泰素帝合并PDTC对PC-3细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的探讨泰素帝合并PDTC对PC-3人前列腺癌细胞的杀伤效应及机制。方法应用流式细胞术、RT-PCR、免疫细胞化学方法,观察不同处理后PC-3细胞凋亡率及NF-κB表达的改变。结果PDTC组PC-3细胞凋亡率和死亡率分别为12%和6.8%,泰素帝组为12.5%和7.2%,两药合并后,凋亡率和死亡率分别增加为25.5%和11.5%;泰素帝有促进NF-κB表达和向核内转移作用;PDTC对NF-κB表达及核转位具有抑制作用;两者合并,NF-κB表达量及核转位减少,与单独PDTC相近。结论泰素帝与PDTC均能诱导PC-3细胞凋亡,并且两者具有协同作用,其机制可能与PDTC拮抗泰素帝的激活NF-κB效应有关。     

不同浓度的PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB表达的影响

目的探讨不同浓度的PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB表达的影响。方法按照不同浓度的PMA及PDTC作用对纯化培养的大鼠星形胶质细胞进行分组,各组分别作用不同时间点后,运用免疫细胞化学方法进行NF-κB蛋白表达测定,进行干预因素和蛋白表达结果的相关分析。结果 PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB的活化和抑制作用呈现剂量与时间依赖性,24h达高峰。结论可采用PMA及PDTC创建星形胶质细胞NF-κB蛋白不同水平表达模型。     

NF-κB、MMP-9在宫颈癌细胞中的表达及意义

目的 探讨核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)及基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)-9在两种宫颈癌siha、caski细胞中的表达及意义.方法 采用免疫细胞化学法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测两种宫颈癌细胞及其上清液中NF-κB及其下游调控基因MMP-9的蛋白表达.结果 NF-κB、MMP-9在宫颈癌细胞中均有表达,与siha细胞相比,两者在肠转移的caski细胞中及其上清液中的表达较高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在宫颈癌细胞中存在有NF-κB及其下游基因MMP-9的高表达,提示其可能在宫颈癌发生发展及转移中起重要作用.     

黄芩素对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的影响及其相关机制

目的 探讨黄芩素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、转移的影响及相关分子机制.方法 将对数生长期MDA-MB-231细胞随机分为对照组和20、40、80、160μmol·L-1黄芩素处理组,分别给予0、20、40、80、160μmol·L-1黄芩素干预;采用划痕愈合实验检测各组MDA-MB-231细胞的转移能力,T...     

PDTC对缺血再灌注复合内毒素血症所致急性肝损伤的保护作用

目的:探讨PDTC对肝脏缺血再灌注复合内毒素血症(HIRE)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制. 方法:Wister大鼠40只随机分为:HIRE组, PDTC保护(HIRE PDTC)组. HIRE组阻断肝左叶及肝中叶的入肝血流60 min后再灌注,再灌注时自阴茎背iv大肠杆菌内毒素(LPS) 2.5 mg/kg,PDTC组先经阴茎背iv PDTC 120 mg/kg后立即按HIRE组致伤. 分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后 1, 3, 6, 12 h NF-κB活性及TNF-α表达,并用赖氏法检测血浆中ALT含量. 结果:损伤后NF-κB结合活性明显升高,并于再灌注后3 h达到高峰,TNF-α表达增加,同时血浆中ALT含量亦明显升高,PDTC保护组NF-κB活性减弱,TNF-α表达减弱,ALT水平降低. 结论:PDTC能通过抑制NF-κB的激活,减少致炎因子的基因表达与合成释放,减轻炎细胞浸润,从而对HIRE所致ALI起到保护作用.     

氨氯地平对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭影响的体外实验

目的 探讨氨氯地平对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231体外侵袭的影响及其相关机制.方法 用8.34 μmol/L氨氯地平处理肿瘤细胞,以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)观察氨氯地平对MDA-MB-231细胞侵袭的影响;免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix met-allo-proteinaae,MMP-9)的表达.结果 8.34 μmol/L的氨氯地平可显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力,侵袭抑制率为36.27%;免疫细胞化学检测结果显示,MMP-9和VEGF蛋白的表达在MDA-MB-231细胞中亦明显降低.结论 氨氯地平对MDA-MB-231细胞体外侵袭具有明显的抑制作用,此作用与降低肿瘤细胞的MMP-9和VEGF的表达有关.     

山茱萸提取物对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和转移的抑制作用及机制研究

目的探讨山茱萸提取物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭和转移的抑制作用及机制。方法设MDA-MB-231细胞组、顺铂组(100.0μg/mL)、山茱萸提取物低剂量组(100.0μg/mL)、高剂量组(200.0μg/mL);以上各组每孔设6个平行样,培养72h。培养结束后,MTT法测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,刮擦伤口愈合试验测定细胞迁移,Transwell室测定细胞侵袭,RT-PCR法及Western blot法测定胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)基因和蛋白水平。结果与MDA-MB-231细胞组比较,顺铂组、山茱萸提取物低、高剂量组人乳腺癌MDA-MB-231细胞吸光度(OD值)[(0.34±0.02)、(0.62±0.04)、(0.18±0.04)比(0.91±0.03)]、存活率[(25.54±0.15)%、(44.65±1.35)%、(16.41±2.36)%比(93.54±0.24)%]、单克隆形成数目[(186.63±12.65)个、(325.98±17.65)个、(108.63±12.63)个比(715.63±15.63)个]、迁移率[(45.63±9.65)%、(63.25±8.99)%、(23.96±11.32)%比(85.65±10.32)%]、穿膜数[(105.63±32.54)个、(298.63±28.65)个、(54.96±16.66)个比(542.63±29.65)个]、IGF-1R、Akt mRNA [(1.62±0.16)、(3.59±0.21)、(1.11±0.18)比(6.54±0.18),(1.48±0.19)、(3.69±0.21)、(0.89±0.25)比(5.69±0.14)]和蛋白[(1.89±0.19)、(3.62±0.15)、(1.24±0.23)比(6.99±0.18),(2.65±0.23)、(3.49±0.18)、(1.05±0.24)比(6.36±0.19)]表达降低(P<0.05)。与顺铂组比较,山茱萸提取物低剂量组人乳腺癌MDA-MB-231细胞OD值[(0.62±0.04)比(0.34±0.02)]、存活率[(44.65±1.35)%比(25.54±0.15)%]、单克隆形成数目[(325.98±17.65)个比(186.63±12.65)个]、迁移率[(63.25±8.99)%比(45.63±9.65)%]、穿膜数[(298.63±28.65)个比(105.63±32.54)个]、IGF-1R、Akt mRNA [(3.59±0.21)比(1.62±0.16)、(3.69±0.21)比(1.48±0.19)]和蛋白[(3.62±0.15)比(1.89±0.19)、(3.49±0.18)比(2.65±0.23)]表达升高(P<0.05),山茱萸提取物高剂量组OD值[(0.18±0.04)比(0.34±0.02)]、存活率[(16.41±2.36)%比(25.54±0.15)%]、单克隆形成数目[(108.63±12.63)个比(186.63±12.65)个]、迁移率[(23.96±11.32)%比(45.63±9.65)%]、穿膜数[(54.96±16.66)个比(105.63±32.54)个]、IGF-1R、Akt mRNA[(1.11±0.18)比(1.62±0.16)、(0.89±0.25)比(1.48±0.19)]和蛋白[(1.24±0.23)比(1.89±0.19)、(1.05±0.24)比(2.65±0.23)]表达降低(P<0.05)。与山茱萸提取物低剂量组比较,山茱萸提取物高剂量组OD值[(0.18±0.04)比(0.62±0.04)]、存活率[(16.41±2.36)%比(44.65±1.35)%]、单克隆形成数目[(108.63±12.63)个比(325.98±17.65)个]、迁移率[(23.96±11.32)%比(63.25±8.99)%]、穿膜数[(54.96±16.66)个比(298.63±28.65)个]、IGF-1R、Akt mRNA[(1.11±0.18)比(3.59±0.21)、(0.89±0.25)比(3.69±0.21)]和蛋白[(1.24±0.23)比(3.62±0.15)、(1.05±0.24)比(3.49±0.18)]表达降低(P<0.05)。结论山茱萸提取物对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭、转移具有明显抑制作用,200.0μg/mL的山茱萸提取物效果尤为明显;其机制可能与山茱萸提取物抑制IGF-1R、Akt mRNA和蛋白的表达进而抑制IGF-1R/Akt信号通路的激活有关。     

TM4 SF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移及EMT的影响

目的:探讨四次跨膜蛋白1(TM4SF1)在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用和可能机制.方法:合成靶向TM4SF1的siRNA并转染MDA-MB-231细胞(TM4SF1 siRNA组),以转染阴性对照siRNA细胞和未转染细胞为对照.用CCK-8实验、Transwell实验检测3组细胞增殖和侵袭转移能力;采用Western ...     

丙泊酚下调H19抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭

目的观察丙泊酚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞H19表达量的变化及其对迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养人乳 腺癌MDA-MB-231 细胞,随机分为空白对照组（C组）,DMSO组（S组）,25 μmol/L 丙泊酚组（P1 组）,50 μmol/L 丙泊酚组（P2 组）,100 μmol/L丙泊酚组（P3组）。分别采用RT-PCR（TaqMan探针法）、划痕实验和Transwell小室法,检测丙泊酚对各组细胞 H19 表达量、细胞运动能力、细胞迁移和侵袭能力的影响。结果不同浓度的丙泊酚（25、50、100 μmol/L）处理24 h 后, MDA-MB-231 细胞的H19 表达量下调率分别为：17.83%、37.50%、63.67%（P<0.05）;细胞运动能力抑制率分别为：13.46%、 36.54%、46.17%（P<0.05）;细胞迁移抑制率分别为：27.93%、57.90%、76.51%（P<0.05）;细胞侵袭抑制率分别为：25.72%、 53.32%、81.43%（P<0.05）。结论丙泊酚可下调人乳腺癌MDA-MB-231细胞H19的表达,抑制其迁移和侵袭进程。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸铵的定性与定量分析

目的建立抗结核病新药吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）的定性鉴别与定量分析方法。方法以化学法、紫外光谱（UV）法、红外光谱（IR）法和高效液相色谱（HPLC）法结合对照品进行定性鉴别,采用HPLC法测定PDTC合成产品的质量分数。结果 PDTC水溶液有特征的硫取代显色反应。PDTC 50%（体积分数）甲醇溶液在255、278 nm波长处有最大吸收,在225 nm波长处有最小吸收。PDTC在3 250、2 500 cm-1间出现VSH较强的宽峰,在1 716 cm-1附近为VCS较弱的宽峰。以PDTC对照品为对照,进行PDTC合成产品定量分析,在25.75-206.00μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 8）,低、中、高3个水平的平均加样回收率分别为100.09、100.06%、100.10%,RSD分别为0.59%、1.47%、0.58%（n=3）。结论建立的定性鉴别和定量分析方法准确、可靠、重复性好,可用于PDTC合成产品的质量控制。     

超氧阴离子和细胞外信号调节激酶在金雀异黄素抑制人乳腺癌细胞浸润中作用的研究

目的:研究金雀异黄素对乳腺癌细胞(MDA-MB-231)浸润能力的影响及其可能机制?方法:不同浓度的金雀异黄素(25~100 μmol/L) 孵育MDA-MB-231细胞24 h,用Transwell assay检测细胞浸润能力;用免疫印迹法比较细胞内磷酸化和总细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白含量的改变;用免疫荧光实验检测细胞内磷酸化ERK的分布;用DHE染色及荧光显微镜检测细胞内超氧阴离子水平?结果:金雀异黄素处理使细胞浸润能力降低;同时,金雀异黄素的处理引起细胞内磷酸化ERK量明显降低,且磷酸化ERK在核内含量明显下降;ERK抑制剂U0126作用于细胞亦能明显降低细胞的浸润能力;金雀异黄素处理还能使细胞内超氧阴离子含量明显下降,超氧阴离子清除剂TEMPOL不仅明显抑制磷酸化ERK含量,同时细胞浸润能力也明显降低?结论:金雀异黄素可能通过抑制乳腺癌细胞的超氧阴离子水平和ERK活性,进而抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的浸润能力?     

吡咯烷二硫氨基甲酸对小鼠大剂量顺铂肾毒性损伤的防治作用

[目的]探讨抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对大剂量顺铂(cisplatin,DDP)所致肾毒性损伤的防治作用.[方法]昆明种小鼠100只,雌雄各半,依体重随机分为DDP组,DDP+PDTC组,生理盐水(NS)对照组.DDP 12 mg/kg单次腹腔内注射,PDTC 50 mg/kg每日皮下注射1次,连用3 d,等量NS对照.每组取10只小鼠,观察并记录其用药后的反应、体重变化及存活时间;分别取对照组小鼠和DDP用药后24、48、72 h的DDP组和DDP+PDTC组小鼠各10只,内眦静脉取血检测肾脏功能,然后剖腹取两侧肾脏,称重并计算肾系数,统计学分析. [结果]DDP用药后24 h,DDP用药组小鼠体重下降、肾系数增高;用药后48 h,小鼠血尿素氮、肌酐含量明显升高;用药72 h 66%小鼠死亡,与对照组小鼠比较差异具有显著性意义(P<0.01).PDTC可明显减轻DDP所致小鼠的体重下降,并能有效预防DDP用药后小鼠血尿素氮和肌酐的升高,明显提高小鼠的生存率,与DDP用药组小鼠比较差异具有显著性意义(P<0.01).[结论]PDTC可改善小鼠DDP用药的毒副作用,预防大剂量DDP所致的肾损伤.     

吡咯烷二硫氨基甲酸酯对犬体外循环中红细胞的保护作用

目的研究犬体外循环(CPB)中吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)对红细胞的保护作用。方法将12只犬随机分为对照组(n=6)和PDTC组(n=6),建立CPB模型。PDTC组于CPB前静脉注射PDTC30mg/kg,对照组于CPB前静脉注射等量生理盐水。分别于CPB前、阻断30min、阻断60min、开放30min和开放60min时测定血浆白细胞介素(IL)-lβ、IL-8、游离血红蛋白(F-HB)、丙二醛(MDA)、红细胞三磷酸腺苷(E-ATP)和红细胞超氧化物歧化酶(E-SOD)水平。结果阻断后各时间点对照组的血浆IL-lβ和IL-8水平均显著高于CPB前(P<0·01),PDTC组开放后血浆IL-lβ和IL-8水平显著高于CPB前(P<0·05,P<0·01);两组血浆MDA和F-HB水平均显著高于CPB前(P<0·01);两组E-ATP和E-SOD水平均显著低于CPB前(P<0·01)。PDTC组CPB后E-ATP水平和E-SOD活性显著高于对照组(P<0·01),而血浆IL-lβ、IL-8、MDA含量和F-HB浓度均显著低于对照组(P<0·01)。结论PDTC通过减轻CPB期间脂质过氧化反应和炎性反应对红细胞起到一定的保护作用。     

miRNA-4465过表达对乳腺癌 MDA-MB-231细胞迁移侵袭的影响及其机制

目的：探讨 miRNA-4465的过表达对乳腺癌 MDA-MB-231细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法将 miR-NA-4465的模拟物（minics）转染入 MDA-MB-231细胞,通过实时定量 PCR 检测 miRNA-4465的表达变化;运用 Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的改变。采用生物信息学技术预测 miRNA-4465的潜在靶基因,并通过荧光报告载体实验及 Western blot 加以证实。结果与阴性对照组相比,转染 miRNA-4465 minics 组 miRNA-4465表达水平明显升高（P ＝0．001）。Transwell 迁移实验结果显示转染 miR-NA-4465 minics 组细胞迁移能力减弱（P ＝0．001）;Transwell侵袭实验结果显示转染 miRNA-4465 minics 组细胞侵袭能力降低（P ＝0．010）。通过生物信息学技术预测了 EZH2为miRNA-4465的潜在靶基因;荧光报告载体实验结果显示转染 miRNA-4465 minics ＋psiCHECK2-EZH23’UTR（野生型）后荧光素酶活性较转染阴性对照序列（NC）＋psiCHECK2-EZH23’UTR（野生型）降低66％（P ＝0．001）。此外将 miR-NA-4465转染入 MDA-MB-231细胞后 EZH2蛋白表达降低。结论 miRNA-4465能降低 MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力,这个过程可能是通过调控 EZH2基因的表达实现的。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷在重症胰腺炎肺损伤中的作用

目的:观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对重症胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的作用并探讨其机制.方法:Wistar大鼠40只,逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型.观察血清淀粉酶、动脉血氧分压(PaO2)、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、支气管肺泡灌洗液(BALF)白蛋白含量;胰腺和肺组织病理变化及核因子-κB(NF-κB)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在肺组织中的表达.结果:PDTC组较SAP组血清淀粉酶显著下降,PaO2明显升高,胰腺、肺组织病理损伤减轻,BALF白蛋白含量[PDTC组(17.28±2.55)mg/ml,(16.53±3.08)mg/ml;SAP组(23.56±0.94)mg/ml]和MPO活性[PDTC组(9.18±1.70)U/g,(8.69±2.06)U/g;SAP组(13.29±3.36)U/g]明显下降,同时肺组织NF-κB和iNOS表达下调,P均＜0.05.结论:PDTC对SAP大鼠肺损伤有一定的治疗作用,其机制与其抑制NF-κB活化、抑制中性粒细胞等多种炎性细胞的活化和调控iNOS基因的表达进而抑制一氧化氮的过量生成有关.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸对食管癌细胞系EC1增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对食管癌细胞系EC1增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:用不同剂量PDTC(1、5、10、50、100 μmol/L)处理EC1细胞24、48和72 h后,MTT法观察细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率.用不同剂量PDTC(0、5、10、50、100 μmol/L)处理EC1细胞48 h后,测定细胞凋亡率和细胞周期.结果:PDTC可剂量依赖性和时间依赖性地抑制EC1细胞的增殖(F剂量=8.950,P=0.005;F时间=30.718,P<0.001;F交互=60.504,P<0.001).不同剂量PDTC作用48 h后,随着PDTC剂量的增加,EC1细胞凋亡率增加(F=7.020,P=0.001),G0/G1期细胞比例降低(F=771.064,P<0.001),G2/M和S期细胞比例增加(F=963.002、309.332,P均<0.001).结论:PDTC可以抑制食管癌细胞系EC1的增殖,诱导其发生凋亡,并将其阻滞在S期.     

体外循环中应用吡咯烷二硫氨基甲酸酯对犬心肌能量代谢的影响

目的 观察抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)对犬体外循环(CPB)中心肌能量代谢的影响.方法 12只犬随机分为对照组(C组,n=6)和PDTC组(P组,n=6),腹腔内注射戊巴比妥钠25 mg/kg麻醉后建立CPB心肌缺血再灌注模型.P组于CPB前静脉注射PDTC 30mg/kg,C组静脉注射等量生理盐水.分别于CPB前、阻断主动脉60 min和开放主动脉60min时,取心肌测定腺苷酸(ATP、ADP、AMP、TAN、EC)、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)和线粒体肿胀度(MSD).于CPB前、开放主动脉30min和开放主动脉60min时测定心率(HR)、平均动脉压(MAP)和心输出量(CO).结果 与CPB前比较,两组阻断升主动脉后ATP、TAN、EC含量及T-AOC均降低(P＜0.01),MSD和MDA含量均升高;开放主动脉后C组ATP、TAN、EC含量及T-AOC均降低(P＜0.01),MSD和MDA含量均升高(P＜0.01);P组在开放主动脉60min时ATP、TAN、EC、MDA含量、T-AOC和MSD差异无统计学意义(P＞0.05).P组在阻断主动脉60 min时和开放主动脉后ATP、TAN、EC含量及T-AOC均显著高于C组(P＜0.01).MSD和MDA含量均显著低于C组(P＜0.01).P组在开放主动脉30 min和开放主动脉60 min时HR、MAP和CO较C组恢复迅速(P＜0.01).结论 CPB可引起心肌能量代谢受损及恢复延迟,PDTC能够明显改善缺血心肌的能量代谢,保护心肌线粒体的结构,从而减轻心肌缺血冉灌注损伤.