炎症诱导早产小鼠脑组织长链非编码RNA的筛选及验证研究

目的探讨长链非编码RNA(lnc RNA)与炎症诱导早产小鼠脑损伤的关系,为脑损伤的防治提供依据。方法孕鼠腹腔注射LPS建立炎症诱导早产小鼠脑损伤模型(早产组),正常孕鼠分娩足月小鼠作为对照(足月组)。应用lnc RNA芯片技术筛选与早产小鼠脑损伤相关的lnc RNA,并应用Real-time PCR技术对lnc RNA进行验证。结果比较早产组与足月组,显著差异表达的lnc RNA有1 978条(P0.05),包括上调lnc RNA 786条,下调lnc RNA 1 192条,其中差异表达1.5倍及以上的lnc RNA共有29条。对差异表达倍数最高的前10条lnc RNA行进一步分析,发现这些lnc RNA可能参与转录、信号转导、凋亡、细胞周期、炎症反应等生物学过程,并与G蛋白偶联受体信号通路、神经肽信号通路有关。对其中2条lnc RNA在早产组和足月组脑组织中的表达进行Real-time PCR验证,发现与芯片结果一致。结论炎症诱导早产小鼠脑组织中的lnc RNA表达谱发生了明显变化,G蛋白偶联受体信号通路可能参与早产脑损伤的发生机制。     

环状RNA在小鼠肺发育中的连续表达及功能预测

目的 探讨环状RNA（circRNA）circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359在小鼠肺发育中的连续表达及潜在功能。方法 根据肺发育分期,取孕16.5 d（E16.5 d）、孕18.5 d（E18.5 d）及生后2 d（P2 d）胎鼠及新生小鼠的肺组织,利用苏木精-伊红染色观察肺组织形态学;利用qRT-PCR技术检测晚期肺发育过程中circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359的表达情况;应用miRanda和TargetScan软件预测circRNA的靶向miRNA,然后对靶基因进行GO和KEGG分析并预测相应circRNA功能。结果 在E16.5 d小鼠肺组织切片中观察到Ⅱ型肺泡上皮细胞,且逐渐增多,P2 d时肺泡迅速扩张,间质变薄,肺泡结构逐渐成熟;qRT-PCR结果显示circ4:150439343|150477468相对表达量随时间推移持续上调（P < 0.05）,circ15:73330849|73343359的相对表达量先下调再上调（P < 0.05）;宿主基因功能预测显示circRNA可参与Notch、PI3K-Akt和NF-κB等信号通路。结论 circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359可通过Notch等信号通路参与肺发育的调控。     

环状RNA在小鼠肺发育中的连续表达及功能预测

目的 探讨环状RNA（circRNA）circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359在小鼠肺发育中的连续表达及潜在功能。方法 根据肺发育分期,取孕16.5 d（E16.5 d）、孕18.5 d（E18.5 d）及生后2 d（P2 d）胎鼠及新生小鼠的肺组织,利用苏木精-伊红染色观察肺组织形态学;利用qRT-PCR技术检测晚期肺发育过程中circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359的表达情况;应用miRanda和TargetScan软件预测circRNA的靶向miRNA,然后对靶基因进行GO和KEGG分析并预测相应circRNA功能。结果 在E16.5 d小鼠肺组织切片中观察到Ⅱ型肺泡上皮细胞,且逐渐增多,P2 d时肺泡迅速扩张,间质变薄,肺泡结构逐渐成熟;qRT-PCR结果显示circ4:150439343|150477468相对表达量随时间推移持续上调（P < 0.05）,circ15:73330849|73343359的相对表达量先下调再上调（P < 0.05）;宿主基因功能预测显示circRNA可参与Notch、PI3K-Akt和NF-κB等信号通路。结论 circ4:150439343|150477468和circ15:73330849|73343359可通过Notch等信号通路参与肺发育的调控。     

基于胎盘病理性炎症的<34孕周早产危险因素分析

目的 基于胎盘病理性炎症,探讨<34孕周早产的危险因素。方法 以2008年1月至2010年10月在上海交通大学附属国际和平妇幼保健院孕27+0～33+6周住院并分娩的孕产妇为研究对象。将研究对象分为孕27+0～31+6周和孕32+0～33+6周组,探讨<34孕周早产的危险因素。结果 ①孕27+0～31+6周组和孕32+0～33+6周组分别纳入106和110例,两组在母亲年龄、剖宫产和产前使用激素方面差异均无统计学意义。48.1%（104/216）胎盘病理性炎症反应阳性（MIR+）,其中51.0%（53/104）为仅母体炎症反应阳性（MIR+FIR-）,49.0%（51/104）母体-胎儿炎症反应均阳性（MIR+FIR+）;51.9％（112/216）母体-胎儿炎症反应均阴性(MIR-FIR-),未见母体炎症阴性-胎儿炎症阳性（MIR-FIR+）的病理结果。②早产主要危险因素包括早产胎膜早破（n=105）、临产(n=115)、妊娠高血压(n=52)、胎儿宫内窘迫(n=51)、产前出血(n=47)、前置胎盘(n=21)、流产史(n=108)、非正规产检(n=46)、妊娠合并内科疾病(n=23)和宫内生长迟缓(n=10)等。③在孕27+0～31+6周组中,MIR+FIR-亚组和MIR+FIR+亚组早产胎膜早破以及临产发生率显著高于MIR-FIR-亚组（64.3% 、83.9% vs 21.3%,P=0.000;78.6%、67.7% vs 46.8%,P=0.016）;母亲妊娠高血压发生率显著低于MIR-FIR-亚组(0、6.5% vs 40.4%,P=0.000);MIR+FIR+亚组产前出血的发生率显著低于MIR-FIR-和MIR+FIR-亚组（6.5% vs 29.8%,32.1％,P=0.027）。在孕32+0～33+6周组中,MIR+FIR-亚组和MIR+FIR+亚组早产胎膜早破、临产发生率显著高于MIR-FIR-亚组(52.0%、90.0% vs 30.8%,P=0.000)。④当MIR-FIR-时,孕27+0～31+6周组临产发生率显著高于孕32+0～33+6周组（46.8%和20.0%,P=0.003）。当MIR+FIR-和MIR+FIR+时,各胎龄组间危险因素差异均无统计学意义。结论 宫内炎症阳性时多为自发性早产,合并早产的其他危险因素较少;宫内炎症阴性时多存在多样的医源性早产因素。宫内炎症存在时并不增加胎儿宫内窘迫、胎盘早剥发生率。     

沉默Nogo-66受体的表达对宫内感染所致早产大鼠脑损伤的神经保护作用

目的探讨特异性si RNA沉默Nogo-66受体(Ng R)对宫内感染所致早产大鼠脑损伤修复的影响及作用机制。方法孕15 d Sprague-Dawley大鼠分别应用RU486和LPS诱导早产,随机选取RU486诱导的早产大鼠为对照组,将LPS诱导的宫内感染致脑损伤早产大鼠随机分为模型组、空载体组和Ng R-si RNA组,每组36只。对照组和模型组仅给予常规饲养,空载体组和Ng R-si RNA组均于出生后第1天(P1)经侧脑室1次性注入慢病毒空载体和Ng R-si RNA慢病毒载体后常规饲养。各组分别于P3、P7、P14时随机选取8只早产大鼠断头取脑。RT-PCR检测Ng R m RNA表达,Western blot测定活性Rho A蛋白表达,免疫荧光组化检测小胶质细胞活化程度和少突胶质前体细胞(OPCs)形态,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学改变,P30时行动物行为学评分。结果 P3时,Ng R-si RNA组脑组织Ng R m RNA表达量、活性Rho A蛋白水平显著低于模型组和空载体组(P0.05);各组Ng R m RNA表达量与活性Rho A蛋白水平均呈正相关性(分别r=0.792、0.747、0.827、0.825,P0.05)。免疫荧光组化结果显示,Ng R-si RNA组P3时小胶质细胞CD11b荧光强度值较模型组和空载体组明显减弱(P0.05);各组O4抗体标记的OPCs细胞形态主要呈现三极突起形态。病理学结果显示,对照组脑室周围白质结构正常,染色清晰;模型组和空载体组白质结构疏松,纤维紊乱,可见软化灶;Ng R-si RNA组白质结构疏松,纤维紊乱相对较轻,胶质细胞增生不明显,无明显软化灶。行为学评分显示,Ng R-si RNA组的悬吊实验评分、活动总路程、平均速度和跨格次数大于模型组和空载体组,而斜坡实验时间及中心区活动时间和路程明显少于模型组和空载体组(P0.05),但同对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 Ng R特异性si RNA可有效沉默宫内感染所致脑损伤早产大鼠Ng R基因表达,在脑损伤后的修复中具有显著神经保护作用。     

早期脑损伤新生大鼠脑白质神经蛋白聚糖和多功能蛋白聚糖表达及意义

目的观察宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质Neurocan和Versican表达情况。方法 40只受孕母鼠随机分为对照组(n=10)和脂多糖组(n=30),给予受孕18 d的脂多糖组孕鼠脂多糖(血清型055)380μg/kg,连续2 d腹腔注射;对照组孕鼠腹腔注射同等剂量的生理盐水。每组随机选取幼鼠各60只,于0,1,7,14,21,28日龄各处死10只仔鼠,HE染色法检测脑组织病理变化,荧光定量RT-PCR方法测定Neurocan和Versican相对表达量。结果对照组孕鼠无死亡及提前分娩,共娩出活产足月仔鼠124只;脂多糖组中孕鼠5只死亡,6只提前分娩,剩余19只共娩出活产足月仔鼠132只,死亡24只。与对照组比较,0,1,7,14,21,28日龄脂多糖组新生大鼠脑白质Neurocan mRNA和Versican mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内感染致脑损伤后,脑白质区Neurocan和Versican的表达明显上调。     

不同胎龄及出生体重早产儿血游离肉碱变化特点

目的检测不同胎龄及出生体重早产儿血游离肉碱（FC）浓度,为制定早产儿FC补充治疗方案提供依据。方法选取3 368例早产儿为研究对象。根据胎龄（GA）分为超早产（EPTB,GA<28周）组（n=39）、极早产（VPTB,28≤GA < 32周）组（n=405）、中期早产（MPTB,32≤GA<34周）组（n=507）、晚期早产（LPTB,34≤GA<37周）组（n=2 417）;根据出生体重（BW）分为超低出生体重（ELBW,BW < 1 000 g）组（n=36）、极低出生体重（VLBW,1 000 g≤BW < 1 500 g）组（n=387）、低出生体重组（LBW,1 500 g≤BW < 2 500 g）组（n=1 873）、正常出生体重（NBW,2 500 g≤BW≤4 000 g）组（n=1 072）。于生后72 h~7 d内采血进行FC浓度测定并进行比较。结果 EPTB、VPTB组FC浓度明显高于MPTB、LPTB组（P < 0.05）,MPTB组FC浓度明显高于LPTB组（P < 0.05）;胎龄越小,FC的95%医学参考范围下限越高。ELBW、VLBW组FC浓度明显高于LBW、NBW组（P < 0.05）,LBW组FC浓度明显高于NBW组（P < 0.05）;出生体重越低,FC的95%医学参考范围下限越高。结论极/超早产儿、极/超低出生体重儿血FC浓度明显升高,并且随着胎龄及出生体重的增加呈明显下降的趋势。     

早产儿脑损伤早期干预模式与临床路径研究

目的 探讨早产儿脑损伤早期干预模式与临床路径的临床应用效果,以降低早产儿脑损伤神经伤残的发生率。方法 2008年3月至2010年2月出生的早产儿117例纳入该研究,根据随机原则分为临床路径组（n=63）和对照组（n=54）。临床路径组定期发育监测、脑损伤筛查、营养神经治疗、神经发育和康复训练。对照组按照常规早期干预方案进行。结果 6个月至1岁临床路径组姿势、反射、睡眠、肌张力和脑电图检查异常发生率明显低于对照组（P<0.05）;临床路径组在纠正月龄6~24个月时智力发育指数（MDI）和运动发育指数（PDI）明显高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。3岁时临床路径组脑性瘫痪、语言障碍、肌张力异常、听力异常发生率明显低于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 多学科紧密结合的早期干预模式与临床路径较对照组明显改善早产儿脑损伤的智能和运动发育水平,可进一步降低小儿脑性瘫痪等神经伤残发生率。     

腺病毒介导VEGF165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的：研究腺病毒介导的血管内皮生长因子（VEGF）165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的神经保护作用。方法：采用细菌内同源重组技术构建Ad-VEGF腺病毒重组载体。7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分成4组，假手术组（n=20）、HIBD组（n=25）、病毒缓冲液移植组（Buffer组，n=20），Ad-VEGF移植组（Ad-VEGF组，n=25）。使用Rice法制成HIBD模型，Ad-VEGF移植组和Buffer组在HIBD后3 d于大鼠左侧感觉运动皮层区分别立体定位注射2 μL重组体腺病毒悬液或病毒缓冲液；移植后7 d采用RT-PCR法检测鼠脑VEGF165 mRNA的表达；采用原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测鼠脑皮质神经元凋亡情况； 采用免疫组织化学法分别检测VEGF蛋白表达及CD34表达计数大脑皮质微血管密度；30日龄时采用放射型迷宫觅水试验进行行为学测试，35日龄采用苏木精-伊红染色观察鼠脑组织病理学。结果：Ad-VEGF组VEGF165基因表达较HIBD组及Buffer组明显增高（P<0.05）；Ad-VEGF组脑细胞凋亡数目较HIBD组及Buffer组减少(P<0.05)；Ad-VEGF组平均大脑皮质微血管数及VEGF蛋白表达较HIBD组及Buffer组明显增多(P<0.05)； Ad-VEGF组行为学测试成绩较HIBD组及Buffer组改善(P<0.05)； Ad-VEGF组鼠脑皮层神经元变性坏死较HIBD组及Buffer组减轻。结论：腺病毒载体介导的VEGF165基因转移可增加新生鼠脑组织VEGF165 mRNA及VEGF蛋白的表达，减少脑细胞凋亡、增加新生脑血管形成，减轻缺氧缺血性脑损伤，改善远期学习记忆功能。     

早期环境干预对脑损伤仔鼠脑神经丝蛋白表达的影响

目的 观察早期环境干预对宫内感染致脑损伤仔鼠脑组织神经丝蛋白(NFP)的表达及对其神经行为的影响.方法 孕第17天的孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)450 μg/(kg·d),连续2 d,建立感染性脑损伤仔鼠模型(LPS组);对照组腹腔注射同等剂量的9 g/L盐水.孕22 d前分娩的仔鼠为早产鼠,二组均去除早产鼠.仔鼠出生后,立即取孕鼠子宫胎盘行HE染色观察宫内感染情况;仔鼠出生24 h,随机选取对照组和LPS组仔鼠脑组织,常规HE染色,观察脑白质损伤情况.LPS组足月产仔鼠随机分为干预组与非干预组,干预组于仔鼠出生8 d起进行早期抚触和丰富环境刺激;对照组和非干预组常规饲养.仔鼠出生21 d采用悬吊试验进行神经行为学检测;应用免疫组织化学方法 对各组仔鼠脑组织NFP阳性染色进行分析.结果 LPS组胎盘病理检测可见腹腔注射LPS造成的宫内感染;1 d仔鼠脑白质结构稀疏.对照组悬吊试验得分最高,干预组次之,非干预组最低,两两比较差异均有统计学意义(Pa<0.01).NFP的阳性表达在对照组最高,干预组其次,非干预组最低;两两比较差异均有统计学意义(Pa<0.01).结论 早期环境干预可促进宫内感染致脑损伤的恢复,NFP表达增加是其可能的机制之一.     

Elucidating the early signal transduction pathways leading to fetal brain injury in preterm birth

Adverse neurologic outcome, including cerebral palsy, is a significant contributor to long-term morbidity in preterm neonates. However, the mechanisms leading to brain injury in the setting of a preterm birth are poorly understood. In the last decade, there has been a growing body of evidence correlating infection or inflammation with preterm birth. The presence of intrauterine inflammation significantly increases the risk for adverse neurologic outcome in the neonate. These studies were performed to elucidate the early signal transduction pathways activated in the fetal brain that may result in long-term neurologic injury. Using our mouse model of localized intrauterine inflammation, the activation of TH1/TH2 pathways in the placenta, fetus corpus, fetal liver, and fetal brain was investigated. Additional studies determined whether activation of TH1/TH2 pathways could promote cell death and alter glial development. Real-time PCR studies demonstrated that a robust TH1/TH2 response occurs rapidly in the fetal brain after exposure to intrauterine inflammation. The cytokine response in the fetus and placenta was not significantly correlated with the response in the fetal brain. Along with an immune response, cell death pathways were activated early in the fetal brain in response to intrauterine LPS. Implicating TH1/TH2 and cell death pathways in permanent brain injury are our findings of an increase in GFAP mRNA and protein as well as a loss of pro-oligodendrocytes. With increased understanding of the mechanisms by which inflammation promotes brain injury in the preterm neonate, identification of potential targets to limit adverse neonatal outcomes becomes possible.     

早产儿脑病的研究现状

近年来,国内外早产发生率呈不断增加的趋势。由于新生儿救治水平的提高,早产儿的存活率也在显著提高,然而幸存的早产儿容易发生脑损伤,已经成为一个严重的公共健康问题。围产期缺氧缺血、感染/炎症是早产儿脑病发生的重要因素,造成少突胶质前体细胞与皮层等处神经元的损伤。脑室周围白质的弥漫性损伤与神经元/轴突的破坏是当前早产儿脑病的重要特点,导致认知、行为障碍、脑瘫等后遗症。近年来,影像学特别是磁共振在临床诊断及随访早产儿脑病中起非常重要作用。本文总结了早产儿脑病的特点及诊断方式,以期为早产儿脑病的临床防治策略提供新的方向。     

特发性矮身材儿童循环microRNA表达水平的研究

目的 研究特发性矮身材（ISS）患儿循环miRNA表达水平,初步建立ISS循环miRNA表达谱,为进一步探索miRNA与ISS发生、发展及寻找新的生物标记物提供理论依据。方法 选取20例ISS患儿和20例健康对照儿童,提取血清总RNA,利用microRNA microarray技术比较ISS患儿与对照儿童血清miRNA的表达差异;实时荧光定量PCR技术验证芯片结果,生物信息学分析软件对筛选出的具有显著差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果 ISS组与对照组对比共有40个差异表达的miRNA,其中表达上调的miRNA有24个;表达下调的有16个;实时荧光定量 PCR对其中2个表达上调（miR-185和miR-574-5p）和2个表达下调（miR-497和miR-15a）的miRNA进行验证,ISS患儿血清中miR-185较对照组明显上调（P<0.05）,miR-497明显下调（P<0.05）。结论 ISS患儿与健康对照血清miRNA表达存在显著差异,提示血清miRNA可能与ISS的发生发展有密切的关系。     

安徽省住院早产儿脑损伤多中心流行病学调查

目的 开展安徽省住院早产儿脑损伤多中心流行病学调查,探讨早产儿脑损伤发生的危险因素,为其早期预防和治疗提供循证依据。方法 以2016年1月至2017年1月安徽省新生儿协作网9家医院新生儿科住院早产儿为研究对象,收集早产儿母亲妊娠资料及早产儿出生资料和住院资料,采用logistic回归模型分析早产儿脑损伤发生的危险因素。结果 共纳入3 378例早产儿,脑室周围-脑室内出血（PVH-IVH）发生率为23.56%（798/3 387）,脑室周围白质软化（PVL）发生率为2.60%（88/3 387）。宫内窘迫、贫血、低血糖、坏死性小肠结肠炎（NEC）为PVH-IVH发生的危险因素（OR分别为1.310、1.591、1.835、3.310,P < 0.05）,较大胎龄为PVH-IVH发生的保护因素（OR为0.671,P < 0.05）。PVH-IVH、NEC和应用机械通气是PVL发生的危险因素（OR分别为4.017、3.018、2.166,P < 0.05）,女性和应用肺表面活性物质是PVL的保护因素（OR分别为0.514、0.418,P < 0.05）。结论 窒息缺氧、感染/炎症、应用机械通气、贫血、低血糖等因素可增加早产儿脑损伤发生的风险。