反义端粒酶反转录酶对5-羟色胺诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖抑制的机制研究

目的 探讨端粒酶反转录酶(TERT)的反义寡核苷酸(ASODN)在抑制5-羟色胺(5-HT)诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖过程中对细胞凋亡和细胞周期的影响.方法 组织块法培养大鼠PASMC,并将细胞分为对照组(应用RPMI-1640培养液培养)、5-HT组(应用含10-5mol/L 5-HT的培养液培养)、反义核酸组(应用含5-HT、反义TERT寡核苷酸的培养液培养)和正义核酸组(应用含5-HT、正义TERT寡核苷酸的培养液培养).采用Hoechst染色、免疫荧光显微镜检测各组细胞凋亡形态,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,免疫组化法检测细胞核增殖抗原(PCNA)在细胞中的表达.结果 Hoechst染色实验显示5-HT组凋亡细胞数(161±33)明显高于对照组(63±16,P＜0.05),而与正义核酸组(177±48)比较差异无统计学意义(P>0.05);反义核酸组凋亡细胞数(289±58)高于5-HT组和正义核酸组(P＜0.05).流式细胞仪检测提示5-HT可促进正常细胞的早期和晚期凋亡,并促使细胞由G1期向S期转化.反义TERT对5-HT引起的细胞凋亡有协同作用,并引起G期阻滞.免疫组化实验显示,5-HT组PASMC的PCNA表达较对照组增加(P＜0.05);正义核酸组PCNA表达高于对照组(P＜0.05),并与,5-HT组表达相近;而反义TERT组PCNA的表达显著低于5-HT组和正义核酸组(P＜0.05).结论 反义TERT可有效抑制5-HT诱导的PASMC增殖,为肺动脉高压的基因治疗提供了理论基础.     

缺氧诱导因子1α在异丙肾上腺素诱导的大鼠心房纤维化中的表达及意义

目的 探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在盐酸异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心房纤维化中的表达及其可能机制.方法 健康雄性Wistar大鼠30只,随机均分为空白对照组、ISO组、ISO+西罗莫司(Rapa)干预组(Rapa组).于实验15d时处死大鼠取心肌组织,放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量,HE和Masson染色法观察纤维化程度即胶原容积分数(CVF),免疫组织化学法、Western blotting检测HIF-1α、转化生长因子β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在大鼠心房纤维化组织中的表达,并分析HIF-1α、TGF-β1、MMP-9蛋白表达量与心房纤维化指标CVF的相关性,以及HIF-1α、TGF-β1、MMP-9蛋白表达量之间的相关性.结果 ISO组、Rapa组AngⅡ含量较空白对照组明显升高(P＜0.01).空白对照组CVF为15.482％±0.837％,无心房纤维化,而Rapa组、ISO组CVF分别为16.730％±1.052％、86.704％±1.928％,Rapa组较ISO组的心房纤维化程度明显减弱(P＜0.01).免疫组化及Western blotting检测显示,与空白对照组相比,ISO组HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量均明显增加(P＜0.01),与ISO组比较,Rapa组中HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量明显降低(P＜0.01). HIF-1α、TGF-β1和MMP-9蛋白表达量均与心房纤维化程度(以CVF为评价指标)呈正相关(r=0.987,r=0.988,r=0.917,P＜0.01); HIF-1α与TGF-β1、MMP-9蛋白表达量呈正相关(r=0.976,r=0.901,P＜0.01),MMP-9与TGF-β1蛋白表达量亦呈正相关(r=0.912,P＜0.01).结论 在异丙肾上腺素诱导的大鼠心房纤维化过程中,AngⅡ、HIF-1α、TGF-β1、MMP-9发挥着重要作用.     

慢病毒载体介导HIF-1α RNAi对人胰腺癌细胞Patu8988相关基因表达的影响

目的 探讨慢病毒表达载体介导HIF-1α RNA干扰(RNAi)对人胰腺癌细胞Patu8988HIF-1α和Glut-1表达的影响.方法 构建针对HIF-1α基因的RNAi慢病毒表达载体LV-RNAi-HIF-1α.乏氧条件下体外培养4h,转染LV-RNAi-HIF-1α的Patu8988细胞为实验组;转染空病毒载体和未转染任何病毒载体Patu8988细胞分别为阴性对照组和空白对照组.采用荧光定量RT-PCR和Western印迹法检测Patu8988细胞HIF-1α表达情况,采用RT-PCR法检测转染LV-RNAi-HIF-1α后Patu8988细胞Glut-1的表达情况.采用SPSS 17.0软件行单因素方差分析和两样本t检验分析各组之间的差异.结果 构建的慢病毒表达载体LV-RNAi-HIF-1α,在常氧和乏氧状态下致HIF-1α mRNA表达分别下降65.1％(0.209/0.321)和80.6％ (0.791/0.982)(t=10.52和15.24,均P＜0.05),阴性对照组分别为0.6％(0.002/0.321)和7.2％(0.071/0.982)(t=5.26和7.38,均P＜0.05);乏氧状态下实验组、阴性对照组和空白对照组HIF-1α蛋白的表达分别为0.159±0.010、0.745±0.012和0.711±0.023,差异有统计学意义(F=35.52,t=6.72和10.56,均P＜0.05),实验组较其他2组表达下降;乏氧条件下实验组Glut-1 mRNA表达(0.040±0.003)较阴性对照组(0.054±0.003)和空白对照组(0.062±0.004)均有明显下降(F=35.28,t=5.94和8.55,均P＜0.01).结论 通过构建LV-RNAi-HIF-1α慢病毒表达载体沉默HIF-1α基因表达,可降低Patu8988胰腺癌细胞Glut-1 mRNA表达.     

缺氧诱导体外绒毛组织转化生长因子3β表达及调控

 目的探讨低氧对体外培养的绒毛组织转化生长因子3β(TGF-3β)表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用.方法取孕早期绒毛组织分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF-1α反义组和HIF-1α正义组.HIF-1α反义组和HIF-1α正义组先加入HIF-1α寡核甘酸,低氧条件培养48h.48h后,收集培养的绒毛组织,实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平;Westem blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平.结果与正常对照组相比,缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加,TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高;与HIF-1α正义组比较,HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低,TGF-3βmRNA和蛋白表达也下降.结论缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织TGF-3β表达,且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控.     

乙酰肝素酶、缺氧诱导因子-1α的表达与食管鳞癌浸润转移的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(heparanase,HPA)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factors-1α,HIF-1α)在食管鳞癌中的表达及其与食管鳞癌浸润转移的关系.方法:应用原位杂交技术检测70例食管鳞癌组织和23例切缘正常组织中HPA mRNA表达,同时应用免疫组化法检测HIF-1α蛋白在全部标本中的表达.结果:癌组织中HPA mRNA和HIF-1α的阳性表达率分别为65.7%(46/70)和55.7%(39/70),显著高于切缘正常组织(P＜0.05);HPA mRNA和HIF-1α的表达与食管鳞癌组织浸润深度、淋巴结转移有关(P＜0.05);在食管鳞癌组织中HPA mRNA的表达与HIF-1α的表达关系密切(Kappa=0.615,P＜0.05).结论:HPA和HIF-1α阳性表达与食管鳞癌的生长及浸润转移有关,两者在食管鳞癌的发生、发展过程中可能存在着一定的协同作用;检测HPA与HIF-1α表达有助于食管鳞癌生物学性能的判断.     

槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

低氧诱导因子-1α与马桑内酯点燃SD大鼠难治性颞叶癫痫耐药模型耐药性的相关性研究

目的 探讨难治性颞叶癫痫中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)在不同脑区表达水平的变化及其与耐药蛋白MDR1/Pgp表达的关系.方法 以SD大鼠作为研究对象,设置点燃组和对照组.点燃组处理方法:以马桑内酯(CL)0.4ml/kg肌注,1次/72h,在给药1～5次期间判定点燃模型是否构建成功,选择符合标准的大鼠继续给药,1次/6d,共30次;最后点燃组共存留7只大鼠.对照组5只大鼠,在同时间点给予0.4ml/kg生理盐水肌注.取大鼠脑组织标本,制备后采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)、免疫组织化学(IIHC)和Western blotting三种方法分别检测HIF-1 α、MDR1/Pgp在脑组织中的表达情况.结果 IHC显示,HIF-1α在点燃组主要表达于大鼠海马、颞叶皮质等部位的神经元和神经胶质细胞,在对照组仅见微弱表达.Pgp的分布及表达情况与HIF-1 α一致.RO-PCR显示,点燃组HIF-1αmRNA在海马中的表达为对照组的1.741倍,在颞叶中的表达是对照组的1.395倍.Pgp mRNA在海马及颞叶的表达分别为对照组的2.297倍和1.474倍.Western blotting显示,点燃组海马HIF-1 α蛋白表达(1.284±0.166)较对照组(0.763±0.117)明显增高(p＜0.05),且点燃组颞叶皮质中HIF-1α蛋白(1.350±0.105)亦较对照组(0.941±0.078)明显增高(P＜0.05).Pgp的表达与HIF-1α表达呈一致变化,即点燃组海马和颞叶中Pgp的表达(0.831±0.086,0.919±0.129)较对照组(0.441±0.053,0.643±0.095)明显增高(P＜0.05).另外,点燃组Pgp蛋白和mRNA在海马中的表达较颞叶高(P＜0.05).结论 HIF-1α在大鼠颞叶癫痫耐药模型的海马和颞叶皮质中的表达较正常大鼠高,且与Pgp表达的空间分布一致.HIF-1 α与PgP表达的相关性提示HIF-1 α可能与难治性颢叶癫痫的耐药性相关.     

肝癌化疗栓塞术后残癌和癌旁组织血管内皮生长因子受体2及其磷酸化状态的表达水平

目的 了解肝癌经动脉化疗栓塞术后残癌及癌旁组织的血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)表达水平及其磷酸化状态水平的差别和意义.方法 取经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)后行二期手术切除的肝癌及其周围组织标本43例份(TACE加手术组)和未经任何治疗直接手术切除的肝癌及周围组织标本20例份(单纯手术组),用免疫组织化学染色方法,检测残癌及癌旁组织VEGFR-2、磷酸化VEGFR-2、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平和微血管密度[MVD(CD31标记)];采用方差分析及χ2检验比较2组间各指标的差异.结果 TACE加手术组残癌组织磷酸化VEGFR-2和HIF-1α的吸光度值(A值)分别为(0.034±0.016)、(0.047±0.021),单纯手术组分别为(0.024±0.009)、(0.035±0.016),2组间差异均有统计学意义(F值分别为6.75、4.77,P值均＜0.05);TACE加手术组癌旁组织VEGFR-2、磷酸化VEGFR-2和HIF-1α的A值分别为(0.040±0.017)、(0.031±0.011)和(0.037±0.015),单纯手术组分别为(0.030±0.015)、(0.020±0.008)和(0.024±0.014),2组间差异均有统计学意义(F值分别为4.60、13.72、11.65,P值均＜0.05);TACE加手术组和单纯手术组的癌旁组织MVD分别为(58.3±15.2)、(44.4±10.5)个/高倍视野,2组差异有统计学意义(χ2=13.64,P＜0.05).结论 肝癌经动脉化疗栓塞术后残癌组织与癌旁组织缺氧程度加重,VEGFR-2表达增加且功能增强.     

18F-FDG PET/CT评估齐墩果酸放射增敏作用的实验研究

目的 探讨18F-FDG PET/CT评估齐墩果酸(OA)对大鼠C6胶质瘤模型放射增敏作用的可行性及OA放射增敏相关机制.方法 建立32只大鼠C6胶质瘤模型,按随机数字表法分为4组:对照组、OA组、放疗组、放疗+OA组.各组分别于放疗前、放疗后24 h及7d行18F-FDG PET/CT显像,观察各组肿瘤SUVmax的变化.显像结束后,处死所有大鼠,取肿瘤组织行HE染色及HIF-1α免疫组织化学检查.各组治疗前后比较采用配对t检验,多组之间比较采用方差分析及LSD-t检验,HIF-1α表达与SUV max的相关性采用Pearson相关分析.结果 放疗前,对照组、OA组、放疗组、放疗+OA组的肿瘤SUVmax分别为5.252±0.536、5.261 ±0.544、5.273±0.520和5.232±0.507,未见明显差异(F=0.008,P＞0.05).放疗后24 h,放疗及放疗+OA组SUVmax (4.766±0.511,4.403±0.486)明显下降(t=14.788和13.366,均P＜0.05),而对照组及OA组SUVmax(5.680±0.635,5.763±0.689)显著上升(t=-11.578和-8.651,均P＜0.05),各组差异有统计学意义(F=10.550,P＜0.05),但放疗和放疗+OA组间比较差异没有统计学意义(t=1.453,P＞0.05).放疗后7d,放疗及放疗+OA组SUVmax明显下降(t=9.750和10.530,均P＜0.05),而对照及OA组SUVmax明显上升(t=-35.353和-6.884,均P＜0.05),各组差异有统计学意义(F=97.691,P＜0.05).放疗+OA组值较放疗组下降更为明显(t=5.329,P＜0.05).病理结果示,放疗+OA组较其他3组肿瘤细胞数量减少且坏死区明显.免疫组织化学检查结果示,放疗+OA组HIF-1α表达明显低于其他3组(F=122.632,P＜0.05).HIF-1α表达与SUVmax呈明显正相关(r=0.853,P＜0.05).结论 18F-FDG PET/CT可评估OA体内放射增敏作用,OA放射增敏可能与下调HIF-1α的表达有关.     

电离辐射诱导HIF-1α-Survivin通路在人淋巴瘤细胞中的活化

目的 研究电离辐射对人非霍奇金淋巴瘤细胞中HIF-1α-Survivin通路活化状态的影响,探讨恶性淋巴瘤放射抗性的机制.方法 采用Western blot方法检测辐射后3种淋巴瘤细胞中HIF-1α和Survivin蛋白的表达水平,观察应用HIF-1α抑制剂Echinomycin及转染反义HIF-1a siRNA对Survivin蛋白及mRNA表达的影响.结果 在人非霍奇金淋巴瘤细胞中存在HIF-1α和Survivin蛋白的表达,X射线照射后10～20 h出现HIF～1α蛋白表达增加,照射后24 h Survivin蛋白表达增加,与对照组比较差异有统计学意义(t =7.53 ～31.31,P＜0.01).与单纯照射组比较,采用HIF-1α抑制剂预处理肿瘤细胞后,Survivin蛋白表达下降,且具有药物浓度依赖性(t=7.21 ～32.81,P＜0.01).而转染反义HIF-1α siRNA后,照射未诱导产生survivin mRNA和蛋白表达增加.结论 电离辐射能够活化人非霍奇金淋巴瘤细胞中的HIF-1α-Survivin通路,可能与肿瘤的放射抗性有关.     

组织蛋白酶B诱导HIF-1α表达对结肠癌细胞侵袭行为的影响

 目的 探讨组织蛋白酶B(CatB)诱导缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响.方法 将CatB cDNA转染人结肠癌细胞系Lovo,通过Transwell侵袭小室实验检测癌细胞的侵袭能力,Western blot法检测癌细胞不同缺氧时点HIF-1α表达水平.结果 CatB转染组癌细胞穿透Transwell滤膜细胞数为(14.8±4.2),明显多于空载体转染组(8.6±3.7)和对照组(8.4±3.2)癌细胞(P<0.05).在缺氧0 时点,各组癌细胞无HIF-1α表达;缺氧6 时点HIF-1α仅有微量表达;在缺氧12 与24 时点,CatB转染细胞组HIF-1α表达水平明显提高,对照组和空载体转染组癌细胞HIF-1α表达水平无显著变化.比较同一缺氧时相,在缺氧0 与6 时点,各组癌细胞HIF-1α表达水平差异无统计学意义(P>0.05);在缺氧12 与24 时点,CatB转染组HIF-1α表达水平显著高于空载体组和对照组(P<0.01).结论 CatB可诱导结肠癌细胞HIF-1α表达,促进癌细胞对缺氧的适应并增强癌细胞的侵袭能力.     

99Tcm-MNLS乏氧显像评估肿瘤放疗后乏氧状态变化的实验研究

目的 探讨99Tcm-2-(2-甲基-5-硝基-1H-咪唑-1-基)磷酸乙酯(MNLS,甲硝唑磷酸酯)乏氧显像监测荷瘤小鼠肿瘤放疗后乏氧状态变化的可行性.方法 (1)建立荷H22肝癌细胞小鼠模型,待肿瘤直径约1 cm时,注射7.4 MBq 99Tcm-MNLS后进行显像,观察注射显像剂后30 min,1、2、3、4、6和8h(各时间组小鼠均为6只)乏氧显像情况并确定最佳显像时间.显像后处死荷瘤小鼠,计算各时间点各组织％ ID/g.(2)放疗组及其对照组荷H22肝癌细胞小鼠行即刻、24 h、48 h 99Tcm-MNLS显像(各组小鼠均为6只,放疗组小鼠肿瘤部位给予25 Gy放射治疗,对照组不予放疗),应用ROI技术测定T/NT(对侧部位),肿瘤标本行HIF-1α免疫组织化学染色,探讨放疗组及对照组T/NT与HIF-1α表达量的相关性.(3)应用SPSS 17.0软件对数据进行单因素方差分析、最小显著差异t检验、两样本t检验及Spearman相关分析.结果 (1)99Tcm-MNLS在肿瘤组织摄取早,2h显像最佳,99Tcm-MNLS主要通过肾脏排泄.(2)放疗后24 h显像组T/NT(2.65±0.27)、HIF-1α表达量[(50.62±3.78)％]低于即刻显像组[3.35±0.19、(85.32±0.94)％,t=5.640、6.701,均P＜0.05],高于48 h显像组[2.23±0.52、(21.69±0.75)％,t=7.674、4.911,均P＜0.05];放疗后即刻显像组T/NT比值、HIF-1α表达量均较相应对照组[2.74±0.29、(28.26±1.70)％]增高(t=4.235、3.473,均P＜0.05);放疗后24h显像组T/NT比值、HIF-1α表达量较相应对照组[2.98±0.16、(58.45±0.98)％]差异均无统计学意义(t=0.525、2.043,均P＞0.05);放疗后48 h显像组T/NT比值、HIF-1α表达量均较相应对照组[3.15±0.88、(67.64±3.55)％]降低(t=7.902、3.258,均P＜0.05).放疗组不同时间点各显像组T/NT与HIF-1α表达量呈正相关(rs=0.793,P＜0.05),对照组不同时间点各显像组T/NT与HIF-1α表达量呈正相关(rs=0.756,P＜0.05).结论 99Tcm-MNLS肿瘤乏氧显像可以评估荷瘤小鼠肿瘤放疗后乏氧状态变化.     

尾悬吊模拟失重大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α表达变化

目的 研究模拟失重环境下大鼠卵巢组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达变化.方法 取性成熟期健康雌性Wistar大鼠60只作为研究对象,体重200±20g,随机分为10组(n=6),按模拟失重时相分为悬吊0.25、0.5、1、2、3、5、7、14、21d组和0d组(对照组).采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.各组大鼠卵巢组织中HIF-1 α的表达分别应用免疫组织化学和RT-PCR方法进行检测.结果 各实验组及对照组大鼠卵巢卵泡卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞中均可见HIF-1α阳性染色细胞.对照组大鼠卵巢HIF-1 α染色阳性颗粒主要位于细胞质中,悬吊0.25d和0.5d组大鼠卵巢卵母细胞、颗粒细胞和膜细胞的HIF-1α颗粒由细胞质向细胞核转移;尾悬吊1d组HIF-1 α表达情况与对照组接近,HIF-1α核染色消失.尾悬吊0.25d、0.5d大鼠卵巢HIF-1α mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.05),持续尾悬吊1d以后各组卵巢HIF-1α的蛋白和mRNA水平逐渐恢复至对照组水平.结论 尾悬吊模拟失重使大鼠卵巢组织中HIF-1α蛋白及mRNA表达发生明显变化,早期同步过表达,提示卵巢HIF-1α表达变化与失重应激反应和失重耐受有密切关系.     

BOLD-MRI评价肾透明细胞癌HIF-α表达的可行性研究

目的 评价透明细胞肾癌(CRCC) R2*值变化与肿瘤组织内缺氧诱导因子(HIF-1α、HIF-2α)表达的相关性.方法 回顾性分析26例经手术病理证实的CRCC患者血氧水平依赖MRI与HIF-1α、HIF-2α的结果.使用Furhman法划分肿瘤的病理级别,并将所有患者分成低级别和高级别两个亚组.测量所有患者肿瘤实质的R2*值.比较高低级别组CRCC之间HIF-1 α、HIF-2α表达情况的差异.使用Pearson相关分析法评价R2*值与HIF-α阳性表达率之间的关系.结果 低级别组(Ⅰ+Ⅱ)17例,高级别组(Ⅲ+Ⅳ)9例.高级别组R2*值明显高于低级别组(P ＜0.005).高级别组HIF-α阳性表达率值明显高于低级别组(P＜0.05).CRCC的R2*值与HIF-2α表达与组织的R2*值呈正相关(P＜0.05).结论 R2*值作为一种无创的评价指标有助于CRCC的病理核分级,且R2*值与HIF-2α表达水平存在相关性.     

高压氧联合甲基强的松龙促进兔极快速减压后肺损伤恢复

目的 探讨高压氧联合甲基强的松龙对极快速减压致兔肺损伤的治疗作用.方法 26只成年雄性新西兰兔,按数字表法随机分为对照组6只、模型组10只,治疗组10只.模型组和治疗组采用真空泵抽气方法建立极快速减压致肺损伤兔模型.出舱后即刻,各组处死3只测定肺湿干质量比.模型组和对照组其余动物常规喂养3d,不治疗;治疗组静脉注射甲基强的松龙(1 mg/kg)后行高压氧治疗(表压0.10 MPa,稳压吸氧2h),每天1次,连续治疗3d.3d后处死所有动物,观察各组兔肺湿干质量比、病理形态学、肺组织TNF-α、IL-1β含量及NF-κB p65 mRNA表达的变化.结果 在极快速减压后即刻和3d后,模型组肺湿干质量比(分别为5.29 ±0.26,3.20±0.21)较对照组(分别为2.32±0.54,2.15±0.40)增高(P＜0.01),肺组织渗出和炎性浸润明显.经高压氧和甲基强的松龙联合治疗3d后,治疗组肺湿干质量比(2.34±0.49)明显降低,与对照组(2.15±0.40)比较差异无统计学意义(P＞0.05),与模型组(3.20 ±0.21)比较差异有统计学意义(P＜0.05).3d后,模型组肺组织匀浆液TNF-α、IL-1β含量[分别为(9.53±1.28)、(20.34±1.87) ng/L)]较对照组[分别为(6.42±0.95)、(15.63±1.85)ng/L)]明显增高(P＜0.05或P＜0.01);NF-κB p65 mRNA相对表达量(1.32±0.48)也较对照组(0.35±0.07)增高(P＜0.05).经过3d高压氧和甲基强的松龙联合治疗后,治疗组急性病理损伤评分(4.43±0.93)与模型组(8.56±1.73)比较明显改善(P＜0.01),与对照组(0.97±0.17)比较仍然较高(P＜0.01);肺组织匀浆液TNF-α、IL-1β含量[分别为(7.17±0.65)、(16.63 ±0.57) ng/L]较模型组[分别为(9.53±1.28)、(20.34±1.84) ng/L)]明显降低(P＜0.05);NF-κB p65 mRNA相对表达量(0.43±0.15)也较模型组(1.32±0.48)显著降低(P＜0.05).结论 高压氧联合甲基强的松龙对极快速减压肺损伤有积极的治疗作用,其中NF-κB炎性途径受抑可能是作用机制之一.     

FasL诱导HIF-1α表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响

目的探讨FasL诱导缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响。方法将含FasL全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1 FasL转染人直肠癌细胞系HR-8348,通过Transwell侵袭小室实验检测癌细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞不同缺氧时点HIF-1α表达水平。结果细胞侵袭实验表明,FasL转染组HR-8348细胞穿透Transwell滤膜细胞数为12.9±2.4,明显多于空载体转染组和对照组(分别为7.7±2.1和8.1±2.0,P<0.05)。各组细胞在缺氧0h时点无HIF-1α表达,6h时点HIF-1α仅有微量表达,缺氧12h与24h时点FasL阳性细胞组(FasL转染组)HIF-1α表达水平明显提高(P<0.05),FasL阴性细胞组(对照组和空载体转染组)HIF-1α表达水平无显著变化(P>0.05)。同一缺氧时相HIF-1α表达水平组间比较,缺氧0h与6h各组间均无显著性差异(P>0.05),缺氧12h与24h转染FasL组显著高于空载体转染组和对照组(P<0.01)。结论直肠癌细胞中FasL诱导HIF-1α表达的因素,可促进直肠癌细胞对缺氧的适应及提高癌细胞的侵袭能力。     

HIF-1α介导肝癌血管生成的多层CT灌注研究

目的 研究多层CT灌注与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)介导肝癌血管生成的相关性及临床意义.方法 手术、病理证实的34例肝癌、11例肝血管瘤行多层CT灌注成像,获取参数.免疫组化SP法检测34例肝癌、11例肝血管瘤及周围正常肝中缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,CD34单克隆抗体标记微血管密度,将两者对比研究.结果 肝癌的肝动脉灌注量(HAP)、肝动脉灌注指数(HAI)均高于肝血管瘤及周围正常肝(P<0.01).肝癌缺氧诱导因子-1α与VEGF及CD34的表达呈正相关(P<0.01).肝癌HAP和HPI与HIF-1α、VEGF及CD34的表达呈正相关(P<0.05).肝癌的Edmondson-Steiner组织学分级从Ⅰ级、Ⅱ～Ⅲ级、Ⅳ级间HAP、HAI、MVD的差异有统计学意义(P<0.05).结论 多层CT灌注在一定程度上反映HIF-1α介导的缺氧条件下的肝癌血管生成.     

缺氧诱导因子-1α在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其临床意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在兔VX2肝癌模型TACE术后的表达及其与肿瘤血管生成的相关性.方法 24只荷VX2瘤兔随机分为3组,每组8只.对照组:经肝动脉注入生理盐水2ml;TAE组:单纯碘油(UFLP)0.5～0.8 ml栓塞,TACE组:碘油抗癌药混悬液(UFLP THP)栓塞,UFLP 0.5～O.8 ml,THP 2 mg.于术后2周应用免疫组化法分别检测肿瘤组织中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,用CD34单克隆抗体标记肿瘤血管内皮细胞,计数肿瘤组织中的微血管密度(MVD).结果 TAE组和TACE组HIF-1α、VEGF表达与MVD值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),HIF-1α与VEGF的表达及MVD的变化呈正相关(rs=0.537,P＜0.01;rs=0.423,P＜0.05).结论 TACE能明显上调HIF-1α的表达,HIF-1α通过调控其下级基因VEGF的表达而促进肿瘤血管的生成,影响肝癌的预后.     

针刺干预对脑缺血大鼠脑组织低氧诱导因子-1α蛋白和mRNA表达的影响

 目的 观察针刺干预对脑缺血大鼠脑组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响,探讨针刺对缺血性脑血管疾病的防治机制。方法 建立局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺组(各8只大鼠),应用蛋白印迹及实时荧光定量检测针刺对局灶性脑缺血大鼠脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达的变化。结果 正常组和假手术组大鼠比较HIF-1α蛋白及mRNA表达无明显变化,模型组大鼠HIF-1α蛋白及mRNA表达上调,差异无统计学意义;针刺组大鼠HIF-1α蛋白及mRNA表达高于模型组(0.567±0.058 vs 0.315±0.118; 1.593±0.102 vs 1.193±0.259),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 脑缺血后大鼠脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达增强,针刺可以上调其表达从而发挥脑保护作用。     

酒精联合脂多糖对大鼠胰腺星状细胞活化的影响

目的 探讨酒精联合脂多糖(LPS)对胰腺星状细胞(PSCs)的影响.方法 24只1月龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、酒精组、LPS组和模型组,每组6只.对照组和LPS组给予饮用水,酒精组和模型组以25％乙醇代水饮.分别于第13、14、15、16周向LPS组和模型组大鼠腹腔注射脂多糖LPS(2mg/kg),每周1次,共4次,于最后1次注射后1周处死动物.在光镜下观察胰腺组织病理学改变,采用免疫组化方法观察胰腺α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的表达,RT-PCR法检测胰腺组织α-SMA、纤维连接蛋白(Fn)mRNA的表达,Western blotting法检测α-SMA蛋白质的表达.结果 光镜下见模型组胰腺组织炎症细胞浸润,Ⅰ型胶原表达增加.RT-PCR检测显示,模型组胰腺组织中α-SMA(0.840±0.022)和Fn(1.667±0.050)的mRNA表达水平高于对照组(0.400±0.048、0.963±0.014,P＜0.01)、酒精组(0.388±0.036、0.930±0.016,P＜0.01)和LPS组(0.414±0.033、0.951±0.010,P＜0.05),但后三者之间比较无统计学差异(P＞0.05).Western blotting检测显示,与其他三组比较,模型组α-SMA蛋白表达也明显上调(P＜0.01).结论 在长期摄入酒精的基础上反复腹腔注射LPS可造成PSCs的活化.