热原的鲎试验法

热原的鲎试验法是70年代发展起来的用以检查热原的新的方法。它与家兔法、TBP法比较,具有方法简单、可靠、快速、灵敏度高等特点。早在1956年,就有Bang发现美洲鲎(Limulus polyphemus)被海水中细菌感染,引起了致命的血管凝血反应。1964年,Levin和Bang在体外观察到这种反应的发生。1968年有人从美洲鲎的血液中制得了变形细胞溶解物(Limulus amebocyte lysate),商品名称为Pyrogent,并用于检查病员的内毒素血     

动态浊度法测定人凝血酶原复合物制品中细菌内毒素含量

[目的] 建立动态浊度法定量测定人凝血酶原复合物制品中细菌内毒素含量的方法。[方法] 通过对样品中定量添加标准内毒素的干扰试验,检测其回收率应在50%~200%范围。[结果] 人凝血酶原复合物制品对鲎试验无干扰作用,动态浊度法定量检测结果与家兔实验结果基本一致。[结论] 应用本方法定量测定人凝血酶原复合物制品中细菌内毒素含量是可行的。     

鲎试验检测在输液反应中的应用

目的探讨输液反应中对鲎试验检测方法的应用和原因分析。方法利用鲎试验与细菌内毒素产生凝集反应的机制，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。结果对27例输液反应进行鲎试验检测结果进行分析，其主要原因有联合用药配伍不当，添加药物过多或添加药物本身热原不合格；药物配伍太久占70％；液体制备过程热原超标占22％；输液器、注射器及其它因素2例占8％。操作时无菌技术操作欠缺、输液时间过长或输液速度过快等都可引起。结论输液不良反应的预防应从各环节抓起，严格执行各项无菌操作技术，注意药物的配伍禁忌，提倡可以口服治疗的不使用静脉输液治疗，杜绝或减少输液或药品引起的不良反应。     

鲎试验失败的原因及改进措施

鲎试验是判断供试品中细菌内毒素含量是否符合规定的一种灵敏、快速、简便的监测方法。监测方法不当会出现鲎试验阴性对照管为阳性反应,阳性对照管为阴性反应,供试液出现假阴性或假阳性反应等现象,致鲎试验失败。1失败原因其原因:(1)试验器具处理不当:试验器具未按规定的洗涤流程处理,干热灭菌的时间、温度不够都可致试验器具去热原不彻底,可致阴性对照管和供试液出现阳性反应。试验器具不宜用一次性注射器,因其对内毒素有吸附作用,也不宜用搪瓷、不锈钢类器具,因铁、铝、镓离子均可降低内毒素活性,产生假阴性结果。(2)热原室环境处理不当:…     

注射器细菌内毒素检测存在问题与对策

1 存在问题 1.1 热源检测与细菌内毒素检测概念混淆热源检测与细菌内毒素检测是两种不同原理的检测方法:(1)热源检查法:系将一定剂量的供试品,静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高情况,以判定供试品中所含热源的限度是否符合规定.(2)细菌内毒素检查法:采用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法.其对热源物质(主要是细菌内毒素)的控制要求提高了很多.两种检测方法虽然在目的有相同之外,但是检测方法有所不同,目前,很多药物和注射器的标准已采用细菌内毒素检测代替热源检测,一是快速、简便、灵敏,二是重现性好.     

产H2S志贺Ⅰ型菌的发现与研究

[目的]鉴定1998年6月自腹泻病人标本中分离的产H2S细菌的种属、血清群、型及其临床价值和流行病学意义。[方法]腹泻病人粪便标本经增菌、分离培养后、挑取可疑菌纯培养,进行生化反应、血清学鉴定。豚鼠角膜试验、鲎试验分别检测未知菌的侵袭力和内毒素,“K-B法”测定细菌对抗生素的敏感性。[结果]该菌为革兰阴性杆状菌,对营养要求不高,在普通培养基上即能生长繁殖,生化学性状符合志贺菌属定义,豚鼠角膜试验显示其有侵袭力,鲎试验表明能产生强烈内毒素,药敏试验证实对多种抗菌素敏感。[结论]经形态学、培养特性、生化学和血清学等微生物学性状的检测,经安徽省卫生防疫站专家的进一步鉴定,确认并命名未知菌为产H2S志贺I型菌,也是引起该腹泻病人腹泻的唯一病原菌。     

鲎试验检测方法在输液反应中的应用

目的 探讨鲎试验检测方法在输液反应中应用的效果.方法 利用鲎试验与细菌内毒素产生凝集反应的机制,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法.结果 对23例输液反应进行鲎试验检杏结果进行分析,其主要原因有液体制备过程热原超标,联合用药配伍不当,添加药物过多或添加药物本身热原不合格;输液器具、治疗室空气污染;操作时违犯无菌技术操作规程;药物配制太久,输液时间过长和输液速度过快等.结论 输液反应的预防应从各环节抓起,严格执行各项无菌操作技术,提倡单剂量输液,杜绝或减少输液反应.     

一氧化氮、内皮素和内毒素与肝硬化腹水及肝功能

目的　测定不同阶段肝硬化患者血浆的一氧化氮 (NO)、内皮素 (ET)及内毒素水平 ,探索它们对肝硬化腹水形成和肝功能损害所起的作用及其相互关系。方法　测血浆NO的代谢产物NO- 2 浓度 (Griess法 ) ,ET - 1浓度(放免法 ) ,内毒素浓度 (鲎试验的显色基质法 )及肝功能。结果　 (1 )血浆NO、ET及内毒素浓度在肝硬化各组均明显高于正常对照组 ,在有腹水组明显高于无腹水组 ;(2 )血浆NO、ET、内毒素水平随肝功能损害加重逐渐升高 ;(3)肝硬化患者血浆内毒素与NO、ET水平分别呈正相关 ,NO与ET水平呈正相关。结论　血浆内毒素、NO和ET升高可能在肝硬化病程进展中起了重要作用 ,是形成腹水的重要因素 ,三者相互依赖、相互影响的协同作用是肝硬化进展的重要机制之一     

定量检测茵栀黄注射液细菌内毒素方法的建立及应用

目的建立茵栀黄注射液中细菌内毒素的定量检测方法,与家兔法热原检测结果相比较,以确定动态显色基质法用于茵栀黄注射液中细菌内毒素定量检测的可行性。方法采用光度法中的动态显色基质法对茵栀黄注射液进行干扰试验,以明确供试品对动态显色法鲎试剂是否有干扰作用,确立不干扰浓度,并与家兔法热原检测结果相比较。结果使用动态显色法鲎试剂对茵栀黄注射液稀释至37.5倍时无干扰作用,回收率为50%～200%;家兔法检查3批茵栀黄注射液热原结果均符合规定,动态显色法与家兔法检查结果一致。结论动态显色基质法用于茵栀黄注射液中细菌内毒素含量的定量检测是可行的,相较于家兔法热原检查,其结果更稳定可靠,操作方便快捷,灵敏度高。     

两种去热原方法对可复用穿刺针灭菌前保存期限的研究

将8000个经细菌内毒素工作标准品（内毒素浓度为10EU／mL）污染的可复用穿刺针，各取一半分为化学法组和干烤法组去热原。分别于去热原后即时、2h、1d、2d、3d……，至70d进行鲎试验检测，每次各抽取一个针头，比较两组各时间段鲎试验阳性率。干烤法组穿刺针去热原70d内鲎试验检测均为阴性；而化学法组穿刺针去热原后即时检测阳性率为8．00％，2h后检测阳性率为24．00％，且随着时间的延长，阳性率逐渐升高。     

盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素检测方法的研究

目的：探讨用凝胶法检查盐酸左氧氟沙星注射液中的细菌内毒素。方法参照2010版《中国药典》细菌内毒素检查法,用不同厂家的鲎试剂对不同批号的注射用盐酸左氧氟沙星注射液分别进行干扰实验,探讨考察注射用盐酸左氧氟沙星注射液的细菌内毒素检查方法。结果注射用盐酸左氧氟沙星注射液以消除对鲎试剂的干扰,用灵敏度0．25EU/ML的鲎试剂检测内毒素是有效的,与家兔法检测结果应一致。结论初步认为注射用盐酸左氧氟沙星注射液可以用细菌内毒素法取代家兔法的热原检验     

鲎试验法检测一次性输液器应注意的问题

鲎试验法检测一次性输液器应注意的问题解放军第４６６医院周玲玲陈云峰董纪先（北京１０００８１）我院根据卫生部１９８８年《医院消毒供应室验收标准（试行）通知》，于１９９３年开始采用鲎试验法对一次性输液器具进行细菌内毒素检测，效果良好。但最近在检测时经常出...     

嗜麦芽窄食单胞菌家兔感染动物模型体内药物敏感性监测

目的:建立嗜麦芽窄食单胞菌感染的家兔细菌感染模型,观察抗菌药物在家兔体内的药物敏感性,比较何种体外药物敏感试验更能准确反应临床疗效。方法:在60只家兔腹腔中分别接种0.5 m l浓度为0.5麦氏的嗜麦芽窄食单胞菌菌液,从接种菌之时起,将家兔分成3组(A、B、C组),每组20只,每24 h测量家兔体温,共10次,并抽血测量计数白细胞、内毒素;分别在48 h、72 h、96 h、120 h、144 h注射药物:A组注射哌拉西林/他唑巴坦(TZP);B组注射替卡西林/棒酸(TIM);C组注射头孢吡肟(PEF)。比较M IC法、纸片琼脂扩散法(K-B法)及仪器法检测的药物敏感性结果与体内药物治疗的疗效关系。结果:成功建立了家兔的细菌感染模型,TZP治疗组(A组),M IC法与体内治疗符合率83.3%;VITEK法与体内治疗符合率77.8%;K-B法与体内治疗符合率55.6%。TIM治疗组(B组),M IC法与体内治疗符合率77.8%;VITEK法与体内治疗符合率77.8%;K-B法与体内治疗符合率44.4%。PEF治疗组(C组),M IC法与体内治疗符合率88.9%;VITEK法与体内治疗符合率77.8%;K-B法与体内治疗符合率66.7%。结论:本研究中家兔体温、内毒素含量、白细胞计数是最有效价判断家兔感染的指标。在已用的检测法中,对3种药物的体外敏感性检测结果与家兔体内药物敏感性符合率最高的方法均为M IC法,建议使用M IC法。     

参麦注射液细菌内毒素检查方法的探讨

目的：考察参麦注射液细菌内毒素检查方法的可行性,加强对参麦注射液的质量监控。方法：采用细菌内毒素检查法,考察参麦注射液对鲎试剂的干扰试验,并检测供试品细菌内毒素的限度。结果：对样品进行1∶4稀释,用0.125 EU/mL鲎试剂无干扰,与家兔热源检查法结果一致。结论：与家兔法检查本品热原相比,细菌内毒素法可行性高,此方法避免了家兔热源检查法操作的复杂性,且灵敏度高、方便快捷。     

体液内毒素及深部真菌快速定量检测方法

目的:应用MB-80微生物快速动态检测系统,建立快速体液内毒素及深部真菌定量检测方法. 方法:在无菌条件下,留取20例正常人、10例严重腹腔革兰阴性菌感染及5例深部真菌感染病人的血浆,经前处理后,用MB-80系统动态浊度定量法,1 h完成检测.内毒素检测采用鲎试验动态浊度法,通过检测真菌细胞壁上1-3-β-D-葡聚糖的含量来反映深部真菌的水平.经计算机光电检测动态浊度变化,计算出内毒素及真菌含量. 结果:本法操作快速、简便,前处理过程标准化,结果重复性好,两种物质的检测可以同时在一台仪器上进行.正常人血浆内毒素和真菌水平在(2.03±2.32)ng/L和(2.46±2.15)ng/L,符合试剂盒提供的正常值范围(均<10 ng/L).严重感染病人不同时相点血浆内毒素含量范围在50～3 958 ng/L.深部真菌感染病人血浆真菌含量范围在20～ 2 381 ng/L. 结论:应用MB-80微生物快速动态检测系统,可以定量检测体液内毒素及真菌实际含量,作为临床上早期难以确诊的内毒素血症和深部真菌感染的辅助性诊断手段.     

对再制废水进行细菌学评价时鲎试验与标准倾注平板法计数和总大肠菌群滤膜法计数的比较

作者对48份再制废水水样进行细菌学评价时,将鲎内毒素试验(Limulus endotoxinassay)与标准倾注平板法计数及总大肠菌群滤膜法计数进行了比较。水样来源于得克萨斯州 Dallas 一家高级废水处理试验厂。水样用已灭菌无热原的塑料管采集。细菌总数及总大肠菌群数分别用标准倾注平板法及滤膜法测定。鲎试验方法:水样总内毒素的测定是将水样用无菌无热原的蒸馏水经不同的稀释度稀释后与鲎变形细胞溶解物进行反应。游离内毒素     

内毒素多克隆抗体制备及其在ELISA中应用

目的制备抗大肠杆菌精制内毒素的兔多克隆抗体并建立检测内毒素的间接竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法大肠杆菌精制内毒素作为免疫原,采用逐渐加强免疫剂量的方法免疫家兔,制备抗体,将抗体用于ELISA检测精制内毒素;并与复合型内毒素进行反应。结果随着免疫次数增加,抗血清效价逐渐提高,最后一次免疫后血清效价达到1:6 400;在包被抗原浓度100μg/mL和兔多抗稀释比1:500最佳使用条件下建立间接竞争性ELISA,内毒素浓度与吸光度(A)值成反比例关系,线性回归方程为:y=-0.1 ln(x)+0.765,检测最低内毒素浓度为50 ng/mL;兔血清与复合型内毒素反应效价为1:16 000。结论成功制备出抗精制内毒素兔多克隆抗体,且能与复合型内毒素反应。     

鲎试验和家兔法检测人血丙种球蛋白热原质的比较

检测人血丙种球蛋白热原质以往采用家兔法。该法对试验条件要求严格,不易筛选出合格家兔,且试验时间长、操作繁杂、费用较高。鲎试验法与之比较具有操作简便、快速省时、灵敏度高、价廉、结果可靠等特点．但用常规的赏试验法检侧人血丙种球蛋白热原质,由于检品本身蛋白质的干扰,效果不佳。我们进行了改良,采用稀释加热预处理检品再进行赏试脸,结果满意,现将赏试验法与家兔法进行对照检测的结果报告如下。     

建立可吸收医用膜细菌内毒素检查的新方法

[目的]检验粘克^TM可吸收医用膜是否符合生物材料的热原要求,建立粘克^TM可吸收医用膜的细菌内毒素检查方法。[方法]按《中华人民共和国药典》2005年版附录及GB/16175-1996规定,同时采用热原检查法和细菌内毒素检查法对粘克^TM可吸收医用膜72h的浸提液样品进行检测。[结果]该浸提液对细菌内毒检测不产生干扰,细菌内毒素试验结果为阴性。同时受试家兔体温升高均低于0.6℃,并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃。[结论]粘克^TM可吸收医用膜不含引起机体发热的内毒素或致热原,符合医用生物材料的使用标准。用细菌内毒素检查法替代家兔热原法对该可吸收膜进行热原检查是可行的。     

蓖麻毒素B链蛋白多克隆抗体的制备及胶体金免疫层析快速检测法的建立

目的:结合蓖麻毒素(RT)的多克隆抗体和单克隆抗体,建立检测RT的胶体金免疫层析快速检测方法。方法:将纯化得到的重组蓖麻毒素B链蛋白(rRTB)免疫兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法纯化,利用间接ELISA方法鉴定抗体效价和特异性。结合抗重组蓖麻毒素A链蛋白(RTA)单克隆抗体,采用双抗体夹心法,建立检测天然RT的胶体金免疫层析技术,并对该方法进行特异性、敏感性、稳定性等评价;在奶粉、血清、土壤等材料中进行模拟添加RT检测。结果:间接ELISA法测定抗体效价为1:105,并可特异性与rRTB结合;胶体金法能在5~10 min内完成检测,多种不同的蛋白及近缘毒素检测评价显示该法特异性良好,检测灵敏性为50 ng/ml,环境样品的检测敏感性也相同。结论:利用兔抗RTB多抗和抗RTA单抗,建立了适用于现场的快速、特异检测天然蓖麻毒素的胶体金免疫层析方法。