肝炎基因诊断芯片同时检测慢性乙型肝炎患者血清及肝组织HBV DNA的临床研究

目的　用肝炎基因诊断芯片同时检测乙型肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA ,并与雅培试剂、免疫组织化学和原位分子杂交法比较。方法　用点样仪将PCR扩增的HBCDNA探针点到特殊处理过的玻片上制成基因芯片 ,对 15例慢性乙型肝炎患者的血清及肝活检组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测HBVDNA、HBcAg、HBsAg、HBeAg .结果　 15例HBsAg、HBeAg阳性的乙型肝炎血清 ,基因芯片检测均阳性。 15例肝组织标本 ,免疫组化法阳性 15例 ,原位分子杂交阳性 14例 ,基因芯片检测阳性 14例。结论　肝炎基因诊断可同时检测乙型肝炎患者血清及肝组织中的HBVDNA。     

415例HBV感染的不同血清学指标组合的HBV—DNA的检测

目的 了解HBV感染的不同血清学指标组合的HBV－DNA阳性情况。方法 对415份血清同时行ELISA方法测定HBV－M及普通PCR法检测HBV－DNA。结果 HBsAg( )组HBV－DNA阳性率为77．8％（270，347），HBsAg(-)组HBV－DNA阳性率19．1％（13／68），二者差别显著（P＜0．001）。其中153例HBsAg( )HBeAg( )抗HBc( )血清，HBV－DNA全部阳性，阳性率为100％，HBsAg（ ）抗HBe( ）抗HBc( )组血清HBV－DNA阳性率为66．9％（79／118），HBsAg( )抗HBc( )组血清HBV－DNA阳性率为50％（38／76），抗HBs( )组为18％（9／50），9例抗HBs( )抗HBe（＋）抗HBc( )血清中2例HBV－DNA阳性，2例抗HBs( )抗HBc( ）血清中1例HBV－DNA阳性，4例单一抗HBc( )血清中1例HBV－DNA阳性。结论 单凭HBsAg或HBeAg是否阳性来判断肝脏中HBV复制及有无传染性是不够的，易造成部分慢性乙型病毒性肝炎的漏诊，对HBsAg阴性无论抗HBs是否阳性，只要有HBV感染后的任何血清学依据，都应进一步检测血清HBV－DNA作为诊断乙型肝炎的第二步筛选，有条件时肝活检加以证实。     

HBeAg阴性和阳性慢性乙型肝炎病人肝脏组织学变化

目的比较HBeAg阴性和阳性慢性乙型肝炎病人肝脏组织学变化情况。方法对266例行肝活检的慢性乙型肝炎病人行免疫组化检测肝组织HBsAg、HBcAg的变化;采用双抗体夹心酶联免疫法检测血清前S1蛋白、HBV—DNA、HBsAg等的变化。按肝组织炎症、纤维化程度分组,比较HBeAg阳性和阴性的分布,并比较肝组织中HBsAg、HBcAg在HBeAg阳性和阴性组的阳性率。结果HBeAg阳性和阴性组肝组织炎症程度分布比较差异有显著性（Uc=2．716,P〈0．01）。HBeAg阳性和阴性组肝组织纤维化程度分布比较差异无显著性（Uc=1．493,P〉0．05）。HBeAg阳性组血清前S。蛋白、HBV—DNA及肝组织中的HBsAg、HBcAg的阳性率明显高于HBeAg阴性组,差异有极显著性（χ^2=8．47～41．29,P〈0．01）。结论HBeAg阳性组肝组织炎症程度高于阴性组。HBeAg阳性组血清前s。蛋白、HBV—DNA及肝组织中的HBsAg、HBcAg等病毒复制指标的阳性率明显高于HBeAg阴性组。     

原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的临床价值

目的：探讨原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的可靠性。方法：将肾活检确诊为乙肝病毒相关性肾炎患者59例与血清单纯HBsAb阳性且肾组织未查到HBsAg病人152例的肾组织PCR检查结果，按照诊断试验的研究方法进行比较。结果：PCR检测肾组织HBV DNA的假阳性率53．29％，假阴性率49．15％，诊断符合率47．87％。结论：原位PCR检测肾组织中HBV DNA有较高的假阳性率和假阴性率，结果不可靠。     

乙肝免疫标志物与HBV DNA的相关性及联合检测的临床价值

目的探讨乙型肝炎五项免疫学标志（HBV-M）与HBV DNA的相关性及联合检测的临床价值。方法采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）技术,分别对收集的373例乙肝患者血清HBV DNA含量和HBV-M进行检测。结果373例血清中HBsAg阳性292例;其中HBV DNA阳性207例,阳性率70.9%;207例HBV DNA阳性血清中,检出HBeAg134例,阳性率64.7%;组中HBV DNA阳性率98.2%,以Ⅰ、Ⅱ组HBV DNA值显著高于其他组;Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组中,HBsAg阴性患者血清中仍有部分患者可检出HBV DNA。组仅HBcAb阳性的27例患者中,检出HBV DNA阳性2例。结论血清HBV DNA与HBsAg、HBeAg有良好的相关性,两者联合检测,可有效提高乙型肝炎的检出率。     

血清中HBV DNA与HBsAg、HBeAg关系的评价

目的：探讨血清中HBsAg、HBeAg与HBV DNA的关系,为乙型肝炎的诊治提供科学依据。方法对927例患者的HBsAg、HBeAg和HBV DNA间的关系进行了回顾性分析。结果927例血清标本中,HBsAg和HBeAg均阳性组中HBV DNA阳性率为最高,为70.44%。不同浓度HBV DNA组与HBV DNA阴性组比较,阴性组的HBeAg阳性率明显低于其他各组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论在检测HBsAg和HBeAg定量的同时联合检测HBV DNA,有助于更准确判断病毒复制情况,进行疗效监测,优化治疗方案。     

定量检测乙型肝炎HBeAg与HBV—DNA的临床意义

目的：探讨乙型肝炎患者血清中HBeAg定量结果与乙型肝炎病毒核酸（HBVDNA）的检测结果在临床上的意义。方法：本院住院及门诊HBV感染患者248例,抽取静脉血,采用1235全自动时间分辨荧光免疫分析仪和PE5700全自动荧光PCR仪对这248例标本分别进行检测。结果：乙型肝炎患者定量测定e抗原（HBeAg）阳性者其HBV—DNA阳性率远大于HBeAg阴性者（P〈0.05）;HBsAg及HBeAg2项阳性模式HBeAg定量结果显著大于HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性模式（P〈0.05）,其HBV—DNA波动范围也大于H＆Ag、HBeAg、HBcAb阳性模式。结论：HBeAg定量结果能较好地反映乙型肝炎患者体内HBV—DNA的含量,并对患者病情进展和诊治有一定应用价值。     

乙型肝炎病毒血清学标志物与乙肝DNA相关性探讨

目的探讨乙肝病毒DNA（HBV—DNA）病毒载量与各型乙型肝炎血清标志物之间的关系。方法运用酶联免疫吸附测定法、荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术对350例各型乙型肝炎患者进行HBV—DNA含量及血清学标志物检测（两对半）。结果血清学检测乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）＋乙肝病毒核心抗体（抗HBc）阳性（大三阳）患者HBV—DNA阳性率明显高于其他类型（阳性率95．7％），且其病毒载量显著高于其他组。HBsAg＋乙肝病毒e抗体（HBeAb）＋抗HBc阳性（小三阳）阳性检出率也较高（阳性率54．0％）其病毒载量高于其他组。结论HBV—DNA与HBeAg的存在明显正相关。在临床工作中，不仅要应用乙肝血清标志物来判断HBV是否在体内复制，更要结合PCR检测技术来测定HBV—DNA含量。     

乙型肝炎病毒标志物及其DNA相关性及联合检测临床价值

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）血清免疫标志物（HBV M）和HBV DNA含量的相关性及两种指标联合检测的临床应用。方法酶联免疫吸附试验检测HBV M;荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HBV DNA含量。结果乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性的标本HBV DNA阳性率高,分别为：Ⅰ组[HBsAg、HBeAg和乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）阳性],HBV DNA阳性率98.9%（181/183）;Ⅳ组（HBsAg和HBeAg阳性）,HBV DNA阳性率96.3%（26/27）;Ⅶ组[HBsAg、HBeAg、乙型肝炎e抗体（抗-HBe）和抗-HBc阳性],HBV DNA阳性率100.0%（2/2）;HBsAg阳性、HBeAg阴性,HBV DNA阳性率也较高,为Ⅱ组（HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性）60.4%（58/96）;Ⅲ组（HBsAg、抗-HBc阳性）50%（10/20）;HBeAg、HBsAg阴性有一定的HBVDNA阳性率,但阳性率低,分别为：Ⅴ组（抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性）13.3%（2/15）;Ⅵ组（抗-HBs、抗-HBc阳性）8.3%（1/12）;Ⅷ组（抗-HBs阳性）0（0/26）;Ⅸ组（HBV M全阴性）6.7%（1/15）。结论血清HBV DNA水平与HBV M表现模式有关,与HBsAg,HBeAg有良好的相关性,而HBV M阴性的患者也可能有HBV DNA阳性,因此HBV M和HBV DNA联合检测,可有效提高乙型肝炎的检出率,为临床提供HBV感染、复制及传染性判断以及指导治疗的实验室依据。     

乙型肝炎肝组织中乙型肝炎表面抗原、核心抗原的表达与血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量及肝脏炎症的相关性研究

乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）的定量与肝脏炎症无明显的关系，肝组织内乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和核心抗原（HBcAg）的定量与肝脏的炎症有明显的关系，但血清HBV DNA与肝脏内HBsAg和HBcAg的表达之间的关系国内外学者意见不统一。我们应用聚合酶链反应（PCR）技术及免疫组织化学技术对51例乙型肝炎患者进行检测，以了解乙型肝炎患者血清HBV DNA的定量及肝脏炎症与肝组织HBsAg和HBcAg的表达的关系。     

芯片显色法检测HBV基因多态性临床应用

目的用芯片显色法检测HBVDNA在前C／C区、BCP区、P区基因突变来探讨拉米夫丁使用与HBV基因多态性关系。方法用含有HBV DNA前C区1896、1814和BCP区1762、1764以及P区552位点突变信息的探针芯片与HBV DNA杂交，采用显色方法判断结果，检测184例乙型肝炎患者HBV基因多态性．并将拉米夫丁治疗组和非拉米夫丁治疗组HBV基因多态性进行比较。结果184例乙肝患者中。前C区1896、1814和BCP区1762、1764以及P区552位点的突变率分别为28．8％、22．2％、25．5％、29．8％和7．0％：拉米夫丁治疗组和非拉米夫丁治疗组P区552位突变率分别为44．4％和8．7％。结论乙肝患者HBV DNA前C区和BCP区的突变与肝炎慢性化、肝硬化以及HBeAg表达有关；拉米夫丁的使用在HBV DNA P区基因突变中起重要作用。     

肝组织HBV cccDNA与HBV复制水平的相关性分析

目的 探讨乙肝患者肝组织中乙型肝炎病毒（HBV ） cccDNA与血清 HBV DNA及乙肝病毒e抗原（HBeAg）含量的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测乙肝患者肝组织 HBV cccDNA和血清HBV DNA ,采用化学发光法检测其血清中 HBeAg。结果 肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（ r ＝0．806,P ＜0．01）,与血清 HBeAg定量值无相关关系（ r ＝0．219,P ＞0．05）。结论 血清HBeAg阳性组病毒复制较阴性组活跃,HBV DNA阴性不能完全反映肝组织内 HBV是否存在复制,而检测肝组织HBV cccDNA可精确反映肝内 HBV复制情况。     

慢性乙型肝炎患者肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的定量检测

目的 探讨肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV CccDNA)水平与病毒复制、肝组织损伤的关系.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测46例慢性乙型肝炎患者肝组织HBV CccDNA水平,同时检测肝组织和血清中HBV DNA、肝细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎核心抗原(HBcAg)表达及肝功能.结果 将肝组织中HBVCccDNA定量水平分为低(＜104copies/mg)、中(104～106copies/mg)、高(＞106 copies/mg)3组,3组中HBsAg阳性表达差异无统计学意义,但105～106copies/mg和＞107copies/mg组HBcAg阳性表达高于＜104 copies/mg组,分别为105～106copies/mg组HBcAg表达14例(63.6%)和＞107copies/mg组7例(77.8%)vs＜104copies/mg组2例(13.3%)(P＜0.01);HBeAg阳性组肝组织中HBV CccDNA和肝组织总HBV DNA均显著高于HBeAg阴性组,分别为肝组织中HBV CccDNAHBeAg阳性组(8.72±1.94)log10 copies/mg vs HBeAg阴性组(6.54±1.56)log10 copies/mg;肝组织中HBV DNAHBeAg阳性组(7.45±1.82)1og10 copies/mg vs HBeAg阴性组(5.27±1.48)log10 copies/mg(均P＜0.01);肝组织中HBV CccDNA与肝组织总HBV DNA、血清HBV DNA呈正相关(均P＜0.05);而与肝组织炎症程度、肝纤维化程度、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)无相关性.结论 肝组织中HBV CccDNA定量能准确反映病毒复制水平,但不能将其视为肝组织损伤的标志.     

State of hepatitis B virus DNA in peripheral blood mononuclear cells from persistently infected individuals: correlation with e antigen and viral DNA in the serum as well as with the activity of liver disease

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were harvested from 76 asymptomatic carriers of hepatitis B virus (HBV) and 100 patients with type B chronic liver disease. DNA was extracted from cells and tested for the binding with radiolabeled HBV DNA probe by Southern blot hybridization technique. Among 34 asymptomatic carriers who had hepatitis B e antigen (HBeAg) and HBV DNA in the serum, HBV DNA was detected in 29 (85%) PBMC. In remarkable contrast, of the remaining 42 carriers seronegative for HBeAg, only 1 (2%) had HBV DNA in the serum, and none exhibited HBV DNA in PBMC. Among 32 patients seropositive for HBeAg, HBV DNA was detected in 28 (88%) sera, and in 24 (75%) PBMC. Of 68 patients seronegative for HBeAg, HBV DNA was found in 10 (15%) sera, and in 7 (10%) PBMC. Among 62 cases with HBV DNA in PBMC, only 1 had it integrated into the host's DNA. The remaining 61 had free HBV DNA in PBMC. Only 8 of them possessed replicative intermediate forms of HBV DNA, with molecular sizes less than 2.0 kilobases as observed in liver infected with HBV, and they all were patients with chronic active hepatitis. HBV DNA was not detectable in PBMC from 172 controls comprising 44 healthy individuals and 128 patients with non-A, non-B hepatitis. Based on these results, the state of HBV DNA in PBMC reflects the phase of HBV infection with HBeAg in the serum, and a high activity of hepatitis accompanied by active HBV replication.     

基因芯片在检测慢性乙型肝炎前C区、C启动子区和P区基因变异中的临床应用研究

目的应用基因芯片检测慢性乙肝患者HBV变异类型及其与乙肝标志物和HBVDNA载量的关系，为合理指导临床对慢性乙肝患者进行抗病毒治疗提供科学依据。方法149倒慢性乙肝患者采用酶联免疫法检测乙肝标志物，采用荧光定量PcR法检测RBVDNA载量，采用基因芯片法检测HBV变异。结果在libV感染的不同模式中，HBV—DNA阳性共检出128例。检出阳性率85．90％（128／149），其中大三阳98．82％（84／85）、小三阳75．75％（28／33）、表面抗原与核心抗体阳性51．61％（16／31）。在三组中前c区突变率分别为14．12％、27．27％和33．33％，1组与2、3组比差别有显著性意义（P〈0．01）；BCP区突变率分剐为47．06％、48．48％和58．06％，1组与3组比剐差别有显著性意义（P〈0．05）；P区突变率分别为82．35％、30．30％和51．61％。1组与其他两组比较差别有显著性意义（P〈0．01）；HBVDNA载量≥106组前C区、BCP区和P区突变率分别为48．68％、58．67％和81．33％。与HBV DNA载量104组比，差别均有显著性意义（P〈0．01）。前C区和P区突变率与HBVDNA载量105组比差别有显著性意义（P〈0．05）。结论基因芯片检测HBV基因变异方法简便，特异性高，变异模式判读直观，结果可靠。在治疗前和治疗过程中检测YMDD变异情况。对指导争调整抗病毒治疗的方案有重要的临床应用价值。     

原发性肝癌组织HBVDNA存在状态及HBsAg,HBcAg表达的检测

本文采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术检测原发性肝癌（ＰＨＣ）组织ＨＢＶＤＮＡ存在状态，同时应用免疫组化染色检测ＰＨＣ组织内ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ表达，并比较ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ在ＰＨＣ组织与癌旁肝组织的定位分布。结果显示：整合型ＨＢＶＤＮＡ在３２例ＰＨＣ组织检出率７１．９％（２３／３２），癌旁组织检出率４０．７％（１１／２７）；ＰＨＣ组织内检出ＨＢＳＡｇ阳性细胞１２例（３７．５％）未检出ＨＢＣＡｇ；癌组织检出ＨＢｓＡｇ２６例（９６．３％），ＨＢｃＡ９５例（１８．５％）。结果提示：ＨＢＶ感染与ＰＨＣ发生密切相关，ＨＢＶ可能通过整合于宿主细胞染色体对ＰＨＣ发生起一定作用。     

乙型肝炎四项指标消长分析及其相互关系研究

目的 探讨HBV DNA与乙型肝炎聚合人血清白蛋白受体（PHSA－Re）、核心抗原（HBcAg）、e抗原（HBeAg）的相互关系。方法 采用荧光定量PCR法检测HBV－DNA，对其中浓度不同阳性102例和阴性36例进一步检测PHSA－Re,HBcAg和HBeAg。结果 102例HBV DNA阳性中PHSA－Re、HBcAg、HBeAg的阳性率分别占86.27%、82.35%、72.55%。36例HBV DNA阴性中PHSA－Re、HBcAg、HBeAg的阳性率分别占38.89%、80.56%、11.11%。PHSA－Re浓度与HBV DNA含量呈正相关递增。结论 HBV DNA阴性患者HBV复制和感染仍有并存，四项指标联合检测更能客观反映HBV复制与感染程度。     

Serum HBV-DNA (hepatitis B virus DNA) in acute and chronic hepatitis B infection

HBV DNA was measured in the sera of 69 patients with hepatitis B virus infections. Sixteen patients had acute hepatitis B, 24 had chronic active hepatitis (CAH), 6 had chronic persistent hepatitis (CPH), 5 had cirrhosis without CAH and 18 were asymptomatic HBsAg carriers. In patients with acute hepatitis B who recovered, HBV DNA was present in the serum transiently early in the illness. HBV DNA persisted in the serum in the two patients who developed chronic hepatitis. Sera of 23 of 24 patients with CAH were persistently positive for HBV DNA. There was no relationship between the quantity of HBV DNA in the serum and the histological intensity of activity. Thirteen of the 24 patients with CAH had histological evidence of cirrhosis in addition to CAH and HBV DNA was detected in the sera of all 13. The sera of 2 of 6 patients with CPH were positive for HBV DNA. In one it was positive only where there was clinical evidence of reactivation of HBV infection. The other patient subsequently developed CAH. Sera of 5 patients with established HBsAg positive cirrhosis but without evidence of CAH were negative for HBV DNA. Two of these patients had hepatocellular carcinoma. Sera of 18 asymptomatic anti-HBe positive carriers with normal ALT were negative for HBV DNA. HBeAg and HBV DNA were not always found in the serum together. In acute hepatitis 5 patients with HBV DNA in the serum were HBeAg positive, but in 6 patients the sera were HBeAg positive inthe absenceof HBV DNA.     

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA定量检测的临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）的临床意义。方法选取经肝组织病理学诊断的慢性乙型肝炎患者57例,其中乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性37例,HBeAg阴性20例;肝组织炎症轻度33例,肝组织炎症中度24例。采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）同时定量检测其血清HBVDNA和cccDNA。结果HBeAg阳性组血清HBV cccDNA对数值和阳性率分别高于阴性组,8.1±1.3vs6.5±1.9,73.0%vs30.0%（均P〈0.01）。肝组织炎症轻度组（G1～G2）血清HBVcccDNA对数值低于中度组（G3）,7.1±0.4vs8.5±0.4（P〈0.01）。血清cccDNA与丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶呈正相关（r=0.612、0.632,均P〈0.05）。结论血清HBVcccDNA为病毒复制的标志物,与肝组织细胞损伤相关。