肺炎大鼠心肌TNF-α、IL-6mRNA表达及腺苷对其影响

目的:观察金葡菌感染大鼠肺炎时心肌组织TNF-α、IL-6mRNA表达, 以及腺苷对其影响。方法:50只SD大鼠被随机分为5组, 为对照组、肺炎组和腺苷治疗A、B、C组。金葡菌经气管插管注入复制肺炎大鼠模型, 于注菌后第2、3、4d静脉点滴腺苷治疗, 每天90min, 剂量分别为50、100、150μg·kg^-1·min^-1。第5d处死大鼠, 立即取心脏液氮保存, 心肌组织用于病理检测和采用RT-PCR方法检测TNF-α、IL-6mRNA的表达。结果:(1)肺炎组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达显著高于对照组(均P<0.01);(2)腺苷治疗B、C组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达低于肺炎组(P<0.01), 且治疗C组心肌IL-6mRNA表达低于治疗B组(P<0.01);而A组心肌中TNF-α、IL-6mRNA的表达与肺炎组无明显差异(P>0.05);(3)腺苷治疗可以减轻心肌的病理损伤(P<0.01)。结论:金葡菌感染大鼠肺炎可致心肌损害, 细胞炎症因子IL-6和TNF-α参与心肌损伤的发生和发展, 外源性腺苷治疗可抑制炎症因子TNF-α、IL-6的分泌, 从而有利于减轻炎症和保护心肌。     

益气活血方逆转压力负荷性心肌肥大过程中心肌间血管超微结构的变化

目的观察益气活血方治疗压力负荷所致大鼠心肌肥大对心肌间血管超微结构的影响。方法用腹主动脉缩窄法制备心肌肥大模型,用多道生物信号分析系统记录血压和心率,用透射电镜观察心肌的超微结构。结果高血压组微血管内皮细胞部分高度肿胀,细胞增大是正常的6~7倍;微血管内皮细胞形成指状增生、指状分叉;微血管呈扩张状,内皮细胞间隙显著开大,内质网扩张。开搏通组未见内皮细胞水肿、肿胀,未见内皮细胞肿胀所致阻塞。中药组微血管内皮损害程度大部分均接近开搏通组,仅偶见内皮水肿程度略高于开搏通组。结论压力负荷性心肌肥大出现严重的微循环紊乱,益气活血方能大部分逆转腹主动脉缩窄大鼠的心肌间血管超微结构,内皮细胞水肿、肿胀减轻。     

一氧化氮在压力超负荷心肌肥大作用中的定量分析

目的：探讨一气化氮（NO）在压力超负荷心肌肥大反应过程中的作用。方法：建立腹主动脉缩窄性高血压大鼠模型,测定平均动脉压（MAP）和左心室／体重比值（LVW／BW）;测量大鼠心肌的体积密度（Vv）、表面积密度（Sv）、比表面（S／V）及平均自由程（λ）等。结果：高血压大鼠的MAP、LVW／Bw、心肌横断面积、平均直径、Vv、Sv明显增大、入显著减小;加L-Arg组的MAP、LVW／BW值大致恢复至正常水平,心肌横断面积及平均直径、Vv、Sv等明显小于高血压组,S／V及入则增大;加L-NAME组的MAP、LVW／BW、心肌横断面积及平均直径、Vv、Sv等持续加大,而S／V及入则变小。结论：NO可明显改变体视学各项参数,对压力超负荷引起的高血压和心肌肥大具有明显的抑制作用。     

Akta和FoxO1在超负荷性心肌肥大时大鼠心肌的表达

目的 通过检测Akt和FoxO1基因在大鼠超负荷性心肌肥大过程中的表达,探讨心肌肥大时的细胞周期调控机制.方法 采用升主动脉缩窄的方法制作大鼠超负荷心肌肥大动物模型,通过三维彩色超声技术评价心肌肥大程度,采用RT-PCR技术检测心肌组织Akt和FoxO1的mRNA表达,用Western blots方法检测Akt磷酸化水平.结果 与假手术组相比,模型组的左室后壁厚度(LVPW)、室间隔厚度(IVS)增加(P<0.01),左室舒张末内径(LVDD)减小(P<0.01).模型组心肌组织中FoxO1的mRNA表达下调(P<0.01).Akt的基因表达没有明显变化但蛋白的磷酸化水平显著增加(P<0.01).结论 大鼠超负荷性心肌肥大时Akt激活,同时FoxO1的表达下调.     

心肌肥大大鼠心肌尾加压素II受体的变化

目的:观察心肌浆膜上新发现的强缩血管活性肽尾加压素II(UII)的受体在压力超荷性心肌肥大中的变化及意义。方法:在腹主动脉缩窄复制的大鼠压力超荷性心肌肥大模型上,采用放射性配基结合技术,测定术后1d(早期组)和30d(晚期组)大鼠心肌浆膜上UII受体的结合位点。结果:早期组血压较正常对照组和假手术组分别高54%和43%(P＜0.01),心重/体重比值无明显差异,受体数目(Bmax)分别上调184%和159%(P＜0.01),亲和力下降(Kd值分别高224%和206%,P＜0.01)。晚期组血压较对照组和假手术组分别高85%和67%(P＜0.01),心重/体重比值分别高18%和22%(P＜0.05),受体数目分别下调35%和41%(P＜0.05),亲和力增强(Kd值分别低30%和33%,P＜0.05)。结论:压力负荷引起心肌浆膜UII受体先增加后减少的双相变化,其变化可能参与心肌肥大的发病过程。     

压力超负荷致心肌肥大过程中心肌内分泌因子活化

目的探讨急性压力超负荷心肌肥大的跨膜信号传递机制.方法分别利用放射免疫法、分光光度法、免疫组化及原位杂交法动态观察压力超负荷后大鼠心肌组织血管紧张素转换酶(ACE)活性、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、一氧化氮含量和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的变化,并观察它们与压力超负荷心肌肥大的关系.结果随大鼠血压升高,心肌组织中ACE活性及AngⅡ含量均迅速升高(P＜0.05),并持续保持高水平,bFGF表达先升高(P＜0.05)后又恢复到正常水平;AngⅡ含量升高早于bFGF表达升高;而一氧化氮含量迅速降低并持续受抑(P＜0.05).结论心肌内分泌活化可能是介导压力超负荷致心肌肥大的重要机制.     

Wee1基因在大鼠生后发育不同阶段与压力负荷后心肌组织的差异表达

目的检测wee1基因在大鼠生后不同发育阶段和压力负荷性心肌肥大心肌组织中的表达情况,探讨心肌细胞增殖调控的相关机制。方法采用升主动脉缩窄方法制作压力负荷性心肌肥大动物模型,采用RT-PCR技术检测大鼠生后不同发育阶段和肥大心肌组织wee1基因的mRNA表达。结果 wee1基因在大鼠生后0天呈低表达,生后第3天高表达(P<0.01),之后至成年呈低水平表达;与假手术组相比,压力负荷性肥大心肌组织wee1基因表达水平明显上调(P<0.01)。结论 wee1基因在大鼠生后发育过程中和在压力负荷性心肌肥大组织呈差异表达。     

鱼腥草对油酸性急性肺损伤大鼠肺组织TNF-α表达的影响

目的: 探讨急性肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化及中药鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb)对其影响。方法: SD大鼠随机分为正常对照(C)组、油酸致伤(O)组、鱼腥草治疗组(H)组, 观察急性肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α的表达及鱼腥草对其影响, 观察鱼腥草对大鼠油酸型急性肺损伤动物模型的动脉血氧分压(PaO₂)、平均肺动脉压、总肺水量的影响。结果: 鱼腥草能提高ALI时机体PaO₂、减轻肺水肿、降低平均肺动脉压, ALI时TNF-α表达增加, 鱼腥草降低了ALI时TNF-α的表达。结论: 中药鱼腥草对急性肺损伤有治疗作用, 这种作用可能部分是通过降低ALI时肺组织TNF-α表达实现的。     

Akt和FoxO1在超负荷性心肌肥大时大鼠心肌的表达

目的通过检测Akt和FoxO1基因在大鼠超负荷性心肌肥大过程中的表达,探讨心肌肥大时的细胞周期调控机制。方法采用升主动脉缩窄的方法制作大鼠超负荷心肌肥大动物模型,通过三维彩色超声技术评价心肌肥大程度,采用RT-PCR技术检测心肌组织Akt和FoxO1的mRNA表达,用Westernblots方法检测Akt磷酸化水平。结果与假手术组相比,模型组的左室后壁厚度(LVPW)、室间隔厚度(IVS)增加(P<0.01),左室舒张末内径(LVDD)减小(P<0.01)。模型组心肌组织中FoxO1的mRNA表达下调(P<0.01),Akt的基因表达没有明显变化但蛋白的磷酸化水平显著增加(P<0.01)。结论大鼠超负荷性心肌肥大时Akt激活,同时FoxO1的表达下调。     

NO介导TNF-α诱导的培养大鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

目的:研究一氧化氮(NO)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的缺氧/复氧心肌细胞的保护作用。方法:在培养的大鼠乳鼠心肌细胞上,建立缺氧/复氧模型,测定复氧后培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量和细胞内锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性。结果:(1)用TNF-α(10⁵U/L)预处理,缺氧/复氧后心肌细胞内Mn-SOD活性增高、LDH释放量减少;(2)NO供体硝普钠(SNP)(5μmol/L)和前体L-精氨酸(L-Arg)(5mmol/L)预处理心肌细胞3h,缺氧/复氧后细胞内Mn-SOD活性增高、LDH释放量减少,用Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)(100μmol/L)预处理减弱了TNF-α的抑制缺氧/复氧心肌细胞LDH释放和诱导Mn-SOD活性增高的作用;(3)可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂ODQ(10μmol/L)和CPK抑制剂chelerythrine(5μmol/L)可分别减弱SNP、L-Arg和TNF-α对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用;(4)TNF-α对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用可被抗氧化剂2-巯基丙酰氨基乙酸(2-MPG,400μmol/L)削弱,但是酪氨酸蛋白激酶(TK)抑制剂4,5,7-三羟基异黄酮(genistein,50μmol/L)预处理对TNF-α诱导的心肌缺氧/复氧保护无影响。结论:NO参与TNF-α对缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用,PKC和SGC可能为其下游信号途径成分。     

解偶联蛋白- 2基因在压力负荷模型大鼠心肌中的动态表达变化

目的：探讨心肌线粒体解偶联蛋白-2(UCP2)在高血压心肌肥厚发生、发展中的作用。方法：本实验动物模型采用腹主动脉结扎法，对心肌UCP2mRNA检验采用RT-PCR方法，计算机凝胶成像分析其相对含量。结果：①各组大鼠的腹主动脉平均压、心重指数以及心肌病理切片均证实模型成功；②造模手术后14h，手术组和假手术组均可见UCP2mRNA表达明显增加，最大峰值较正常高达3倍左右；③手术后24hUCP2mRNA表达明显回落，手术组和假手术组回落趋势无差异；④手术后4d假手术组UCP2mRNA表达回落至正常水平，而手术组仍处于较高水平状态，平均达假手术组的1.5倍左右。结论：我们认为UCP2参与了心肌肥厚的发生和发展，且是心功能储备的一个指标。     

雄性大鼠心肌雄激素受体及其mRNA的表达

目的观察雄激素受体(AR)蛋白及其mRNA在大鼠心肌的表达。方法采用免疫组织化学方法和原位杂交的方法观察成年(3月龄)Wistar大鼠心肌中AR阳性神经元的存在及其表达。结果大鼠心肌中存在AR阳性神经元和ARmRNA阳性神经元。结论为AR在心脏的存在提供形态学依据,并在基因水平证实部分心肌细胞中存在雄激素受体的结合位点,提示心肌细胞可能受雄激素影响。     

血管内皮生长因子及其基因在自发性高血压大鼠心肌中的表达

目的：血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是新近确定的一种特异作用于血管内皮细胞的活性肽。最近发现正常心肌细胞有ＶＥＧＦ及其基因表达,但对高血压肥大心脏心肌ＶＥＧＦ及其基因表达的变化尚不清楚。方法：本实验采用免疫组化和分子杂交方法,对自发性设备夸大鼠（ＳＨＲ）肥大于心脏心肌ＶＥＧＦ及其基因表达进行研究。结果：免疫组化结果表明：ＳＨＲ心肌细胞浆内特异性ＶＥＧＦ染色颗粒明显多于ＷＫＹ对照大鼠。Ｎｏｔｈｅｒｎ分     

腹主动脉狭窄致大鼠心肌肥大后心肌组织蛋白质组变化的研究

目的探讨腹主动脉狭窄诱导大鼠心肌肥大后心肌组织蛋白质表达谱的变化。方法健康雄性Wistar大鼠12只,随机分为模型组和对照组（均n=6）。模型组行腹主动脉缩窄术,对照组仅分离腹主动脉不行缩窄术。术后4周结束实验并提取左心室组织蛋白质,双向电泳分离心肌组织蛋白质,分析差异显示的蛋白质并选取9个差异显著的蛋白点进行胶内酶切和质谱分析。结果双向电泳可分离（454±13）个蛋白质,点匹配率为（78．7±1．4）％,心肌组织13种蛋白质出现明显差异表达,与对照组比较,模型组4种蛋白质表达上调,9种蛋白质表达下调。质谱分析鉴定出7个蛋白质为：与能量代谢相关的丙酮酸脱氢酶E1和β-烯醇酶、与细胞收缩功能相关的α-肌球蛋白重链和心脏α-肌动蛋白前体、与甲状腺激素代谢相关的甲状腺素结合蛋白等5种蛋白质在模型组表达下调,肌球蛋白轻链和与细胞内源性保护相关的热休克蛋白B6等2种蛋白质在模型组表达上调。结论腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥大后,心肌组织蛋白质组变化显著,这些变化涉及与心肌细胞能量代谢、细胞骨架以及心肌收缩等有关的几组蛋白质,提示上述蛋白质组改变可能参与了心肌肥大过程。     

微量酶联夹心杂交法定量检测TNF-α mRNA

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微板酶联夹心杂交技术, 对人单核细胞分泌的TNF-α mRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针, 其中一条为捕获探针, 5'端带有氨基修饰, 可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合, 而且是"竖直"地包被在微孔内, 另一个为检测探针, 3'端带有生物素标记。提取人单个核细胞总RNA, RT-PCR后的扩增产物经变性后加入已包被好捕获探针的微孔板中, 加入检测探针与已杂交的产物结合, 最后加入亲和素-辣根过氧化物酶(avidin－HRP)显色系统催化底物显色, 450 nm波长下检测吸光度进行定量。结果:该方法检测TNF-αmRNA的灵敏度, 明显高于琼脂糖凝胶电泳, 而且具有良好的重复性, 等量PCR产物作10个复孔, 吸光度的CV值为7.2%, 批间的CV值为9.1%。在本实验中, 我们首次尝试着用客观的数据来表示正常人中1×10⁶个PBMCs中TNF－αmRNA的平均表达量, 发现该表示方法直观明了, 结果稳定, 而且简便可行, 不需要特殊的仪器及昂贵的试剂。结论:本方法具有高灵敏度、高特异性、精确、简单易操作, 结果数据化等优点, 适合于微量细胞因子mRNA的定量检测。     

甲状腺素性心肌肥大模型的建立

心肌肥大是致心律失常的重要诱因[1] ,一般常用腹主动脉结扎复制心肌肥大动物模型 ,此方法操作复杂 ,对动物损伤较大。本文采用甲状腺素致大鼠心肌肥大 ,对模型动物进行心肌细胞能量代谢、离子分布等方面的检测 ,并对心肌肥大大鼠进行冠脉结扎 -再灌 ,诱发心律失常 ,观察缺血再灌各时点心律失常分数及恶性心律失常室颤 (ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｆｒｉｂｉｌｌａ ｔｉｏｎ)的发生率。材　料　和　方　法1　试剂　　Ｌ -甲状腺素 (Ｌｅｖｏｔｈｙｏｘｉｎｅ)及ＡＤＰ ,Ｓｉｇｍａ公司产品 ;工艺超纯硝酸及工艺超纯高氯酸 ,上海试剂一厂生产 ;…     

Neuregulin-1β对压力超负荷心肌肥大大鼠治疗作用及机制的研究

 目的：研究神经调节蛋白 1β（NRG-1β）对压力超负荷所致大鼠心肌肥大的治疗作用并探讨其机制。方法：Wistar雄性大鼠采用腹主动脉缩窄的方法复制心肌肥大模型。术后8周,将模型动物随机分成模型（model）组、NRG-1β治疗组（尾静脉注射NRG-1β,10 μg·kg-1·d-1）和NRG-1β+赫赛汀(Herceptin, HERCE)治疗组（尾静脉注射NRG-1β的同时给予注射HERCE 10 μg·kg-1·d-1）。假手术（sham）组除不以银夹缩窄腹主动脉外,其余操作同腹主动脉缩窄组。7　d后分别采用心动超声、血流动力学评价心功能;Masson染色观察心肌组织的超微结构;放射免疫法检测心肌组织中血管紧张素II（Ang II）,酶联免疫吸附法测定心肌组织中肿瘤坏死因子 α（TNF-α）的变化;RT-PCR法检测心肌中bcl-2和bax mRMA表达的改变。结果：（1）心动超声显示,和模型组比较,NRG-1β组左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(LVFS)升高,左室收缩末内径(LVESD)及舒张末内径(LVEDD)减小（P<0.01）。（2）血流动力学检测显示,NRG-1β治疗组左室收缩末压(LVESP)和左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)均明显高于模型组（P<0.01）;左室舒张末压(LVEDP)低于模型组（P<0.01）。（3）与模型组比较,NRG-1β组心肌胶原容积分数（CVF）下降,心肌中Ang II和TNF-α明显减少,bcl-2 mRNA表达显著升高,而bax mRNA表达下降（P<0.01）。（4）NRG-1β+ HERCE治疗组与模型组相比各项指标无明显改变（P>0.05）。结论：NRG-1可以减少压力超负荷大鼠心肌Ang II和TNF-α的生成,从而减轻Ang II和TNF-α介导的心肌间质重构; NRG-1可通过上调bcl-2 mRNA表达、下调bax mRNA表达,抑制心肌细胞的凋亡,改善压力超负荷大鼠的心功能,进而在心肌肥大的过程中发挥作用。     

肿瘤坏死因子α通过PI3K-IP3R-Ca2+途径诱导乳鼠心肌肥大

 目的: 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否通过PI3K-IP₃R-Ca²⁺信号途径诱导心肌肥大。方法: 以培养的乳鼠心肌细胞为模型,采用Lowry法测心肌细胞蛋白含量;[³H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;Till阳离子测定系统测定心肌细胞内Ca²⁺浓度。结果: PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)明显抑制TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌[Ca²⁺]_i增高(P<0.01),对正常心肌[Ca²⁺]_i无明显影响;其抑制程度与合用2-氨基乙基二苯硼酸盐(2-APB)组相近,但小于与兰尼碱(RYA)合用组(P<0.05)。PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)明显抑制TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及细胞体积的增加;其抑制程度与合用2-APB组无差异,但明显大于单用2-APB组,小于合用RYA组(P<0.05)。PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)对正常心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及细胞体积无明显影响。结论: TNF-α通过PI3K-IP₃R-Ca²⁺途径诱导心肌肥大。     

肾性高血压大鼠左心室肌球蛋白重链同型基因的表达

目的和方法：用二肾一夹（２Ｋ１Ｃ）肾性高血压大鼠模型，利用分子生物学实验方法，探讨心肌肥厚发生和逆转以及肌球蛋白重链（ＭＨＣ）基因表达的改变。结果：（１）２Ｋ１Ｃ肾性高血压大鼠术后第２～１２周，动脉血压持续升高；左心室重量和体重比值明显升高；左心室α－ＭＨＣｍＲＮＡ表达明显减弱；β－ＭＨＣｍＲＮＡ表达明显增强。（２）在术后第４周给予巯甲丙脯酸和术后第８周切除肾动脉狭窄侧肾脏可使２Ｋ１Ｃ肾性高血压大鼠动脉血压下降；左心室肥厚发生逆转；抑制左心室α－ＭＨＣｍＲＮＡ表达减弱和β－ＭＨＣｍＲＮＡ表达增强。结论：在２Ｋ１Ｃ肾性高血压过程中，动脉血压升高是左心室肥厚、左心室肌球蛋白ＭＨＣ基因表型转换的重要因素；血管紧张素Ⅱ可能参与２Ｋ１Ｃ肾性高血压过程中的心肌肥厚和ＭＨＣ同型基因表型的转换     

心肌肥大时细胞核被膜核苷三磷酸酶活性及mRNA出核转运的变化

目的：探讨心肌肥大时心肌细胞ｍ ＲＮＡ 出核转运率及核被膜核苷三磷酸酶（ ＮＴＰａｓｅ） 活性的变化。方法：采用腹主动脉缩窄法复制大鼠心肌肥大模型,密度梯度离心法制备心肌细胞核被膜,观察心肌肥大时对心肌ＮＴＰａｓｅ 活性和成熟ｍ ＲＮＡ 出核转运速率的影响。结果：早、晚期肥大组心肌细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率以ＡＴＰ 为底物时较对照组增加２５ ％ ～６２ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ,以ＧＴＰ 为底物时增加８ ％ ～４４ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ,其中晚期肥大组ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率增加幅度低于早期组。早期肥大组细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值不变,晚期组ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值下降,以ＡＴＰ 和ＧＴＰ 为底物时晚期肥大组Ｋｍ 值分别下降２２ ％ 和８６ ％ 。早期肥大组１０ ｍｉｎ 心肌细胞核ｍ ＲＮＡ 出核转运率以ＡＴＰ 或ＧＴＰ 启动反应时分别较对照组增加６８ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 或７８ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ,晚期肥大组增加幅度不如早期组大,仅增加２７ ％ 和２１－７ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 。结论：大鼠心肌肥大组细胞核被膜ｍ ＲＮＡ 出核转运率的增加可能是心肌肥大时蛋白质合成增加的一个重要原因,而这种ｍＲＮＡ 出核转运率的增加可能与