一种简便快速的真菌DNA提取方法

一种简便快速的真菌ＤＮＡ提取方法殷正男，吴绍熙，郭宁如，柴建华中国医学科学院皮肤病研究所（邮政编码２１００４２）真菌感染发病率逐年上升，使人们从多方面加强了对真菌的研究，用传统的方法研究真菌已显出很大局限性。现代生物学技术的发展为从分子水平研究真菌的...     

致病性真菌DNA提取方法的实验研究

聚合酶链反应(PCR)技术可用于真菌感染的早期诊断和菌株分型^[1]。为保证PCR技术及其相关技术的顺利开展,要求提取的真菌DNA完整,纯度高,不含TaqDNA聚合酶抑制剂,并且快速,简便,费用低。为探讨提取真菌DNA的最佳方法,本研究对3种提取真菌DNA的方法进行了比较,结果显示用尿素裂解法提取的真菌DNA完整性好,纯度高,操作步骤简便,缩短了工作时间,所需费用低,适用于多种真菌DNA的提取,现报道如下。     

一种丝状真菌DNA提取方法的介绍

由曲霉、毛霉、镰刀菌、青霉等丝状真菌引起的人类感染日益多见.研究丝状真菌致病的分子机制以及进行临床快速基因诊断已成为热点.而这些工作的前提就是获取足量高质稳定的供分析用的DNA分子.丝状真菌的生长周期、菌丝形态、孢壁成分等均与酵母样真菌有相当差别,其DNA的提取有一定难度.我们经过反复摸索、比较,找出一个较为简便、经济、可靠的方法,现介绍如下.     

几种快速提取新生隐球菌DNA的方法

目的　探讨几种快速提取新生隐球菌DNA方法的效果。方法　分别用玻璃珠机械破裂法、酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法提取有荚膜的新生隐球菌B 3 50 1野生株DNA ,用联合法提取 5种血清型新生隐球菌标准株的DNA ,用紫外分光光度计检测提取DNA的浓度和纯度。结果　 4种方法抽提 2ml新生隐球菌培养液 (菌体数约为 1×10 8个 /ml) ,可获得DNA的量约是 64～ 2 0 3 μg。酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法抽提的DNA ,其OD2 60 /OD2 80比值均小于 1.8。结论　除玻璃珠机械破裂法外 ,酶消化法、高渗剂破裂法 ,以及三法联合法均可用于快速抽提新生隐球菌的DNA。以三法联合法效果最好     

介绍一种从组织切片中提取DNA的方法

介绍一种从组织切片中提取ＤＮＡ的方法范卫新ＣｒａｉｇＬ．Ｌｅｏｎａｒｄｉ在临床和基础分子生物学研究中，从常规处理病理组织块中提取ＤＮＡ已越来越受到人们的重视。从福尔马林固定石蜡包埋组织切片（简称石蜡切片）中提取ＤＮＡ的方法报道不少［１～６］，但大多操...     

一种快速提取新生隐球菌基因组DNA的方法

本研究建立了简单快速抽提新生隐球菌基因组DNA的方法,适用于PCR和酶切分析。方法是细胞悬浮于含5mmol/LDTT的1%Sarkosyl抽提缓冲液中,通过加入玻璃珠在混漩器上剧烈振荡破碎细胞壁和荚膜;然后酚氯仿抽提DNA,1×108细胞约可得1μgDNA。     

玻璃珠－盐析法提取常见致病真菌DNA的研究

目的 进一步提高提取ＤＮＡ的效率并减少污染和毒性,以适应临床ＰＣＲ检测的需要,建立玻璃珠－盐析法快速提取常见致病真菌ＤＮＡ。方法 分别采用玻璃珠－盐析法和经典的酶解－酚氯仿法比较从白念珠菌、乳酒念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉和马内菲青霉等８种常见致病真菌中提取ＤＮＡ,同时行ＰＣＲ以评价其可靠性。结果 本方法从８种常见致病真菌均提取浓度较高且较完整的ＤＮＡ,用于ＰＣＲ也     

皮肤分枝杆菌DNA提取方法比较分析

目的 比较分枝杆菌DNA提取的常用方法。 方法 分别采用传统的冻融法和两种试剂盒（A、B）对不同浓度结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和耻垢分枝杆菌纯菌悬液及模拟标本进行总DNA提取。通过检测DNA纯度和PCR产物比较3种方法的提取效果,并应用临床皮肤组织标本进一步验证。 结果 3种方法提取的分枝杆菌DNA均能用于PCR检测。试剂盒A获得的DNA纯度最高,冻融法其次,试剂盒B杂质最多;灵敏性检测显示3种方法可检测出的纯菌悬液最低浓度皆为102菌细胞/ml;对于模拟标本,在103菌细胞/ml时检出率为100%,在102菌细胞/ml时试剂盒A、B和冻融法检出率分别为60%（12/20）、55%（11/20）、55%（11/20）;临床标本检测结果提示,试剂盒B可用于石蜡标本DNA的提取,对分枝杆菌感染组织提取率同其它两种方法基本一致。 结论 试剂盒A通过多次过柱洗涤可快速获得分枝杆菌的优质基因组DNA,为实验研究及临床检测的首选;试剂盒B单次试剂处理除适用于石蜡标本提取DNA外,可用于新鲜组织标本的协同检测。     

基因释放剂在快速制备医学真菌DNA中的应用

目的 评价基因释放剂在快速制备医学真菌ＤＮＡ中的作用和应用条件。方法 样品加入基因释放剂后分别用程序加热法、微波处理法和煮沸法处理,然后用１８ｓｒＤＮＡ通用引物进行ＰＣＲ扩增。优化ＰＣＲ扩增体系和条件。结果 ３种方法均能达到实验要求,其中以微波处理法中的５档火力７ｍｉｎ条件效果最好,各菌株均可被扩同一条４８２ｂｐ的ＤＮＡ带。敏感性为１０＾１个孢子／ｍｌ。结论 使用基因释放剂可简便快速从小量致病真菌     

PCR方法快速检测一些常见医学真菌

目的 为选择一种快速、敏感和特异的方法来检测临床感染的真菌。方法 选取真菌１８ＳｒＤＮＡ序列中两个片段设计引物,对１２种菌株进行ＰＣＲ扩增,均扩增出长约３１０ｂｐ产物。对一些临床常见细菌扩增均无反应。对酶母相真菌白念珠菌、新生隐球菌进行敏感性实验检测。结果 发现二者ＰＣＲ最小检出量均为菌体数达每个反应体系１０＾３。本实验过程总耗时３６ｈ以内。结论 本实验方法可快速特异性检测一些常见医学真菌。     

甲真菌病甲组织病原菌DNA提取方法的研究

甲真菌病的诊断主要依靠真菌培养。但该方法存在阳性率低、费时等缺点,不能快速鉴定菌种,限制了对药物的选择。     

石蜡包埋组织中DNA提取方法的对比研究

目的探讨石蜡包埋组织中提取DNA的简易有效方法。方法将58份10%福尔马林固定、石蜡包埋组织标本按保存时间分为1~5年组和6~10年组,采用微卫星引物PCR扩增技术对“一步法”和酚氯仿法进行DNA检出率的比较研究。结果58份标本中“一步法”和酚氯仿法总阳性数分别为45份和32份(P<0.05);其中35份保存1~5年标本中,“一步法”和酚氯仿法阳性数分别为29份和24份(P>0.05);23份保存6~10年标本中,“一步法”和酚氯仿法阳性数分别为16份和8份(P<0.05)。结论“一步法”标本用量少、DNA检出率高且简便易行,尤其对保存较长时间的石蜡标本是一种值得推荐的方法。     

艾滋病患者外周血单个核细胞DNA的提取方法

目的：为了完整地获得艾滋病患者或感染者外周血单个核细胞中的ＤＮＡ分子，以适应其分子流行病学研究的需要。方法：分离外周血单个核细胞，采用尿素－十二烷基硫酸钠裂解缓冲液破碎细胞，经酚、氯仿、异戊醇等抽提蛋白、乙醇沉淀核酸等步骤提取ＤＮＡ样品。结果：样品中ＤＮＡ含量较高，结构稳定，聚合酶链反应扩增效果良好。结论：本法提取的ＤＮＡ样品适合于基因扩增和分子克隆，为艾滋病的早期诊断和进一步研究奠定基础     

一步法提取隐球菌DNA

我们在对隐球菌临床和环境分离株进行基因分型的过程中，将隐球菌ＤＮＡ提取方法进行了改革，建立了一个简便、快速、高产的方法，现介绍如下。一、材料和方法（一）菌株：选择４株新生隐球菌（血清Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ型），其中９４５７５２（Ａ型）由意大利米兰大学卫生与预...     

裴氏着色真菌基因组DNA文库的构建

为了进一步研究裴氏着色真菌基因组ＤＮＡ组成，以便为快速、准确地鉴定和诊断该菌的感染提供依据，采用Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切基因组ＤＮＡ，以ｐＵＣ１８为载体，首次成功地构建了裴氏着色真菌基因组ＤＮＡ文库。插入片段的长度在２．５～６．０ｋｂ，ＤＮＡ文库的完整性在８４％以上。结果提示本文库大小适度、完整性较高，在实验诊断、菌种鉴定和探针筛选等方面有应用潜力     

DNA探针在致病真菌研究中的应用

随着DNA研究的深入,DNA探针在微生物研究领域中的应用日益广泛。现详述应用DNA探针的分子生物学基础,着重复习DNA探针在致病真菌所致感染的诊断及其流行病学研究中的应用。     

DNA探针在致病真菌研究中的应用

随着ＤＮＡ研究的深入，ＤＮＡ探针在微生物研究领域中的应用日益广泛，现详述应用ＤＮＡ探针的分子生物学基础，着重复习ＤＮＡ探针在致病真菌所致感染的诊断及其流行病学研究中的应用。