circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。 方法采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。 结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P＜0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P＜0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P＜0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P＜0.05)。 结论抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。     

miR-16-5p靶向PTEN/PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌细胞活性和迁移能力的影响

目的 探讨AS-miR-16-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞活性和迁移能力的影响及潜在的作用机制.方法 将NSCLC A549细胞分为3组,分别为Black组、miR-NC组和AS-miR-16-5p组.miR-NC组和AS-miR-16-5p组分别转染阴性对照miRNA(miR-NC)及AS-miR-1...     

miR-129-5p通过靶向SALL4抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的：探讨miR-129-5p在肝细胞癌（HCC）发展中的作用及其机制。方法：通过实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测miR-129-5p在正常血清及肝癌患者血清、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况。采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics转染至人肝癌细胞HCCLM3细胞,应用Western印迹检测人类婆罗双树样基因-4(SALL4)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)蛋白的表达。通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验和Transwell实验等检测在体外过表达miR-129-5p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。此外,通过生物信息学工具、数据库分析和荧光素酶报告基因检测实验,探索miR-129-5p在HCC中的靶点,并探讨靶点SALL4是否介导miR-129-5p对HCC细胞的作用。结果：与正常血清相比,肝癌患者血清miRNA-129-5p表达量显著降低（t=13.32,P<0.001）,与LO2相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B、HCCLM3、BEL-7402和QGY-7703的miR-129-5p表达量均显著降低（...     

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物 (miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p 明显降低野生型CYLD 的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论 miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

LncRNA XIST通过调控miR-186-5p促进非小细胞肺癌的增殖和侵袭实验研究

目的:探究LncRNA XIST通过调控miR-186-5p促进非小细胞肺癌增殖和侵袭的作用机制。方法:选用非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549、H1299、Calu-3及人支气管上皮细胞系BEAS-2B进行研究。采用RT-PCR检测NSCLC细胞系中LncRNA XIST表达情况。构建XIST siRNA转染敲降XIST表达,采用MTT法、Transwell实验及Western blot法验证其对NSCLC细胞增殖、侵袭及相关蛋白表达的影响。构建包含miR-186-5p结合位点的pmir GLO-XIST-Wt和pmir GLO-XIST-Mut基因片段报告载体,采用荧光素基因实验进行两者结合验证,并利用RIP实验及营救实验检测验证XIST和miR-186-5p靶向调控关系。结果:NSCLC细胞系A549、H1299、Calu-3中LncRNA XIST表达水平均显著高于人支气管上皮细胞系BEAS-2B(P<0.05)。敲降XIST表达后A549、H1299细胞中LncRNA XIST表达显著降低,miR-186-5p表达显著增高(P<0.05)。过表达miR-186...     

金银花多酚粗提物调控miR-100-5p参与非小细胞肺癌细胞NCI-H1299侵袭迁移

目的:探讨金银花多酚粗对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:将非小细胞肺癌NCI-H1299细胞分为NC组、紫杉醇组、金银花多酚粗提物低、中、高剂量组、miR-100-5p组、miR-NC组、anti-miR-100-5p+高剂量组、anti-miR-NC+高剂量组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-100-5p表达水平。结果:不同浓度金银花多酚粗提物处理后,NCI-H1299细胞活性降低,细胞迁移和侵袭数量减少,E-Cadherin、miR-100-5p表达水平升高,N-Cadherin、Vimentin表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-100-5p后,NCI-H1299细胞活性升高,细胞迁移[(226±20.03)个]和侵袭数量[(171±15.03)个]增加,E-Cadherin表达水平(0.34±0.03)降低,...     

miR-218-5p靶向EGLN3抑制肺腺癌增殖、迁移和侵袭

目的 微小RNA(microRNAs, miRNA)参与了多种癌症的发生发展,有研究证明微小RNA-218-5p(microRNA-218-5p, miR-218-5p)在癌症的发展中发挥着重要作用。然而,miR-218-5p影响肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)发展的具体机制尚未明确。方法 通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据分析肺腺癌组织中miR-218-5p的表达情况,实时荧光定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测miR-218-5p和EGLN3在人肺正常细胞系和人肺腺癌细胞系中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-218-5p对AKT/mTOR信号通路关键蛋白表达的影响以及细胞中EGLN3的蛋白表达。使用生物信息学方法预测并通过荧光素酶报告基因检测证实miR-218-5p与EGLN3的靶向关系。细胞活力和细胞毒性检测(cell counting kit-8, CCK-8)、细胞克隆形成、细胞...     

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的 探讨微小RNA-28 (miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法 通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b (RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果 与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1...     

lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白...     

miR-132调节非小细胞肺癌hedgehog信号通路受体基因PTCH1及细胞增殖、迁移和侵袭

 目的  研究miR-132在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系H1299中的作用及相应的靶基因。方法  real-time PCR检测7种细胞系中miR-132的表达量。用CCK-8检测稳定株细胞H1299-pEGP-miR-132与H1299-pEGP-miR-null 的生长速率的变化。使用稳定株细胞H1299检测miR 132对于细胞克隆形成、细胞迁移和细胞侵袭的影响。用Transwell结合matrigel的方法检测H1299-pEGP-miR-132细胞与H1299-pEGP-miR-null细胞在72 h时细胞迁移和侵袭的变化,同时在H1299-pEGP-miR-132细胞中使用anti-miR-132进行了相关的实验验证。运用生物信息学方法预测miR-132的靶基因,并运用双荧光实验、real-time PCR和Western blot验证。在H1299-pEGP-miR-132细胞中共同转染anti-miR-132和PTCH1 siRNA检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果   miR-132在肺癌细胞系中呈现高表达,在NSCLC细胞H1299中miR-132通过靶向调节PTCH1基因的表达发挥作用。H1299-pEGP-miR-132细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)、侵袭(P<0.05)能力明显高于对照组。在H1299-pEGP-miR-132细胞中转入PTCH1 siRNA后细胞增殖能力升高(P<0.05),迁移和侵袭能力降低(P<0.001)。H1299-pEGP-miR-132细胞15天形成的克隆数目是对照组细胞的1.41倍(P<0.05)。Western blot法检测显示miR-132使H1299中PTCH1蛋白表达量显著降低(0.68倍),anti-miR-132使PTCH1表达量显著升高(1.97倍)。结论  miR-132可能参与NSCLC的细胞增殖、迁移和侵袭。它的致癌性部分归因于对Hh信号通路关键的负调控蛋白PTCH1的调节。     

miR-145-5p通过调节PHB2基因发挥对非小细胞肺癌细胞A549增殖迁移的影响

目的:探讨miR-145-5p通过靶向调控PHB2基因抑制非小细胞肺癌细胞(NSCLC)的增殖和迁移的作用及机制.方法:使用RT-PCR法评估miR-145-5p在NSCLC组织和癌旁组织正常人支气管上皮细胞系(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞系(A549)中的表达;MTT及EDU测定miR-145-5p过表达后A5...     

血清外泌体miR-205-5p/miR-152-5p对早期非小细胞肺癌的诊断价值

目的 探索血清外泌体miR-205-5p/miR-152-5p联合相对表达量在早期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的水平及诊断价值。 方法 纳入TNM分期为0-II期的NSCLC患者(NSCLC组)83例(包括腺癌组55例和鳞癌组28例)和健康对照(对照组)50例,采集血清标本,提取并检测血清外泌体miR-205-5p/miR-152-5p联合相对表达量。比较NSCLC组和对照组的表达量,比较腺癌组、鳞癌组和对照组的表达量,使用多重线性回归分析表达量与性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、淋巴结转移的关联性,采用ROC曲线评价血清外泌体miR-205-5p/miR-152-5p联合相对表达量的诊断效能。 结果 对照组、NSCLC组、腺癌组、鳞癌组的miR-205-5p/miR-152-5p相对表达量分别为17.76±4.27、20.52±5.51、21.79±5.12、18.02±5.48;NSCLC组高于对照组(t=3.027,P=0.003),腺癌组、鳞癌组、对照组3组间比较差异有统计学意义(F=10.412,P<0.001),腺癌组高于鳞癌组(P=0.001)和对照组(P<0.001),鳞癌组与对照组间差异无统计学意义(P=0.823)。多元线性回归分析结果显示,淋巴结转移情况与相对表达量存在关联性(P=0.037)。对NSCLC的诊断效能评估,曲线下面积为0.671(95%CI:0.579~0.764),截断值为18.493,灵敏度为73.3%,特异度为64.0%。对肺腺癌的诊断效能评估,曲线下面积为0.738(95%CI:0.642~0.883),截断值为18.495,灵敏度为78.2%,特异度为64.0%。对肺鳞癌的诊断效能评估,曲线下面积为0.541(95%CI:0.399~0.684),无统计学意义。 结论 血清外泌体miR-205-5p/miR-152-5p联合相对表达量在早期NSCLC(主要为早期肺腺癌)患者中升高,对早期NSCLC诊断具有辅助价值。     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

miR-497-5p靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的实验研究

目的 探讨miR-497-5p对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响及其机制.方法 将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-NC组、miR-497-5p组、pLV-VEGFA组和miR-497-5p+VEGFA组,采用Real time PCR检测miR-497-5p和血管内皮生长...     

LncRNA LUCAT1通过调节miR-493-5p/RAC1轴对非小细胞肺癌细胞增殖凋亡和侵袭的影响

目的:阐明长链非编码RNA(lncRNA)肺癌相关转录物1(LUCAT1)对非小细胞肺癌(NSCLC)发挥作用的潜在机制。方法:RT-qPCR和Western blot检测基因和蛋白表达。双荧光素酶报告基因(DLRG)验证miR-493-5p与LUCAT1或RAC1之间的关系。通过CCK-8、集落形成、流式细胞术以及Transwell对细胞生物学行为进行评估。此外,通过肿瘤异种移植实验研究LUCAT1在NSCLC中的生物学功能。结果:LUCAT1和RAC1 mRNA在NSCLC组织和细胞系中表达上调,miR-493-5p表达下调(P<0.05);而且在NSCLC中观察到LUCAT1与miR-493-5p呈负相关,与RAC1 mRNA呈正相关,miR-493-5p与RAC1 mRNA呈负相关(P <0.05)。DLRG证实miR-493-5p与LUCAT1或RAC1之间存在相互作用关系(P <0.05)。沉默LUCAT1可显著上调miR-493-5p水平,下调RAC1水平(P <0.05)。此外,沉默LUCAT1可显著减弱细胞增殖活力,且侵袭能力也降低,促进细胞凋...     

miR-185-5p靶向AKR1C1抑制肺癌细胞的迁移和侵袭

目的 观察miR-185-5p对肺癌细胞迁移、侵袭的影响,分析酮还原酶1家族成员C1(AKR1C1)在miR-185-5p调控肺癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法 RT-qPCR检测miR-185-5p在组织样本(人肺癌及对应癌旁组织)、细胞系(人肺上皮细胞系BEAS-2B和肺癌细胞系A549、H460)中的表达。按照处理方式不同将A549细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-185-5p组(转染miR-185-5p)、miR-185-5p+pcDNA组(共转染miR-185-5p和pcDNA)、miR-185-5p+pcDNA-AKR1C1组(共转染miR-185-5p和pcDNA-AKR1C1);Transwell和划痕实验检测各组A549细胞迁移和侵袭;在线预测网站Starbase预测miR-185-5p的下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验检测A549细胞荧光素酶活性;蛋白免疫印迹实验检测各组A549细胞中AKR1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的蛋白表达。结果 与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-185-5p的表达显著降低(P<0.001);与BEA...     

miR-122-5p靶向FGFRL1通过PI3K/AKT信号通路抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨微小RNA-122-5p(miR-122-5p)对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能作用机制.方法:采用qRT-PCR和Western blotting检测HEB细胞及胶质瘤SHG44、U87细胞中miR-122-5p、成纤维细胞生长因子受体样1(FGFRL1)的表达;MTT、Transwell小室...