犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染的小鼠肺组织及大鼠肺微血管内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达的影响

 目的：研究中医经典合方犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒性肺炎小鼠肺组织及对流感病毒感染的大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)中细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达的影响,探讨其治疗病毒性肺炎的机制。方法：54只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组和XDY组,每组18只,后2组以流感病毒滴鼻感染,XDY组灌胃给予XDY;在感染后的2、4和6 d分别取材,免疫组化法观察肺组织中ICAM-1和VCAM-1表达。从雄性Wistar大鼠中分离并原代培养RPMVECs,设置正常组、病毒组、病毒+XDY含药血清组、肿瘤坏死因子α（TNF-α）组和TNF-α+XDY含药血清组;刺激因素作用24 h后,real-time PCR检测ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平,流式细胞术检测ICAM-1和VCAM-1蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组肺组织中ICAM-1和VCAM-1表达持续增多(P<0.01),而XDY组的表达均低于模型组 (P<0.01);与正常组比较,流感病毒和TNF-α作用的RPMVECs中 ICAM-1和VCAM-1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01),XDY能下调ICAM-1和VCAM-1 mRNA及蛋白表达 (P<0.01)。结论：抑制流感病毒感染导致的RPMVECs黏附分子的表达从而抑制机体的炎症级联反应可能是XDY治疗流感病毒性肺炎的作用机制之一。     

Notch信号通路对烧伤大鼠血清诱导的肺血管内皮细胞细胞间黏附分子-1的影响

目的探讨Notch信号通路对烧伤大鼠血清诱导的肺血管内皮细胞(PMVEC)细胞间黏附分子(ICAM)-1的影响。 方法42只SD大鼠(6～8周龄)中,随机选取30只,按随机数字表法分为假伤组(n＝15)和烧伤组(n＝15),烧伤组大鼠于95 ℃热水浸浴背部18 s造成30%总体表面积Ⅲ度烧伤,假伤组大鼠于37 ℃水浴中浸浴背部18 s模拟致伤。伤后6、12、24、48、72 h,烧伤组随机分别取3只大鼠,腹主动脉采血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中ICAM-1含量,假伤组大鼠行相同检测。取剩下的12只大鼠(6～8周龄)中的6只,按前述方法造成30%总体表面积Ⅲ度烧伤,伤后24 h制备烧伤大鼠血清;剩下的6只大鼠不作处理,制备健康大鼠血清。切取10只出生3 d的SD大鼠的肺外边缘组织,组织块法培养大鼠PMVEC,倒置相差显微镜下观察原代细胞培养2、6 d后的形态特征,流式细胞术对原代培养7 d的细胞进行细胞鉴定。取处于对数生长期的第4代PMVEC进行实验,将细胞接种于6孔板中,待细胞生长至80%融合时按随机数字表法分为3组(每组设3个复孔)：对照组(培养液中分别加入体积分数10%健康大鼠血清),二甲基亚砜(DMSO)+烧伤血清组、γ-分泌酶抑制剂(GSI)+烧伤血清组(分别加入3 μL/mL DMSO、75 μmol/L GSI,培养24 h后,加入体积分数10%烧伤大鼠血清刺激培养24 h),ELISA法检测PMVEC上清中ICAM-1的含量;流式细胞仪检测各组PMVEC中ICAM-1的含量;采用蛋白质印迹法检测ICAM-1蛋白表达水平,计算相对蛋白表达量;检测PMVEC的细胞黏附能力。数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。 结果(1)烧伤组大鼠伤后6、12、24、48、72 h血清中的ICAM-1含量分别为(19.77±3.03)、(22.09±3.65)、(22.44±4.04)、(25.40±2.51)、(26.37±3.07) pg/mL,显著高于假伤组的[(10.60±1.51)、(11.03±1.95)、(10.87±0.89)、(9.30±0.89)、(10.93±1.22) pg/mL],2组比较差异均有统计学意义(t＝4.699、4.466、3.181、10.490、8.097,P<0.05)。(2)原代细胞培养2 d后可见细胞从组织块边缘移出,生长较慢;培养6 d后可见细胞融合,细胞呈铺路石样生长。对原代培养7 d的细胞进行流式细胞术鉴定,结果显示CD31阳性细胞占98.6%,确定为PMVEC。(3)血清刺激培养24 h后,对照组,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量分别为1.21±0.25、2.16±0.12、3.07 ±0.30,3组比较差异有统计学意义(F＝46.72,P<0.05);与对照组比较,DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量均明显增加,差异均有统计学意义(t＝5.977、8.274,P<0.05);GSI+烧伤血清组细胞上清中ICAM-1含量明显高于DMSO+烧伤血清组,2组比较差异有统计学意义(t＝4.847,P<0.05)。(4)血清刺激培养24 h后,对照组,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组PMVEC中ICAM-1平均荧光强度分别为2 582±143、3 453±204、4 559±414,3组比较差异有统计学意义(F＝37.84,P<0.05);与对照组比较,DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞中ICAM-1含量均明显增加,差异均有统计学意义(t＝6.056、7.817,P<0.05);GSI+烧伤血清组ICAM-1含量明显高于DMSO+烧伤血清组,2组比较差异有统计学意义(t＝4.149,P<0.05)。(5)血清刺激培养24 h后,对照组、DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组的ICAM-1/GAPDH比值分别为0.74±0.08、1.07±0.08、1.38±0.28,3组总体比较差异有统计学意义(F＝30.76,P<0.05); DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组的ICAM-1/GAPDH比值均明显高于对照组,差异均有统计学意义(t＝5.182、6.990,P<0.05);GSI+烧伤血清组ICAM-1/GAPDH比值明显高于DMSO+烧伤血清组,差异有统计学意义(t＝3.770,P<0.05)。(6)PMVEC与人单核细胞系THP-1细胞共培养2 h后,倒置荧光显微镜下观察对照组、DMSO+烧伤血清组、GSI+烧伤血清组细胞黏附的细胞数呈递增趋势,3组的细胞数分别为(152.00±21.07)、(265.33±36.83)、(345.67±30.66)个,3组比较差异有统计学意义(F＝31.09,P<0.05);DMSO+烧伤血清组和GSI+烧伤血清组黏附的细胞数均明显高于对照组,比较差异均有统计学意义(t＝4.626、9.016,P<0.05);GSI+烧伤血清组黏附的细胞数明显高于DMSO+烧伤血清组,差异有统计学意义(t＝2.903,P<0.05)。 结论大鼠烧伤后血清中的ICAM-1含量明显上升,烧伤大鼠血清刺激PMVEC可以导致细胞内ICAM-1含量以及分泌到上清中的ICAM-1含量增加,应用GSI阻断Notch信号通路可以增加ICAM-1的产生及表达,可增加PMVEC对人单核细胞系THP-1细胞的黏附作用。     

高容量血液滤过减轻脂多糖诱导犬急性肺损伤

目的 研究高容量血液滤过(HVHF)对脂多糖(LPS)诱导犬急性肺损伤(ALI)的治疗作用,并探讨其机制.方法 健康犬16条,静脉注入LPS(650 μg/kg) ,随机分为对照组(C组)和HVHF治疗组(T组).监测动脉血气.放免法测定血TNF-a、IL-6和IL一10含量,流式细胞仪测定肺组织NF-κB活性,免疫印迹法测定肺表面活性蛋白(SP-B)含量,电镜下观察肺组织病理改变.结果 动物注入LPS后Pa和PaO/FiO2下降,HVHF治疗后上述指标明显高于C组(P<0.01).治疗1 h血中TNF-α、IL-6和IL-IO的浓度即有明显下降,低于同时点C组(P<0.01).治疗4 h后,NF-κB活性度下降(P相似文献   

胆红素对抗脂多糖诱导致大鼠急性肺损伤的实验研究

目的：探讨胆红素对抗急性肺损伤（ALI）的作用及其机制。方法： 用雄性Wistar大鼠（200-250 g） 30只，随机分为生理盐水对照组、脂多糖（LPS）致ALI动物模型组、胆红素干预组。观察病理形态变化并检测肺组织肺系数（LI）；支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞（WBC）计数、中性粒细胞（PMN）百分比、蛋白质含量（Pr）；肺泡通透指数（LPI）及肺组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平变化。结果： （1）ALI模型组LI，BALF中WBC计数、PMN百分比、Pr及LPI均显著高于生理盐水对照组（均P<0.01）。胆红素干预组LI，BALF中WBC计数和LPI均显著低于AIL模型组（均P<0.01），PMN百分比和Pr明显低于ALI模型组（均P<0.05），且与生理盐水对照组无显著差异（P>0.05）。（2）ALI模型组MDA含量显著多于生理盐水对照组（P<0.01），SOD活性和GSH-Px含量都明显低于生理盐水对照组(P<0.01)。胆红素干预组MDA含量明显低于ALI模型组 (P<0.01)，而SOD活性和GSH-Px含量显著多于ALI模型组（P<0.01，P<0.05)且与生理盐水对照组无显著差异（P>0.05）。结论： 胆红素通过其抗氧化作用对抗大鼠急性肺损伤。     

L-精氨酸对大鼠脂多糖致急性肺损伤的影响及机理

目的:探讨L-精氨酸对大鼠急性肺损伤的影响及机理.方法:采用尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备大鼠急性肺损伤模型.将45只大鼠随机分为三组:生理盐水对照组(NS组)、急性肺损伤模型组(LPS组)和L-精氨酸预处理组(L-Arg组)(n=15),再各分为2、6、24 h三个时间点.LPS组尾静脉注射LPS(6 mg/kg)制备急性肺损伤模型,L-Arg组在造模前0.5 h腹腔注射L-Arg 500 mg/kg.测定各组大鼠不同时间点的动脉血气分析,肺组织湿/干重(W/D)比,肺组织HE病理切片,ELISA法测定血清TNF-α,硝酸还原酶法测定血清NO,Real Time-PCR法测定肺组织iNOSmRNA.结果:LPS组动脉血氧降低、W/D增高、血清TNF-α及NO增高、肺组织iNOSmRNA增高,且与对照组比较有显著差异(P<0.05),肺组织HE病理切片有肺损伤改变.L-Arg组肺损伤有改善,上述检测指标与LPS组有显著差异(P<0.05).结论:L-精氨酸预处理对LPS致大鼠急性肺损伤有保护作用.     

LPS直接及间接作用致小鼠急性肺损伤模型的建立

目的　呼吸系统的急性炎症所致的急性肺损伤（ALI）是临床常见的急症、重症,也是目前实验研究的热点。在对其发病机制和治疗手段的探讨过程中,动物模型的有效建立极其重要。 方法　本实验比较了气道内直接滴入和腹腔注射给入两种LPS给入方式,通过组织学病理评价、炎症细胞的细胞学反应,炎症反应细胞分泌物蛋白水平的变化等炎症反应指标,评价了LPS两种不同的给入方式对小鼠急性肺损伤（ALI）模型建立的有效性。 结果　组织学水平显示,气道内直接滴入LPS肺组织炎性细胞浸润的病理改变较腹腔注射LPS组更明显,肺损伤的组织学病理改变也更明显;细胞学水平,气道内直接给入LPS组肺泡灌洗液可见较多中性粒细胞渗出,而腹腔注射LPS组肺泡灌洗液中性粒细胞渗出少,与腹腔注射生理盐水组无差别;细胞因子水平,气道内直接滴入LPS肺组织组肺泡灌洗液蛋白水平明显升高,高于生理盐水对照组和腹腔注射LPS组。 结论 气道内直接滴入LPS是一种有效的小鼠急性肺损伤模型制备方法,可通过LPS的直接气道内分散和刺激至直接肺损伤。     

NG-硝基-L-精氨酸对大鼠内毒素性肺线粒体损伤的影响

目的： 观察非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对急性肺损伤大鼠肺线粒体功能的影响，并探讨其改善急性肺损伤的作用机制。方法: 将SD大鼠随机分为空白对照组、急性肺损伤组、L-NA治疗组，采用舌静脉注射脂多糖(LPS)复制大鼠急性肺损伤模型，于大鼠急性肺损伤3h后给L-NA治疗3h，断头放血处死大鼠，迅速取出肺脏，匀浆器混匀后，低温差速离心法提取肺线粒体，测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总一氧化氮合酶（T-NOS）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）的活性，以及线粒体肿胀度、膜流动性和线粒体一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量；电镜观察大鼠肺线粒体超微结构的改变及治疗药对此改变的影响。结果: 在大鼠内毒素性急性肺损伤后，肺脏组织中线粒体表现为肿胀、膜流动性降低，线粒体中的T-NOS和iNOS活性显著升高，线粒体NO生成明显增加，而cNOS活性无明显变化；线粒体总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均明显下降，线粒体MDA含量明显升高。急性肺损伤3h给予L-NA治疗3h,与急性肺损伤组相比，一氧化氮合酶活性有所改变，NO生成显著下降，总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均显著升高，MDA含量下降。电镜结果显示内毒素性急性肺损伤后肺脏组织细胞水肿，线粒体肿胀、嵴断裂、溶解、消失；L-NA能改善内毒素性急性肺损伤引起的细胞水肿、线粒体肿胀和空泡化。结论: L-NA能明显抑制急性肺损伤后线粒体一氧化氮合酶活性，减少NO生成，改善线粒体能量供应，增加线粒体抗氧化作用，从而减轻急性肺损伤。     

内源性CO在CCK-8减轻脂多糖所致的急性肺损伤中的作用

目的：探讨内源性一氧化碳（CO）在八肽胆囊收缩素（CCK-8）减轻LPS所致急性肺损伤（ALI）中的作用。 方法： 将56只大鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+ZnPP（HO-1特异性阻断剂）组、LPS+Hm（CO供体）组、CCK-8+LPS组、CCK-8+LPS+ZnPP组、CCK-8组7组，每组8只。各组给药后2 h，6 h，12 h行支气管肺泡灌洗、检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中中性粒细胞（PMN）数目，并进行肺组织的形态学观察；计算大鼠死亡率；测定肺组织中MDA、CO含量。 结果： 给药2 h和6 h后，各组大鼠死亡率均为0，LPS 注入12 h后大鼠死亡率高于相应对照组，LPS+Hm和CCK-8+LPS组大鼠死亡率均低于LPS组，LPS+ZnPP和CCK-8+LPS+ZnPP组大鼠死亡率分别高于LPS和CCK-8+LPS组；LPS组肺组织均出现损伤变化，同时BALF中PMN数目和肺组织中MDA和CO含量高于相应对照组；LPS+Hm和CCK-8+LPS组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量低于相应LPS组，但肺组织中CO含量高于相应LPS组；LPS+ZnPP和CCK-8+LPS+ZnPP组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量分别高于相应LPS和CCK-8+LPS组，而肺组织中CO含量分别低于相应LPS组和CCK-8+LPS组。 结论： CCK-8可通过内源性CO介导的抗氧化、抑制PMN聚集等效应来发挥改善LPS所致的肺损伤作用。     

急性肺损伤大鼠肺组织白细胞介素-13表达的初步研究

目的：动态观察急性肺损伤（ＡＬＩ）大鼠肺组织白细胞介素－１３（ＩＬ－１３）mＲＮ Ａ表达的变化,初步探讨ＩＬ－１３mＲＮＡ的表达。结果：正常肺组织表达一定水平的Ｉ Ｌ－１３mＲＮＡ;在ＡＬＩ大鼠肺组织,ＩＬ－１３mＲＮＡ表达呈短暂性上调,随即逐渐下调。结论：正常肺组织可表达一定水平的ＩＬ－１３mＲＮＡ;在ＡＬＩ肺组织,ＩＬ－ １３mＲＮＡ表达逐渐下调,提示局部抗炎作用减弱,可能引起抗炎和致炎作用失衡,从而     

NF-κB在大鼠急性肺损伤模型肺组织中的表达及N-乙酰半胱氨酸的影响

目的 :检测NF κB在LPS诱导的急性肺损伤 (ALI)肺组织中的表达 ,以及N 乙酰半胱氨酸 (NAC)对ALI的抑制作用。方法 :采用免疫组化染色 (ABC法 )和Westernblot,检测NF κB在急性肺损伤大鼠气道和肺组织中的表达 ,以及NAC干预后活性NF κB表达的变化。结果 :正常对照组大鼠气道黏膜上皮和肺间质中 ,仅见少量散在的NF κB核阳性细胞 ;而LPS诱导ALI后 ,气道黏膜、肺间质、肺泡腔及血管内皮细胞中NF κB核阳性的细胞明显增多 (P <0 .0 1)。NF κB核阳性反应细胞主要为气道黏膜上皮细胞、浸润的炎症细胞、肺泡上皮细胞和血管内皮细胞。NAC治疗组NF κB核阳性细胞较LPS诱导的ALI组及对照组均明显减少 (P <0 .0 1)。Westernblot的结果显示 ,LPS诱导的ALI后不同时间点 ,NF κB的表达不同 ,于急性肺损伤 3h达高峰。各时间点NF κB的表达均较正常对照组高。结论 :LPS诱发的大鼠急性肺损伤的气道和肺组织内NF κB的表达增加 ,肺组织内的多数细胞参与了NF κB的激活。NAC可通过抑制NF κB的激活减轻急性肺损伤的炎症程度     

地塞米松对急性肺损伤中TREM-1表达的影响

目的　探讨地塞米松（Dexamethasone,Dex）对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠肺组织中髓样细胞表达的触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）表达的影响。 方法　以昆明小鼠为研究对象,腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立ALI模型,30 min后给予不同浓度的Dex（5、10、20、40 mg/kg）处理6 h;选用Dex(10 mg/kg)处理不同的时间（6、12、24、36 h）。HE染色法观察肺组织病理损伤程度; RT-PCR检测肺组织TREM-1mRNA的表达;ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液中可溶性TREM-1（sTREM-1）蛋白水平。 结果　Dex可减轻肺病理损伤;Dex呈时间依赖性地下调ALI小鼠肺组织的TREM-1 mRNA的表达,且在6 h即可降低;Dex呈剂量依赖地下调ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达,并在10 mg/kg时开始降低。Dex可降低ALI小鼠支气管肺泡灌洗液中sTREM-1的蛋白水平。 结论　Dex可呈剂量及时间依赖性下调ALI小鼠肺组织中的TREM-1mRNA的表达,并减少肺内髓样细胞胞膜TREM-1的脱落,提示Dex可能通过调节TREM-1的表达,从而抑制ALI早期的炎症级联反应,参与保护肺组织。