miR-122介导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨微小RNA-122(mi R-122)介导肝癌细胞凋亡的分子作用机制。方法将人工合成的mi R-122类似物、对照片段NC转染到肝癌细胞Hep G2(p53wt)、MHCC97H(p53 mutation)后,mi R-122组(转染mi R-122)、对照组(转染对照无意片段)和空白对照组均应用RT-PCR检测mi R-122,Western blot检测p53、Bax蛋白,MTT法检测肝癌细胞增殖变化,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率。结果在Hep G2中,mi R-122组的mi R-122的表达、p53蛋白和Bax蛋白表达量明显高于对照组和空白对照组,三组间差异均有统计学意义(χ~2=13.41,F分别=15.35、16.88,P均<0.05)。在MHCC97H中,mi R-122组mi R-122的表达和Bax蛋白表达量明显高于对照组和空白对照组,三组间差异均有统计学意义(χ~2=12.98,F=18.91,P均<0.05),而三组的p53蛋白测定值比较,差异无统计学意义(F=2.82,P>0.05)。在Hep G2和MHCC-97H细胞中,与对照组和空白对照组比较,mi R-122组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(χ~2分别=8.53、7.81、11.64、12.45,P均<0.05)。对照组和空白对照组的细胞增殖和细胞凋亡率无明显变化,差异均无统计学意义(χ~2=0.08、0.05、0.12、0.09,P均>0.05)。结论 mi R-122可通过p53依赖途径及非p53依赖途径促进肝癌细胞凋亡。     

核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究核糖体蛋白RPL41对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响,并分析其潜在凋亡机制。方法不同浓度RPL41(0μM、20μM、50μM、100μM)处理A2780细胞,分为对照组和RPL41低、中、高剂量组。采用MTT法检测人卵巢癌A2780细胞活力变化;采用Hoechst染色法检测A2780细胞凋亡情况;采用流式细胞仪检测A2780细胞周期;采用蛋白印记(Western Blot)法检测A2780细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达;采用RNA干扰技术沉默RPL41,分为NC组和si RPL41组,Western Blot检测沉默RPL41后A2780细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果与对照组相比,糖体蛋白RPL41可以抑制人卵巢癌A2780细胞的增殖,具有剂量依赖性(P 0. 05);RPL41剂量依赖性引起A2780细胞凋亡(P 0. 05); RPL41可以显著上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,呈浓度依赖性(P 0. 05);沉默RPL41表达后,A2780细胞中Bcl-2的表达较NC组显著上升,Bax的表达较NC组显著下降(P 0. 05)。结论 RPL41可呈剂量依赖性抑制卵巢癌A2780细胞的增殖,并可能通过上调Bax表达、下调Bcl-2表达,参与细胞程序化死亡机制,导致A2780细胞凋亡。     

缺氧环境中胸腺素β4基因转染骨髓间充质干细胞凋亡率及Bax和Bcl-2的表达

背景：研究表明体外培养细胞加入胸腺素β4能增加细胞的抗凋亡能力,若在缺氧环境中上调胸腺素β4基因在骨髓间充干细胞中的表达,其抗凋亡能力如何改变,目前鲜见报道。
　　目的：观察胸腺素β4基因修饰的骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的凋亡率改变,并探讨其是否通过调控Bax、Bcl-2表达影响凋亡能力。
　　方法：将携带有胸腺素β4基因的慢病毒转染骨髓间充质干细胞,转染完毕后利用Western blot法检测胸腺素β4在骨髓间充质干细胞中的表达。将细胞分为胸腺素β4转染组、对照病毒组、未转染组,分别置于缺氧环境中。流式细胞仪检测3组细胞凋亡率;Western blot法检测3组细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达情况。
　　结果与结论：Western blot检测结果示,胸腺素β4基因在骨髓间充质干细胞中成功表达。流式细胞仪结果示,胸腺素β4转染组细胞凋亡率较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组凋亡率差异无显著性意义。Western blot结果显示,Bcl-2蛋白在胸腺素β4转染组中表达量较对照病毒组、未转染组高,Bax蛋白在胸腺素β4转染组表达量较对照病毒组、未转染组低,而对照病毒组、未转染组中Bax、Bcl-2表达差异无显著性意义。提示过表达胸腺素β4基因可增加骨髓间充质干细胞在缺氧环境中的抗凋亡能力,其可能的作用机制是调控Bax和Bcl-2蛋白表达水平。     

miR-320a调控水通道蛋白4对阿尔茨海默病细胞模型的影响

目的 探讨miR-320a调控水通道蛋白4(AQP4)对阿尔茨海默病细胞模型的影响。 方法 采用神经生长因子（NGF）诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PC12)为神经元细胞,观察PC12组和神经元细胞组的细胞形态。采用β淀粉样蛋白(Aβ)处理诱导的神经元细胞,构建AD细胞模型。根据处理因素的不同将培养细胞分为对照组（不做特殊处理）、miR-320a模拟剂组（加入miR-320a模拟剂50 nmol/L）、miR-320a抑制剂组（加入miR-320a抑制剂50 nmol/L）、Aβ处理组（加入Aβ）、Aβ+miR-320a模拟剂组（加入Aβ+miR-320a模拟剂50 nmol/L）和Aβ+miR-320a抑制剂组（加入Aβ+miR-320a抑制剂50 nmol/L）。采用CCK8法检测细胞活力。利用RT-PCR检测目标基因AQP4、miR-320a、Bax、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA的相对表达。采用免疫印迹法检测目标基因AQP4、Bax、Bcl-2蛋白的相对表达。 结果 PC12经NGF诱导后,与PC12组比较,神经元细胞组泛素羧基末端水解酶-L1(Uch-L1)基因表达明显下调,神经丝蛋白(NFP)、微管结合蛋白2(MAP2)、AQP4基因表达明显上调,MAP2和AQP4蛋白相对表达明显增高。造模后,与对照组比较,Aβ处理组神经元细胞凋亡增加,细胞活力明显减低,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax的mRNA及蛋白表达明显增加。与Aβ处理组比较,Aβ+miR-320a模拟剂组,细胞活力明显增加,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax的mRNA及蛋白表达明显降低。与Aβ+miR-320a模拟剂组比较,Aβ+miR-320a抑制剂组细胞活力明显降低,miR-320a、AQP4、Bcl-2的mRNA及AQP4、Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax的mRNA及蛋白表达明显升高。 结论 miR-320a可以上调AD细胞模型中AQP4的表达,减少细胞凋亡,增加细胞存活率。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨mi R-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,q RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中mi R-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM3000将mi R-103a-3p mimic、mimic NC、mi R-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,q RT-PCR检测mi R-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。结果 mi R-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01);q RT-PCR结果显示,转染mi R-103a-3p mimic组细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染mi R-103a-3p inhibitor组细胞中mi R-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。结论 mi R-103a-3p在肺癌组织中低表达,mi R-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

雌激素受体β通过非激素配体途径减轻β淀粉样蛋白对PC12细胞的毒性作用

目的研究在无雌激素作用下雌激素受体β过表达对PC12细胞在β淀粉样蛋白刺激下抗炎、抗凋亡能力的影响。方法取普通PC12细胞为对照组,Ad-EGFP空白质粒转染的PC12细胞为空白组,Ad-ERβ-EGFP转染的PC12细胞为转染组,western blot法检测3组中ERβ蛋白的表达。随机选取未感染的PC12细胞为对照组,转染ERβ后的PC12细胞分为过表达组和ABI-2组,3组均加入培养液及Aβ,ABI-2组还加入Akt特异性抑制物ABI-2。实时定量PCR法测定3组在β淀粉样蛋白刺激作用下炎症因子TNF-α和IL-1βmRNA的表达;流式细胞术测定3组在β淀粉样蛋白刺激作用下的凋亡情况。结果 ERβ在转染后PC12细胞内高表达。过表达组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA表达明显低于对照组及ABI-2组。过表达组PC12细胞凋亡率明显低于对照组及ABI-2组。结论 ERβ在不依赖雌激素受体的情况下,通过Akt途径发挥其抗炎、抗凋亡及减轻Aβ细胞毒性的作用。     

靶向IRF-2基因的siRNA对胰腺腺泡细胞凋亡的机制研究

目的探讨靶向干扰素调节因子2(IRF-2)基因的小干扰RNA(siRNA)对胰腺腺泡细胞凋亡的影响及机制。方法以脂质体Lipofectamine TM2000为载体,参照其转染说明将设计并合成的IRF-2的siRNA转染AR42J细胞,并设置阴性对照siRNA(NC)及空白组(仅加入脂质体)。IRF-2的siRNA及阴性对照siRNA转染AR42J细胞24 h后与雨蛙肽(10-8mol/L)同培养,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及活性氧族(ROS)含量;Western blotting检测Bcl-2、Bax和p53的蛋白表达。结果转染IRF-2的siRNA的AR42J细胞IRF-2蛋白表达降低,与空白组比较差异具有统计学意义(P0.05)。雨蛙肽可明显诱导AR42J细胞凋亡,诱导ROS产生,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,与NC组比较差异具有统计学意义(P0.05),而转染si-IRF-2后可降低由雨蛙肽诱导的AR42J细胞凋亡和ROS产生,下调Bax和p53蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达,与NC+雨蛙肽组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论靶向IRF-2基因的siRNA可抑制胰腺腺泡细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS含量及下调Bax、p53表达和上调Bcl-2表达有关。这种抑制可能与增加急性胰腺炎的炎症程度有关。     

单磷酰脂A和缺血预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡 Bcl-2 Bax蛋白表达的影响

目的 研究单磷酰脂A预处理(MLA-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因 Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法 复制I/R损伤模型,采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果I/R组凋亡细胞较多,MLA-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P<0.01)。Bcl-2和Bax蛋白表达在I/R组均较多,MLA-P组及IP组Bcl-2表达明显高于I/R组(P<0.01),而Bax蛋白表达明显低于I/R组(P<0.01)。MLA-P组与IP组各指标均无显著性差异(P>0.05)。结论 MLA-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。MLA-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达影响的作用相近。     

过表达MST-1基因对大鼠INS-1细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨过表达哺乳动物不育系20样激酶-1(MST-1)基因对大鼠胰腺β瘤(INS-1)细胞增殖与凋亡的影响。方法转染pJ3H-HA-MST-1质粒于INS-1细胞,设为实验组,另设立对照组(空载体),利用Western blot检测MST-1、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞活性。结果实验组通过pJ3H-HA-MST-1质粒转染细胞后,MST-1、Bax和Caspase-3蛋白表达水平较对照组增高,而Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。CCK-8法检测结果显示过表达MST-1对INS-1细胞的增殖有明显的抑制作用。结论 MST-1基因过表达可诱导INS-1细胞凋亡,这可能是2型糖尿病中胰腺β细胞凋亡形成的机制之一。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

罗格列酮对兔髂动脉球囊损伤后细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察罗格列酮时兔髂动脉球囊内膜剥脱术后细胞凋亡及凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达的影响.方法:将30只雄性新西兰大耳白兔随机分为3组,正常对照组(普通饮食)、模型组(高脂饮食+球囊内膜剥脱术)和罗格列酮组(高脂饮食+球囊内膜剥脱术+罗格列酮).分别于术后第1、4周末处死动物,取髂动脉标本行病理形态学观察,TUNEL法检测细胞凋亡水平,免疫组化法测定Bax、Bcl-2蛋白表达的情况.结果:正常对照组仅见少量凋亡细胞和Bax、Bcl-2蛋白表达.与模型组相比,罗格列酮组在术后第1、4周末内膜增殖程度显著减轻(P＜0.05),细胞凋亡程度、Bax蛋白表达明显增强(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达减少(P＜0.01),细胞凋亡改变在术后l周末更为明显.结论:罗格列酮具有促进球囊损伤术后内膜平滑肌细胞凋亡、下调Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达的作用.     

去松果体对β-淀粉样蛋白诱导海马细胞凋亡及相关基因表达的探讨

目的探讨松果体摘除对β-淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性影响。方法SD大鼠随机分为松果体摘除组和假手术组,术后40d给Aβ1-40右侧海马注射,7d后标本用改进甲醇刚果红染色以及HE、TUNEL法检测海马凋亡细胞、SABC法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达。结果实验组海马细胞凋亡数比对照组增多(P<0.01),Aβ周围Bax表达比对照组增强(P<0.01);而Bcl-2在两组中表达无明显差别(P>0.05)。结论大鼠松果体摘除可以使Aβ1-40诱导海马细胞凋亡增多,与Bax表达增强有关。     

锌指基因1对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡能力的影响

目的：研究过锌指基因1（JAZF1）对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡能的影响及其信号通路。方法：体外培 养脑胶质瘤细胞株,分为对照组、空载组和过表达组;分别于无血清的 RPMI 1640 培养基中,加入 Adv-JAZF1-GFP或空载体Adv-GFP,对照组不予转染腺病毒。MTT法检测细胞活力,使用流式细胞仪检 测细胞凋亡,Western blot法检测糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、β-连环蛋白（β-catenin）、腺瘤性结肠息肉病 相关基因（APC）、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果：对照组和空载组细胞活力和凋亡率差异无统计学意义 （P＞0.05）,过表达组细胞活力低于其他 2 组、细胞的凋亡率高于其他 2 组（均 P＜0.05）;对照组和空载组 β-actenin、GSK-3β、APC、Bax和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）,过表达组β-actenin、GSK-3β、 APC和Bax蛋白表达低于其他2组,Bcl-2蛋白表达高于其他2组（P＜0.05）。结论：过表达JAZF1可能可通 过作用于Wnt/β-catenin信号通路,调控β-catenin、GSK-3β、Bax、APC、Bcl-2蛋白的表达,抑制脑胶质瘤细胞 的增殖,促进脑胶质瘤细胞的凋亡。     

帕金森病神经元死亡机制 : Bcl- 2与多巴胺诱导 PC12细胞凋亡的相关性研究

目的研究 Bcl- 2家族的表达同多巴胺诱导的 PC12细胞凋亡的相关性 , 探讨帕金森病 ( PD) 神经元的死亡机制 . 方法应用免疫组织化学及电镜技术 , 对 Bcl- 2家族的表达同多巴胺诱导 PC12细胞凋亡的相关性进行分析 . 结果适当浓度 DA可诱导 PC12细胞凋亡 , 凋亡早期伴有 Bcl- 2及 Bax表达量及 Bcl- 2/Bax比值的增高 , 后期则出现 Bcl- 2/Bax比值的下降 . 结论细胞凋亡参与了 PD的发病过程 , Bcl- Bax比例的变化同凋亡发生密相关 .     

MiR-551b-3p靶向USP9X对人肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨miR-551b-3p对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法:将miRNC,miR-551b-3p,anti-miR-NC,anti-miR-551b-3p,si-NC,si-USP9X分别转染至A549中,记为miR-NC组、miR-551b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-551b-3p组、si-NC组、si-USP9X组;将miR-551b-3p分别与pc DNA和pc DNA-USP9X共转染至A549中,记为miR-551b-3p+pc DNA组、miR-551b-3p+pc DNA-USP9X组。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测miR-551b-3p和USP9X的表达水平;蛋白质印迹法检测X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 (B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)的表达;荧光素酶报告实验检测miR-551b-3p和USP9X的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆集落形成实验检测放射敏感性。结果:肺癌组织和肺癌细胞A549中miR-551b-3p表达水平显著降低,USP9X mRNA和蛋白质表达水平显著升高(均P<0.001)。miR-551b-3p靶向调控USP9X,过表达miR-551b-3p和抑制USP9X表达,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,Bax表达水平显著升高,细胞的存活曲线明显下移(均P<0.001)。USP9X过表达逆转了miR-551b-3p过表达对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的作用。结论:过表达miR-551b-3p促进肺癌A549细胞凋亡,增强肺癌细胞放射敏感性,其机制可能与USP9X有关。     

miR-153在卵巢癌中的表达及其生物学功能

目的分析mi R-153在卵巢癌中的表达,并探讨mi R-153的生物学作用。方法荧光定量PCR法检测卵巢癌组织及细胞中mi R-153的表达水平;转染mi R-153类似物(mimics)至SKOV3细胞,MTT法、平板克隆实验及流式细胞仪分别检测mi R-153对细胞增殖及凋亡的影响。结果 mi R-153在卵巢癌组织及细胞中的表达显著下调;转染mi R-153 mimics后细胞生长受到明显抑制,克隆数目减少,细胞早期凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 mi R-153在卵巢癌中表达下调;过表达mi R-153可显著抑制SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡。     

沉默HCCR-2基因对胰腺癌细胞Bcl-2和Bax表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的利用反义寡核苷酸(ASODN)干扰技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将HCCR-2ASODN转染人胰腺癌细胞株PANC-1,荧光显微镜观察细胞内荧光信号,流式细胞仪检测细胞转染效率及凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测转染细胞的增殖活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转染细胞HCCR-2、Bcl-2、Bax mRNA与蛋白表达。结果 HCCR-2ASODN转染PANC-1细胞的转染效率为85.04%。反义组、无义组和单加培养液组细胞凋亡率分别为(24.04±2.38)%、(2.44±0.13)%、(2.54±0.21)%,反义组较其他组细胞凋亡显著增加(P<0.01);相应的各组细胞增殖活性分别为2.38±1.03、3.78±1.69、3.72±1.54,反义组细胞增殖较其他组显著被抑制(P<0.01)。反义组、无义组和单加培养液组细胞HCCR-2mRNA表达量分别为0.29±0.16、0.55±0.31、0.57±0.33;Bcl-2mRNA表达量分别为0.31±0.14、0.63±0.28、0.62±0.35;BaxmRNA表达量分别为0.68±0.36、0.24±0.09、0.23±0.12;HCCR-2蛋白表达量分别为0.47±0.28、0.93±0.48、0.95±0.42;Bcl-2蛋白表达量分别为0.35±0.19、0.82±0.51、0.81±0.45;Bax蛋白表达量分别为0.91±0.42、0.42±0.21、0.39±0.20,较其他组,反义组细胞HCCR-2、Bcl-2mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.01),而Bax mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.01)。结论下调PANC-1细胞HCCR-2表达后,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加,其作用机制与Bcl-2表达降低而Bax表达升高有关。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl- 2、Bax和C- fos蛋白表达及损伤神经细胞凋亡的影响

目的观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl- 2、Bax和C- fos蛋白表达及损伤神经细胞凋亡的影响. 方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大脑中动脉阻塞2 h,再灌注损伤6 h,用原位缺口末端标记(Tdtmediated dUTP- biotin nick end labeling,TUNEL)法和免疫组织化学法分别检测假手术组、对照组和亚低温组的凋亡细胞百分率和Bcl- 2、Bax和C- fos蛋白表达水平. 结果亚低温组Bcl- 2蛋白表达水平为(63.48±0.47)%,较对照组显著升高(P<0.05),而Bax和C- fos蛋白表达水平和凋亡细胞百分率分别为(6.13±0.93)%和(5.09±0.21)%,明显低于对照组(P<0.05). 结论亚低温下调大鼠脑缺血再灌注损伤后Bax和C- fos蛋白表达水平和上调Bcl- 2蛋白表达水平,可能与其抗损伤神经细胞凋亡作用有关.     

雌激素对MPP+诱导的PC12细胞损伤后Bcl-2蛋白含量的影响

目的:观察雌激素在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPP )引起PC12细胞损伤的过程中对凋亡抑制蛋白Bcl-2的影响,从而阐明雌激素对帕金森病的保护作用。方法:实验于2004-03在华中科技大学同济医学院神经科实验室完成。①细胞分组:对照组;雌激素组;雌激素 MPP 组;MPP 组。②帕金森病细胞模型的建立:用250μmol/L的MPP 处理细胞,造成细胞凋亡的帕金森模型。③应用SABC法检测PC12细胞内的Bcl-2蛋白表达,反转录-聚合酶链反应检测Bcl-2基因表达产物的mRNA的水平,Westernblot检测Bcl-2蛋白的水平。结果:①雌激素组Bcl-2阳性PC12细胞平均吸光度(0.438±0.065)明显高于空白对照组(0.216±0.067),雌激素 MPP 组(0.283±0.036),MPP 组(0.112±0.034),SABC显色明显增强(P<0.05)。②雌激素组Bcl-2基因表达产物的mRNA的水平(1.30±0.19)明显高于空白对照组(0.70±0.15),雌激素 MPP 组(0.66±0.26),MPP 组(0.29±0.08)(P<0.05)。③雌激素组Bcl-2蛋白的水平(129±19)明显高于空白对照组(81±23),雌激素 MPP 组(72±12),MPP 组(48±11);雌激素 MPP 组与空白对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:在MPP 对PC12细胞损伤的过程中,雌激素通过促进凋亡抑制蛋白Bcl-2的增高,对神经细胞起保护作用。     

下调miR-125b以抑制白血病K562细胞的增殖

目的:探讨下调mi R-125b对白血病K562细胞的增殖抑制作用及相关机制。方法:利用LipofectamineTM2000脂质体将mi R-125b inhibitor和mi R-125b NC转染于白血病K562细胞中,应用RT-PCR法检测mi R-125b表达,MTT法检测细胞活力,琼脂糖形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中BCL-2、BCL-2同源拮抗物1(Bak1)、p53及p53正向细胞凋亡调控因子(Puma)表达。结果:与mi R-125b NC比较,mi R-125b inhibitor组mi R-125b表达下调(P0.01),细胞活力及细胞集落形成能力降低(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),BCL-2表达下调(P0.01),BAK1、p53和Puma表达上调(P0.01)。结论:mi R-125b表达量下调能显著地抑制白血病细胞K562的增殖,这一效应与下调BCL-2表达、上调BAK1、p53及Puma表达有关。