抑制circRNA ABCB10的表达对结直肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨circABCB10在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学行为、放射敏感性和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法收集2018年1月至2018年12月于河南省人民医院治疗的结直肠癌患者的结直肠癌组织和癌旁正常组织。采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29中circABCB10和miR-217的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力, 克隆形成实验检测放射敏感性, Circular RNA Interactome预测circABCB10下游miRNAs的表达, 双荧光素酶报告基因实验进一步验证, 裸鼠皮下移植瘤实验检测circABCB10对移植瘤生长的影响。结果结直肠癌组织中circABCB10 mRNA的表达水平(3.97±2.12)高于癌旁组织(1.13±0.64, P<0.05)。正常结肠上皮细胞FHC中circABCB10 mRNA的表达水平(1.00±0.09)低于结直肠癌细胞SW480、HCT116、HT29(分别...     

γ-氨基丁酸抑制结直肠癌细胞增殖及其对化疗的增敏作用

目的:通过体内、体外实验,探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)对结直肠癌SW480、HCT116细胞的抑制作用及其与化疗联用的增敏作用.方法:采用CCK-8方法分析GABA及其与抗癌药5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-ru)或奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)联用对结直肠癌SW480、HCT116细胞增殖的影响,流式细胞术分析GABA对SW480、HCT116细胞周期的影响.通过裸鼠成瘤实验观察移植瘤质量和体积,免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织Ki67蛋白的表达,TUNEL染色观察裸鼠结直肠癌细胞的凋亡,体内实验研究GABA与OXA联用对肿瘤细胞生长的影响.结果:100 μmol/L GABA可显著抑制结直肠癌SW480、HCT116细胞的增殖,其抑制率分别为(37.38±2.62)％、(15.54±1.33)％,GABA浓度增加至200 μmol/L时,其抑制作用未见明显增强.GABA使SW480、HCT116细胞S期数量分别减少11.8％及10.7％.GABA与5-FU或OXA联用组对SW480细胞增殖抑制率高于5-FU或OXA组[(72.76±1.07)％ vs (63.82±3.29)％或(65.60±1.19)％ vs (57.09±1.25)％;q=4.079或4.128,P＜0.05],对HCT116细胞增殖抑制率也高于单用5-FU及OXA组[(79.53±1.12)％ vs(69.71±0.09)％或(73.19±0.07)％ vs(64.65 ±1.99)％;g=4.569或4.561,P＜O.05].实验结束时,GABA与OXA联用组小鼠移植瘤质量、体积显著低于对照组和OXA组[(0.20±0.016) vs (0.42±0.039)、(0.36±0.030)g和(250±27)vs(780±60)、(520±46) mm3,均P＜0.01];抑制Ki67蛋白在肿瘤组织的表达、促进肿瘤组织细胞的凋亡.结论:GABA对结直肠癌细胞增殖具有较强的抑制作用,与5-FU或OXA联用可增强化疗效果.     

细丝蛋白A抑制荷人结肠腺癌细胞SW480裸鼠移植瘤的生长

目的:探讨细丝蛋白A(fi lamin A,FLNa)基因对人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:将重组载体质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa通过脂质体介导的方式转染到SW480细胞中,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW480/FLNa细胞中FLNa mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的体外增殖能力。将SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞接种于裸鼠皮下,观察移植瘤的生长情况,计算抑瘤率,HE染色观察移植瘤组织的形态学变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达水平。结果:FLNa基因在SW480细胞中获得稳定表达,SW480/FLNa、SW480/pcDNA3.1和SW480细胞的体外增殖能力相似;SW480/FLNa组移植瘤的生长速度和质量低于SW480组,抑瘤率为(88.7±3.5)%(P=0.000);SW480/FLNa组移植瘤组织出现退变坏死,MMP-9mRNA和蛋白的表达水平(0.11±0.02和0.02±0.00)均低于SW480组(1.12±0.02和1.25±0.05),差异均有统计学意义(P=0.012,P=0.025)。结论:FLNa基因具有抑制人结肠腺癌SW480细胞在裸鼠体内的生长作用,其作用机制可能与下调MMP-9的表达有关。     

过表达缺氧诱导因子-1α的结直肠癌裸鼠可视化模型的建立

目的:建立一种荧光可视化显像且稳定过表达缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的裸鼠结直肠癌移植瘤模型。方法:对不同的人结直癌细胞系(SW480、SW620、LOVO及HCT116细胞)用缺氧诱导剂Co Cl2处理,根据HIF-1α被诱导表达的情况选择合适的靶细胞;将HIF-1α的c DNA序列克隆至慢病毒表达质粒p LV-TRC-EGFP,构建p LVHIF1α-EGFP慢病毒表达质粒,并包装过表达HIF-1α的慢病毒颗粒Lenti-HIF1α-EGFP。将Lenti-HIF1α-EGFP感染SW480细胞,嘌呤霉素筛选稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1α,Western blotting检测SW480HIF-1α细胞内HIF-1α及其下游蛋白VEGF、M1型丙酮酸激酶(pyruvate kinase expression M1,PKM1)的表达情况,Transwell实验检测其迁移能力。裸鼠腹腔注射SW480HIF-1α建立结直肠癌移植瘤模型,倒置荧光显微镜观察裸鼠腹腔移植瘤结节。结果:常氧条件下4种结直肠癌细胞均不表达HIF-1α,经Co Cl2诱导后,除SW480细胞系以外的细胞均可被诱导表达HIF-1α,故选择SW480细胞作为研究靶细胞。成功构建稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1α,SW480HIF-1α细胞内HIF-1α、VEGF和PKM1的表达水平均高于野生型SW480细胞,其迁移能力较野生型SW480细胞显著增强[观察视野内迁移细胞数:(250±11)vs(50±5)个,P<0.01]。SW480HIF-1α组裸鼠肠壁形成肿瘤结节数量显著多于SW480组[(15±4)vs(4±1)个,P<0.05]。结论:成功建立了高表达HIF-1α的荧光可视化裸鼠移植瘤模型,为进一步的相关功能学研究以及药物筛选提供条件。     

shRNA干扰CDX2基因表达对裸鼠结直肠癌肝转移瘤的影响

目的:建立人结直肠癌裸鼠肝转移瘤模型,探讨干扰尾型同源盒基因2(caudal-related homeobox 2,CDX2)基因表达对结直肠癌肝转移瘤的影响.方法:通过慢病毒载体将CDX2-shRNA体外转染人结直肠癌细胞SW480、HT29,筛选建立稳定干扰CDX2基因表达细胞株和阴性病毒细胞株;将稳定干扰CDX2基因表达的结直肠癌细胞(SW480-KD、HT29-KD)、空白对照细胞(SW480-CON、HT29-CON)和阴性对照细胞(SW480-NC、HT29-NC)接种到裸鼠脾下极包膜内,建立裸鼠结直肠癌肝转移瘤模型,每天称量裸鼠体质量并观察其摄食、活动及精神情况;50 d后处死裸鼠,分别从大体水平以及镜下观察肝转移瘤情况.结果:成功构建裸鼠结直肠癌肝转移模型,H-E染色确认为结直肠癌肝转移.各细胞干扰组(SW480-KD、HT29-KD)裸鼠体质量明显低于相应空白对照组和阴性对照组[SW480-KD:(15.02±2.00) vs (18.00±2.48)、(18.03 ±2.05) g;F=3.761,P ＜0.05;HT29-KD:(15.39 ±2.16) vs (17.96 ±2.48)、(18.30±1.87) g;F=3.721,P ＜0.05].SW480-KD组肝转移瘤数目明显多于SW480-CON组和SW480-NC组[(57.83 ±22.56)vs (29.50±16.90)、(28.20±15.40)个;F=4.197,P＜ 0.05];HT29-KD组肝转移瘤数目明显多于HT29-CON组和HT29-NC组[(56.83 ±29.16) vs (26.40±12.76)、(21.00±11.50)个;F=4.467,P＜0.05)].结论:脾注射法裸鼠肝转移模型可作为体内研究基因功能的理想模型;干扰CDX2基因表达可促进结直肠癌SW480和HT29细胞在体内的转移.     

DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。     

香加皮杠柳苷对结肠癌细胞SW480体内外生长的影响

背景与目的： 观察香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae, CPP)对人结肠癌细胞SW480体内外生长的抑制作用。 材料与方法： 应用MTT法检测CPP不同浓度(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 μg/ml)处理SW480细胞后,对细胞增殖的影响;并于CPP (0.5 μg/ml)处理SW480细胞24 h 后用光学显微镜及透射电镜观察细胞凋亡形态学变化;免疫细胞化学检测细胞Survivin蛋白表达变化。采用裸鼠移植瘤模型进行体内移植瘤抑制实验。以上各实验均设立对照组。 结果： 与对照组比较,CPP对SW480细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量和时间依赖效应;CPP 处理SW480细胞后,细胞出现典型的细胞凋亡形态学改变;CPP可明显下调SW480细胞survivin蛋白表达阳性率和表达水平(P<0.01);以30 mg/kg CPP对SW480细胞裸鼠移植瘤进行治疗后,荷瘤小鼠的肿瘤重量和体积均被明显抑制,抑瘤率为61.41％(P<0.01)。CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化。 结论： CPP对人结肠癌细胞SW480的体内外生长均具有明显抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞survivin蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

USP7在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin specific protease 7,USP7）在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响和机制研究。方法:免疫组织化学法检测USP7在结直肠癌组织中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测沉默USP7在SW480细胞中的表达;细胞克隆形成实验检测SW480细胞增殖能力;Transwell迁移实验检测SW480细胞迁移能力;流式细胞术检测SW480细胞的凋亡情况;Western blotting检测Wnt/PCP通路相关蛋白的表达。结果:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达（P＜0.05）;沉默USP7使SW480细胞中USP7的表达降低（P＜0.001）,细胞的增殖和迁移能力下降（P＜0.001）,细胞凋亡率增加（P＜0.001）;与shNC组相比,沉默USP7使Wnt7a蛋白和RhoA蛋白的表达水平显著下调（P＜0.001,P＜0.001）,JNK蛋白磷酸化程度显著降低（P＜0.01）。结论:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达。沉默USP7抑制SW480细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡,可能与Wnt/PCP通路有关。     

进展期结直肠癌合并低白蛋白血症与癌组织中IL-6mRNA表达的相关性研究

[目的]探讨进展期结直肠癌血清IL-6和癌组织中IL-6mRNA与血清白蛋白水平变化的关系。[方法]63例患者按血清白蛋白浓度是否≥35g／L分成两组，低白蛋白血症组38例，白蛋白正常组25例，使用ELISA法检测患者血清中IL-6浓度，RT—PCR方法检测癌组织中IL-6mRNA表达水平。[结果]进展期结直肠癌血清中低白蛋白血症组血清IL-6浓度和癌组织中IL-6mRNA表达水平（2．84±1．53pg／ml1．39±0．49）明显高于血清白蛋白正常组（1．71±1．13pg／ml0．62±0．40）P〈0．011，且癌组织中IL-6mRNA表达水平与血清白蛋白水平呈负相关，与血清IL-6水平正相关。[结论]进展期结直肠癌的血清白蛋白浓度下降与血清IL-6等细胞因子参与的急性炎症反应密切相关。癌组织高表达IL-6mRNA水平是导致血清IL-6浓度增高的重要因素。     

ANXAl1表达稳定下调小鼠肝癌Hca-F细胞株的构建

目的：构建膜联蛋白A11（annexinA11,ANXAll）稳定下调的小鼠肝癌高淋巴转移力细胞株Hca—F。方法：合成2条针对ANxAll的发夹RNA（shorthairpinRNA,shRNA）序列shRNAl和shRNA2,连接到pGPU6／GFP／Neo质粒中,并转染到Hca—F细胞,获得了稳定转染的pGPU6／GFP／Neo—ANxAll-Hca—F细胞株。通过有限稀释法筛选单克隆细胞,并利用RT—PCR和蛋白质印迹法验证ANXAll的表达变化。结果：成功构建了pGPU6／GFP／Neo—ANXAll重组表达质粒,并筛选出单克隆细胞;RT—PCR及蛋白质印迹法检测结果表明,与空白对照组比较,重组质粒pGPU6／GFP／Neo—A1l—Hca—F-1和2在mRNA水平,对ANXAll干扰率分别为（27．3±5．9）％和（58．3±12．4）％,P=0．001;在蛋白质水平,对ANXAll的下调率分别l为（57．4±4-0．9）％和（87．1±6．1）％,P〈0．001;shRNA-2对ANXAll的表达抑制效果更为显著,P〈0．001。结论：成功建立了ANXAll表达稳定下调的小鼠肝癌Hca—F细胞株,为进一步研究ANXAll在淋巴转移中的作用奠定前期基础。     

人胎盘提取物抑制结肠癌细胞的增殖及迁移

目的:探讨人胎盘提取物(human placenta extracts,HPE)对人结肠癌细胞株Caco-2及SW480增殖和迁移能力的影响.方法:用不同质量浓度HPE处理Caco-2和SW480细胞,CCK-8、Ki-67、CFSE法检测细胞增殖活性的变化,Annexin-V/PI及DAPI细胞核染色检测HPE对细胞周期及凋亡的影响,实时荧光定量PCR法检测HPE对细胞中BAX、CDK2及CyclinA2基因表达的影响,划痕实验检测对细胞迁移能力的影响.建立裸鼠结肠癌移植瘤模型,随机分组分别单独或联合给予HPE和5-氟尿嘧啶(5-Fu),观察裸鼠移植瘤的生长状况.结果:HPE处理组Caco-2及SW480细胞增殖能力低于对照组[(0.82±0.01) vs (0.96±0.02),P＜0.01;(0.90±0.03) vs (0.96±0.02),P＜0.05],细胞凋亡率高于对照组[(20.47±1.32)％ vs(11.01±3.82)％,P＜0.01;(20.70±5.19)％ vs (8.00±2.69)％,P＜0.05];HPE处理组细胞胞质减少、核固缩、BAX基因表达增加[(3.23±1.90)vs(1.00±0.00),(2.25 ±0.55) vs (1.00±0.00),均P＜0.05];细胞停留在细胞DNA复制S期,出现凋亡峰;Caco-2细胞CDK2及CyclinA2基因表达降低(P＜0.05);并且细胞的迁移能力低于对照组[(0.17 ±0.29) vs (1.50±0.50)mm,P＜0.05].HPE处理组裸鼠移植瘤体积小于对照组、生存率高于单用5-Fu组(P＜0.05).结论:HPE在体内外通过干预结肠癌细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,可能对抑制肿瘤细胞增殖有一定作用.     

IL-17A通过NF-κB通路介导MMP-2/9表达促进结肠癌SW480细胞迁移和侵袭

目的:探讨IL-17A对结肠癌细胞株SW480侵袭、迁移的作用及其机制.方法:体外培养结肠癌SW480细胞,分为实验组(IL-17A50 ng/ml)及对照组(空白组).通过细胞划痕实验观察细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting检测细胞MMP-2/9蛋白及PI3k/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达水平.结果:经50 ng/ml的IL-17A处理后,(1)SW480细胞的迁移距离及穿膜细胞数目均明显增加[(2.49±0.18) vs (1.54±0.21) mm及(262.00±24.60)vs (92.00 ±31.16)个,均P＜0.05];(2) SW480细胞MMP-2/9蛋白水平明显上调[(0.41 ±0.05) vs (0.23 ±0.03)及(0.76±0.09) vs (0.25±0.04),均P＜0.05];(3) SW480细胞AKT磷酸化水平表达增加[(0.72±0.1)vs(0.28±0.04),P＜0.05],P65和P50蛋白表达水平明显升高[(0.78 ±0.10) vs (0.35 ±0.04)和(0.85±0.15) vs (0.44±0.06),均P＜0.05],而c-Rel、ReLB和P52蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论:IL-17A诱导结肠癌SW480细胞迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT/NF-κB转导通路、调节MMP-2/9蛋白表达有关.     

蜂胶黄酮PB3A对人大肠癌SW480细胞株CXCL1和FOS基因表达的影响

目的 探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)处理SW480细胞后CXCL1和FOS基因表达的改变及其与PB3A抑制人大肠癌细胞增殖的关系.方法 采用实时荧光定量RT-PCR和Westernblot法检测PB3A(100 mg/L)处理24小时后SW480细胞的CXCL1和FOS基因转录和蛋白质表达水平.结果 药物干预诱导CXCL1基因的mRNA转录水平下调,差异倍数为0.03(△CT比较,P＜0.01),蛋白质表达强度也降低(0.24±0.03)与非干预的对照组(0.52±0.04)比较表达水平差异有统计学意义(P＜0.01);药物干预诱导FOS基因的mRNA转录水平上调,差异倍数为13.64(△CT比较,P＜0.01),蛋白质表达水平也升高(1.43±0.16),与非干预的对照组(0.58±0.07)比较表达水平差异有统计学意义(P＜0.01).结论 蜂胶黄酮PB3A抗人大肠癌细胞的作用可能与其下调CXCL1基因和上调FOS基因的表达有关.     

肠癌小鼠高血糖下的血清胰岛素样生长因子-1变化及瘤体血管内皮生长因子表达

 目的　观察小鼠肠癌移植瘤在高血糖下的生长并检测瘤体血管内皮生长因子（VEGF）表达以及血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的变化情况,探讨2型糖尿病（T2DM）是否为促进结直肠癌的发生与进展的危险因素。方法　建立肠癌移植瘤合并T2DM的小鼠模型,观察移植瘤体积大小变化,5周末处死小鼠检测血清IGF-1及瘤体组织VEGF表达。结果　肠癌糖尿病组小鼠瘤体体积[（1628.5±882）mm3]大于肠癌组小鼠瘤体体积[（1950.2±726）mm3]（P＜0.05）,其血清IGF-1[（105.33±32.32）ng／ml]高于正常组[（69.83±25.57）ng／ml]及肠癌组小鼠[（70.17±25.27）ng／ml]（P＜0.05）,瘤体组织VEGF表达[（70.0±11.5）%]强于肠癌组[（42.9±7.5）%]（P＜0.05）。结论　T2DM可能为促进肠癌生长的原因之一,其可能机制与血液中升高的IGF-1作用有关,并通过诱导VEGF基因转录,上调VEGF的表达,促使肿瘤组织血管生成,从而导致肿瘤的发生和转移有关。     

沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi a-mannosidase Ⅱ,GM Ⅱ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响.方法:为沉默GM Ⅱ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照质粒表达载体.应用LipofectAMINE2000将质粒转染入BGC-823细胞.分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后GM Ⅱ mRNA和蛋白表达的变化,选出沉默效果最佳的质粒.应用Transwell侵袭实验和划痕损伤实验分别检测GM Ⅱ基因沉默对人胃癌细胞BGC-823侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Nco-1303沉默GM Ⅱ基因的效果最好.转染pGPU6/GFP/Neo-1303组穿透小室基质的细胞数明显少于空白对照组和转染阴性对照组(P＜0.05).无血清培养液培养24 h后,转染pGPU6/GFP/Neo-1303组细胞的迁移能力较空白对照组和转染阴性对照组明显降低(P＜0.05).结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌BGC-823细胞中GMⅡmRNA和蛋白的表达,从而抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力.GM Ⅱ可能成为胃癌治疗的新靶点之一.     

吉西他滨对卵巢癌移植瘤小鼠的免疫调节作用

目的:观察吉西他滨(gemcitabine,GEM)对卵巢癌移植瘤小鼠肿瘤免疫微环境的调节作用.方法:C57BL/6小鼠皮下注射卵巢癌ID8细胞构建卵巢癌移植瘤模型,实验组腹腔注射GEM,对照组注射生理盐水,观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测小鼠脾脏及肿瘤组织的调节性T细胞(regulatoryT cells,Treg)及髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),实时定量PCR检测小鼠肿瘤组织arginase-1(Arg-D和Foxp3 mRNA的表达,流式细胞仪检测小鼠脾脏CD8+T细胞的比例,ELLSE法检测小鼠血清IFN-γ及IL-2的表达.结果:GEM处理后的移植瘤小鼠肿瘤生长明显受到抑制[(366.8±44.88) vs (499.3±24.14)mm3,P＜0.01].移植瘤小鼠肿瘤组织及脾脏Treg比率明显降低[(12.71±2.31)％ vs (20.36±2.65)％、(10.09±1.69)％ vs (13.79±1.31)％,均P＜0.01].实验组的相关基因mRNA表达较对照组显著降低[Foxp3:(4.30±0.46)vs (6.35±0.58);Arg-1:(16.32±0.38)vs(13.26±0.37);均P＜0.01].实验组血清中的IFN-γ和IL-2含量明显高于对照组[IFN-γ:(71.90±2.28)vs (53.91±3.91) pg/ml;IL-2:(51.46±1.69)vs (40.90±1.50) pg/ml,均P＜0.01].结论:GEM下调卵巢癌移植瘤小鼠免疫抑制活性,并可上调小鼠抗肿瘤免疫原性,该结果可为GEM作为卵巢癌免疫治疗干预措施提供实验依据.     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL内源mdr1基因对细胞增生的影响

目的构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的mdr1基因的短发夹状RNA重组质粒,研究其沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL内源mdr1基因对细胞增生的抑制作用。方法运用基因克隆技术构建靶向于mdr1基因的重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3／TAXOL,CCK-8检测对SKOV3／TAXOL细胞增生的抑制作用。结果构建的重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1能明显抑制mdr1基因的表达。CCK-8检测结果表明,转染重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1的SKOV3／TAXOL靶细胞的抑制率比对照组显著提高（P〈0．05）。pGPU6／GFP／Neo—mdr1明显抑制SKOV3／TAXOL细胞的增生。细胞凋亡检测显示,pGPU6／GFP／Neo—mdr1转染SKOV3／T后细胞凋亡增加,通过pGPU6／GFP／Neo—mdr1转染SKOV3／T促进凋亡的发生。结论mdr1基因在耐药的卵巢癌细胞增生与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pGPU6／GFP／Neo—mdr1可有效地抑制SKOV3／TAXOL细胞内源mdr1基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增生和促进凋亡的发生,     

TIZ基因mRNA在卵巢癌细胞系中的表达及其RNA干扰载体构建

目的检测卵巢癌细胞株中TIZ基因的mRNA表达水平,并构建TIZ基因的特异性RNA干扰（RNAi）载体。方法通过RT-PCR方法检测卵巢癌细胞系（SKOV3、SKOV3顺铂耐药细胞、SKOV3卡铂耐药细胞、A2780、A2780卡铂耐药细胞、H08910）中TIZmRNA的表达;根据Genebank上TIZ的mRNA序列,设计5对siRNA干扰片段,采用脂质体转染法介导siRNA干扰片段并下调卵巢癌细胞系中TIZmRNA的表达。采用pTG19-T质粒构建TIZ和β-actintmRNA表达重组质粒并制备其标准品。采用实时定量PCR（QRT—PCR）检测siRNA干扰片段对TIZ基因的下降效率,并筛选最佳siRNA干扰片段。以pGPU6／GFP／Neo载体和质粒DNA测序方法构建pGPU6／GFP／Neo-siRNA—TIZ-573重组质粒。结果①除卵巢癌细胞H08910细胞无TIZ基因mRNA表达外,其余细胞均有TIZ基因mRNA表达。②细胞siRNA干扰片段筛选结果显示介导TIZ-573片段后可下调60％细胞TIZmRNA表达。③成功构建了TIZ基因RNAi载体pG-PU6／GFP／Neo-TIZ-573。结论多数卵巢癌细胞系表达TIZmRNA。siRNA-TIZ-573为最佳下调细胞TIZmRNA片段。构建的pGPU6／GFP／Neo-TIZ-573重组质粒可用于下一步的实验研究。