分子佐剂C3d3增强hCGβ3蛋白疫苗的体液免疫效应

目的：通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法：采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ，在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB／c与C57BL／6小鼠进行免疫，共免疫两次，间隔4周，ELISA测定血清中的抗体滴度，比较各组的免疫效果。结果：无论是BALB／c小鼠还是C57BL／6小鼠，hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALB／c小鼠，初次和再次免疫结果显示，C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL／6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB／c小鼠，但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论：通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性，在个性差异很大的不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

真核细胞表达质粒pCMV4增强hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力

目的：比较以pCMV4和pcDNA3为载体的hCGβ-C3d3DNA疫苗的表达效率和免疫效力。方法：分别构建pcDNA3-hCGβ-C3d3、pCaMV4-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒，并转染真核细胞瞬时表达系统COS-7细胞，以分析体外表达效率。抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3-hCGβ-C3d3、pCMV4-hCGβ-C3d3质粒。对6周龄BLAB／C小鼠行DNA免疫。于末次免疫后6周采血，用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。结果：对COS-7体外表达效率分析，由pCMV4介导的hCGβ-C3d3表达效率明显高于pcDNA3。动物DNA免疫结果，pCMV4-hCGβ-C3d3刺激动物机体产生的免疫应答强度及免疫效果显著高于pcDNA3-hCGβ-C3d3。结论：pCMV4真核表达质粒hCGβ-C3d3体外表达效率及动物DNA免疫效力均显著高于pcDNA3真核表达质粒。     

hCGβ-03d3基因免疫BALB／c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hcGβ-C3d3和pCMV4-hOGβ免疫BALB／c小鼠，免疫剂量为50pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周，MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖；ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hcGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周，hCGβ-C3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组；而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hcGβ-C3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

hCGβ-C3d3基因免疫BALB/c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hCG-βC3d3和pCMV4-hCGβ免疫BALB/c小鼠,免疫剂量为50 pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周,MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖;ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hCGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周,hCG-βC3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组;而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hCG-βC3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。     

分子佐剂C3d增强hCGβ基因免疫体液免疫效应

目的：该实验室前期工作已成功构建真核表达质粒pcDNA3-hCGβ、pcDNA3-hCGβ-C3d3且证明其能在真核表达系统中有效表达。通过动物DNA免疫，以期证实分子佐剂C3d增强免疫避孕疫苗免疫原性。方法：抽提与纯化pcDNA3、pcDNA3-hCGβ、pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒，进行动物DNA免疫。免疫剂量分别为5、10、20pmol，共免疫2次，每次间隔3周。末次免疫后6周采血，用间接ELISA分析实验动物外周血抗hCGβ抗体效价。结果：C3d分子佐剂能明显提高抗hCGβ抗体滴度；且其作用呈剂量依赖性。结论：分子佐剂确实能增强hCGβ免疫原性；此结果将有助于免疫避孕疫苗的技术进步及实际应用。     

C3d3-hCGβ融合蛋白免疫BALB/c小鼠增强抗hCG-β TH2型体液免疫效应

目的 通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性并实现免疫效应向TH2型体液免疫偏倚。方法 在CHO细胞中表达、纯化hCGβ、C3d3和hCGβ-C3d3融合蛋白。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、单用hCGβ、hCGβ联合C3d3和hCGβ加用弗氏完全佐剂免疫BALB／c小鼠，共免疫2次，间隔4周。ELISA测定血清中抗hCGβ抗体滴度。末次免疫后3周处死小鼠制备单个脾细胞悬液，体外用hCG刺激培养48h，ELISA检测上清中TH1型(IFN-γ、IL-2)和TH2型(IL-Ⅱ，4、IL-10)细胞因子分泌水平。结果 C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍，C3d3的佐剂能力是弗氏完全佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫)。借助C3d3分子佐剂，hCGβ-C3d3融合蛋白可产生很明显的TH2型体液免疫优势效应。结论 分子佐剂C3d3可以大幅增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性，使免疫效应向TH2型体液免疫偏倚。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗的体液免疫效应

目的:通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法:采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV16HishCGβC3d3和phCMV16HishCGβ,在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβC3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALBc与C57BL6小鼠进行免疫,共免疫两次,间隔4周,ELISA测定血清中的抗体滴度,比较各组的免疫效果。结果:无论是BALBc小鼠还是C57BL6小鼠,hCGβC3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALBc小鼠,初次和再次免疫结果显示,C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALBc小鼠,但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论:通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性,在个性差异很大的不同品系小鼠,C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

重组乳酸杆菌Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔免疫BALB/c小鼠的抗生育潜能

目的:探讨表达hCGβ-C3d3融合蛋白的重组乳酸杆菌避孕疫苗经鼻腔黏膜接种BALB/c小鼠及其抗生育潜能。方法:用野生型乳酸杆菌Lb.及重组乳酸杆菌Lb.hCGβ和Lb.hCGβ-C3d3以两种剂量(109个和1010个)经鼻腔滴注接种6~8周龄雌性BALB/c小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。于初次免疫后的第6、7、8周收集血清,分别培养MLTC-1、BeWo细胞;化学发光法检测培养上清中孕酮或hCGβ水平;免疫荧光观察抗血清处理后BeWo细胞的融合情况。结果:用1010个Lb.hCGβ-C3d3滴鼻免疫BALB/c小鼠产生的抗血清能显著抑制hCG刺激MLTC-1分泌孕酮,明显抑制BeWo细胞分泌hCGβ及细胞融合。结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.hCGβ-C3d3经鼻腔接种诱导的hCGβ抗体可拮抗hCGβ生物学功能,并干扰滋养细胞功能,因此具有抗生育潜能。     

hCGβ与鼠补体片段C3d的连接及其在真核细胞中的表达

目的:构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用pcr方法在hCGβ cDNA3’端引入BamHI位点,然后利用酶切位点的互补性,与C3d3　cDNA连接,构建了pBS-hCGβ-C3d3质粒,最后插入真核细胞表达质粒pcDNA3的CMV启动子下游,以产生pcDNA3-hCGβ-C3d3。将此融合质粒转染瞬时表达系统 COS-7细胞表达相应产物。其无血清培养上清液用免疫亲和层析法纯化重组蛋白。Raji细胞免疫细胞化学技术鉴定表达产物准确性。结果:真核细胞瞬时表达系统 COS-7细胞经转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒后,可分泌hCGβ重组蛋白。1.0×105个 COS-7细胞转染了pcDNA3-hCGβ-C3d3质粒,经72h培养后,可产生152ng的hCGβ重组蛋白,且表达量随时间延长而增高。在有血清培养基中的分泌量明显高于无血清培养基。同时,用Raji细胞免疫细胞化学分析表达产物显示,纯化的表达产物既有C3d结合受体活性,亦有hCGβ抗原性。结论:利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接,构建了pc-DNA3-hCGβ-C3d3真核细胞表达质粒,为提高hCGDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。     

CCR9/CCL25介导小鼠经生殖道hCGβ避孕疫苗粘膜免疫后B细胞归巢

目的：探讨hCGβ粘膜避孕疫苗体液免疫的分子机制。方法：分别用1010个重组乳酸杆菌Lb.pIlac、Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜途径免疫6～8周龄BALB/c小鼠,3周后相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测加强免疫后2周阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度;ELISPOT检测分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞数;RT-PCR筛查小鼠子宫B细胞上18种趋化因子受体和相关趋化因子CCL25;FCM和ELISA分析CCR9/CCL25的表达。结果：经小鼠生殖道粘膜接种1010Lb.pIlac-hCGβ可在生殖道局部诱导产生抗hCGβIgG和IgA抗体,且以IgG抗体为主;局部存在抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞,而以IgG抗体分泌细胞为主;粘膜免疫后,小鼠生殖道局部B细胞上CCR9表达增高,粘膜局部相应配体CCL25表达亦增高。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜免疫可诱导有效的免疫应答;粘膜局部CCR9/CCL25可介导B细胞归巢至生殖道局部,这可能增强hCGβ粘膜避孕疫苗的避孕效果。     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经口接种小鼠产生抗hCGβ体液免疫应答

目的：用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经口接种不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答。方法：用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb．hCGβ灌服6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液抗hCGβIsG和IgA抗体滴度。流式细胞仪分析B和T细胞的增殖情况，ELISpot计数抗hCGβIsG和IsA抗体分泌细胞克隆数。结果：不同品系小鼠经口腔接种10^9、10^10Lb．hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10。诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10Lb．hCGβ诱导的抗血清结合hCGβ抗原的能力〉100ng／n11。Lb．hCGβ口腔接种后，BALB／c小鼠子宫和阴道的B细胞增殖；C57BL／6小鼠子宫及阴道的抗体分泌细胞克隆数较脾脏明显增多（P〈0．05）。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb．hCGβ可经口接种诱导有效的抗hCGβ免疫应答，产生的应答强度与免疫剂量呈正相关。     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经阴道免疫小鼠后的体液免疫应答

目的 用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经阴道黏膜途径免疫不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答及机制。方法 用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb hCGβ经阴道黏膜免疫6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫一次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液中抗hCGβ IgG和IgA抗体滴度。分离免疫小鼠脾、子宫、阴道黏膜的淋巴细胞，流式细胞仪分析其中B和T细胞的增殖情况，ELISPOT分析分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞的克隆数。结果 对不同品系小鼠黏膜接种10^9、10^10 Lb hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10^8诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10 Lb hCGβ诱导的抗血清中和hC邰抗原的能力〉100ng／ml。LbhCGβ阴道黏膜免疫后T和B细胞增殖；脾脏、子宫及阴道内均存在抗hCGβIgG及IgA抗体分泌细胞。结论 重组乳酸杆菌活疫苗LbhCGβ可经阴道黏膜免疫诱导有效的免疫应答，产生的应答与免疫剂量呈正相关。黏膜局部及全身T和B细胞克隆增殖；子宫及阴道内抗hCGβIgG和IgA分泌细胞可能是Lb hCGβ阴道黏膜免疫诱导体液免疫的主要来源。     

hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化

目的：构建带有6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒，在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达。方法：利用高效真核表达载体phCMV1，构建phCMV1-6His-hCGβ和phCMV1-6His-hCGβ-C3d3，脂质体法转染CHO细胞，G418(800μg/ml)筛选抗性克隆。放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量，Western blotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ-C3d3融合蛋白。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。结果：酶切及测序结果显示，phCMV1-6His-hCGβ及phCMV1-6His-hCGβ-C3d3构建正确。在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白的高效表达，phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的1．6倍。表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白。结论：hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ-C3d3融合蛋白免疫动物的体液免疫效应和抗生育效果奠定了基础。     

C3d对基因免疫诱导的HBV特异性体液免疫应答的调节作用

观察补体C3d对HBV基因免疫诱导的特异性体液免疫应答的调节作用 ,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径。将HBV preS2 /S编码基因分别插入真核表达载体TR4 2 1和含有 3拷贝C3d编码基因的TR4 2 1 C3d3质粒 ,构建重组质粒TR4 2 1 preS2 /S和TR4 2 1 preS2 /S C3d3。采用肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫 (10 0 μg/ 10 0 μl/只小鼠 ) ,以空质粒为对照 ,定期采集血清。ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗 HBs IgG及其亚型 ,并采用NaSCN竞争ELISA法检测其亲合力。结果表明 ,TR4 2 1 preS2 /S C3d3重组质粒免疫组诱导的特异性抗 HBs IgG水平明显高于TR4 2 1 preS2 /S重组质粒免疫组 (P <0 0 5 ) ;而且TR4 2 1 preS2 /S C3d3重组质粒免疫组诱导的抗 HBs IgG抗体的亲合力 (ED50 :1 375 )显著高于TR4 2 1 preS2 /S重组质粒组 (ED50 :0 875 ) ,但C3d并不改变基因免疫诱导的特异性抗HBs IgG各亚型水平的格局 ,仍以IgG2b和IgG2a为主。提示C3d可增强基因免疫诱导的HBV特异性体液免疫应答 ,并促进特异性抗体亲和力的成熟 ,这为提高HBV基因疫苗的免疫效果提供了新的途径。     

hCGβ-C3d融合蛋白在CHO细胞中的表达

为了提高hCGβ的免疫原性 ,构建含新型分子佐剂C3d的hCGβ真核细胞表达质粒pcDNA3 hCGβ C3d3,使其转染稳定表达系统中国仓鼠卵细胞 (CHO )后 ,检测融合蛋白分泌情况。CHO细胞转染了pcDNA3 hCGβ C3d3质粒后 ,经 4 8h培养 ,1 0× 10 6个CHO细胞可分泌 6 6 0ng的重组融合hCGβ C3d3蛋白。细胞免疫化学技术分析显示 ,表达产物既有hCGβ的组分也有C3d的成分。经SDS PAGE及免疫印迹试验发现CHO细胞培养上清液中含有三组蛋白成分 ,其相对分子质量分别为12 0 0 0 0、90 0 0 0和 6 5 0 0 0。利用新型分子佐剂C3d与hCGβ的连接 ,构建了pcDNA3 hCGβ C3d3真核细胞表达质粒 ,为提高hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础     

C3d-P28对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用

目的：观察补体C3d-P28对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用，为增强基因免疫效果寻求新方法。方法：将质粒pVAON33-S2／S质粒(仅含HBV-preS2／S编码基因)和pVAON33-S2／S-P28．4质粒(含HBV-prS2/S和4拷贝C3d-P28的编码基因)以肌肉注射法对BALB／C小鼠实施基因免疫(100μg/100μl只)，并以空载质粒为对照。定期采集免疫小鼠血清、ELISA法检测其中特异性抗HBs-IgG及其亚型的水平；免疫小鼠脾细胞经特异性抗原(HBsAg)刺激后，采用，H-TdR掺入法、半定量RT-PCR法、同位素释放法分别检测其特异性淋巴细胞增殖活性、IL-4和IFN-γ基因表达的水平、CTL杀伤活性。结果：pVAON33-S2／S-P28．4质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性、抗HBs-IgG水平以及特异性CTL杀伤活性均明显高于pVAON33-S2／S质粒；C3d-P28未改变基因免疫诱导的抗HBs-IgG各亚型水平的格局，同时增强IgG1、IgG2a、IgG2b的水平；pVAON33-S2／S-P28．4质粒诱导的IL-4和IFN-γ的基因表达水平均明显高于pVAON33-S2／S质粒。结论：C3d-P28可在提高体液免疫应答的同时增强基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答。     

全反式维甲酸对基因免疫应答的调节作用

目的　研究全反式维甲酸 (ATRA)对TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用。方法　肌肉注射重组质粒TR4 2 1 hCGβDNA(每只鼠 5 0 μg 10 0 μl)初次免疫小鼠 ,以灌胃的方式给予ATRA ,并以灌溶剂和TR4 2 1质粒免疫为对照 ;3周与 6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠 ,采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察 ,分析小鼠血清中IgG抗体亚类 ;3H TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结果　ELISA结果表明 ,TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平 ,ATRA增强TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a IgG1显著性降低 ;TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性 ,ATRA抑制TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结论　ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答 ,抑制TH1型免疫应答 ,为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径。     

pVR-IL15基因佐剂对表达HBsAg重组病毒免疫效果的影响CSCD

目的 探索pVR-IL15基因佐剂在表达HBsAg病毒治疗型疫苗的不同免疫策略中对免疫应答的影响.方法 采用了携带乙肝病毒S基因片段的DNA、重组Ankara痘病毒和重组腺病毒序贯免疫策略免疫BALB/c小鼠,在序贯免疫策略的基础上联合pVR-IL15免疫.用ELISA和IFN-γELISPOT方法检测不同免疫组别中小鼠的细胞免疫和体液免疫反应强度.结果 联合pVR-IL15免疫组的体液免疫应答水平和细胞免疫应答水平均显著高于无联合pVR-IL15免疫组,差异具有统计学意义.结论 pVR-IL15基因佐剂能够增强表达HBsAg重组病毒诱导的小鼠免疫应答.     

重组弓形虫棒状体蛋白5诱导小鼠的免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用

为探讨重组弓形虫棒状体蛋白5诱导的免疫应答及其免疫保护效应,本研究克隆表达了弓形虫棒状体蛋白5,并分析其诱导的细胞免疫、体液免疫应答和抗弓形虫感染的保护作用。采用PCR方法从刚地弓形虫cDNA中扩增出ROP5基因片段,将该基因片段克隆至pET-28a原核表达载体表达,用重组ROP5蛋白免疫BALB／c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠抗体和细胞因子的变化。以强毒型RH株弓形虫攻击感染免疫小鼠,统计小鼠不同时间存活率,评价重组蛋白产生的免疫保护性。结果表明ROP5重组蛋白疫苗免疫BALB／c小鼠诱导机体产生高水平的IgG、IgG1、IgG2a抗体和IFN—y、IL-2及IL-10细胞因子。与PBS及佐剂对照组相比,重组蛋白免疫组小鼠的存活时间明显延长。本实验证实了ROP5重组蛋白免疫BALB／c小鼠能够诱导其产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,以及一定的抗弓形虫感染保护作用。     

草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3的构建表达及其免疫不育的研究

目的:构建草原兔尾鼠卵透明带3 DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3进行小鼠的黏膜免疫,增强该疫苗的免疫不育效果.方法:将两种佐剂分子大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基和C3d基因通过酶切鉴定,构建重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3 d3,采用RT-PCR和Western blot技术,检测其在mRNA和蛋白水平的表达,并通过肌肉注射、滴鼻和灌服3种途径免疫雌性C57BL/6小鼠,通过ELISA检测抗体水平及分型.结果:酶切鉴定,RT-PCR和Western blot 结果表明重组质粒构建正确并可在mRNA和蛋白水平的表达,ELISA结果表明以重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3免疫诱导的特异性IgG、IgA的水平明显高于对照组(P＜0.01)o抗生育实验表明该疫苗免疫的小鼠平均生仔数与对照组相比差异极显著(P＜0.01).结论:构建的草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3可高效地激发小鼠特异性免疫应答,提高抗生育的效果.