Hippo—YAP信号通路与胃癌相关性研究

目前研究表明,Hippo—YAP信号通路在调控细胞生长、凋亡及组织器官大小方面起重要作用。YAP是Hippo—YAP信号通路下游的效应子,其异常表达与肿瘤的发生发展密切相关,可引起胃癌增殖、侵袭转移及凋亡逃逸等一系列生物学行为,并对胃癌患者的诊断、治疗及预后具有潜在的临床应用价值。此文就Hippo—YAP信号通路构成、作用机制及其与胃癌相关性的研究作一综述。     

PBLD通过MAPK通路抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和转移

目的分析PBLD对HepG2细胞增殖、侵袭及转移的影响,并初步探讨其发挥作用的分子机制。方法首先利用细胞转染技术构建PBLD过表达的HepG2稳转细胞株,CCK-8法检测PBLD过表达后肝癌细胞增殖能力的变化,Transwell实验检测PBLD过表达后HepG2细胞侵袭、转移能力的变化,最后利用Western-blot技术筛选并验证PBLD可能的下游信号通路。结果 PBLD过表达后HepG2细胞的增殖能力被显著抑制(P0.05),同时,发生侵袭、迁移的细胞数量与空载对照细胞相比显著减低[(68±12.5)vs.(19±10.21),P0.01;(30±8.83)vs.(11±4.41),P0.01]。进一步Western-blot检测结果显示,PBLD过表达可显著抑制MAPK信号通路相关分子的表达。结论 PBLD可通过MAPK信号通路抑制Hep G2细胞的增殖、侵袭和转移。     

SiRNA干扰LOX基因对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨siRNA靶向干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用脂质体转染法建立LOX-siRNA的BGC-823细胞株和阴性对照BGC-823细胞株。应用RT-PCR法检测胃癌细胞转染前后LOX mRNA水平,应用Western blotting法检测胃癌细胞转染前后的LOX蛋白表达水平。MTS法检测BGC-823细胞的增殖情况;Transwell迁移和侵袭实验检测干扰LOX基因对BGC-823细胞迁移及侵袭能力的影响。结果与NC-siRNA组及空白组比较,LOX-siRNA转染组LOX mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05),细胞增殖、迁移、侵袭能力明显下降(P0.05)。结论 LOX基因对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭及迁移有一定的促进作用。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

胃癌患者术后血清中TGFBI与复发转移的关系及其机制

目的探讨术后血清细胞外基质蛋白转化生长因子β诱导(TGFBI)对胃癌复发转移的影响及其作用机制。方法利用shRNA结合慢病毒技术稳定敲低胃癌细胞SGC-7901中TGFBI的表达,并通过Western blot对其在细胞内及培养上清中的表达进行验证;MTT法检测TGFBI下调对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响,Transwell法检测其对细胞侵袭与迁移的影响;通过检测E-cadherin、Snail和ZEB1等转录因子的表达,探究TGFBI是否通过上皮间质转化促进胃癌的转移复发。结果胃癌患者血清样本中TGFBI表达水平显著高于正常样本,RNA干扰后TGFBI在胃癌细胞SGC-7901内及其培养上清中的表达水平均发生显著下降;TGFBI下调后胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭与迁移能力均受到显著抑制,同时上皮间质转化标志物E-cadherin的表达发生上调,而Snail和ZEB1的表达发生下调。结论胃癌细胞SGC-7901中TGFBI表达下调时可能通过抑制上皮间质转化,抑制胃癌细胞增殖、侵袭与迁移,最终抑制胃癌的转移复发。     

miR-107靶向PCDH17表达调控EMT通路抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制

目的 探讨微小RNA(miR)-107靶向原钙黏蛋白(PCDH)-17调控EMT通路影响胃癌细胞迁移、侵袭的作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-107、PCDH17 mRNA在胃癌组织中表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107对PCDH17转录活性的影响;胃癌MKN-28细胞转染pcDNA-PCDH17或siRNA-PCDH,Transwell迁移及侵袭实验检测PCDH17的表达对MKN-28细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测PCDH17的表达对EMT通路的蛋白表达水平的影响.miR-107过表达验证细胞迁移及侵袭.结果 miR-107在胃癌组织中高表达,PCDH17在胃癌组织中低表达;过表达PCDH17后,细胞迁移及侵袭能力明显降低,E-Cadherin表达水平明显升高,而N-Cadherin、Vimentin表达水平明显降低;抑制PCDH17表达后,细胞迁移及侵袭能力明显增强,E-Cadherin表达水平明显降低,而N-Cadherin、Vimentin表达水平明显升高;双荧光素酶报告基因系统检测结果 显示,miR-107可直接调控PCDH17的转录活性;miR-107可通过负向调控PCDH17而促进EMT转化进而增强胃癌细胞迁移及侵袭能力.结论 miR-107靶向PCDH17表达从而调控胃癌细胞迁移及侵袭能力,其可能通过激活EMT通路而发挥作用.     

YAP在大肠癌中的表达及对大肠癌增殖和侵袭能力的影响

[目的]探讨YAP在大肠癌中的表达情况,及其对大肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。[方法]运用生物信息学方法分析YAP在大肠癌组织和正常大肠组织中的表达情况;应用Western blot方法检测大肠癌及其癌旁组织中YAP的表达情况;建立干扰YAP表达的大肠癌细胞株HCT116和SW480,通过MTT法和Transwell实验检测YAP对大肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。[结果]对筛选出的GSE9348和GSE5206两组芯片数据分析均提示YAP mRNA在大肠癌组织中的表达水平明显高于正常大肠组织(P0.01);Western blot实验结果显示大肠癌组织中YAP的表达水平明显高于癌旁组织(P0.01);MTT法动态观察发现敲低YAP基因后大肠癌细胞HCT116和SW480的增殖受到明显的抑制(P0.01);Transwell小室实验提示敲低YAP基因后大肠癌细胞跨膜细胞数明显减少(P0.001)。[结论]YAP在大肠癌中高表达,YAP促进大肠癌细胞的增殖和侵袭,可能是大肠癌治疗的潜在靶点。     

Moesin调控肺癌A549细胞增殖、侵袭的实验研究

目的研究Moesin在非小细胞肺癌中的作用及其机制。方法通过数据库分析发现Moesin高表达在非小细胞肺癌患者中与不良预后相关。利用Western Blot检测Moesin在肺癌细胞株内表达情况。选取Moesin表达量中等A549细胞株进行实验。将A549细胞分为对照组和Moesin干扰组,分别利用CCK-8, Transwell检测细胞增殖、转移的作用,利用Western blot检测干扰Moesin对细胞增殖、上皮间充质转移(EMT)信号通路蛋白的影响。结果干扰Moesin后,增殖信号通路p-AKT, p-ERK,EMT信号通路E-cadherin, N-cadherin, Vimtein等蛋白都有明显变化,并且肺癌细胞表型如增殖,转移、侵袭能力也有明显下降。结论 Moesin在非小细胞肺癌中表达上调,其高表达与不良预后相关。并且,通过影响下游增殖、转移信号通路蛋白,Moesin可促进肺癌细胞增殖转移。     

AnnexinA2-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及机制

目的观察siRNA靶向干扰膜联蛋白(Annexin)A2对甲状腺乳头状癌(PTC)K1细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨其可能的相关机制。方法首先利用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTC、甲状腺良性肿瘤和正常组织中AnnexinA2 mRNA的表达;采用Western印迹检测细胞中AnnexinA2蛋白的表达水平。实验分为:空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-AnnexinA2组;利用脂质体lipofectamine^TM 2000瞬时转染的方法沉默PTCK1细胞中AnnexinA2的表达,采用qRT-PCR和Western印迹验证K1细胞转染的干扰效果;采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法分别检测K1细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力的变化,进一步采用qRT-PCR和Western印迹分别检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和下游因子c-myc、细胞周期蛋白(cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达变化。结果小干扰RNA转染成功沉默了K1细胞中AnnexinA2基因的表达;转染成功后,与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-AnnexinA2组细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AnnexinA2组中细胞的迁移和侵袭能力显著受到抑制(均P<0.05);沉默AnnexinA2基因后明显抑制了β-catenin、c-myc、cyclinD1、MMP-2、MMP-9的表达水平(均P<0.05)。结论AnnexinA2基因的沉默抑制K1细胞的侵袭、转移能力,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的,从而为PTC分子生物治疗提供新的靶标。     

miR-660-3p下调REG4对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的研究miR-660-3p对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测134例胃癌组织和癌旁组织中miR-660-3p的表达,MTT法和Transwell实验测定过表达miR-660-3p和REG4后MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测REG4、Cyclin D1、p21、E-cadherin和MPP-2蛋白的表达,双荧光素酶报告系统验证miR-660-3p与REG4的调控关系。结果与正常癌旁组织相比,胃癌组织中的miR-660-3p表达量显著降低(P 0. 05);抑制miR-660-3p可抑制MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,抑制MGC-803中REG4、Cyclin D1和MPP-2表达(P 0. 05),促进p21和E-cadherin表达(P 0. 05); miR-660-3p靶向负调控REG4的表达;过表达REG4可逆转过表达miR-660-3p对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-660-3p通过靶向REG4抑制MGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-660-3p是胃癌的潜在分子靶点。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

抑制EphA7表达对非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨抑制酪氨酸蛋白激酶受体(Eph)A7表达对非小细胞肺癌NCI-H1975细胞生长的抑制作用及其分子机制。方法噻唑蓝(MTT)检测细胞活力,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测EphA7基因表达,Transwell实验检测沉默EphA7对NCI-H1975细胞迁移和侵袭的影响。蛋白印迹实验检测EphA7蛋白表达及信号通路相关蛋白表达。结果小干扰(si)EphA7的转染抑制了NCI-H1975细胞的增殖、迁移和侵袭。siEphA7还显著增加了蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)蛋白表达,蛋白激酶B(AKT)的总表达没有改变,而磷酸化AKT被抑制。结论EphA7可能通过PTEN-AKT通路调控NCI-H1975细胞的迁移和侵袭。     

siRNA沉默CXCR4基因对胃癌生物学行为的影响

背景:CXCR4在肿瘤细胞中广泛表达,参与肿瘤侵袭和转移。RNA干扰技术可有效降低或关闭基因的表达,从不同水平阻断肿瘤侵袭和转移。目的:研究胃癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白表达及其与临床病理特征的关系,并探讨siRNA沉默CXCR4表达对胃癌生物学行为的影响。方法:选取86例胃癌及其癌旁正常黏膜组织,应用RTPCR和蛋白质印迹法分别检测CXCR4 mRNA和蛋白表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建CXCR4干扰RNA质粒载体,并转染胃癌MKN45细胞。应用MTT法、Transwell法、流式细胞术分别评估胃癌细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡能力。结果:胃癌组织中CXCR4 mRNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05),且其表达与TNM分期、肿瘤分化、淋巴结转移相关(P 0. 05)。与阴性对照组相比,siRNA转染组转染24、48、72 h后MKN45细胞增殖力均显著降低(P 0. 05),迁移率和侵袭率均显著降低(P 0. 05),细胞凋亡率显著升高(P 0. 05)。结论:CXCR4在胃癌发展过程中具有重要作用;以siRNA沉默CXCR4基因后,可显著抑制MKN45细胞增殖,抑制体外细胞迁移和侵袭,促进细胞凋亡,从而为胃癌的治疗提供新策略。     

ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响

目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Western blot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Western blot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA和蛋白表达.结果:M...     

CD98对肝癌细胞侵袭和转移的影响

目的本研究拟通过RNA干扰技术下调人类肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)CD98基因的表达,探讨CD98对肿瘤侵袭与转移的影响.方法利用CD98 siRNAs瞬时转染人类HCC系(FHCC-98),免疫印迹法证实癌细胞中CD98蛋白表达下调后,通过细胞黏附实验、Transwell侵袭实验及划痕愈合实验,检测CD98对HCC的黏附、侵袭和迁移能力的影响.结果 CD98 siRNAs瞬时转染FHCC-98细胞48 h后,癌细胞CD98的蛋白水平显著下调,干扰CD98蛋白表达水平后,癌细胞黏附能力显著下降,Transwell实验证实与对照组相比,癌细胞的侵袭能力显著下降,划痕实验也证实干涉CD98后癌细胞的迁移能力显著下降.结论 CD98通过增强HCC的黏附及迁徙能力,促进HCC的侵袭和转移,为未来肝细胞癌治疗提供了可能的靶点.     

甘草甜素对胃癌细胞BGC-823增殖作用的影响

目的:探讨甘草甜素抑制胃癌细胞BGC-823增殖及其相关机制.方法:不同浓度甘草甜素培养后,采用MTT法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期;黏附实验和Transwell小室实验检测细胞的黏附百分比和迁移的变化;免疫印迹法检测β-catenin、Bcl-2、CyclinD1和Survivin的蛋白表达水平.结果:甘草甜素呈浓度依赖性抑制BGC-823细胞增殖,并且抑制细胞从G1期向S期的转变(P0.05).给予40umol/L甘草甜素处理BGC-823细胞后,细胞黏附和迁移的能力减弱,且β-catenin、Bcl-2、CyclinD1和Survivin的蛋白表达水平明显降低(P0.05).结论:甘草甜素通过调控细胞周期抑制BGC-823细胞的增殖、黏附、迁移,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关.     

IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

神经纤毛蛋白-1调控血管内皮细胞增殖迁移的功能作用和潜在机制研究

目的 研究神经纤毛蛋白-1（Neuropilin-1,NRP1）在血管内皮细胞（Vascular Endothelial Cells, VECs）增殖迁移中的功能作用及潜在机制。 方法 通过基因干扰腺病毒靶向抑制NRP1的表达,行CCK-8实验研究NRP1下调后对VECs增殖活力的影响,采用流式细胞术研究NRP1下调后对VECs凋亡的影响,行Transwell实验研究NRP1下调后对VECs迁移能力的影响;此外,通过Western Blot检测NRP1下调后对其下游信号通路蛋白表达的影响。 结果 CCK-8实验结果显示下调NRP1表达可抑制大鼠VECs的增殖活力,流式细胞凋亡实验结果显示下调NRP1表达可促进大鼠VECs的凋亡,Transwell实验结果显示下调NRP1表达可抑制大鼠VECs的迁移能力。通过Western Blot检测发现NRP1下调后,下游信号通路蛋白Akt、ERK1/2及NF-kB的磷酸化水平均显著降低。 结论 NRP1可能通过激活PI3K/Akt、MAPK/ERK及NF-kB信号通路促进VECs的增殖与迁移,在静脉桥再内皮化进程中发挥潜在的促进作用。     

IGF-1经AKT通路对人肺癌A549细胞增殖、侵袭与转移的影响

目的探究胰岛素生长因子(IGF)-1能否经蛋白激酶B(AKT)信号通路调节人肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移。方法体外培养人肺癌A549细胞融合至70%～80%,经无血清饥饿过夜,分为对照组、LY294002组、IGF-1组和IGF-1+LY294002组,继续饥饿培养48 h。噻唑蓝(MTT)法、细胞划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western印迹法检测磷酸化(p)-AKT、AKT、基质金属蛋白酶(MMP)-9、小鼠双微体扩增基因(MDM)2和上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达。结果与对照组相比,IGF-1组可明显促进细胞增殖,加速细胞迁移与侵袭,并伴有p-AKT、MMP-2、MDM2蛋白表达增加及E-cadherin蛋白表达降低(P0.05);AKT通路特异性抑制剂LY294002可显著抑制上述作用。结论 IGF-1可能经AKT信号通路上调MMP-9、MDM2蛋白表达并抑制E-cadherin蛋白表达,进而促进人肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移。     

藏红花素通过调控微管蛋白进而影响胃癌细胞MGC-803的增殖、侵袭和凋亡

目的 探讨藏红花素(Crocin)是否通过调控微管蛋白进而影响人胃癌细胞MGC-803的增殖、侵袭和凋亡,以期为胃癌的治疗提供新的思路。方法 使用藏红花素处理MGC-803细胞,并用顺铂作为阳性对照药,观察藏红花素对MGC-803细胞生物学的影响。采用MTT分析细胞活性,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。最后通过蛋白免疫印迹分析藏红花素作用的潜在机制。结果 藏红花素使MGC-803细胞活力、迁移和侵袭能力明显下降,凋亡增加。进一步研究发现,藏红花素对MGC-803细胞的抑制能力与微管蛋白作用密切相关,藏红花素通过降低MGC-803细胞中的微管蛋白表达进而影响其增殖、侵袭和凋亡。结论 藏红花素能够显著抑制MGC-803细胞生长、迁移、侵袭能力,并能促进MGC-803胃癌细胞的凋亡反应。