莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的机制

目的研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)在体外诱导人胃癌SGC7901细胞的凋亡作用,并探讨其作用机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTT比色法观察SFN对其增殖的影响。流式细胞术检测早期凋亡率、线粒体跨膜电位;免疫细胞化学法检测细胞Bax、Bcl-2、Bcl-X/L及Fas蛋白的表达;RT-PCR检测细胞Survivin基因mRNA表达。结果 SFN对SGC7901细胞的增殖具有明显抑制作用,SFN浓度在6.25～50μmmol/L之间时诱导SGC7901细胞凋亡的作用呈剂量依赖性(P0.01)。经SFN作用的SGC7901细胞线粒体跨膜电位降低,Bax及Fas蛋白表达水平上调,Bcl-X/L及Bcl-2/Bax表达水平降低;Survivin基因的mRNA表达降低(P0.01)。结论SFN可能通过下调Bcl-2/Bax及抑制Bcl-X/L蛋白的表达,活化Bax蛋白,诱导SGC7901进入内源性途径凋亡,外源性途径也可能起一定作用。SFN对SGC7901细胞的诱导凋亡作用还可能与抑制Survivin基因表达有关。     

PI3K/AKT信号通路在RANKL诱导的SGC-7901胃癌细胞迁移中的作用

目的文献报道RANKL/RANK/OPG途径与肿瘤细胞迁移及骨转移密切相关,但RANKL/RANK途径是否参与胃癌细胞迁移,尚无文献报道。本文拟检测RANK在胃癌细胞系SGC-7901细胞中的表达,并进一步探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的胃癌细胞迁移中的作用。方法 West-ern blot检测SGC-7901细胞表面RANK蛋白的表达;RANKL刺激后磷酸化Akt(P-Akt)及Akt的表达;Transwell法测定RANKL及抑制剂刺激后细胞迁移能力的改变。结果 SGC7901细胞表达RANK蛋白。RANKL(1μg/mL)诱导SGC-7901细胞迁移能力增强,迁移增加率为57.2%±5.9%,RANKL抑制剂rOPG(5μg/mL)显著抑制RANKL诱导的细胞迁移(13.88%±3.57%,P<0.05)。RANKL刺激后30 min～3 h,SGC-7901细胞p-Akt表达升高,应用PI3K的抑制剂LY294002(50 mmol/L)显著抑制RANKL诱导的胃癌细胞SGC-7901的迁移(57.28%±5.91%vs23.18%±2.79%,P<0.05)。结论胃癌细胞系SGC-7901细胞表达受体RANK,PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的SGC-7901细胞迁移。     

三氧化二砷通过Akt信号通路抑制HGC-27细胞的增殖并促进其凋亡

目的探讨三氧化二砷对HGC-27细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷作用于胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901,同时以只加入二甲基亚砜(DMSO)溶液的细胞作为对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,筛选出受到抑制作用最大的细胞继续研究,并计算三氧化二砷半数抑制浓度。用三氧化二砷半数抑制浓度作用于人胃癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平。用50 ng/ml的Akt信号通路激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及半数抑制浓度的三氧化二砷联合作用于人胃癌细胞作为联合组,以半数抑制浓度的三氧化二砷作用组作为对照,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测Cleaved Caspase-3、Akt、p-Akt表达水平。结果 1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷能够抑制胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901的生长,抑制作用从强到弱依次为:HGC-27、MKM28、SGC7901,半数抑制浓度依次为:(9.34±1.57)μmol/L、(12.92±1.08)μmol/L、(13.24±1.34)μmol/L,后续实验选用9μmol/L的三氧化二砷作用于HGC-27细胞。9μmol/L的三氧化二砷作用后细胞凋亡率从(6.35±2.14)%提高到(39.32±6.54)%,细胞中Cleaved Caspase-3升高,p-Akt水平降低。联合组细胞较单用三氧化二砷组细胞增殖能力增强,细胞凋亡数量减少,细胞中Cleaved Caspase-3水平降低,p-Akt水平升高。结论三氧化二砷能够抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,激活Akt信号通路能够部分逆转三氧化二砷对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。     

乳香通过PTEN/Akt/COX-2通路诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

目的研究乳香对人胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度乳香处理SGC7901细胞不同时间,噻唑兰比色法检测乳香对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞术分析乳香对SGC7901细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)分析乳香对SGC7901细胞中同源性磷酸张力蛋白(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(PKB,亦称Akt)和环氧化酶2(COX-2)蛋白表达影响,划痕实验检测细胞迁移能力,裸鼠移植瘤实验验证乳香在裸鼠体内抑制肿瘤的效果。采用Graphpad Prism 6.0统计软件对数据进行分析。结果乳香能够抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力,呈现剂量依赖和时间依赖性。乳香诱导SGC7901细胞的凋亡,呈现剂量依赖性。乳香能够诱导SGC7901细胞中PTEN的表达,抑制p-Akt和COX-2的蛋白表达。此外,乳香能够抑制裸鼠体内胃癌移植瘤的生长。结论乳香可以抑制胃癌细胞SGC7901的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,这可能与PTEN/Akt/COX-2信号通路相关。     

金雀异黄素对人胃腺癌细胞中Akt及其磷酸化蛋白表达的影响

目的:研究金雀异黄素(Genistein)对人胃腺癌细胞SGC-7901中Akt及其磷酸化蛋白p-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)表达的影响.方法:用浓度为0,5,10,20,40和80μmo1/L的Genistein处理SGC-7901细胞24 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测Genistein对SGC-7901增殖的抑制作用,Hoechst 33342染色观察Genistein对SGC-7901凋亡的诱导作用,Westem blot方法检测不同浓度Genistein处理后的SGC-7901细胞中Akt,p-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)的表达情况.结果:5,10,20,40和80 μmol/L的Genistein对SGC-7901细胞增殖的抑制率分别为6.85%±3.71%,13.19%±1.90%,20.94%±1.83%,29.58%±1.19%和41.75%±1.92%.20-80μmo1/L的Genistein处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变.Genistein对细胞中Akt蛋白的表达没有明显影响.不同浓度Genistein处理SGC-7901细胞24 h后,均有两种磷酸化Akt蛋白的表达,两种磷酸化蛋白表达均随Genistein浓度的增加而逐渐减弱,80 μmo1/L Genistein处理组表达最弱.结论:Genistein的抗癌活性与其抑制磷酸化Akt蛋白表达有关.     

西咪替丁对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,以不同浓度的西咪替丁处理后用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况;流式细胞术检测癌细胞周期和凋亡;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察药物作用后癌细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;Western印记法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:以不同浓度的西咪替丁分别处理人胃癌SGC-7901细胞24h和48 h,结果发现,在0.5,1,2.5,5,10 mmol/L时对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用,与对照组相比差异显著(24 h:0.705±0.018,0.560±0.038,0.408±0.029,0.276±0.042,0.205±0.031 vs 0.803±0.012,P<0.05;48 h:0.902±0.024,0.671±0.015,0.420±0.030,0.180±0.037,0.0117±0.021 vs 1.079±0.040,P<0.05),并呈时间和剂量依懒性,而在0.25 mmol/L以下浓度对SGC-7901细胞未见明显细胞毒作用;0.5-10 mmol/L西咪替丁作用后,可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0/G1期细胞明显增多(60.83±2.27,67.21±1.18,75.15±4.01,81.88±3.10,86.99±1.43 vs 50.28±1.97,P<0.05);西咪替丁还可下调SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论:西咪替丁可改变细胞周期分布,并能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

扁塑藤素对胃癌细胞MGC803及SGC7901增殖和凋亡的影响

目的:研究扁塑藤素对胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:体外培养MGC803和SGC7901细胞,细胞接受0-50μmol/L药物处理之后,采用CCK-8实验、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测及细胞周期检测实验研究扁塑藤素对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响;采用罗丹明123测定细胞线粒体跨膜电位变化,最后采用Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关x蛋白(Bcl-associated x protein,Bax)表达水平.同时用人胃癌细胞系MGC803进行裸鼠成瘤实验,观察扁塑藤素对裸鼠成瘤的影响.结果:扁塑藤素可以抑制MGC803和SGC7901细胞增殖,其IC_(50)值分别为8.5μmol/L和12.6μmol/L;Annexin V-FITC/PI双染实验显示随着药物浓度的增加,出现凋亡的细胞明显增加;细胞周期实验显示扁塑藤素可以诱导MGC803细胞出现G_1期阻滞;细胞经过药物处理后,细胞线粒体跨膜电位明显下降.Western blot实验显示随着药物浓度的增加,细胞中Bax蛋白表达水平上升,Bcl-2蛋白表达水平下降,呈现一定的浓度依赖性.裸鼠成瘤实验显示,扁塑藤素可以抑制裸鼠种植瘤的生长.结论:扁塑藤素能显著抑制胃癌MGC803和SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡,认为扁塑藤素可能通过增强线粒体通透性来诱导细胞凋亡.     

肝再生磷酸酶3对SGC7901细胞迁移侵袭及RhoC表达的影响

目的:通过观察肝再生磷酸酶3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)对胃癌SGC7901细胞迁移侵袭及RhoC表达的影响,探讨胃癌SGC7901细胞迁移侵袭的机制中PRL-3和RhoC是否位于同一信号通路.方法:体外培养人胃癌SGC7901细胞,经不同浓度PRL-3抗体(1∶600,1∶400,1∶200)作用后,采用细胞划痕实验观察不同时间段(0、12、24、48 h)SGC7901细胞的迁移距离;通过Transwell迁移侵袭实验检测不同浓度PRL-3抗体(1∶600,1∶400,1∶200)作用48 h后SGC7901细胞迁移侵袭的穿膜细胞数,并采用Real-time PCR和ELISA检测SGC7901细胞中RhoC mRNA及蛋白表达量的变化,比较不同浓度PRL-3抗体处理后SGC7901细胞迁移侵袭的细胞数和RhoC mRNA及蛋白的表达量.结果:与对照组比较,随着PRL-3抗体浓度的升高和作用时间的延长,SGC7901细胞的迁移距离逐渐减小,在48 h,经不同浓度PRL-3抗体(1∶600,1∶400,1∶200)处理SGC7901细胞后,其迁移和侵袭的细胞数,RhoCmRNA相对表达量和蛋白表达水平与对照组相比均明显降低(迁移SGC7901细胞数:365.0±5.0,165.3±5.0,90.3±5.5 vs 512.3±4.9;侵袭SGC7901细胞数:321.3±6.1,179.0±6.1,75.7±4.0 vs 545.3±5.0;RhoC mRNA的相对表达量:0.910±0.022,0.742±0.018,0.539±0.015 vs 1.000±0.000;RhoC蛋白表达量:1130.77 g/mL±15.32 g/mL,981.52 g/mL±14.44 g/mL,893.03 g/mL±11.10 g/mL vs 1212.42 g/mL±18.37g/mL)(均P0.01),不同PRL-3抗体浓度组两两比较均有统计学意义(均P0.01).结论:PRL-3在体外能显著促进SGC7901细胞的迁移侵袭,并能增强RhoC基因和蛋白的表达,提示在SGC7901细胞迁移侵袭的机制中PRL-3和RhoC可能位于同一信号通路.     

癌性锚蛋白重复序列在胃癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)在人胃癌细胞的表达,以及在尼美舒利诱导细胞凋亡过程中的改变.方法 培养不同分化程度的人胃癌细胞系[MKN28(高分化)、AGS(低分化)、MKN45(低分化)和SGC7901(中分化)],以尼美舒利处理细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验和流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡,实时PCR和Western印迹法检测Gankyrin基因和蛋白表达.结果 在4种不同分化程度的人胃癌细胞系中,均存在不同水平的Gankyrin基因和蛋白表达.尼美舒利以时间-剂量依赖方式抑制AGS、FYGC7901细胞增殖.与对照组相比,尼美舒利400 μmol/L处理48 h可诱导AGS、SGC7901细胞显著凋亡(细胞凋亡率分别为0.57%±0.19%比23.30%±2.50%和0.88%±0.17%比16.80%±1.55%,P均<0.01).在AGS细胞凋亡过程中,Gankyrin基因和蛋白表达水平下降,以尼美舒利作用后24 h(0.0035±0.0014)和36 h(0.0980±0.0160)改变最为显著(对照组为0.4690±0.1190,P值均<0.01).结论 在人胃癌细胞中存在Gankyrin基因和蛋白表达.Gankyrin可能参与尼美舒利诱导的AGS胃癌细胞凋亡.     

调控线粒体膜电位青蒿琥酯诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用

目的研究青蒿琥酯(Art)抑制胃癌细胞(SGC-7901)生长作用机制,探讨Art调控SGC-7901细胞线粒体膜电位诱导SGC-7901细胞凋亡作用与Art抑制胃癌细胞生长作用关系。方法利用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的Art干预SGC-7901细胞24 h后的细胞凋亡,细胞线粒体膜电位及细胞中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、B细胞淋巴瘤2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平。选取Art的浓度为30、60、120μmol/L。对照组使用生理盐水代替Art。结果 FCM检测结果显示,Art组SGC-7901细胞凋亡率显著高于对照组(均P0.05),且Art诱导SGC-7901细胞凋亡作用具有Art剂量依赖性。Art组SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平及细胞线粒体膜电位水平显著低于对照组(P0.05),而SGC-7901细胞中的Bax及Caspase-3蛋白表达量显著高于对照组(均P0.05)。结论 Art具有抑制胃癌SGC-7901细胞生长作用,其作用机制与Art降低SGC-7901细胞线粒体膜电位从而诱导细胞凋亡有关。     

小干扰RNA沉默bcl-2基因抑制胃癌细胞生长的研究

目的利用RNA干扰技术,研究靶向bcl-2的小干扰RNA(siRNA)在体内外对胃癌细胞生长的影响,探讨其对胃癌治疗的可行性。方法化学合成bcl-2基因的siRNA,脂质体法将bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞,采用实时定量PCR和Western印迹观察bcl-2 siRNA转染前后胃癌细胞bcl-2基因的表达变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验、流式细胞检测技术和端粒重复序列扩增法(TRAP)分别检测胃癌细胞增殖、凋亡和端粒酶活性变化。并将转染bcl-2 siRNA的胃癌SGC 7901细胞接种于裸鼠皮下,观察其在裸鼠体内成瘤及生长情况。结果数据经方差分析,bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞后,明显抑制bcl-2基因表达,并与其浓度和作用时间相关,以100 nmol/L bcl-2 siRNA对bcl-2基因表达抑制效果最佳。以该浓度的bcl-2 siRNA转染胃癌SGC 7901细胞后,bcl-2 mRNA和蛋白表达抑制分别为79．9%和85．3%；经bcl-2 siRNA作用的SGC 7901细胞生长明显缓于对照组(P＜0．05),细胞凋亡率高于对照组(P＜0．05),端粒酶活性明显低于对照组(P＜0．05)。转染100 nmol/L bcl-2 siRNA的胃癌SGC 7901细胞接种裸鼠皮下后,肿瘤出现时间晚,体积小．生长受到明显抑制(P＜0．05)。结论靶向bcl-2的siRNA可明显下调靶基因bcl-2的表达,在体内外抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,为探索胃癌基因治疗提供新的策略。     

艾塞那肽抑制高糖诱导内皮细胞凋亡的作用机制

在正常糖浓度(5.5 mmol/L)和高糖(33 mmol/L)培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别加入不同浓度的艾塞那肽并干预不同时间后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞活力,应用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)磷酸化、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果显示,HUVECs经高糖培养48和72 h后,细胞活力明显下降(P＜0.01).经1、10和100 nmol/L艾塞那肽干预48 h后,细胞活力明显增加,并呈浓度依赖性(P＜0.01).与正常糖浓度组比较,高糖组细胞凋亡率升高,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01).艾塞那肽干预后,细胞凋亡率下降,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01),而艾塞那肽的作用可被磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002所对抗(P＜0.01).提示艾塞那肽可通过PI3 k/Akt信号通路调节Bcl-2/Bax蛋白表达来抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,起到保护内皮细胞的作用.     

Celecoxib对胃癌细胞凋亡的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celecoxib对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响.方法:采用MTT法测定人胃癌细胞株SGC7901分别在1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9mol/L的Celecoxib作用48h后生长抑制情况;流式细胞术(FCM)观察Celecoxib对SGC7901细胞凋亡的影响;采用免疫细胞化学染色观察Survivin的表达.结果:Celecoxib浓度为1×10-5-1×10-9mol/L时,对SGC7901细胞的生长均有抑制作用,以1×10-5mol/L浓度的抑制作用最为显著,其抑制率为30.03%;1×10-5mol/LCelecoxib作用12,24,48h后,细胞凋亡比例较对照组均明显增加,48h凋亡率达17.83%;1×10-5mol/LCelecoxib作用后,Survivin的表达自用药3h起下降,24h最明显.结论:Celecoxib可诱导SGC7901细胞的凋亡,其可能的作用机制为抑制细胞Survivin基因的表达.     

洛贝林逆转胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药的作用

目的:探讨哌啶类生物碱洛贝林(Lobeline)能否逆转人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,并进一步探讨洛贝林逆转其多药耐药的机制,评估其有效性.方法:以人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,用四氮唑蓝(MTT)法分别测定在无和有洛贝林(细胞无毒浓度10 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR对VCR及5-Fu的半数生长抑制率,并由此求其耐药逆转的倍数;RT-PCR分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药基因MDR1 mRNA表达情况;Western blot分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的P-gp蛋白表达.结果:在洛贝林无毒作用浓度(10 mol/L)作用下,多药耐药细胞株SGC7901/VCR对化疗药的敏感性增加,VCR对耐药细胞株的IC50由原来的16.55 g/L±0.13 g/L变成7.27g/L±0.65 g/L,逆转指数约为2.28;5-Fu对耐药细胞株的IC50由原来的11.01 g/L±0.43 g/L变成9.53 g/L±0.79 g/L,逆转指数约为1.16;RT-PCR检测示多药耐药细胞株SGC7901/VCR呈现MDR1 mRNA高度表达,随洛贝林终作用浓度的增大,MDR1 mRNA表达逐渐下降,各组间差距有统计学意义(P<0.05);Western blot检测表明多药耐药细胞株SGC7901/VCR高度表达P-gp蛋白,随洛贝林作用终浓度依次增加P-gp蛋白表达依次减弱,组间呈浓度依赖性,差别有统计学意义(P<0.05).结论:无细胞毒作用浓度的洛贝林可以逆转胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,增强VCR和5-Fu的化疗敏感性.洛贝林对SGC7901/VCR细胞多药耐药的逆转可能机制为抑制P-gp蛋白的表达.     

环氧合酶-2抑制剂celecoxib抑制胃癌生长的实验研究

目的研究celecoxib在体内外对胃癌增殖及凋亡的影响.方法不同浓度celecoxib处理体外培养的SGC7901细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测处理后24、48、72、96小时SGC7901细胞的增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡.利用SGC7901胃癌细胞株建立裸鼠胃癌种植瘤模型,实验组予以celecoxib 10 mg/Kg/day灌胃,共给药6周.结果 25,50,100,200μmol/Lcelecoxib处理SGC7901细胞24、48、72、96小时后,细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性特点.50 μmol/L celecoxib处理SGC7901细胞24 h后,流式细胞仪细胞周期分析表明G0/G1期细胞百分率上升,S期和G2/M期细胞百分率下降.流式细胞仪检测实验组的凋亡率明显高于对照组(20.4±2.8%vs 7.6±0.6%,P＜0.05).celecoxib治疗组裸鼠胃癌种植瘤重量为(0.43±0.21)g,明显低于对照组(1.33±0.45)g(P＜0.05).结论体内及体外实验表明,celecoxib能有效抑制胃癌生长,其机制可能与其阻滞细胞周期及诱导凋亡有关.     

As2O3与Aspirin联合应用对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响

目的:观察As2O3与Aspirin联合应用对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响并探讨其可能机制.方法:As2O3和Aspirin处理SGC-7901细胞,实验分为:阴性对照组、2 mmol/L Aspirin组、1 mmol/L Aspirin组、4 pmoI/L As2O3组、2μmol/L As2O3组和2 Bmol/L As2O3组 1 mmol/LAspirin组,流式细胞术检测As2O3和Aspirin单独及联合应用对SGC-7901细胞凋亡的作用,免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:2 μmol/L As2O3 1 mmol/L Aspirin联合应用组与4 μmol/L As2O3组、2 mmol/L Aspirin 组SGC-7901细胞在细胞周期G1期前均出现明显的亚二倍体凋亡峰,差异无明显统计学意义,与阴性对照组细胞、2 μmol/L As2O3及1 mmol/L Aspirin单药组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).As2O3与Aspirin联合应用组使Bcl-2表达下降,Bax表达增高,与阴性对照组、2 μmol/L As2O3及1 mmol/L Aspirin单药组相比,差异均具统计学意义(50.21%±5.94% VS 91.65%±11.51%,88.66%±10.53%,89.27%±9.84%;40.72%±9.54% VS 21.03%±4.32%,23.07%±6.23%,22.67%±3.1 6%,均P＜0.05).结论:As2O3和Aspirin可能通过改变Bcl-2和Bax表达诱导SGC-7901细胞凋亡,两者联合应用具有协同作用.     

钒化钠抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用机理

目的通过观察钒化钠对人胃癌SGC7901细胞周期蛋白cyclinD1表达的影响,探讨其对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的作用机理。方法应用MTT法测定钒化钠对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制作用;用Western-blot法检测钒化钠对人胃癌SGC7901细胞周期蛋白cyclinD1表达水平的变化。结果一定浓度的钒化钠使人胃癌SGC7901细胞增殖周期密切相关的cyclinD1蛋白表达降低。结论一定浓度的钒化钠能明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,钒化钠的抗肿瘤机制可能与cyclinD1蛋白表达降低有关。     

高浓度葡萄糖对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因表达的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖培养条件对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bel-2、Bax表达的影响,探讨Bcl-2、Bax对周细胞凋亡的调控.方法 在体外培养第3代近融合的视网膜血管周细胞中加入不同浓度的葡萄糖(5.5 mmol/L、15.0 mmol/L、25.0 mmol/L和35.0mmol/L)孵育6 d后,应用MTT方法检测高糖下牛视网膜周细胞增殖情况,TUNEL法特异性标记凋亡细胞,免疫组化染色法和RT-PCR测定Bcl-2、Bax基因的表达. 结果 周细胞在高浓度葡萄糖培养下,细胞增殖受抑制,呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率分别为(28.4±0.8)%、(40.4±0.9)%与(50.2±0.6)%.高浓度葡萄糖培养呈剂量依赖性促周细胞凋亡(r=0.959,P＜0.01)和凋亡调节基因Bax的表达(蛋白水平r=0.966,P＜0.01;mNRA水平r=0.874,P＜0.01)及抑制凋亡调节基因Bcl-2的表达(蛋白水平r=-0.964,P＜0.01;mNRA水平r=-0.912,P＜0.01);周细胞的凋亡率与Bax/Bcl-2比率呈正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 高浓度葡萄糖培养以剂量依赖的方式促进周细胞凋亡,Bcl-2、Bax基因表达的改变参与了细胞凋亡的调控.     

RNA干扰FLOT2基因表达下调NF-κB信号对胃癌细胞凋亡诱导作用研究

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响。方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达。BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体Lipofectamine~(TM)2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β和Bax的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P0.05)。转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P0.05)。与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

LKB1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及相关分子实验

目的:探讨LKB1在胃癌发生中的作用及相关分子机制研究,为胃癌化疗药物的研发提供一定的理论基础.方法:利用L K B1过表达质粒以及L K B1s i R N A转染人胃癌细胞株S G C7901,实时荧光定量PCR及Western blot检测质粒以及s i R N A转染效果,流式细胞术检测L K B1过表达以及干扰后的SGC7901细胞(血清饥饿处理2 h)凋亡数量.活性氧检测试剂盒检测L K B1对S G C7901细胞内R O S产生的影响M T T法检测N A C抑制细胞内R O S产生后LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞数量的改变.Western blot检测LKB1过表达以及干扰后SGC7901细胞中凋亡相关蛋白的表达水平.结果:LKB1过表达质粒转染后的人胃癌细胞株SGC7901细胞凋亡增加,胞内ROS产生增加,LKB1过表达后的SGC7901细胞凋亡则明显增多(3.54%vs 1.29%),转染LKB1 si RNA的人胃癌细胞株SGC7901早期凋亡和晚期凋亡的细胞数量占总数较转染scramble si RNA组明显减少(0.54%vs 1.39%)同时Western blot检测发现LKB1过表达后的SGC7901细胞中剪切型Caspase3表达明显升高上升3.12倍,较对照组差异有统计学意义而si RNA干扰后剪切型Caspase3表达则表现为相反的趋势.结论:LKB1通过促进ROS的产生,上调剪切型Caspase3介导的凋亡通路促进胃癌细胞凋亡,因此LKB1在胃癌发生发展过程中具有重要抑制作用,其可能作为胃癌化疗药物研发的重要目标分子.