金合欢素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究

目的 探讨金合欢素（Aca）通过调节PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶（Parkin）通路介导的线粒体自噬对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 将肝癌HepG2细胞分为对照组（正常培养的HepG2细胞）、Aca组（10μmol/L Aca）、PINK1小干扰RNA阴性对照（si-NC）组（转染si-NC）、PINK1小干扰RNA(si-PINK1)组（转染si-PINK1）、Aca+si-NC组（转染si-NC后用10μmol/L Aca处理）、Aca+si-PINK1组（转染si-PINK1后用10μmol/L Aca处理）。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移；透射电镜观察自噬小体的形成；Western blot检测细胞中自噬相关蛋白[Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ]及PINK1/Parkin通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较，Aca组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目降低，凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平...     

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^-1 ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。     

芪血通络片联合依达拉奉治疗急性脑梗死的临床研究

目的 研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法 采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果 与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强（P<0.05）;山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论 山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

黄芪多糖对黄嘌呤氧化酶诱导的肺癌A549细胞自噬及PI3K/AKT信号通路的影响

目的基于PI3K/AKT信号通路观察黄芪多糖(Astragaluspolysaccharide, APS)对人肺癌A549细胞自噬的影响。方法黄嘌呤氧化酶(XOD)建立自噬模型,分别以APS(100、200、400) mg·L~(-1)浓度及3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)进行干预;CCK-8法、透射电镜及Western blot分别检测APS对人肺癌A549细胞自噬模型增殖、自噬体及自噬标记分子的影响。结果与空白组比较,模型组细胞生长加快,自噬小体数量增多,模型组LC3B及PI3K蛋白表达增高,p62及AKT降低(P<0.05);与模型组比较,APS(200、400) mg·L~(-1)浓度组细胞生长减慢,自噬小体数量减少,LC3B及PI3K蛋白表达下降,p62及AKT显著性增高(P<0.05);与3-MA组比较,APS(200 mg·L~(-1))浓度组LC3B蛋白表达下降(P <0. 05),APS(400 mg·L~(-1))浓度组PI3K显著性下降(P <0. 05)。结论 APS可能通过下调PI3K/AKT信号通路的自噬而发挥抗肿瘤作用。     

雷帕霉素通过调控NLRP3炎症小体抑制成纤维样滑膜细胞增殖

目的 探讨自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)通过调控含核苷酸寡聚化结构域样受体(NLR)家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)炎症小体对肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)诱导成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法 培养FLS并分为3组：对照组、TNF-α组、RAPA组。采用CCK-8法检测细胞活力。采用免疫荧光法和透射电镜(TEM)检测FLS细胞自噬情况。采用Western blotting法检测NLRP3炎症小体关键蛋白NLRP3、caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1、P62的表达。结果 与对照组比较,TNF-α组FLS细胞明显增殖(P<0.05),并激活NLRP3炎症小体(P<0.01)。与TNF-α组比较,RAPA组FLS增殖明显抑制(P<0.05),LC3-II和Beclin1表达水平明显上调(P<0.01),P62、NLRP3和caspase-1的表达水平均降低(P<0.05)。结论 RAPA可以抑制TNF-α诱导的FLS增殖,其机制可能与提高自噬、抑制NLRP3炎症小体的激活有关。     

α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平

目的观察α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)Z型突变体(α1-antitrypsin Z variant,ATZ)表达对细胞自噬水平的影响,探讨ATZ细胞毒作用的可能机制。方法体外培养人胚肾细胞株HEK 293T并转染ATZ真核表达质粒,利用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,免疫荧光染色观察LC3的细胞定位,real-time PCR法检测自噬相关基因Atg5、Atg12和Beclin1的变化,DAB染色观察ATZ过表达对细胞形态的影响。结果与转染空质粒对照组相比,ATZ过表达促进细胞自噬的标志分子LC3由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62水平降低;而经自噬抑制剂氯化铵处理后,ATZ过表达细胞中出现LC3点状聚集,p62水平增加;同时,ATZ过表达明显增加自噬相关基因Atg5、Atg12的mRNA水平,而对Beclin1无明显影响;少量表达ATZ的细胞形态基本正常,细胞中LC3形成点状聚集;反之,过度表达ATZ的细胞核变小、固缩甚至消失,无LC3-Ⅱ表达。结论过表达ATZ通过增加Atg5和Atg12表达激活自噬,这可能与其细胞毒性有一定相关性。     

白杨素通过PI3K/AKT信号通路抑制LPS诱导的软骨细胞自噬

目的探索白杨素对脂多糖诱导的大鼠软骨细胞骨关节炎模型中对软骨细胞自噬的作用及其机制。方法提取10只SPF级SD大鼠关节软骨正常细胞进行体外分离培养,通过LPS诱导大鼠软骨细胞自噬。实验分为空白对照组、LPS组、白杨素(CHR)组和LPS+CHR组;CCK-8法检测各分组细胞的活性、Rhodamine123检测各组细胞中线粒体膜电位、DCFH-DA检测各组细胞的活性氧,Western blot法检测各组细胞中PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、Beclin-1及LC3Ⅱ的蛋白表达。结果白杨素对LPS诱导的软骨细胞自噬具有抑制作用,且当白杨素浓度为10 mmol·L^-1时抑制自噬作用最为显著;白杨素能够抑制LPS所致LPS诱导的软骨细胞的活性氧(ROS)的增加;白杨素抑制了细胞受损后线粒体膜电位的降低;同时白杨素抑制Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白的表达,抑制PI3K和AKT的磷酸化。结论白杨素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路,下调自噬蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ的表达抑制自噬,进而保护软骨细胞。     

Anicequol抑制HepG2细胞自噬的抗肿瘤作用研究

目的 探讨从海洋真菌Penicillium dipodomyicola分离的anicequol抑制肝肿瘤细胞株HepG2增殖与自噬的关系。方法 HepG2分别用 0、2.5、5或10μmol·L?1 的anicequol处理,CCK-8法检测对HepG2的增殖作用,透射电镜观察对自噬囊泡的影响,Western blot检测对LC3II/I表达的影响,mRFP-GFP-LC3腺病毒转染观察对自噬流的影响,吖啶橙(AO)染色检测对溶酶体膜通透性的影响,。结果 Anicequol显著抑制HepG2细胞增殖,透射电镜观察到典型的自噬囊泡,mRFP-GFP-LC3腺病毒转染显示绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白同步呈现荧光点状聚集,表明anicequol阻断HepG2的自噬流(P < 0.05)。AO染色表明anicequol引起HepG2溶酶体膜通透性增加,溶酶体膜的完整性被破坏(P < 0.05)。结论 Anicequol可通过调控肿瘤细胞自噬过程,阻断自噬流抑制HepG2细胞增殖。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨黄芪多糖对结直肠癌自噬的影响

目的 探讨黄芪多糖（APS）对结直肠癌自噬的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测APS各剂量（0.25 g/L、0.5 g/L、0.75 g/L、1 g/L）组对人结直肠癌HCT-116细胞增殖的影响，通过细胞划痕实验检测APS对HCT-116细胞迁移的影响，通过单丹磺酰尸胺染色检测APS对结直肠癌细胞自噬的影响，采用Western blot法检测APS对HCT-116细胞和结直肠癌荷瘤裸鼠肿瘤中自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白LC3B、p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、PI3K、Akt及m TOR表达的影响；通过免疫组化染色检测APS对结直肠癌肿瘤中自噬相关蛋白p62表达的影响。结果APS可抑制HCT-116细胞增殖，且呈剂量依赖性（P<0.05）;APS可通过诱导细胞自噬抑制HCT-116细胞增殖和迁移，而自噬抑制剂3-MA(2 mmol/L)不仅可减弱APS对HCT-116细胞自噬的诱导作用，也可减弱APS对HCT-116细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.05）;APS可上调HCT-116细胞及结直肠癌小鼠肿瘤中自噬相关蛋白LC3BⅡ...     

苍术素调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1信号通路对白细胞介素 -1β诱导软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨苍术素(ATR)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1(AMPK/SIRT1)信号通路对白细胞介素 1β(IL-1β)诱导的乳鼠软骨细胞自噬与凋亡的影响。方法 2022年 1―8月从乳鼠中分离软骨细胞并鉴定;使用不同浓度苍术素(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)预处理软骨细胞,再使用 IL-1β诱导软骨细胞培养 24 h,噻唑蓝( MTT)法检测增殖活性,筛选最佳药物浓度;将软骨细胞分为对照组、 IL-1β组( 10 μg/L IL-1β)、苍术素组( 10 μg/L IL-1β+20μmol/L苍术素)、苍术素 +AMPK抑制剂组(苍术素 +compound C组, 10 μg/L IL-1β+20 μmol/L苍术素 +50 μmol/L compound C);流式细胞术与 TUNEL法检测软骨细胞凋亡,单丹磺酰尸胺( MDC)染色观察自噬小体;蛋白质印迹法检测自噬及 AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达。结果与对照组比较, IL-1β组软骨细胞增殖活性、自噬水平、微管相关蛋白轻链 3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)［( 0.47±0.08)比( 1.23±0.14)］、 Beclin-1［( 0.67±0.09)比( 1.45±0.19)］、自噬相关基因 -5(Atg5)［( 0.35±0.06)比( 1.14±0.13)］、磷酸化 AMPK(p-AMPK)［(0.37±0.05)比( 0.91±0.05)］、SIRT1［(0.51±0.06)比( 1.31±0.14)］磷酸化 Unc-51样自噬激活蛋白酶(p-ULK1)蛋白表达［(0.25±0.04)比(0.85±0.11)］降低,细胞凋亡率［(28.46±3.55)%比( 2.54±0.82)%］升高( P<0.05);与 IL-1β组比较,苍术素组细胞增殖活性、自噬水平、 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Atg5、p-AMPK、SIRT1、p-ULK1蛋白表达升高,细胞凋亡率降低( P<0.05); compound C可逆转苍术素对 IL-1β诱导的软骨细胞自噬激活作用。结论苍术素通过激活 AMPK/SIRT1信号通路促进 IL-1β诱导的大鼠软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡。     

蛇床子素通过PINK1/Parkin通路诱导HeLa细胞自噬

目的 探讨蛇床子素促进宫颈癌HeLa细胞发生自噬的潜在作用机制。方法 不同浓度蛇床子素(0、10、20、40、80、160、240、320 mg·L^-1)作用于HeLa细胞,MTT法检测蛇床子素对HeLa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察经蛇床子素干预的HeLa细胞形态;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)染色检测自噬水平;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot分析线粒体相关蛋白MFN1、DPR1表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;建立裸鼠宫颈癌体内移植瘤模型探讨蛇床子素对宫颈癌的抑制作用;Western blot检测PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平。结果 蛇床子素能明显抑制HeLa细胞增殖;通过透射电镜观察,经蛇床子素干预的HeLa细胞有典型的自噬小体形成;MDC染色荧光强度增强,细胞发生自噬;线粒体融合蛋白MFN1表达下调,分裂蛋白DRP1表达上调;JC-1显示线粒体膜电位下降;流式细胞术检测结果显示细胞内ROS水平升高,且能被自噬...     

PPARα促进自噬流抑制脑缺血后星形胶质细胞的过度激活

目的阐明过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)在脑缺血后星形胶质细胞活化中的作用及机制。方法大脑中动脉闭塞(MCAO)建立小鼠脑缺血损伤模型,缺氧缺糖再灌注(OGD/R)建立小鼠原代培养星形胶质细胞活化模型。应用PPARαnull小鼠及PPARα激动剂,观察PPARα功能缺失或者激活后对星形胶质细胞活化的影响。进一步通过观察自噬经典标记物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62表达变化,联合应用巴弗洛霉素或雷帕霉素观察自噬流的变化,应用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)检测自噬体和自噬溶酶体的变化,应用透射电子显微镜观察超微结构等方法,研究PPARα功能缺失或者激活后对星形胶质细胞自噬的影响。结果 PPARαnull小鼠或原代培养的PPARαnull星形胶质细胞在脑缺血损伤或OGD/R处理后,星形胶质细胞活化标记物GFAP,Neurocan等的表达较野生型对照组相比明显增加。脑缺血损伤或OGD/R处理后活化星形胶质细胞中存在自噬流障碍,自噬双标腺病毒检测及透射电子显微镜的结果均发现活化的星形胶质细胞中存在大量自噬小体的堆积,PPARαnull星形胶质细胞较野生对照组相比堆积更加明显,而PPARα激动剂可显著改善自噬流障碍,抑制星形胶质细胞的过度活化。结论 PPARα可促进脑缺血后星形胶质细胞的自噬流,抑制星形胶质细胞的过度活化。     

积雪草酸通过改变自噬作用促进胶质瘤细胞T98G凋亡的实验研究

目的研究积雪草酸对T98G细胞凋亡及自噬的影响。方法 MTT法分析积雪草酸对T98G细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞自噬;Western blot检测凋亡和自噬通路相关因子的表达。结果积雪草酸对T98G细胞增殖有抑制作用,IC50值为46.3μmol·L-1。Annexin-V/7-AAD双染和Western blot结果显示,积雪草酸可引起Akt表达下调、线粒体膜电位下降和Caspase-3激活,进而诱导T98G细胞凋亡。同时,AA可抑制T98G细胞自噬,表现为降低MDC荧光强度,抑制Beclin-1、LC3-Ⅱ、Atg表达。通过氯喹上调Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,积雪草酸抑制自噬作用被阻断,同时促凋亡作用也明显降低。结论积雪草酸可同时诱导T98G细胞凋亡和抑制自噬,并且抑制自噬作用能够促进细胞凋亡,进而抑制T98G细胞增殖。     

土槿皮乙酸对人肺癌A146细胞的自噬作用以及凋亡与自噬的关系

目的土槿皮乙酸是从松科植物金钱松的根皮或近根树皮中分离的二萜酸,具有抗肿瘤、抗生育等作用。本研究主要阐述了土槿皮乙酸能够诱导人肺癌细胞(A146)发生自噬从而抑制细胞生长的机制及在A146细胞中自噬与凋亡的关系。方法采用了形态学观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析法、MDC流式细胞术分析、MDC荧光染色法、乳酸脱氢酶LDH活力测试法、免疫沉淀法、蛋白质印迹法等方法考察了土槿皮乙酸通过自噬抑制A146细胞生长以及该细胞中自噬与凋亡的关系。结果研究发现,4μmol/L土槿皮乙酸作用A146细胞0、12、24、36、48 h后,细胞数目减少,MDC染色有荧光亮绿色颗粒出现,流式细胞仪分析显示土槿皮乙酸增加MDC阳性率。而且4μmol/L土槿皮乙酸作用后自噬相关蛋白Beclin 1的表达增高,LC3从Ⅰ型转化为Ⅱ型,说明土槿皮乙酸诱导A146细胞自噬,自噬在抑制A146细胞生长中起到了关键的作用。另外,加入自噬抑制剂3-MA与土槿皮乙酸联用之后,凋亡小体明显增加,凋亡率上升,自噬率下降,自噬相关蛋白Beclin 1和LC3表达降低,说明在A146细胞中,自噬是对抗凋亡的。结论土槿皮乙酸诱导A146细胞自噬,自噬在抑制A146细胞生长中起到了关键的作用。     

土槿乙酸诱导的卵巢癌细胞HO-8910自噬及其机制

目的探讨土槿乙酸诱导的人卵巢癌细胞系HO-8910细胞自噬蛋白的表达及PI3K/Akt信号转导通路的变化,以及自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)对自噬相关蛋白的影响。方法不同浓度的土槿乙酸作用HO-8910细胞,采用台盼蓝染色检测细胞的存活率,Western blot分析检测自噬相关蛋白及PI3K/Akt通路相关蛋白的变化,分别用3-MA和RAPA处理HO-8910细胞后检测自噬相关蛋白的变化。结果土槿乙酸能够诱导卵巢癌细胞HO-8910自噬,增加LC3-Ⅱ和自噬调节因子Beclin-1的表达;3-MA可以抑制土槿乙酸诱导的HO-8910细胞自噬相关蛋白的表达,而RAPA促进了土槿乙酸诱导的HO-8910细胞自噬相关蛋白的表达,且土槿乙酸能抑制PI3K/Akt通路蛋白的表达。结论土槿乙酸可通过抑制PI3K/Akt通路诱导HO-8910细胞自噬。     

A型流感病毒对肺巨噬细胞自噬的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素组、空白组,干预12 h后,分别用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检测细胞自噬情况;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达。结果麻杏石甘汤含药血清能不同程度抑制流感病毒诱导的细胞自噬标志蛋白LC3的膜聚集,抑制细胞内自噬小体和自噬溶酶体的增加,以及LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且呈现一定的量效关系。结论麻杏石甘汤可能通过抑制A型流感病毒诱导的细胞自噬,最终调控A型流感病毒的致病作用。     

下调 HER2 降低自噬活性抑制人肺癌细胞增殖 转移作用的体外研究

目的 探讨下调 HER2 表达是否抑制细胞自噬活性, 从而影响人肺癌细胞的增殖、 迁徙和侵袭。方法 采用浓度 5 μmol/L 自噬抑制剂 3-MA、 10 μmol/L HER2 抑制剂 Neratinib 分别作用人肺癌细胞 A549。Western blot 检测肺癌细胞 A549 中 HER2、 Beclin-1 及 LC3B （Ⅱ/Ⅰ） 蛋白表达水平; Wound healing 和 Transwell invasion 实验检测 细胞迁徙、 侵袭能力; 四甲基偶氮唑盐 （MTT） 检测细胞的增殖能力。结果 Neratinib 和自噬抑制剂 （3-MA） 作用 24 h 后, 细胞 HER2、 Beclin-1 及 LC3B（Ⅱ/Ⅰ）蛋白表达水平显著低于阴性对照组; Neratinib、 自噬抑制剂（3-MA）处理组 的细胞增殖、 迁徙和侵袭能力显著低于阴性对照细胞。结论 下调 HER2 能降低人肺癌细胞 A549 的自噬活性并抑 制其增殖、 迁徙和侵袭     

纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制

目的 探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷（gracillin）诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制。方法 以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测不同浓度（0.25、0.5、1、2、4μmol/L）gracillin作用不同时间（12、24、48 h）对细胞增殖的影响。与不加药物的对照组进行比较,采用生物透射电子显微镜观察gracillin(2μmol/L)作用24 h对细胞自噬小体形成的影响;通过GFP-LC3质粒转染实验检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测gracillin(0.25、0.5、1、2μmol/L)作用24 h后A549细胞中序列相似性家族102成员A(FAM102A)mRNA和蛋白的表达水平,以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)]和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（又名Akt）信号通路相关蛋白的表达水平。结果 gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用,且呈浓度...     

自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用

目的 研究自噬在人肝癌细胞Huh7对仑伐替尼耐药中的调节作用。方法 以人肝癌细胞Huh7为对象,采用低浓度逐渐递增联合长期给药的方式构建仑伐替尼耐药细胞模型Huh7-LR,以CCK-8实验和流式细胞术检测亲本细胞Huh7及耐药细胞Huh7-LR对仑伐替尼的敏感性,以Western blot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中自噬效应蛋白Beclin-1、自噬接头蛋白sequestosome 1（又名p62）、微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达水平和细胞自噬水平。通过饥饿诱导构建自噬激活细胞模型,以Western blot实验和GFP-mCherry-LC3质粒转染实验分别检测细胞中p62蛋白表达水平和细胞自噬水平,以流式细胞术检测自噬激活对仑伐替尼敏感性的影响。结果 与亲本细胞相比,Huh7-LR细胞的耐药指数为6.2,其p62蛋白的表达水平显著升高,凋亡率、Beclin-1蛋白的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著降低（P<0.05或P<0.01）,自噬水平有所下降。自噬激活可显著升高Huh7-LR细胞中p62蛋白的表达水平（P<0.0...     

芦荟大黄素对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

摘 要 目的：探讨芦荟大黄素（AE）对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53蛋白（p53）/磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。 方法: 实验分为对照组（AE 0 μmol·L-1）、AE低（10 μmol·L-1）、中（30 μmol·L-1）、高（50 μmol·L-1）剂量组和自噬阻断剂3 甲基腺嘌呤（3 MA）+ AE组（20 μmol·L-1+50 μmol·L-1）。CCK 8法检测各组细胞增殖抑制率,采用透射电镜及单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察各组细胞自噬体及自噬溶酶体的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法观察各组细胞凋亡率变化,Western blot法检测各组细胞p53、AMPK、mTOR信号通路蛋白及自噬标致蛋白Beclin 1蛋白（Beclin 1）、微管相关轻链蛋白Ⅰ（LC3Ⅰ）及微管相关轻链蛋白Ⅱ（LC3Ⅱ）表达情况。 结果: 与对照组相比,AE各剂量组及3 MA+AE组细胞的增殖抑制率、凋亡指数（AI）显著升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;AE中、高剂量组的增殖抑制率和AI与3 MA+AE组相比差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,AE各剂量组细胞自噬体、自噬空泡增多,溶酶体积分光密度（IOD）/所选区域面积（Area）值及p53、AMPK、Beclin 1表达显著升高,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性;3 MA+AE组细胞自噬体、自噬空包等超微结构减少,IOD/Area值及p53、AMPK及Beclin 1表达显著降低,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著升高（P<0.05）。 结论: AE可通过提高胃癌SGC-7901细胞自噬水平,诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与促进p53/AMPK/mTOR信号通路表达有关。