起宿主HLA-Ⅰ类分子表达缺失与APM成员表达情况有无关联,是揭示肿瘤的分子机制、疫苗治疗、建立肿瘤生物标志谱体系的关键.我们通过检测宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织中APM成员蛋白及HLA-Ⅰ类分子的表达情况,分析其与HPV16感染的相关性,从而探讨宫颈病变中HLA-Ⅰ类分子表达下调的机制.     

贵州地区汉族结核病患者HLA-DM基因多态性的研究

HLA—DM基因是人类HLA-Ⅱ类基因区的一种非典型基因，分为DMA和DMB两个区，目前已明确的DMA等位基因有4个（DMA＊0101～0104），DMB等位基因有5个（DMB＊0101～0105）。HLA-Ⅱ类分子依赖途径是结核分枝杆菌抗原的主要递呈方式，HLA-DM分子作为经典Ⅱ类分子的分子伴侣，其基因多态性是否影响结核抗原的递呈值得研究。     

HLA-G结构与功能研究进展

胎盘组织外绒毛滋养层细胞不表达经典的HLAⅠ类分子 ,使这些细胞易感于NK细胞的攻击 ,但由于表达非经典的MHCⅠ类分子HLA G可以防止NK细胞识别这些细胞 ,HLA G至少是 3种NK细胞抑制受体的配体 ;表达HLA G的滋养层细胞可能递呈肽类给T细胞 ,转染膜结合型HLA G1, G2及可溶型HLA G分子的细胞能抑制同种T淋巴细胞的增殖反应及抗原特异性的CTL反应 ;以及HLA G基因的多态性程度是有限的 ,提示HLA G在母体对半异体的胎儿的免疫耐受中可能起一个重要的作用。     

HLA-G分子表达调控及其功能研究进展

HLA G分子是一种非经典HLA Ⅰ类抗原 ,相对于经典的Ⅰ类抗原 ,它的组织分布非常局限 ,具有有限的多态性。它的表达调控与经典Ⅰ类抗原存在着很大的差异 ,HLA G基因内经典Ⅰ类基因反式活化的3个主要元件增强子A、ISRE和SXY均发生变异 ,导致NF κB、IRF1、CⅡTA介导的反式激活途径对HLA G基因不能发挥作用。最早在母胎界面发现存在HLA G分子表达 ,它可以与NK细胞和CTL表面相应的杀伤细胞抑制性受体 (KIR)结合 ,从而抑制它们的杀伤作用 ,这可能是母胎耐受的重要机制。近来的研究表明HLA G分子还可表达于少数类型肿瘤细胞、一些受到感染的细胞和一些正常细胞。它的表达调控及其可能的功能是近来的研究热点。     

强的松对小儿原发性肾病综合症患者PBMC HLA表达的调节作用

目的: 初步探讨糖皮质激素对外周血单个核细胞(PBMC)人类白细胞抗原(HLA)表达的调控作用.方法: 肾病综合征(NS)患儿PBMC体外经IFN-γ联合PHA 刺激诱导活化,用不同浓度强的松干预,采用流式细胞术检测其PBMC组成性、活化后和强的松处理后HLA-Ⅰ/Ⅱ类分子和HLA-DR7分子的表达量并与正常对照组进行分析比较.结果: (1)体外培养NS患儿及正常人PBMC组成性表达HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子和HLA-DR7分子,且NS患儿高于正常人(尤以HLA-Ⅱ类分子突出,为正常人的11.78倍,P＜0.01);(2)体外经 IFN-γ联合PHA活化后HLA-Ⅰ/类分子和DR7分子表达增加(P＜0.01);(3)经不同浓度强的松处理后,HLA-Ⅰ/类分子和DR7分子比活化后表达减少(P＜0.01);(4)经不同浓度强的松预处理后,与活化组比较HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子和HLA-DR7表达减少(P＜0.01),对NS患儿的抑制率要高于正常人,并且HLA-Ⅱ类分子表达的抑制作用表现出剂量依赖性(P＜0.01).结论: NS患儿体内存在异常活化的T细胞;糖皮质激素对IFN-γ诱导活化的PBMC HLA表达有抑制作用.     

002 HLA表型与肿瘤逃逸

HLA-Ⅰ类分子表达缺失是肿瘤细胞针对HLA分子具有向T细胞递呈免疫原性多肽这一作用而选择的一种逃逸机制.然而不同类型的肿瘤细胞或同一肿瘤在不同的发展阶段均呈现出不同的HLA-Ⅰ类表达类型.目前,肿瘤组织及肿瘤细胞系中HLA-Ⅰ类分子丢失的类型主要有4种①HLA-Ⅰ类分子全部丢失;②HLA单倍型丢失;③HLA单个座位丢失;④HLA等位基因丢失.此外,在肿瘤发展过程中非经典HLA-Ⅰ类HLA-E、-G及MHC类似物的异常表达可以抑制NK细胞对肿瘤细胞的溶解,则反映了肿瘤细胞针对NK细胞的免疫监视作用而选择的一种逃避机制.每一个荷瘤病人都是一个独特的整体,都将产生一个特殊的有助于逃逸的变异体,因此,检测HLA抗原在肿瘤细胞上的表达是一个新的指标,有助于制定未来的肿瘤生物治疗策略.     

HLA-DM及HLA-DO的研究进展

抗原递呈涉及多种机制及各种分子。细胞膜上的外来抗原被细胞表面的mIg或BCR摄取进入细胞内早 后期内涵体及溶酶体中。内质网中的新合成并结合于Ii链的HLAⅡ类分子进入内涵体 溶酶体中 ,Ii链降解成为CLIP片段 ,在DM DO的联合作用下 ,结合于HLAⅡ类分子抗原结合槽内的CLIP脱落 ,同时抗原肽进入槽内形成HLAⅡ 抗原肽复合物 ,将抗原提呈于细胞表面供T细胞识别 ,激发一系列的免疫反应。DM DO对于这一复杂过程的准确进行起着至关重要的作用     

血小板特异性抗体及HLA抗体引起血小板输注无效的研究

目的分析血小板输注无效（PTR）患者血小板同种抗体,并对其HPA及HLA-Ⅰ类抗原进行基因分型,探讨血小板输注无效与血小板同种抗原／HLA—Ⅰ类抗原相关性。方法应用ELISA方法对17例血小板输注无效患者血清中的血小板抗体进行检测;运用PCR—SSP方法,采用HPA分型试剂盒检测血小板同种抗原7个抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、15,以及HLA分型试剂盒对HLA—A／B抗原进行基因分型。结果6名患者单独表达HLA抗体,4名患者表达血小板特异性糖蛋白抗体,3例HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同表达．其中以GPⅡb／Ⅲa为主。对17例患者HPA系统和HLA-Ⅰ类抗原基因分型,发现HPA-3系统中a的基因频率高达0．676,b为0．324;HLA—A＊02、HLA—A＊24、HLA—A＊11和HLA—B＊60、HLA—B＊13、HLA—B＊46多见。结论HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体表达引起血小板输注无效,了解胛R与HPA／HLA—Ⅰ类抗原的相关性对指导临床血小板配合性输注具有重要意义。     

抗原处理相关转运体结构与功能的研究进展

内源性抗原通过MHCⅠ类分子提呈给细胞毒性T细胞 (CTL)是机体细胞免疫识别的重要阶段。抗原处理相关转运体 (transporterassociatedwithantigenprocessing ,TAP)负责抗原肽从胞浆到内质网的转运 ,在MHCⅠ类分子的抗原处理及提呈过程中发挥重要作用。TAP结构和功能障碍将导致细胞表面MHCⅠ类分子表达缺陷 ,这成为肿瘤细胞、病毒感染细胞逃逸免疫监视的重要机制。     

057 抗原处理相关转运体结构与功能的研究进展

内源性抗原通过MHCⅠ类分子提呈给细胞毒性T细胞(CTL)是机体细胞免疫识别的重要阶段.抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)负责抗原肽从胞浆到内质网的转运,在MHCⅠ类分子的抗原处理及提呈过程中发挥重要作用.TAP结构和功能障碍将导致细胞表面MHC Ⅰ类分子表达缺陷,这成为肿瘤细胞、病毒感染细胞逃逸免疫监视的重要机制.     

326例孕妇HLA抗体检测结果分析

人类白细胞抗原（HkA）为移植抗原,具有高度多态性,分为HLA—Ⅰ、HLA-Ⅱ、HLA-Ⅲ三类,HIA为同种抗原,可以刺激机体产生HIA同种抗体。现代医学研究证明,HLA抗体与实体移植、输血、妊娠等密切相关,为探讨HLA抗体与妊娠的关系,笔者对326例孕妇进行HIA抗体检测,现将结果报告如下。     

081 HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA-Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用,其表达调节主要发生在转录水平上.在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件,调节HLA-Ⅱ类抗原的表达.HLA-Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性,也可通过多种途径影响HLA-Ⅱ基因的表达.肿瘤细胞可异常表达HLA-Ⅱ类抗原,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达.     

抗原处理相关转运体结构与功能的研究进展

内源性抗原通过MHCⅠ类分子提呈给细胞毒性T细胞(CTL)是机体细胞免疫识别的重要阶段。抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)负责抗原肽从胞浆到内质网的转运，在MHCⅠ类分子的抗原处理及提呈过程中发挥重要作用。TAP结构和功能障碍将导致细胞表面MHCⅠ类分子表达缺陷，这成为肿瘤细胞、病毒感染细胞逃逸免疫监视的重要机制。     

MHCⅡ类反式激活因子基因的克隆、鉴定及初步功能测定

目的 克隆MHCⅡ类反式激活因子（class Ⅱ rtansactivator,CⅡTA）基因并进行初步功能测试，为CⅡTA的应用研究奠定基础。方法 RT－PCR扩增CⅡTA基因，将其克隆到pGEM-T载体上并进行酶切和测序鉴定，用EcoRⅡ、XhoⅠ将CⅡTA定向克隆到表达载体pcDNA3上，用脂质体转染法将pcDNA3/CⅡTA转入HeLa细胞；流式细胞术观察细胞表面HLA－DR／DQ的表达变化。结果 成功克隆CⅡTA基因，CⅡTA的转入使HeLa细胞表面表达HLA－DR／DQ分子。结论 转入CⅡTA能使HeLa细胞表面表达MHCⅡ类分子表达，CⅡTA参与调控MHCⅡ类基因的转录和表达。     

HLA-Ⅰ类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用

目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-Ⅰ类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片.方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等与HLA密切相关的遗传病等因素,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,根据HLA-Ⅰ类不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,最后设计了122条探针(HLA-A56条,HLA-B66条)制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.结果:所有样本的HLA-Ⅰ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分出598个Ⅰ类抗原等位基因,可检出Ⅰ类抗原特异性57个.结论:基因芯片用于HLA-Ⅰ类抗原分型可行.其分辨率高,特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查.     

091 HLA-DM及HLA-DO的研究进展

抗原递呈涉及多种机制及各种分子.细胞膜上的外来抗原被细胞表面的mIg或BCR摄取进入细胞内早/后期内涵体及溶酶体中.内质网中的新合成并结合于Ii链的HLAⅡ类分子进入内涵体/溶酶体中,Ii链降解成为CLIp片段,在DM/DO的联合作用下,结合于HLAⅡ类分子抗原结合槽内的CLIP脱落,同时抗原肽进入槽内形成HLAⅡ-抗原肽复合物,将抗原提呈于细胞表面供T细胞识别,激发一系列的免疫反应.DM/DO对于这一复杂过程的准确进行起着至关重要的作用.