非诺贝特通过上调短链酰基辅酶A脱氢酶抑制大鼠心肌肥厚

目的:研究非诺贝特对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)心肌中短链酰基辅酶A脱氢酶(Short-chain acyl-CoA dehydrogenase,SCAD)的表达、心肌脂质代谢变化以及心肌肥厚指标的影响,探讨非诺贝特改善SHR心肌肥厚的作用机制.方法:观察非诺贝特灌胃8周后,SHR的血压及左室重量指数、血清和心肌游离脂肪酸含量的变化,采用Western blot方法检测心肌过氧化物酶体增殖剂活化受体α(PPARα)和SCAD的蛋白表达变化,采用厌氧性电子转移黄素蛋白荧光还原分析法检测SCAD酶活性的改变.结果:与Wistar-Kyoto (WKY)大鼠比较,SHR的血压及左室重量指数均明显增高,心肌中PPARα与SCAD的蛋白表达明显下调,SCAD的酶活性显著降低,血清和心肌游离脂肪酸含量增加(P＜0.05);与SHR比较,非诺贝特治疗8周后的SHR,其左室重量指数明显下降,血压无明显变化,心肌中PPARα与SCAD的蛋白表达明显上调,SCAD的酶活性显著增高,血清和心肌游离脂肪酸含量减少(P＜0.05).结论:非诺贝特增加心肌中SCAD的蛋白表达,改善心肌能量代谢障碍,可能是其抑制心肌肥厚发生与发展的机制之一.     

黄芪甲苷通过激活Sirt3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大及氧化应激

目的研究Sirt3在黄芪甲苷抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大和氧化应激中的作用。方法α-actinin染色检测心肌细胞大小;MitoSOX染色检测ROS;Real time PCR检测心肌肥大标记物ANP、BNP和β-MHC的mRNA水平;Western blot法检测心肌细胞肥大信号通路蛋白水平。结果100nmol·L-1血管紧张素Ⅱ处理心肌细胞48 h,心肌细胞面积与ANP、BNP、β-MHC mRNA水平显著增加,ROS水平及NOX-2、NOX-4表达显著增加,Sirt3表达显著降低;黄芪甲苷预处理心肌细胞1 h显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导的上述效应。Sirt3-siRNA干预Sirt3蛋白水平,显著抑制黄芪甲苷的心肌肥厚抑制作用以及抗氧化作用,上调ROS水平,促进心肌肥大。结论黄芪甲苷通过激活Sirt3抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大以及氧化应激。     

雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的：探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（cardi-acfibroblasts,CFb）增殖及α1（Ⅰ）型前胶原合成的影响。方法：建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α1（Ⅰ）型前胶原mRNA及蛋白表达。结果：雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α1（Ⅰ）型前胶原合成。结论：雷公藤甲素可以通过抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α1（Ⅰ）型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。     

晚发型多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症伴急性肾衰竭的病例分析北大核心CSCD

晚发型多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MADD)是一种脂肪酸氧化代谢障碍的常染色体隐性遗传病,主要病因为电子转运黄素蛋白脱氢酶基因变异,起病隐匿,常因出现脂质沉积性肌病才被临床发现,易被误诊为多发性肌炎,但是出现急性肾衰竭者少见。现报道1例女性患儿以肌无力和肌痛为首发表现,病初疑诊“多发性肌炎”,病程中出现急性肾衰竭,经大剂量甲泼尼松龙冲击、血浆置换、连续性血液净化等治疗效果不佳,最终进行基因测序发现ETFDH基因的复合杂合变异[C.770A>G(p.Y257C),C.872T>G(p.V291G)],确诊为晚发型MADD,经大剂量核黄素治疗后好转。晚发型MADD的症状和体征多但缺乏特异性,临床诊断、鉴别较困难,基因检测明确诊断后,疾病稳定期应用大剂量核黄素可纠正患儿的临床症状和生化紊乱。     

中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症合并先天性心脏病1例

患儿,男,33d。主因哭闹伴声音嘶哑15d,咳嗽3d入院。患儿于15d前无明显诱因出现哭闹,呈阵发性,伴面色、口周发绀,同时有声音嘶哑,逐渐加重,3d前出现咳嗽,咳嗽呈阵发性,有痰咳不出,无鸡鸣样尾音,就诊于河北医科大学第二医院,心脏彩超示：先天性心脏病,室间隔缺损、肺动脉高压、卵圆孔未闭。为求进一步诊断来我院,门诊以小儿肺炎、先天性心脏病收入院。患儿系第二胎第二产,孕足月顺产娩出,     

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症16例临床及基因型分析

[摘要]目的：探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)的临床表现、实验室检查、诊治转归以及临床类型与基因型之间的关系。方法：选取2013年6月至2019年6月在我院通过新生儿筛查与临床确诊的VLCADD患儿共16例,回顾性分析患儿临床表现、实验室检查和基因型。结果：16例患儿中男5例,女11例,年龄7个月~10岁。临床类型：心肌型3例（18.75%）,肝型5例（31.25%）,肌型7例（43.75%）,1例失访。心肌型患儿3例均死亡,肝型患儿2例死亡,肌型目前无死亡病例。16例患儿共检出28种不同的基因型,12种为未报道新突变。28种基因型中点突变24种,小片段缺失3种,单碱基插入1种。结论：VLCADD重型患儿起病早而危重,即使新生儿筛查早期诊断也难以扭转结局。基因型中至少带一个无效等位基因或引起框移的突变提示临床类型可能偏重。     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1(P27)蛋白的表达。结果:(1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFBG0/G1期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β1的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论:Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

短/支链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患者临床生化及基因分析

目的 探讨福建地区短/支链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SBCADD)临床特征及基因变异特点。方法 2016年8月至2022年3月该院新生儿疾病筛查中心采用串联质谱分析技术对111 547名新生儿进行遗传代谢病筛查发现C5升高患儿11例,均在该中心进行诊治及随访,其中8例患儿确诊为SBCADD(推测患病率约为1/13 943),3例患儿确诊为IVA(推测患病率约为1/37 182)。回顾性分析8例SBCADD患儿的临床特征、生化资料及基因测序结果。结果 8例SBCADD患儿中男1例,女7例;汉族7例,苗族1例。8例患儿均有异戊酰基肉碱不同程度升高,最高为1.04μmol/L;均有尿2-甲基丁基甘氨酸水平增加。8例患儿生长、发育大致正常,无临床症状。8例患儿中检测到6种ACADSB基因变异。这些患儿均有2个等位基因变异,其中纯合变异3例,复合杂合变异5例。3种基因变异已有文献报道[c.1165A>G(p.M389V)、c.275C>G(p.S92*)和c.923G>A(p.C308Y)],3种变异未见文献报道[c.1232C>T(p.T411M)、 c.421A>...     

短链脂酰辅酶A脱氢酶与心肌肥大关系的初步探索

目的研究心脏能量代谢脂肪酸β氧化过程中关键脱氢酶之一的短链脂酰辅酶A脱氢酶(short-chain acly-coen-zyme A dehydrogenase,SCAD)与心肌肥大之间的关系,探索治疗心血管疾病的新靶点。方法利用自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rats,SHR)和异丙肾上腺素皮下注射两种心肌肥大动物模型,以及苯肾上腺素(PE)刺激的心肌细胞肥大模型,检测SCAD在蛋白水平和mRNA水平上表达量的改变;并采用siRNA对SCAD进行干扰,观察对肥大分子指标的影响。结果以上动物模型和细胞模型中SCAD的蛋白表达水平都有明显的下降,mRNA水平表达量也有一定程度的下降。针对SCAD的siRNA干扰后可导致心肌细胞SCAD的表达明显下降,而肥大标记因子ANF、BNP的表达明显上调,进一步明确了SCAD与心肌细胞肥大的关系。结论心肌肥大时SCAD的蛋白水平和mRNA水平均明显下降,干扰SCAD后心肌细胞肥大指标上升,说明SCAD的下降可能参与心肌肥大的病理过程,上调SCAD有可能成为干预心肌肥大的重要环节之一。     

双苯氟嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制研究

目的研究双苯氟嗪(d ipfluzine,D ip)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(card iac fibrob lasts,CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用MTT法检测D ip对CFB增殖的影响;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪技术检测细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;免疫组织化学染色方法,观察心肌成纤维细胞经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1)蛋白的表达。结果①在一定浓度范围内,D ip能明显抑制AngⅡ诱导CFB的增殖和胶原合成(P<0.05或P<0.01)。②CFB细胞G0/G1期百分率随D ip浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随D ip浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。③D ip能降低PCNA蛋白表达,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.01)。④D ip能够明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。⑤免疫组化结果显示D ip(10、100μmol.L-1)组ERK1和cPKCα阳性表达低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论D ip通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原的增加而起到了抗心肌纤维化的作用,其抗纤维化作用与其降低TGF-β1基因表达以及抑制cPKCα、ERK1通路有关。     

硫化氢对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的 研究硫化氢(H₂S)对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用及机制。方法 取新生SD雄性大鼠心脏,采用差速离心法分离心肌成纤维细胞。以硫氢化钠作为H₂S的供体,检测H₂S对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌成纤维细胞增殖、羟脯氨酸含量以及去乙酰化酶3(SIRT3)蛋白表达的影响。用干扰RNA技术下调SIRT3表达后,观察H₂S对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖、羟脯氨酸的含量以及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和视神经萎缩蛋白1(OPA1)表达的影响。结果 H₂S可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,降低羟脯氨酸含量,增强SIRT3蛋白表达(P<0.05)。用干扰RNA技术下调SIRT3表达后,H₂S对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖抑制作用、羟脯氨酸含量降低作用均被抑制,且H₂S降低ColⅠ、ColⅢ表达的作用和增强OPA1表达的作用也明显减弱。结论 H₂S依赖增加SIRT3表达来抑制AngⅡ诱导的...     

熊果酸对血管紧张肽Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘要］目的观察熊果酸对血管紧张肽II（ Ang Ⅱ）诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法培养新生大鼠心肌成纤维细胞,噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,羟脯氨酸法检测胶原含量,［3H］ 脯氨酸掺入法测定胶原合成速率,免疫荧光法观察成纤维细胞形态学改变。Western blot测定还原型辅酶II（NADPH）亚单位p47 phox蛋白表达。结果Ang Ⅱ能够明显上调心肌成纤维细胞增殖、胶原含量、胶原合成速率及p47 phox表达。经熊果酸处理后,以上指标均明显下调。结论熊果酸能减轻Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖、胶原分泌及合成速率,机制与抑制p47 phox通路有关。     

钩藤提取物抑制血管紧张素Ⅱ诱导血管成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的探讨钩藤碱和异钩藤碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管成纤维细胞(VAF)增殖及胶原沉积的抑制效应及相关机制。方法建立AngⅡ诱导VAF增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、扫描电镜技术、流式细胞术、天狼猩红染色法和逆转录聚合酶链反应等观察钩藤碱和异钩藤碱对其增殖活性、细胞形态、细胞周期、细胞凋亡率、细胞c-myc蛋白表达、细胞培养液中羟脯氨酸含量、细胞间胶原蛋白含量、细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA的影响。结果AngⅡ刺激VAF增殖,钩藤碱和异钩藤碱抑制AngⅡ诱导VAF增殖;在钩藤碱和异钩藤碱作用下VAF处于G0/G1期的细胞数增多、S期的细胞数减少、细胞凋亡率增加、细胞c-myc蛋白表达降低、细胞培养液中羟脯氨酸含量降低、细胞间胶原表达降低、细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA转录也降低。结论钩藤碱和异钩藤碱对AngⅡ诱导VAF增殖和胶原沉积有抑制效应,部分机制与其阻滞VAF G0/G1期向S期转化、诱导细胞凋亡、下调细胞c-myc蛋白表达和细胞ColⅠmRNA和ColⅢmRNA转录有关。     

血管紧张素Ⅱ介导心肌成纤维细胞增殖的信号转导

目的探讨钙调神经磷酸酶（ＣａＮ）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）刺激的乳鼠心肌成纤维细胞（ＦＢｓ）增殖中的作用。方法以培养的ＦＢｓ为模型,用ＡｎｇⅡ刺激ＦＢｓ外Ｃａ２＋入流,环抱素Ａ（ＣｓＡ）阻断ＣａＮ信号通路,维拉帕米（Ｖｅｒ）阻断ＦＢｓ钙通道,检测ＦＢｓ　ＣａＮ、丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）、蛋白激酶 Ｃ（ＰＫＣ）活性,用［３Ｈ］－亮氨酸及［３Ｈ］－胸腺嘧啶参入量作为反应 ＦＢｓ增殖的指标。结果Ａｕｇ Ⅱ刺激组ＦＢｓ蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异有显著性（Ｐ＜０．０１）;ＣｓＡ及Ｖｅｒ能明显抑制Ａｎｇ Ⅱ介导的ＦＢｓ蛋白核酸合成速率增高,与ＡｎｇⅡ血刺激组相比差异有显著性（ Ｐ＜ ０． ０１）。同时发现 Ａｎｇ Ⅱ刺激组 ＣａＮ、ＰＫＣ活性与对照 ＦＢｓ相比差异有显著性（ Ｐ＜ ０． ０５或 Ｐ＜０．０１）。 ＣｓＡ和Ｖｅｒ抑制ＡｎｇⅡ介导的 ＦＢｓ ＣａＮ活性增高,Ｖｅｒ抑制Ａｎｇ Ⅱ介导的ＦＢｓＰＫＣ活性的增高。结论 ＣａＮ信号通路在ＡｎｇⅡ刺激的ＦＢｓ增殖中起重要作用,但ＣａＮ信号通路不是ＡｎｇⅡ介导ＦＢｓ的增殖的唯一信号通路,以ＭＡＰＫ为核心的信号通路亦参与了ＡｎｇⅡ刺激的ＦＢｓ增殖。     

环孢霉素A抑制血管升压素诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成

目的探讨环孢霉素A(CsA)对血管升压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成作用的影响。方法采用胰酶消化法培养新生Sprague-Dawley大鼠CFs，无血清培养基培养24 h以上的细胞在AVP刺激的基础上给予不同浓度的CsA。采用MTT法测定细胞数目，应用流式细胞仪分析细胞周期，羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清液羟基脯氨酸含量，钙调神经磷酸酶(CaN)活性通过分光光度计测定。结果环孢霉素A可剂量依赖性地抑制AVP诱导的心脏成纤维细胞数目的增加，0.05，0.5及5 μmol·L^-1 CsA对CFs的MTT吸收度值的抑制率分别为12%，24%和29%(均P<0.05)；细胞周期分析显示，0.5 μmol·L^-1 CsA可降低AVP诱导的S期百分数和增殖指数(P<0.05)；0.5及5 μmol·L^-1 CsA可降低细胞培养上清液羟基脯氨酸含量，抑制率分别为29%和33%，有统计学差异(均P<0.05)；CsA可完全阻断AVP诱导CFs细胞内CaN活性，而CsA对基础状态下的CaN活性和细胞存活率无明显影响。结论CsA通过阻断CaN信号通路抑制AVP诱导的CFs增殖和胶原合成，可抑制心肌纤维化进程，为心肌纤维化的防治提供了新的治疗靶点。     

黄芪苷Ⅳ对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究黄芪苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AST)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的保护作用并探讨其作用机制。方法AngⅡ刺激新生大鼠心肌细胞,制备心肌细胞肥大模型,分别用AST10mg·mL-1和20mg·mL-1进行预防性治疗。检测心肌细胞直径及细胞总蛋白含量,测定心肌细胞[Ca2+]i、肌浆网钙泵(SERCA)活力和钙调神经磷酸酶(CaN)活性。结果AngⅡ组细胞直径增大,总蛋白含量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);AST10mg·mL-1和20mg·mL-1能够降低心肌细胞肥大程度(P<0.05或P<0.01)、[Ca2+]i(P<0.01)及CaN活性(P<0.05或P<0.01)、提高SERCA活力(P<0.01)。结论AST对AngⅡ诱导心肌细胞肥大有明显的保护作用,可能与其降低[Ca2+]i、提高心肌SERCA活力及降低CaN活性有关。     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法将CFs随机分为A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K组。A组未给予氟伐他汀和AngⅡ处理;B组用0.1μmol·L^-1 AngⅡ刺激细胞6 h; C、D、E组在0.1μmol·L^-1 AngⅡ刺激细胞6 h后,再分别用0.1,1.0和10.0μmol·L^-1氟伐他汀处理12 h; F组将miR-NC转染至0.1μmol·L^-1 AngⅡ处理6 h后的CFs细胞中;G组将miR-590-5p转染至0.1μmol·L^-1 AngⅡ处理6 h后的CFs细胞中;H、I、J、K组分别将anti-miR-NC、anti-miR-590-5p、pcDNA3.1和pcDNA3.1-STAT3转染至1.0μmol·L^-1氟伐他汀和0.1μmol·L^-1AngⅡ处理12 h后的CFs细胞中。用噻唑蓝法检测细胞增殖,用Transwell法检...     

蛋白激酶C-ζ介导血管紧张素Ⅱ激活的CCDPK对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响(英文)

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和表皮生长因子(EGF)是否经不同的蛋白激酶C(PKC)亚基介导而激活CCDPK产生促培养新生大鼠心肌成纤维细胞增殖。方法:Western Bloting和[~3H]thymidine参入法。结果:PDBU对Ang Ⅱ诱导的CCDPK活性和DNA合成速率无显著影响。而EGF诱导的CCDPK活性下降了65％,DNA合成速率下降了38％。PD 98059对Ang Ⅱ和EGF诱导的CCDPK活性分别下降了70％和72％。结论:PKC-ζ介导了Ang Ⅱ对CCDPK的激活及心肌成纤维细胞的增殖效应。     

丝裂素活化蛋白激酶反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞c-myc基因的表达及细胞增殖的抑制效应(英文)

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)反义寡核苷酸(ODN)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌成纤维细胞c-myc基因及其细胞增殖的抑制效应。方法:MAPK反义ODN转染培养新生大鼠心肌成纤维细胞,Western Blot法结合p-81滤纸法测定MAPK活性;Northern Blot法检测c-myc mRNA的表达;[~3H]TdR掺入和[~3H]脯氨酸接入测定细胞DNA和胶原蛋白的合成。结果:MAPK反义ODN显著抑制Ang Ⅱ诱导的MAPK蛋白表达及其活性;显著抑制c-myc基因的表达以及细胞DNA和胶原蛋白的合成。结论:MAPK反义ODN特异性下调MAPK的活性,有效抑制了Ang Ⅱ诱导的c-myc基因的表达以及心肌成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成。