碱处理对人血白蛋白分子的影响

目的  初探不同碱处理条件对人血白蛋白（human serum albumin,HSA）分子的影响。方法  在保持pH 10.0±0.2的条件下,以不同钠离子浓度和辛酸钠浓度处理白蛋白,通过圆二色谱和高效液相色谱对碱处理的HSA进行检测,分析不同处理条件对HSA分子的影响。结果  在保持pH 10.0±0.2且辛酸钠浓度为0.16 mmol/g的条件下,以不同钠离子浓度（40～800 mmol/L）处理获得的单体和双体HSA含量均＞96%,而且碱处理HSA的圆二色谱峰值（6.7～8.2 cm）与合格HSA（7.5～8.9cm）相近,峰值位置没有偏移。在保持pH 10.0±0.2且钠离子浓度为40 mmol/L的条件下,以不同辛酸钠浓度（0.16～1.00 mmol /g）处理获得的的单体和双体HSA含量均＞97%,碱处理HSA的圆二色谱峰值（6.1～8.2 cm）与合格HSA（7.5～8.9 cm）相近,峰值位置没有偏移。结论  在一定条件下对HSA进行碱处理不会对其结构产生明显影响。     

人抗凝血酶Ⅲ生产工艺中病毒灭活／去除效果的验证

目的  验证和评价人抗凝血酶Ⅲ（human antithrombin Ⅲ,AT-Ⅲ）生产工艺中有机溶剂/去污剂（solvent/detergent,S/D）法联合纳米膜过滤法灭活／去除病毒的可行性。方法  采用S/D法作为AT-Ⅲ病毒灭活工艺,纳米膜过滤法（20 nm孔径）作为其病毒去除工艺,分析病毒灭活／去除工艺对AT-Ⅲ活性的影响;以伪狂犬病毒、辛德毕斯病毒、猪细小病毒、脑心肌炎病毒作为指示病毒,对上述工艺进行病毒灭活／去除工艺效果的验证。结果   S/D法联合纳米膜过滤法可有效灭活／去除脂包膜病毒和非脂包膜病毒,指示病毒滴度下降均>4 lg;且AT-Ⅲ的生物活性及其他各项指标未发生明显改变,活性变化<10%。结论  研究建立的S/D法联合纳米膜过滤法可有效灭活／去除AT-Ⅲ中的指示病毒,该方法为凝血因子类制品的病毒灭活验证工艺提供了参考。     

短波紫外线对人凝血因子Ⅷ中猪细小病毒灭活的研究

目的 研究短波紫外线(short-wave ultraviolet-C,UV-C)对人凝血因子Ⅷ(human coagulationfactor Ⅷ,FⅧ)中猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的灭活的效果.方法 将PPV作为指示病毒与FⅧ中间品混合,用紫外灭活仪UVivatec分别以200、300和400 J/m2 UV-C进行灭活.将UV-C灭活的FⅧ接种ST细胞并进行培养,采用细胞病变(cytopathic effect,CPE)法检测病毒,并以Reed-Muench法计算病毒滴度.对所有UV-C灭活后未出现CPE的样品盲传3代,验证灭活效果;同时对UV-C灭活前后的FⅧ活性进行检测.结果 3个照射剂量的UV-C灭活后,FⅧ中的PPV滴度降低均不低于每0.1 ml4.62lg半数组织培养感染剂量,所有未出现CPE的样品盲传至第3代均未检到病毒.UV-C灭活的FⅧ的活性无明显降低,且各项质量指标均符合药典的要求.结论 UV-C可有效灭活无包膜病毒PPV,且对FⅧ活性无明显影响.     

麻疹风疹联合减毒活疫苗的稳定性观察

目的  观察麻疹风疹联合减毒活疫苗（麻风二联）的稳定性。方法  将17批北京生物制品研究所有限责任公司（北京公司）2012—2017年生产的麻风二联存放于（5±3）℃,分别在0、9、12、18和24个月按照企业注册标准和中国药典2010或2015年版三部要求进行相关检测。同时对新、旧车间生产的各3批疫苗进行主要质量指标比对。结果  随着存放时间延长,疫苗的病毒滴度呈逐渐下降趋势,麻疹病毒滴度波动于3.9~4.8 lg半数细胞培养感染量（CCID₅₀)/ml,风疹病毒滴度波动于4.0~4.8 lgCCID₅₀/ml,热稳定病毒滴度下降均不超过1.0 lg,疫苗水分不高于3.0%,疫苗的其余各项指标均符合企业注册标准和中国药典要求。新、旧车间生产的疫苗质量没有差别。结论  北京公司生产的麻风二联的质量稳定。     

两种工艺制备的麻疹减毒活疫苗加速稳定性可比性研究

目的  通过强制降解试验,对细胞工厂与转瓶培养两种工艺制备的麻疹减毒活疫苗进行加速稳定性可比性研究。方法  取细胞工厂与转瓶培养工艺制备的麻疹减毒活疫苗单次收获液和原液各3批于25 ℃保存10 d,疫苗成品3批于37 ℃保存10 d。按照中国药典2015版三部和企业标准进行病毒滴度检定。利用Minitab 19比较两种工艺产品的病毒滴度降解曲线。结果  所有样品的降解曲线均符合麻疹病毒的热敏感性。2种工艺制备的麻疹减毒活疫苗单次收获液病毒滴度第1组分别下降1.51和1.56 lg细胞培养半数感染量（CCID₅₀）/ml,第2组均下降1.33 lg CCID₅₀/ml,第3组均下降1.54 lg,原液分别下降1.20和1.43 lg CCID₅₀/ml,成品分别下降1.33和1.30 lg CCID₅₀/ml。2种工艺产品的降解曲线相似。结论   细胞工厂与转瓶培养工艺生产的麻疹减毒活疫苗具有相似的加速稳定性。     

Vero细胞洗换方式对轮状病毒活疫苗收获液的影响

目的  探讨Vero细胞洗换方式对口服六价轮状病毒活疫苗收获液的影响。方法  采用3种不同方式洗换Vero细胞后,观察相应的致细胞病变效应,使用ELISA检测洗换前后牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）残留、快速荧光灶法检测收获液病毒滴度,并测定病毒收获液浊度及粒径,比较3种洗换方式的差异。结果  使用方式1、2、3洗换后,方式1、2致细胞病变进程明显较方式3快;收获液BSA残留（均值±标准差）分别为（15.0±4.1）、（16.3±4.0）、（52.6±4.7） ng/ml,方式1、2较方式3收获液BSA残留明显下降;方式1、2、3洗换的收获液病毒滴度分别为（7.27±0.06）、（7.23±0.06）、（6.97±0.06） lg荧光灶单位/ml,方式1、2较方式3收获液病毒滴度明显上升。不同洗换方式处理后,病毒收获液浊度和粒径的差异无统计学意义。方式1、2、3处理后,病毒收获液BSA残留、病毒滴度、浊度与粒径均符合标准。结论  结合实际生产条件,滴度较高、BSA含量较低的方式1适合作为后续的大规模原液制备过程中的洗换方式。     

水痘减毒活疫苗无明胶稳定剂的筛选和应用

 目的   研制不含明胶的新型稳定剂,以提高水痘减毒活疫苗的安全性。方法   以现行水痘减毒活疫苗稳定剂配方为基础,去除明胶,配制4种不同的新型稳定剂（B、C、D、E配方）。用无明胶稳定剂制备水痘减毒活疫苗,并将制备的无明胶稳定剂疫苗（B、C、D、E疫苗）与现行的含明胶稳定剂疫苗（作为对照的A疫苗）进行比较,确定最佳稳定剂配方。结果   疫苗成品于37 ℃放置7 d后,A、B、C、D、E疫苗的相关质量指标均符合《水痘减毒活疫苗注册标准》的要求,病毒滴度分别为3.6、3.5、3.3、3.3、3.3 lg PFU/0.5 ml,但C、D、E疫苗的病毒滴度已降至临界值。疫苗成品于2~8 ℃放置24个月后,A、B、C、D、E疫苗的病毒滴度分别为3.4、3.4、3.2、3.0、2.8 lg PFU/0.5 ml,其中C、D、E疫苗的病毒滴度已低于规定的标准（3.3 lg PFU/0.5 ml）,仅B疫苗的相关质量标准符合规定的要求,且与A疫苗（对照）没有差异。 结论   去除明胶的B配方稳定剂对水痘病毒有较好的保护作用。     

pH4/胃酶处理对灭活人体免疫球蛋白制剂中病毒的潜在作用

生产静脉注射用免疫球蛋白(IVIG)有各种不同方法,有些厂家采用pH4/胃酶处理免疫球蛋白这一生产步骤。作者对IVIG和血浆蛋白溶液进行试验,评价pH4/胃酶处理能否灭活试验病毒。作者首先观察了pH4/胃酶处理灭活的白蛋白和免疫球蛋白制剂中的游离病毒的作用,发现在白蛋白溶液中牛痘病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、流行性腮腺炎病毒和Semliki森林病毒(SLFV)等不耐酸病毒能被迅速灭活,而乙型脊髓灰质炎病毒(耐酸病毒)不能被灭活;在免疫球蛋白制剂中的牛痘病毒和SLFV经处理也被迅速灭活。作者又观察了免疫球蛋白对病毒的中和作用。将牛痘病毒和HSV分别培育在处理的     

麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗的生产工艺研究

目的  建立麻疹、腮腺炎、风疹、水痘联合减毒活疫苗（combined live attenuated measles，mumps，rubella and varicella vaccine，MMRV）的生产工艺。方法  根据现有疫苗病毒原液生产工艺，将麻疹病毒沪-191纯化株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRD-Ⅱ株和水痘-带状疱疹病毒Oka株在原代鸡胚成纤维细胞或人二倍体细胞MRC-5株中制备高滴度病毒原液，并超低温保存。筛选无明胶冻干稳定剂配方。按国外已上市同类产品的病毒配比，研究MMRV中4种病毒的原液配制滴度及成品配制比例，建立最佳冻干工艺。结果  用筛选出的适合于MMRV的无明胶冻干稳定剂配方进行试验，确定病毒原液的配制滴度为，麻疹4.6 lg半数细胞培养感染量（50% cell culture infective dose，CCID₅₀）/ml、腮腺炎5.8 lgCCID₅₀/ml、风疹4.3 lgCCID₅₀/ml、水痘4.8 lg噬斑形成单位（plaque forming unit，PFU）/ml。使成品中腮腺炎病毒滴度至少达到麻疹和风疹和水痘病毒的10倍，水痘病毒滴度高于现有单价水痘疫苗。连续制备3批MMRV，平均病毒滴度为，麻疹4.5 lgCCID₅₀/ml、腮腺炎5.1 lgCCID₅₀/ml、风疹4.3 lgCCID₅₀/ml、水痘4.6 lgPFU/ml；平均水分为1.2%。其他项目检定均合格。结论  建立了MMRV的生产工艺，可以稳定生产出达到国外同类产品质量标准并符合我国4种单价减毒活疫苗国家标准的产品。     

核糖核酸Ⅱ制备及其病毒灭活工艺的验证

目的从牛胰脏制备核糖核酸Ⅱ(RNAⅡ),对巴氏灭活法灭活病毒工艺进行验证。方法以苯酚、氯仿抽提法制备,以猪细小病毒(PPV)为指示病毒,观察用巴氏灭活法(60℃,10h)灭活RNAⅡ原液中病毒的效果,用纯度、A260/A280比值、紫外特征峰、完整性、含量变化考察灭活前后制剂变化。结果制备了纯度和活性均较好的RNAⅡ,PPV滴度为7.7logTCID50/0.1mL时灭活液中未检测出PPV,经盲传3代,亦未发现特异性细胞病变,灭活前后制剂无质的变化。结论可以现行方法从牛胰脏制备较高纯度RNAⅡ,巴氏法能对RNAⅡ溶液作有效的病毒灭活处理。     

纳米膜过滤和低pH孵放法去除/灭活静注人免疫球蛋白中病毒效果的验证

目的:验证纳米膜过滤法和低pH孵放法去除/灭活静注人免疫球蛋白中病毒的效果。方法:纳米膜过滤法选用猪细小病毒为指示病毒,低pH孵放法选用水疱性口炎病毒、辛德比斯病毒、HIV和伪狂犬病毒为指示病毒,高浓度静注人免疫球蛋白在pH4.6～5.0、30～32 ℃条件下作用不同时间后,取样检测样品中残余病毒滴度以评价病毒灭活效果...     

Anticomplementary activity of equine whole IgG antivenoms: comparison of three fractionation protocols.

Early adverse reactions occur in a number of patients treated with heterologous antivenoms and have been associated with anticomplementary activity (ACA). In order to reduce the ACA of equine whole IgG antivenoms produced by caprylic acid fractionation, three different fractionation protocols were compared: (a) routine caprylic acid fractionation; (b) caprylic acid fractionation followed by beta-propiolactone treatment; and (c) caprylic acid fractionation followed by ion-exchange chromatography using a quaternary ammonium membrane. The three protocols yielded products with similar physicochemical characteristics and anti-Bothrops asper venom antibody titers, except that ion-exchange purified antivenom had a lower protein concentration. Antivenoms fractionated by using beta-propiolactone or filtration through quaternary ammonium membrane had a significantly reduced in vitro ACA. A preparation of caprylic acid-fractionated antivenom was heated in order to induce the formation of protein aggregates; however, its ACA was similar to non-heated antivenom. None of the antivenoms affected the hemolytic activity of serum complement in rabbits after a bolus intravenous administration. It is concluded that (a) beta-propiolactone and quaternary ammonium membranes significantly reduce in vitro ACA of caprylic acid-fractionated equine antivenom, and (b) the validity of in vitro ACA as a predictor of EAR needs to be reexamined in clinical and experimental studies, since it may not adequately predict in vivo complement activation by antivenoms.     

叙利亚地鼠作为狂犬病暴露后免疫动物模型的研究

目的  对叙利亚地鼠（地鼠）作为狂犬病暴露后疫苗免疫效果动物模型的可行性进行研究。方法 将狂犬病病毒CVS株和CTN-1V株分别肌内感染不同周龄的地鼠和小鼠,观察动物对不同毒株的敏感性。用直接免疫荧光法检测CVS株进入地鼠脑组织的情况;用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体。以不同病毒量CVS株感染8周龄雌性地鼠,确定暴露时病毒的最佳感染剂量。对暴露后地鼠用疫苗进行免疫,观察疫苗的保护效果。结果  地鼠感染后7 d左右出现狂犬病临床症状,同一病毒株对地鼠的致病力比小鼠强〔6.4～8.0 lg半数致死量（LD₅₀）/ml对3.4~6.5 lgLD₅₀/ml〕;3周龄和8周龄地鼠对病毒的敏感性无差异。感染后5~6 d病毒进入地鼠脑组织。以3.8～4.0 lg小鼠脑内半数致死量（MICLD₅₀）/ml的CVS株感染后6～7 d,地鼠血清中检出中和抗体。暴露后疫苗免疫结果显示,不同疫苗具有不同程度的保护效果。结论  地鼠对狂犬病病毒神经外途径感染敏感,临床症状典型,潜伏期恒定,感染后免疫血清抗体应答出现早,具备作为暴露后疫苗免疫动物模型的条件。     

Cholesterol lowering therapy inhibits the low-flow mediated vasoconstriction of the brachial artery in hypercholesterolaemic subjects

1 We tested whether lipid lowering treatment with HMG CoA reductase inhibitor modified the flow mediated large artery reactivity in primary pure hypercholesterolaemia.
2 Abnormalities in arterial reactivity have been described in the presence of high blood cholesterol, in particular an enhanced constriction of the brachial artery in response to acute induction of a low flow state.
3 Using pulsed-Doppler, we measured brachial artery diameter and flow velocity at rest and their changes induced by wrist occlusion before and after 3 months of double-blind treatment by pravastatin (40  mg orally) in 13 subjects and placebo in 15 others.
4 The significant decrease ( P <0.01) in diameter induced by wrist occlusion before (0.34±0.08  mm) placebo and pravastatin (0.39±0.10  mm) persisted after placebo (0.26±0.07  mm) but was abolished after pravastatin (0.07±0.05  mm). The absolute change in diameter induced by wrist occlusion was lower after than before pravastatin ( P <0.01) and lower after pravastin than after placebo ( P <0.05). Diameter during wrist occlusion was higher after pravastatin than after placebo (4.35±0.16 vs 3.89±0.09  mm); P <0.01).
5 These findings indicate that the lipid changes induced by pravastatin and/or some unknown but direct mechanism of the drug itself inhibit low-flow-mediated vasoconstriction associated with hypercholesterolaemia. Such effects may have important implications for the treatment of vasospasm often seen in the presence of high blood cholesterol.