紫外线照射消除PCR技术外源性DNA污染

聚合酶链反应（PCR）最大优点是高度灵敏性，但也极易网微量污染而产生假阳性，因此，避免和消除污染已引起人们的重视(1)。我们采用紫外线照射法与传统的消毒方法进行比较，证实紫外线照射法可有效避免外源性DNA污染引起的假阳性，并指出传统的消毒方法，不能有效避免污染的发生。1材料和方法1.1污染标本的制作模板DNA阳性对照及1：32滴度HBSAg阳性血清进行不同浓度的稀释，取3PI加入PCR测定管，自然晾干。1．2仪器和试剂480型DNA扩增仪（由美国PE公司生产），乙肝病毒PCR试剂盒（由西安拜奥医用生物工程公司提供），“84”消毒…     

γ线照射引起哺乳动物细胞DNA单链断裂与重接的研究

本文应用Kohn碱洗脱法对⁶⁰Coγ线照射引起的中屠田鼠肺纪胞(CHL)和615小鼠的离体脾细胞DNA单链断裂和再接进行了研究。结果表明,两种细胞DNA单链断裂的程度与照射剂量均呈线性相关。CHL细胞单链断裂的重接修复包含有快修复和慢修复两个过程,其重接修复的速度和数量与照射剂量呈负相关。离体小鼠脾细胞在不加血清的RPMll640培养液中其DNA断链未见重接修复。怛在此培养液中脾细胞却能进行DNA生物台成,表明牌细胞在进行这两个生物学过程中需要的培养条件有异.     

毛乳头细胞凝集性生长与细胞DNA合成的研究

目的 了解毛乳头细胞凝集性生长状态对细胞DNA合成的影响。方法 通过培养的毛乳头细胞诱导形成凝集性生长状态后，进行^3H-TdR掺入，放射显影观察细胞DNA合成情况。结果 细胞凝集性生长区DNA合成功能较非凝集性生长区明显增强。结论 毛乳头细胞呈凝集性生长后，其增殖能力增强，活性增加。     

受小剂量射线连续照射的小鼠外周血淋巴细胞DNA合成及UDS的改变

小鼠受小剂量⁶⁰Coγ射线连续的恒定剂量率照射l0天,累积剂量分别为46.2、59.4、96.8、162.8和255.2rad。照后用UDS(Unscheduled DNA Synthesis)为指标研究了小鼠外心血淋巴细胞DNA修复能力的变化,前两个剂量组UDS值升高为对照值的8倍以上。而后三个剂量组降低为对照值0.68或以下。另外测定了DNA半保留合成(Semiconsotvative DNA Synthesis),发现所有剂量组均明显降低为对照值的30～55%。     

电离辐射对哺乳动物细胞DNA合成的抑制作用

一、前言四十多年来,哺乳动物细胞DNA合成的辐射效应一直吸引着放射生物学家们。人们普遍认为:电离辐射对DNA合成抑制的剂量反应曲线可分两相,即低剂量时的陡相和高剂量时的平相。但对此无统一解释。 1963年,Coirns证明大肠杆菌所有的DNA是约3000kb的单一大分子,整个分子由一个复制点复制,由于把这一概念引入到哺乳动物模型,致使把哺乳动物细胞的研究工作引向歧途。后来,人们应用放射自显影及平衡密度梯度技术证明了哺乳动物细胞复制子量多(约10~5)而小(20～100kb),从而奠定了实验工作的基础,促进了对双向剂量反应曲线的更全面地了解。     

Υ线对两株不同辐射敏感性细胞DNA合成的影响

通过检测两株不同辐射敏感性细胞γ线照射后DNA合成的水平,发现电离辐射敏感细胞SX-9的DNA合成抑制程度明显低于对辐射较不敏感的野生型细胞SR-1,而且前者受低剂量照射的影响程度显著低于后者,2Gy照射后SX-9细胞DNA合成的恢复率亦快于SR-1细胞。     

DNA损伤修复与细胞凋亡

细胞ＤＮＡ的损伤修复是影响细胞存活和死亡的主要原因，细胞缺乏修复能力，其辐射敏感性就会增加。近年来，ＤＮＡ损伤修复的机制已被逐步阐明。本文介绍了ＤＮＡ损伤修复和细胞凋亡发生和机制及其与细胞周期、细胞增殖关系的研究进展。     

转化生长因子-β1对肌腱细胞DNA及胶原合成的影响

近年来的研究表明 ,转化生长因子- β1(ＴＧＦ - β1)在肌腱的修复中起重要作用[1,2 ] 。而ＴＧＦ - β1对细胞增殖分化作用的调节不仅与细胞来源、实验条件及其他生长因子有密切关系 ,亦与分化程度、细胞基质及其作用时间和剂量等密切相关[3 ] 。笔者通过同位素掺入及ＲＴ -ＰＣＲ法观察ＴＧＦ - β1不同作用剂量对人胚腱细胞ＤＮＡ及胶原的合成效应 ,一、材料与方法1.材料 :肌腱取自健康自然引产的5个月龄胎儿四肢。ＴＧＦ - β1购自美国Ｓｉｇｍａ公司。3 Ｈ -ＴｄＲ及3 Ｈ -脯氨酸 ,购自中国原子能研究所。ＴＲＩｚｏｌ试剂盒及Ｔｈｅｒ…     

三—（2—甲基—1—氮丙啶）膦化氧在不同组织中诱导的程序外DNA合成

用小组织块高压氧下^H-TdR体外掺入的放射自显影法，对三－（2－甲基－1－氮丙啶）磷化氧（MAPO）在LACA小鼠几种器官组织中诱导的程序外DNA合成（UDS）进行检测。MAPO于体外直接与组织作用及皮下注射后都能诱导肾小管、肾小球、肺泡和支气管上皮的UDS。两种试验中标记细胞百分数及平均银粒数与MAPO浓度及剂量均有量效关系。大剂量体内给药时前胃上皮等组织亦出现UDS，但对肝细胞没有作用。此毕MAPO有基因毒性。     

T—2毒素诱发哺乳动物细胞DNA单链断裂效应

用总洗脱时间为2h 的碱洗脱技术测定不同剂量~(60)Co-γ线照射后 L_(1210)细胞的 DNA 单链断裂,能获得与照射剂量呈直线关系的洗脱动力学曲线,剂量效应关系 r=-0.9986。0.1、1、10和100μg/ml 的 T-2毒索与哺乳动物细胞(L_(1210)和 HEL)作用3或24h均诱导轻度 DNA 单链断裂,相对 DNA 单链断裂度为11%～19%。     

HBV DNA疫苗诱导健康及HBV转基因小鼠细胞免疫应答

采用HBVCTL表位多肽体外刺激或冲击免疫效 (E)、靶(T)细胞 ,以观察DNA疫苗诱导健康及HBV转基因 (Tg)小鼠细胞免疫效果。结果发现 ,DNA疫苗能有效诱导健康BALB/c小鼠CTL活性 ,活性强弱与E/T比值及其上清液中IFN γ分泌水平有一定关系。HBsAg表位多肽(pp2 0 )体外刺激DNA疫苗免疫组效应细胞 ,培养上清IL 1 2释放水平 (2 1 1 3± 39 8pg/ml)明显较对照组 (86 7±2 7 1 pg/ml)高(P <0 0 5 ,t=4 4 82 )。DNA疫苗免疫HBVTg小鼠诱导CTL活性 (1 2 7%± 6 7% )较蛋白疫苗免疫对照组(1 7%±3 2 % )高(P <0 0 1 ,t=3 6 2 9) ;其效应细胞体外受 pp2 0刺激后分泌IL 1 2水平 (4 0 0± 30 1pg/ml)明显高于同期空载体免疫对照组 (3 8±3 0 pg/ml,P <0 0 5 ,t=2 376 )。采用在体电脉冲法DNA疫苗接种的 5只HBVTg小鼠中 ,于 4周时有 2只血清HBsAg阴转 ,并于 8周时出现抗 HBs阳性 ,而对照组中无一例血清HBsAg发生变化。表明HBVDNA疫苗能有效诱导健康及HBVTg小鼠细胞免疫应答 ,提示其通过增强细胞免疫功能作为抗HBV免疫治疗的可行性     

眼部淋巴组织增生性病变PCNA和AgNOR检测及其意义

眼部淋巴组织增生性病变ＰＣＮＡ和ＡｇＮＯＲ检测及其意义２００００３上海第二军区大学长征医院魏锐利，叶挺军，楼月芳，奚寿增，刘会敏关键词眼疾病；淋巴组织增生性疾病中国图书资料分类号Ｒ７３９．７收集我院眼部淋巴增生性病变石腊标本３４例（眼眶３１例，眼睑１...     

High dose rate and flattening filter free irradiation can be safely implemented in clinical practice

Purpose: We hypothesize that flattening filter free (FFF) high dose rate irradiation will decrease cell survival in normal and cancer cells with more pronounced effects in DNA repair deficient cells. Additionally, we hypothesize that removal of the flattening filter will result in an enhanced relative biological effectiveness independent of the dose rate.

Materials and methods: Clonogenic survival was assessed after exposure to dose rates of 4 or 24 Gy/min (FFF 10 megavolt [MV] photon beam) using a Varian TrueBeam accelerator. Additionally, cells were exposed to 4 Gy/min with or without flattening filter. Relative biological effectiveness estimations were performed comparing the different beam photon spectra.

Results: Cell survival in tumor and normal cell lines was not influenced by high dose rate irradiation. The intrinsic radiation sensitivity of DNA repair deficient cells was not affected by high dose rate compared to normal dose rate. Furthermore, the relative biological effectiveness was not significantly different from unity in any of the cell lines for both FFF and conventional flattened beam exposures.

Conclusions: High dose rate irradiation did not affect long-term survival and DNA repair for cell lines of different tissues. This suggests that high dose rate does not influence treatment outcome or treatment toxicity and could be safely implemented in clinical routine.     

孕妇外周血中胎儿细胞富集纯化在产前诊断中的初步研究

探讨对Ｘ连锁隐性伴性遗传者进行了无创伤产前性别２基因诊断的可行性,应用密度梯度离心技术对４１例不同孕周的孕妇外周血中胎儿细胞进行了富集纯化,并采用高度敏感和特异的巢式ＰＣＲ技术扩增人类Ｙ染色体锌指结构基因,同时以正常男性和女性各２０名为阳性,阴性对照,并对扩增产物进行核酸序列分析鉴定。     

高场强电磁脉冲辐射对小鼠肝细胞DNA含量和倍体影响的定量学研究

目的　动态观察高场强电磁脉冲辐射 (EMP)对小鼠肝细胞核DNA含量及倍体的影响 ,探讨电磁辐射的生物学效应。方法　应用高场强EMP发射源对二级昆明小鼠进行全身辐射 ,场强分别选用 8× 10 3、2× 10 4 和 6× 10 4 V m ,发射源相关技术参数 :脉冲上升时间 2 0ns,脉宽 30 μs ,2min内发射 5个单脉冲 ;采用Feulgen染色动态观察小鼠肝细胞核内DNA含量的变化 ,观察时间 1年 ,共设 10个时相点 (n =6 ) ,并用德国IBSA显微数字图像分析系统作DNA含量定量分析和倍体分型。结果　小鼠经高场强EMP辐射后 3个月内 ,肝细胞核DNA含量与正常对照组差异无显著性 ,以二倍体细胞 (2C)为主 ,四、六倍体 (4C ,6C)较少 ,八倍体 (8C)偶见 ;辐射后 6个月 ,8× 10 3V m辐射组比对照组DNA含量高 (P <0 0 5 ) ,2C数量减少 ,4C和 6C增加 ;至辐射后 9个月和 12个月 ,各辐射组肝细胞核DNA含量比其他各时相点辐射组及同一时相点对照组显著增高 (P <0 0 1) ,并且以 4C为主 ,6C和 8C增加 ,而 2C明显减少。结论　高场强EMP对小鼠肝DNA含量及倍体有影响 ,且表现为远后效应 ,推测电磁辐射对肝的生物学效应中肝细胞核酸可能是一个重要的靶点 ,这将为进一步研究其损伤效应及其作用机制提供实验性依据。此外 ,本研究结果提示要注重电磁辐射远     

Role of various DNA repair pathways in chromosomal inversion formation in CHO mutants

Abstract

Purpose: In an effort to better understand the formation of chromosomal inversions, we investigated the role of various DNA repair pathways, including the non-homologous end joining (NHEJ), homologous recombination (HR), and Fanconi Anemia (FA) repair pathways for the formation of radiation induced chromosomal inversions.

Materials and methods: CHO10B2 wild type, CHO DNA repair-deficient, and CHO DNA repair-deficient corrected mutant cells were synchronized into G1 phase and exposed to gamma-rays. First post-irradiation metaphase cells were analyzed for chromosomal inversions by a differential chromatid staining technique involving a single cycle pre-irradiation ethynyl-uridine treatment and statistic calculations.

Results: It was observed that inhibition of the NHEJ pathway resulted in an overall decrease in the number of radiation-induced inversions, roughly a 50% decrease when compared to the CHO wild type. Interestingly, inhibition of the FA pathway resulted in an increase in both the number of spontaneous inversions and the number of radiation-induced inversions observed after exposure to 2 Gy of ionizing radiation. It was observed that FA-deficient cells contained roughly 330% (1.24 inversions per cell) more spontaneous inversions and 20% (0.4 inversions per cell) more radiation-induced inversions than the wild-type CHO cell lines. The HR mutants, defective in Rad51 foci, showed similar number of spontaneous and radiation-induced inversion as the wild-type cells. Gene complementation resulted in both spontaneous and radiation-induced inversions resembling the CHO wild-type cells.

Conclusions: We have concluded that the NHEJ repair pathway contributes to the formation of radiation-induced inversions. Additionally, through an unknown molecular mechanism it appears that the FA signal pathway prevents the formation of both spontaneous and radiation induced inversions.